專利名稱：一種厚樸皮再生劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于林業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體提供了一種促進(jìn)厚樸新皮生長(zhǎng)的再生劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
厚樸officinalisRehcL et Wils)是木蘭科(Magnoliaceae)木蘭屬(Magnolia)落葉喬木,包括原亞種厚樸officinalis subsp. officinalD^W亞種凹葉厚樸officinalis subsp. biloba、。厚樸樹(shù)皮、根皮、枝皮是我國(guó)特有的常用中藥材，為國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)的中藥材，具有祛濕、消痰、健脾、寬中下氣、除滿之功效，主治高血壓、濕滯傷中、腔腹吐瀉、食積氣滯、腹脹 便秘、痰飲喘咳、腹痛瀉痢等癥。尤其是近幾年，國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)厚樸的主要活性成分研究，證明其具有抗癌、消炎、抑制病毒等藥理作用。厚樸主要活性成分為厚樸酚、和厚樸酚，其藥材品質(zhì)優(yōu)劣主要反映在這兩種成份的差異上。過(guò)去厚樸的采收慣用伐樹(shù)取皮，每株只能剝皮一次，樹(shù)體即會(huì)死亡。這種殺雞取卵的方法使我國(guó)本來(lái)不多的厚樸資源更加緊缺。近年來(lái)經(jīng)有關(guān)科技工作者的研究，采用環(huán)狀剝皮或帶狀剝皮，剝皮之后能重新生長(zhǎng)出新的樹(shù)皮，使剝皮再生成功，在一株樹(shù)上實(shí)現(xiàn)多次剝皮的愿望。但是若是剝皮后不采取特殊的處理，新皮再生速度緩慢，常需4、5年后方可再次剝皮，有些甚至新皮再生失??；另外新皮中活性物質(zhì)含量較低，造成產(chǎn)品質(zhì)量較差。最接近的現(xiàn)有技術(shù)中CN1086382A公開(kāi)了一種植物增皮素，由生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、抗菌素、殺蟲(chóng)劑和營(yíng)養(yǎng)素組成，主要用于杜仲的新皮生長(zhǎng)，其中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的質(zhì)量比例為I : I。這種植物增皮素智能促進(jìn)新皮生長(zhǎng)，不能提高新皮中的藥效成分含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決厚樸剝皮后新皮生長(zhǎng)緩慢、新皮中活性物質(zhì)含量低的問(wèn)題，提供了一種適用于厚樸皮再生的再生劑及其制備方法和應(yīng)用，該厚樸皮再生的再生劑可以提高新皮再生速度和新皮中活性物質(zhì)含量。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是
一種厚樸皮再生劑，每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分
細(xì)胞分裂素50-200mg
生長(zhǎng)素1000-2000mg
生物素50-100mg
瑞毒霉500-1200mg
不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養(yǎng)基4-5g
其余為水。優(yōu)選所述每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分
細(xì)胞分裂素100-200mg生長(zhǎng)素1500-2000mg
生物素70-100mg
瑞毒霉700-1000mg
不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養(yǎng)基4. 74g
其余為水。所述細(xì)胞分裂素優(yōu)選為6-芐氨基腺嘌呤和玉米素中的一種或兩種。 所述生長(zhǎng)素優(yōu)選為a_萘乙酸和吲哚丁酸中的一種或兩種。本發(fā)明的厚樸皮再生劑的制備方法為按照所述比例，先用O. 8M-1. 2M的NaOH或KOH分別將細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素、生物素助溶，得助溶液，所述NaOH或KOH的用量以固體物質(zhì)剛好完全溶解為準(zhǔn)；再將瑞毒霉和MS干粉培養(yǎng)基分別用水溶解，得混合液；然后將上述助溶液與混合液混合，攪拌均勻，加水定容，得所述濃度的厚樸皮再生劑。本發(fā)明還提供了所述厚樸皮再生劑在作為植物剝皮后新皮生長(zhǎng)促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。本發(fā)明的于厚樸皮再生的再生劑若需長(zhǎng)期保存應(yīng)置于4°C冰箱中。下面對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步解釋和說(shuō)明
