專利名稱：雙孢菇液體菌種配方及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及 一種生物工程領(lǐng)域，特別涉及一種培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
食用菌是人們所喜歡的營養(yǎng)價(jià)值高的食品，近年來食用菌人工栽培技術(shù)有很大的發(fā)展。食用菌中有杏鮑菇、香菇、雙孢菇等。其中，雙孢菇肉質(zhì)肥美、口味鮮美、口感厚實(shí)，廣受人們的青睞。而在培育雙孢菇的過程中，會(huì)涉及到很多環(huán)節(jié)，其中雙孢菇的菌絲培養(yǎng)是雙孢燕培養(yǎng)的一個(gè)重要環(huán)節(jié)之一。在雙孢菇的生產(chǎn)過程中，雙孢菇生產(chǎn)所用的菌種有固體菌種和液體菌種，液體菌種相對(duì)固體菌種具有培養(yǎng)時(shí)間短、發(fā)菌快、生物轉(zhuǎn)化率高、菌種純度高等優(yōu)勢，且更便于規(guī)模化、連續(xù)生產(chǎn)，是食用菌產(chǎn)業(yè)工廠化法杖技術(shù)革新的趨勢。但是，目前雙孢菇的液體菌種培養(yǎng)基存在制備成功率低、菌絲生長不適應(yīng)，在培養(yǎng)后期容易出現(xiàn)菌絲老化退變的問題，且操作專業(yè)技術(shù)要求高，在大規(guī)模生產(chǎn)過程中，會(huì)直接影響到雙孢菇培育的效率與其經(jīng)濟(jì)效應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種雙孢菇液體菌種配方，解決以上技術(shù)問題。本發(fā)明的另一目的在于，提供一種雙孢菇液體菌種的制備方法，解決以上技術(shù)問題。本發(fā)明所解決的技術(shù)問題可以采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)雙孢菇液體菌種配方，包括原料、水溶液，其特征在于，所述原料在所述水溶液中的重量百分比如下酵母粉O. 1-1.0%、糖分I. 5-3%、磷酸二氫鉀O. 05-0. 3%、硫酸鎂O. 05-0. 3%、蛋白胨 O. 1-0. 5%O本發(fā)明中，采用酵母粉作為雙孢菇液體菌絲生長所需的主要氮源，所述糖分作為主要的碳源，而蛋白胨則既可以作為氮源也可以作為碳源，在雙孢菇液體菌絲生長過程中，可起到調(diào)節(jié)補(bǔ)充的作用，而磷酸二氫鉀與硫酸鎂的添加為雙孢菇的生長提供必要的微量元素，確保雙孢菇液體菌絲能得到足夠豐富的養(yǎng)料，更具生命力、增強(qiáng)菌絲的抗病能力。所述糖分可以采用蔗糖，也可以采用葡萄糖或者麥芽糖，優(yōu)選采用蔗糖，相對(duì)其他糖分，蔗糖更適合作為雙孢菇的碳源，所述蔗糖與酵母粉之間的反應(yīng)，相對(duì)葡萄糖、麥芽糖與酵母粉之間的反應(yīng)更為穩(wěn)定，成本更為低廉，利用效果更佳。所述水溶液中包括如下重量百分比的原料酵母粉O. 2%、蔗糖2%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨O. 3%ο所述原料還包括馬鈴薯粉；所述水溶液中含有以下重量比的原料馬鈴薯粉0-1. 0%。所述水溶液中包括如下重量百分比的原料酵母粉O. 3%、蔗糖2. 5%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨O. 2%、馬鈴薯粉O. 5%。
上述組分大都來源豐富，價(jià)格低廉，便于大量使用，進(jìn)行量產(chǎn)。且采用本發(fā)明培育出的雙孢菇菌絲，菌絲體生長快速，活力強(qiáng)，在同樣的萌發(fā)時(shí)間內(nèi)菌絲密度偏高。所述水溶液中還包括以下比重的原料大豆肽O. 05-0. 5%、硫酸鈣O. 01-0. 1%。適當(dāng)?shù)募尤胨龃蠖闺淖鳛榈?，可為所述雙孢菇的生長提供足夠的養(yǎng)料。而在雙孢菇生長的過程中，需要微量的鈣元素，所述硫酸鈣的添加可為雙孢菇的生長提供需要的營養(yǎng)成分。所述原料在所述水溶液中的重量百分比如下酵母粉O. 3%、蔗糖2. 5%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨O. 2%、馬鈴薯粉O. 5%、大豆肽O. 2%、硫酸鈣O. 03%。雙孢菇液體菌種的制備方法，其特征在于，包括如下步驟I)培養(yǎng)基配置將原料按比例倒入水溶液中，并充分?jǐn)嚢韬笕ヅ?，制成培養(yǎng)基液體。
