專利名稱：一種甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法，屬于甘蔗遺傳育種研究領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
遠(yuǎn)緣雜交是進(jìn)行植物遺傳學(xué)、育種學(xué)和進(jìn)化研究的重要途徑，現(xiàn)已成為植物育種取得突破性進(jìn)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。離體培養(yǎng)技術(shù)是ー項(xiàng)簡(jiǎn)單實(shí)用的生物技術(shù)，要求的器材簡(jiǎn)單，在普通的植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中就可以進(jìn)行。這ー技術(shù)應(yīng)用于拯救敗育或發(fā)育不良的遠(yuǎn)緣雜種胚，將雜交種子進(jìn)行體外培養(yǎng)，從而可以提高種子成苗率，獲得可育的實(shí)生苗后代。目前，胚離體培養(yǎng)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于水稻、小麥等糧食作物，在甘蔗等經(jīng)濟(jì)作物中的應(yīng)用前景也非常值得期待。但是，由于影響雜種胚生長(zhǎng)的因素十分復(fù)雜，而不同物種不同雜交 組合雜種胚生長(zhǎng)的條件各不相同，致使雜種胚的離體培養(yǎng)拯救難于程序化，必需針對(duì)不同的雜種胚進(jìn)行各種影響因素的優(yōu)化，建立起適用于不同物種和組合的雜種胚離體培養(yǎng)育苗體系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供ー種甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法，是ー種能簡(jiǎn)便高效地通過甘蔗雜交種子離體培養(yǎng)獲得實(shí)生苗后代的有效方法，該方法有利于提高甘蔗雜交種子的萌發(fā)率和成苗率。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)ー種甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法，其特征在于以甘蔗雜種胚作為外植體，先接種到改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基上進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，出苗后轉(zhuǎn)移到改良的N6生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根；
所述的甘蔗雜種胚外植體為人工剝離后的甘蔗雜交花穗種子；
所述改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基配方為KC + I mg/L IBA + 30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂，ρΗ5· 8 ；
所述改良的Ν6生根培養(yǎng)基配方為/^6( 大量元素，其它成分不變)+ 2 mg/L NAA+30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂+ O. 2g/L活性炭，ρΗ5· 8。本發(fā)明以不同組合的甘蔗遠(yuǎn)緣雜交花穗種子作為培養(yǎng)材料，試驗(yàn)了 MS、KnUdson C(KC)、N6等多種改良培養(yǎng)基，并對(duì)添加不同2. 4-D和IBA濃度的培養(yǎng)基進(jìn)行了比較研究，最終獲得了適合甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)使用的萌發(fā)培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，建立起一套便捷的甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法。本發(fā)明以不同雜交組合的甘蔗雜種胚作為外植體,先接種到改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基上進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，出苗后轉(zhuǎn)移到改良的N6生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，注意種子萌發(fā)后周圍的稠狀體應(yīng)切去，在幼苗生根培養(yǎng)中有利于小苗的成活，該方法能使得甘蔗雜種胚萌發(fā)率和生根成苗率得到顯著提高。所述的甘蔗雜種胚外植體為人工剝離后的甘蔗雜交花穗種子，依次經(jīng)70%酒精消毒60s和1%。升萊溶液消毒6min處理。所述改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基配方為KC + I mg/L IBA + 30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂，pH 5.8 ;改良的N6生根培養(yǎng)基配方為ぶ郵“大量元素，其它成分不變)+ 2 mg/L NAA+30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂+ O. 2g/L活性炭，pH5.8。本發(fā)明提出的甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗方法與常規(guī)甘蔗實(shí)生苗育苗技術(shù)相比具有顯著優(yōu)點(diǎn)，由于采用了經(jīng)試驗(yàn)改良的萌發(fā)培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基進(jìn)行階段性培養(yǎng)，使得甘蔗雜種胚細(xì)胞在出苗和生根不同階段的細(xì)胞分化得到了充分増殖，僅用了ー個(gè)10天左右的出苗培養(yǎng)和ー個(gè)2周的生根培養(yǎng)周期，即可得到生根的幼苗。本發(fā)明簡(jiǎn)化了育苗程序，縮短了育苗周期，降低了勞動(dòng)カ成本，提高了甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚的萌發(fā)率和生根成苗率，可為相關(guān)甘蔗科研単位和育種機(jī)構(gòu)在進(jìn)行實(shí)生苗育苗時(shí)提供參考借鑒。