I、生物素，又稱VB7、維生素H、輔酶R，他們以輔酶的形式參與生物催化劑-酶系的活動(dòng)，參與細(xì)胞蛋白質(zhì)、脂肪、糖代謝等重要生命活動(dòng)在脫羧-羧化反應(yīng)和脫氨反應(yīng)中起輔酶作用，其生理作用主要是由生物素酶引起的固碳作用及羧基轉(zhuǎn)移反應(yīng)；生物素為正常長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成以及脂肪酸的基本代謝所必需；在蛋白質(zhì)代謝中，生物素參與蛋白質(zhì)的合成、氨基酸的脫氨基作用、嘌呤的合成以及核酸代謝。生物素含有硫，硫是硫氧還蛋白、鐵硫蛋白與固氮酶的組分，因而硫在光合、固氮等反應(yīng)中起重要作用。另外，蛋白質(zhì)中含硫氨基酸間的-SH基與-S-S-可互相轉(zhuǎn)變，這不僅可調(diào)節(jié)植物體內(nèi)的氧化還原反應(yīng)，而且還具有穩(wěn)定蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的作用。生物素參與代謝活動(dòng)，影響植物細(xì)胞的分裂、形態(tài)發(fā)生和細(xì)胞分化，有利于植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。厚樸皮再生劑中使用生物素有利于樹(shù)干剝皮后形成層細(xì)胞的分裂和分化，形成新皮，有利于次生代謝物的生成。2、在細(xì)胞水平上，生長(zhǎng)素可刺激形成層細(xì)胞分裂；刺激枝的細(xì)胞伸長(zhǎng)，促進(jìn)木質(zhì)部、韌皮部細(xì)胞分化。生長(zhǎng)素對(duì)生長(zhǎng)的促進(jìn)作用主要是促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，特別是細(xì)胞的伸長(zhǎng)，同時(shí)生長(zhǎng)素也能單獨(dú)引起細(xì)胞分裂。細(xì)胞分裂素的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂，也可促進(jìn)組織的分化和生長(zhǎng)，通過(guò)細(xì)胞橫向擴(kuò)大增粗，可以使細(xì)胞體積擴(kuò)大。生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素在新皮再生中具有協(xié)同作用，兩者共同促進(jìn)莖的增粗、皮的增厚。但是，生長(zhǎng)素在植物體內(nèi)的運(yùn)輸是單方向的，只能從植物體形態(tài)學(xué)上端向形態(tài)學(xué)下端運(yùn)輸，割掉一圈樹(shù)皮后需要外施生長(zhǎng)素以促進(jìn)新皮的形成。另外，莖對(duì)生長(zhǎng)素的敏感性較低，需要使用較高濃度才能發(fā)揮作用。生長(zhǎng)素還可以能夠改變植物體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分配，在生長(zhǎng)素分布較豐富的部分，得到的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)就多，有利于新皮的再生和活性物質(zhì)的合成。因此，基于生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的作用機(jī)制以及不同配比試驗(yàn)，本厚樸皮再生劑中生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的質(zhì)量比例應(yīng)大于5I比較合適。3、厚樸剝皮及再生劑的使用都在春天，且厚樸適宜栽培范圍在亞熱帶季風(fēng)氣候、700以上的高山中，適生環(huán)境氣候溫和、雨量充沛、濕度較大。因此，剝皮后要重點(diǎn)防止創(chuàng)面滋生霉菌，產(chǎn)生病害。慶大霉素是一種氨基糖苷類抗生素，主要用于治療細(xì)菌感染，尤其是革蘭氏陰性菌引起的感染。慶大霉素不能抑制霉菌。多菌靈是一種高效、低毒、廣譜、內(nèi)吸性殺菌劑，對(duì)子囊菌的許多病原菌和半知菌類的大多數(shù)病原菌有防治效果，而對(duì)卵菌和細(xì)菌引起的病害無(wú)效。瑞毒霉是一種新型的高效、低毒、內(nèi)吸性殺菌劑。對(duì)霜霉、疫霉、腐霉等病原真菌引起的病害有良好的治療和預(yù)防作用，噴灑后能被植物的根、莖、葉各部分吸收，在植株體內(nèi)具有向頂性和向基性雙向內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，30分鐘即可進(jìn)入植物體內(nèi)，并迅速上下移動(dòng)傳導(dǎo)至各部位，施藥后不怕雨水沖刷，具有良好的保護(hù)和治療作用，殘效期較長(zhǎng)，施藥間隔比其他殘效性的殺菌劑長(zhǎng)得多，對(duì)植物安全，對(duì)人畜低毒。在發(fā)病前和發(fā)病初期用藥都能收到防病和治療效果。瑞毒霉還對(duì)殺滅囷卵綱的病原囷有特殊的效力。因此，本發(fā)明使用瑞毒霉作為殺菌劑，既可以殺菌又可以防蟲(chóng)。4、MS干粉培養(yǎng)基為市購(gòu)產(chǎn)品，一種營(yíng)養(yǎng)兀素比較完全的培養(yǎng)基,含有植物生長(zhǎng)必需的元素，包括大量元素碳、氫、氧、氮、磷、鉀、韓、鎂、硫和微量元素鐵、猛、鋅、硼、銅、鑰、 氯、鎳等。另外還含有氨基酸、維生素、肌醇等有機(jī)物質(zhì)，他們以輔酶的形式參與生物催化劑——酶系的活動(dòng)，參與細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂肪、糖代謝等重要生命活動(dòng)，參與細(xì)胞體內(nèi)離子平衡作用，對(duì)植物組織的生長(zhǎng)具有良好的促進(jìn)作用。使用MS培養(yǎng)基，有利于皮的再生及新皮的生長(zhǎng)，并有利于代謝產(chǎn)物的合成。5、本發(fā)明的厚樸皮再生劑能夠提高新皮中的有效成分含量，是跟試劑中添加的營(yíng)養(yǎng)成分(MS液體培養(yǎng)基)、生物素、細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素有關(guān)系的，這些元素和物質(zhì)協(xié)同作用，不但促進(jìn)新皮的再生，還促進(jìn)物質(zhì)的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)，刺激有效成分的合成，從而提高含量。6、生長(zhǎng)素和生物素要先分別用IM NaOH溶解，是因?yàn)橹参锛に睾茈y直接溶于水或者在水中的溶解度非常小，因此，要配成水溶液時(shí)需要使用助溶劑先溶解再加入水。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)是