2)培養(yǎng)基調(diào)整對(duì)所述培養(yǎng)基液體的PH值進(jìn)行測試，并用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)整所述培養(yǎng)基液體的PH值，使其PH值保持6. 5-7. O。3)培養(yǎng)基滅菌將所述培養(yǎng)基液體放入滅菌設(shè)備進(jìn)行高溫滅菌至少15分鐘，然后將處于高溫的所述培養(yǎng)基液體在無菌條件下進(jìn)行以150-200rpm的攪拌速度進(jìn)行攪拌。4)菌種接種將培養(yǎng)基液體進(jìn)行冷卻，使所述培養(yǎng)基液體的溫度保持在20-25°C后，接入雙孢菇菌種，將含有雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體通過凈化空氣進(jìn)行有氧培養(yǎng)7-10天，即可制得優(yōu)質(zhì)的雙孢菇菌種。步驟I)中，所述原料在所述水溶液中的重量百分比如下酵母粉O. 1-1.0%、糖分
I.5-3%、磷酸二氫鉀 O. 05-0. 3%、硫酸鎂 O. 05-0. 3%、蛋白胨 O. 1-0. 5%。步驟2 )中，所述PH調(diào)節(jié)劑可以采用磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀中的至少一種。所述PH調(diào)節(jié)劑優(yōu)選采用磷酸氫二鉀，所述培養(yǎng)基液體的原料內(nèi)含有磷酸二氫鉀偏于酸性，可通過加入所述磷酸氫二鉀將其PH值調(diào)和為中性。步驟3)中，有氧培養(yǎng)時(shí)，保持所述培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為20-23°C，并對(duì)含有所述雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。有益效果采用上述技術(shù)后，本發(fā)明所培育出的雙孢菇菌絲，菌絲生命力旺盛，不易衰老，發(fā)菌速度快，抗病能力強(qiáng)，易大規(guī)模種植。


圖I為本發(fā)明制備方法的流程圖。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體圖示進(jìn)一步闡述本發(fā)明。參照圖1，雙孢菇液體菌種配方，包括原料、水溶液，原料在水溶液中的重量百分比如下酵母粉O. 1-1. 0%、糖分I. 5-3%、磷酸二氫鉀O. 05-0. 3%、硫酸鎂O. 05-0. 3%、蛋白胨
O.1-0.5%。糖分可以采用蔗糖，也可以采用葡萄糖或者麥芽糖，優(yōu)選采用蔗糖，相對(duì)其他糖分，蔗糖更適合作為雙孢菇的碳源，蔗糖與酵母粉之間的反應(yīng)，相對(duì)葡萄糖、麥芽糖與酵母粉之間的反應(yīng)更為穩(wěn)定，成本更為低廉，利用效果更佳。水溶液中包括如下重量百分比的原料酵母粉O. 2%、蔗糖2%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨O. 3%。
原料還包括馬鈴薯粉0-1.0%。水溶液中包括如下重量百分比的原料酵母粉
O.2%、蔗糖2%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨O. 3%、馬鈴薯粉O. 5%。上述組分組分大都來源豐富，價(jià)格低廉，便于大量使用，進(jìn)行量產(chǎn)。且采用本發(fā)明培育出的雙孢菇菌絲，菌絲體生長快速，活力強(qiáng)，在同樣的萌發(fā)時(shí)間內(nèi)菌絲密度偏高。原料還包括以下比重組分大豆肽O. 05-0. 5%、硫酸鈣O. 01-0. 1%。適當(dāng)?shù)募尤氪蠖闺淖鳛榈?，可為雙孢菇的生長提供足夠的養(yǎng)料。而在雙孢菇生長的過程中，需要微量的鈣元素，硫酸鈣的添加可為雙孢菇的生長提供需要的營養(yǎng)成分。原料在所述水溶液中的重量百分比如下酵母粉O. 3%、蔗糖2. 5%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨O. 2%、馬鈴薯粉O. 5%、大豆肽O. 2%、硫酸鈣O. 03%。