具體實(shí)施例方式
甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗方法，具體實(shí)施中用到的儀器設(shè)備有超凈工作臺(tái)、滅菌鍋、低溫冰箱和光照培養(yǎng)箱等，其詳細(xì)實(shí)施步驟如下
I.雜交花穗種子剝離
采集甘蔗雜交花穂，人工剝離留取雜交種子，保存至-20°C低溫冰箱備用。2.培養(yǎng)基配制
按照下列培養(yǎng)基配方，依次配制KC/N6培養(yǎng)基母液于-4°C冰箱保存?zhèn)溆?。誘導(dǎo)種子萌發(fā)KC改良培養(yǎng)基KC + I mg/L IBA + 30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂；誘導(dǎo)幼苗生根N6改良培養(yǎng)基ΑΝΘ ( 大量元素，其它成分不變)+ 2 mg/L NAA+30g/L
鹿糖+4g/L瓊脂+ O. 2g/L活性炭；
以上培養(yǎng)基均為固體培養(yǎng)基，pH5. 8。3.種子消毒接種及離體培養(yǎng)
剝?nèi)〉母收岱N子用滅菌紗布包好放在無菌水中泡洗3次，70%含水量的酒精消毒60s，1%。升汞溶液消毒6min，無菌水泡洗5次；接種時(shí)用滅過菌的勺把種子取到濾紙上吸去表面水分，在酒精燈旁干燥后用鑷子將種子接種到KC萌發(fā)培養(yǎng)基上，封ロ置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察；待種子出苗長(zhǎng)到4-5cm時(shí)(10天左右)，切去幼苗根部稠狀體，轉(zhuǎn)接到N6生根培養(yǎng)基上光照培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，I周后幼苗開始生根，2周后可獲得根系生長(zhǎng)情況良好的組培實(shí)生苗。
權(quán)利要求
1.ー種甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法，其特征在于以甘蔗雜種胚作為外植體，先接種到改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基上進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，出苗后轉(zhuǎn)移到改良的N6生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根；所述的甘蔗雜種胚外植體為人工剝離后的甘蔗雜交花穗種子；所述改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基配方為KC + I mg/L IBA + 30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂，pH5.8 ；所述改良的N6生根培養(yǎng)基配方為占郵“大量元素，其它成分不變)+ 2 mg/L NAA+30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂+ O. 2g/L活性炭，pH5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法，其特征在于步驟如下①剝?nèi)〉母收犭s交花穗種子用滅菌紗布包好放在無菌水中泡洗3次，70%含水量的酒精消毒60s，1%。升汞溶液消毒6 min，無菌水泡洗5次；②接種時(shí)把種子取到濾紙上吸去表面水分，干燥后將種子接種到改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基上，封ロ置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察；所述改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基配方為KC + I mg/LIBA + 30g/L 鹿糖 + 4g/L 瓊脂，pH 5. 8 ；③待種子出苗長(zhǎng)到4-5cm吋，切去幼苗根部稠狀體，轉(zhuǎn)接到改良的N6生根培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，獲得組培實(shí)生苗；所述改良的N6生根培養(yǎng)基配方為/^6( 大量元素，其它成分不變)+ 2 mg/L NAA+30g/L蔗糖+ 4g/L瓊脂+ O. 2g/L活性炭，pH5.8。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甘蔗遠(yuǎn)緣雜種胚離體培養(yǎng)育苗的方法，屬于甘蔗遺傳育種研究領(lǐng)域，本發(fā)明以甘蔗雜種胚作為外植體，先接種到改良的KC萌發(fā)培養(yǎng)基上進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，出苗后轉(zhuǎn)移到改良的N6生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，所述的甘蔗雜種胚外植體為人工剝離后的甘蔗雜交花穗種子；本發(fā)明簡(jiǎn)化了育苗程序，縮短了育苗周期，降低了勞動(dòng)力成本，同時(shí)提高了甘蔗雜交種子的萌發(fā)率和成苗率，可為相關(guān)甘蔗科研單位和育種機(jī)構(gòu)在進(jìn)行實(shí)生苗育苗時(shí)提供參考借鑒。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102823493SQ20121029625
公開日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月20日
發(fā)明者毛鈞, 蔡青, 陸鑫, 吳轉(zhuǎn)娣, 張敏, 劉新龍, 蘇火生, 馬麗, 劉洪博, 林秀琴, 范源洪 申請(qǐng)人:云南云蔗科技開發(fā)有限公司