本發(fā)明的厚樸皮再生劑，一方面能夠促進(jìn)厚樸剝皮后新皮的生長(zhǎng)，縮短再生時(shí)間，2年后新皮厚度基本可以達(dá)到老皮厚度；另一方面能提高新皮中活性物質(zhì)含量，新皮與老皮相t匕，厚樸總酚含量提高10%_40%以上，實(shí)現(xiàn)了厚樸可持續(xù)再生利用。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明實(shí)施例所述百分含量均指質(zhì)量百分含量。所述不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養(yǎng)基為市購(gòu)產(chǎn)品，如上海宇涵生物科技有限公司
坐寸ο實(shí)施例I :
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA)50mg，a_萘乙酸(NAA) 2000mg,生物素50mg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養(yǎng)基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL。制法a):先用少許IM NaOH分別將細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素、生物素助溶，得助溶液，以固體物質(zhì)完全溶解為準(zhǔn)；再將瑞毒霉和MS干粉培養(yǎng)基分別用水溶解，得混合液；b):上述助溶液與混合液混合均勻，加水定容至IOOOmL,攪拌均勻避光保存。再生劑使用方法采用帶狀剝皮法將厚樸樹(shù)皮剝?nèi)ヒ徊糠?，剝皮時(shí)注意刀和手都不要觸及形成層和木質(zhì)部。剝皮后及時(shí)在剝皮表面噴灑此再生劑溶液，然后用塑料薄膜包扎剝面，上、下扎緊，中間重疊處用膠帶粘貼。全株新皮完整愈合后方可解膜。2年后，剝?nèi)⊥粯?shù)干高度的老皮和新皮，分別測(cè)定皮厚度和厚樸總酚含量。老皮厚度2. 77mm，新皮厚度2. 59mm，基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 13%，新皮中厚樸總酚含量3. 58%，提高14. 37%。實(shí)施例2
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA) lOOmg，吲哚丁酸(IBA) IOOOmg,生物素IOOmg,瑞毒霉500mg, MS干粉培養(yǎng)基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL。··采用實(shí)施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對(duì)樹(shù)干剝皮后的剝面進(jìn)行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 92mm,新皮厚度2. 71mm,基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 94%，新皮中厚樸總酚含量3. 62%，提高23. 13%。實(shí)施例3
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA) 200mg，a_萘乙酸(NAA) 1500mg,生物素IOOmg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養(yǎng)基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL。采用實(shí)施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對(duì)樹(shù)干剝皮后的剝面進(jìn)行噴灑和處理。2年后，老皮厚度3. 06mm,新皮厚度2. 97mm,基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 79%，新皮中厚樸總酚含量3. 65%，提高30. 82%。實(shí)施例4
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為6_芐氨基腺嘌呤(6-BA) 200mg，吲哚丁酸(IBA) 1500mg,生物素50mg,瑞毒霉500mg,MS干粉培養(yǎng)基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至 1000mL。采用實(shí)施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對(duì)樹(shù)干剝皮后的剝面進(jìn)行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 95mm,新皮厚度2. 83mm,基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 06%,新皮中厚樸總酚含量3. 69%，提高20. 59%。實(shí)施例5
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為玉米素(ZT)50mg，吲哚丁酸(IBA)lOOOmg，生物素50mg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養(yǎng)基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至1000mL。采用實(shí)施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對(duì)樹(shù)干剝皮后的剝面進(jìn)行噴灑和處理。2年后，老皮厚度3. 13mm,新皮厚度2. 89mm,基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 56%，新皮中厚樸總酚含量3. 94%，提高10. 67%。實(shí)施例6 原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為