實(shí)施例I :將20g蔗糖、O. Sg硫酸鎂、O. Sg磷酸二氫鉀倒入1000毫升的水溶液中攪拌，直至溶解成半成品；再將3g酵母粉、5g馬鈴薯粉、3g蛋白胨放入半成品中，充分?jǐn)嚢韬笕ヅ荩瞥膳囵B(yǎng)基液體。對(duì)培養(yǎng)基液體的PH值進(jìn)行測試，并用磷酸氫二鉀調(diào)整培養(yǎng)基液體的PH值，使其PH值保持6. 5-7.0。將培養(yǎng)基液體放入滅菌設(shè)備進(jìn)行滅菌溫度為121_123°C，氣壓為I. 3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的高溫滅菌，高溫滅菌時(shí)，至少保持15分鐘的高溫滅菌狀態(tài)。然后將處于高溫的培養(yǎng)基液體在無菌條件下進(jìn)行以150-200rpm的攪拌速度進(jìn)行攪拌后，將培養(yǎng)基液體進(jìn)行冷卻，使培養(yǎng)基液體的溫度保持在20-21. 9°C后，接入雙孢菇菌種，將含有雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體通過凈化空氣進(jìn)行有氧培養(yǎng)7-10天，有氧培養(yǎng)時(shí)，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為20-23°C，并對(duì)含有雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。實(shí)施例2 將15g蔗糖、IOg麥芽糖、O. Sg硫酸鎂、O. Sg磷酸二氫鉀、3g酵母粉、3g蛋白胨一起倒入倒入1000毫升的水溶液中，并用攪拌機(jī)進(jìn)行充分?jǐn)嚢韬?，進(jìn)行去泡。利用PH試紙對(duì)培養(yǎng)基液體進(jìn)行PH值測試，用磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀對(duì)培養(yǎng)基液體的PH值進(jìn)行調(diào)試呈中性。然后將培養(yǎng)基液體放入滅菌設(shè)備進(jìn)行高溫高壓滅菌30分鐘，滅菌時(shí)，將滅菌的溫度調(diào)至124-125 ，氣壓為I. 3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓。滅菌完畢后，在無菌狀態(tài)下取出培養(yǎng)基液體并對(duì)其進(jìn)行冷卻至22-23. 9°C后，如上述實(shí)施例I一樣進(jìn)行接種并有氧培育。實(shí)施例3 將25g葡萄糖、O. 8g硫酸鎂、O. 8g磷酸二氫鉀、倒入1000毫升的水溶液中，并攪拌使其溶化，然后放入3g酵母粉、5g馬鈴薯粉、3g蛋白胨、3g大豆肽，通過攪拌機(jī)進(jìn)行充分?jǐn)嚢璩蔀榕囵B(yǎng)基液體，對(duì)培養(yǎng)基液體進(jìn)行去泡。并用PH測試儀對(duì)培養(yǎng)基液體進(jìn)行PH值測試，用鹽酸和氫氧化鈉對(duì)培養(yǎng)基液體的PH值進(jìn)行調(diào)至6. 5-7. O。然后將培養(yǎng)基液體放入超聲波滅菌裝置進(jìn)行消毒滅菌至少30分鐘，然后對(duì)培養(yǎng)基液體進(jìn)行降溫至24-25 °C后，接入雙孢菇菌種，將含有雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體通過凈化空氣進(jìn)行有氧培養(yǎng)7-10天，有氧培養(yǎng)時(shí)，保持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為20-23°C，并對(duì)含有雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變 化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。
權(quán)利要求
1.雙孢菇液體菌種配方，包括原料、水溶液，其特征在于，所述原料在所述水溶液中的重量百分比如下酵母粉O. 1-1.0%、糖分I. 5-3%、磷酸二氫鉀O. 05-0. 3%、硫酸鎂O. 05-0. 3%、蛋白胨 O. 1-0. 5%O