玉米素(ZT) lOOmg, a-萘乙酸(NAA) 1500mg,生物素IOOmg,瑞毒霉500mg,MS干粉培養(yǎng)基(不含蔗糖和瓊脂)4. 74g，水定容至1000mL。采用實(shí)施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對(duì)樹(shù)干剝皮后的剝面進(jìn)行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 85mm,新皮厚度2. 67mm,基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 84%，新皮中厚樸總酚含量3. 52%，提高23. 94%。實(shí)施例7
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為玉米素(ZT) 200mg，吲哚丁酸(IBA) 2000mg， 生物素IOOmg,瑞毒霉500mg, MS干粉培養(yǎng)基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至1000mL。采用實(shí)施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對(duì)樹(shù)干剝皮后的剝面進(jìn)行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 67mm，新皮厚度2. 61mm，基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量2. 55%，新皮中厚樸總酚含量3. 63%，提高42. 35%。實(shí)施例8
原料配方
配制1000 mL厚樸皮再生劑原料用量為玉米素(ZT) 200mg，a-萘乙酸(NAA) IOOOmg,生物素50mg,瑞毒霉IOOOmg, MS干粉培養(yǎng)基(不含鹿糖和瓊脂)4. 74g,水定容至1000mL。采用實(shí)施例I同樣的配制方法，直接用上述再生劑對(duì)樹(shù)干剝皮后的剝面進(jìn)行噴灑和處理。2年后，老皮厚度2. 89mm,新皮厚度2. 72mm,基本達(dá)到老皮厚度；老皮中厚樸總酚含量3. 20%，新皮中厚樸總酚含量3. 73%，提高16. 56%。
權(quán)利要求
1.一種厚樸皮再生劑，其特征是，每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分 細(xì)胞分裂素50-200mg 生長(zhǎng)素1000-2000mg 生物素50-100mg 瑞毒霉500-1200mg 不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養(yǎng)基 4-5g 其余為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述厚樸皮再生劑，其特征是，所述每IOOOmL再生劑中主要含有以下重量的組分 細(xì)胞分裂素100-200mg 生長(zhǎng)素1500-2000mg 生物素70-100mg 瑞毒霉700-1000mg 不含瓊脂和蔗糖的MS干粉培養(yǎng)基4. 74g 其余為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述厚樸皮再生劑，其特征是，所述細(xì)胞分裂素為6-芐氨基腺嘌呤和玉米素中的一種或兩種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述厚樸皮再生劑，其特征是，所述生長(zhǎng)素為a-萘乙酸和吲哚丁酸中的一種或兩種。
5.權(quán)利要求I或2所述厚樸皮再生劑的制備方法，其特征是，具體步驟為按照所述比例，先用O. 8M-1. 2M的NaOH或KOH分別將細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素、生物素助溶，得助溶液，所述NaOH或KOH的用量以固體物質(zhì)剛好完全溶解為準(zhǔn)；再將瑞毒霉和MS干粉培養(yǎng)基分別用水溶解，得混合液；然后將上述助溶液與混合液混合，攪拌均勻，加水定容，得所述濃度的厚樸皮再生劑。
6.權(quán)利要求1-4之一所述厚樸皮再生劑在作為植物剝皮后新皮生長(zhǎng)促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物皮再生劑領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種厚樸皮再生劑。該再生劑由細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素、生物素、瑞毒霉、MS干粉培養(yǎng)基配制而成。該厚樸皮再生劑能促進(jìn)厚樸剝皮后形成層細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)，刺激新皮再生和新皮中活性物質(zhì)的形成。使用本發(fā)明的厚樸皮再生劑2年后，再生新皮厚度基本可達(dá)到老皮厚度，新皮中厚樸總酚含量比老皮提高10%-40%以上，縮短了厚樸剝皮間隔時(shí)間，并保證了藥材的質(zhì)量和藥效。
文檔編號(hào)A01N37/10GK102870792SQ201210407968
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月24日
發(fā)明者王曉明, 蔡能, 宋慶安, 蔣麗娟, 裴剛, 李永欣, 曾慧杰 申請(qǐng)人:湖南省林業(yè)科學(xué)院