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的雙孢菇液體菌種配方，其特征在于所述糖分采用蔗糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙孢菇液體菌種配方，其特征在于所述原料還包括馬鈴薯粉；所述水溶液中含有以下重量比的原料馬鈴薯粉0-1.0%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙孢菇液體菌種配方，其特征在于所述水溶液中包括如下重量百分比的原料酵母粉O. 2%、蔗糖2%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨O. 3%、馬鈴薯粉O. 5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙孢菇液體菌種配方及其制備方法，其特征在于所述水溶液中還包括以下比重的原料大豆肽O. 05-0. 5%、硫酸鈣O. 01-0. 1%。
6.雙孢菇液體菌種的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 O培養(yǎng)基配置培養(yǎng)基配置將原料按比例倒入水溶液中，并充分?jǐn)嚢韬笕ヅ?，制成培養(yǎng)基液體； 2)培養(yǎng)基調(diào)整對(duì)所述培養(yǎng)基液體的PH值進(jìn)行測試，并用PH調(diào)節(jié)劑調(diào)整所述培養(yǎng)基液體的PH值，使其PH值保持6. 5-7. O ； 3)培養(yǎng)基滅菌將所述培養(yǎng)基液體放入滅菌設(shè)備進(jìn)行高溫滅菌至少15分鐘，然后將處于高溫的所述培養(yǎng)基液體在無菌條件下進(jìn)行以150-200rpm的攪拌速度進(jìn)行攪拌； 4)菌絲接種將培養(yǎng)基液體進(jìn)行冷卻，使所述培養(yǎng)基液體的溫度保持在20-25°C后，接入雙孢菇菌種，將含有雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體進(jìn)行有氧培養(yǎng)7-10天，即可制得雙孢菇菌種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙孢菇液體菌種的制備方法，其特征在于所述原料在所述水溶液中的重量百分比如下酵母粉O. 2%、蔗糖2%、磷酸二氫鉀O. 08%、硫酸鎂O. 08%、蛋白胨 O. 3%ο
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙孢菇液體菌種的制備方法，其特征在于步驟2)中，所述PH調(diào)節(jié)劑采用磷酸氫二鉀。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙孢菇液體菌種的制備方法，其特征在于步驟3)中，有氧培養(yǎng)時(shí)，保持所述培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為20-23°C，并對(duì)含有所述雙孢菇菌種的培養(yǎng)基液體進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物工程領(lǐng)域，特別涉及一種培養(yǎng)基及其制備方法。雙孢菇液體菌種配方，包括原料、水溶液，水溶液內(nèi)含有原料，水溶液中原料包括以下重量比的組分酵母粉0.1-1.0%、糖分1.5-3%、磷酸二氫鉀0.05-0.3%、硫酸鎂0.05-0.3%、蛋白胨0.1-0.5%。雙孢菇液體菌種的制備方法，包括如下步驟培養(yǎng)基配置、培養(yǎng)基調(diào)整、培養(yǎng)基滅菌、菌絲接種。采用上述技術(shù)后，本發(fā)明所培育出的雙孢菇菌絲，菌絲生命力旺盛，不易衰老，發(fā)菌速度快，抗病能力強(qiáng)，易大規(guī)模種植。
文檔編號(hào)C05G3/00GK102964170SQ20121031634
公開日2013年3月13日 申請日期2012年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月30日
發(fā)明者胡衛(wèi)紅 申請人:上海雪榕生物科技股份有限公司