專利名稱：肝損傷模型的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法，即一種肝損傷模型的建立方法。
背景技術(shù)：
建立肝損傷模型是肝病研究中常用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法。目前，肝損傷模型的建立方法很多，例如灌注四氯化碳(CCL4)、D_半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)、豬血清、高度白酒等。研究發(fā)現(xiàn)，上述造模方法均與蒙醫(yī)基礎(chǔ)理論不太吻合。蒙醫(yī)理論認(rèn)為，肝臟位于右側(cè)上腹，橫隔之下，希拉之總位，五元中之火元素精華所藏之處，是變色希拉之所舍，也是病變希臘竄行之道。肝的生理功能是通過(guò)分熱能和變色希拉之作用，使水谷之精華生化為血液，同時(shí)把肝內(nèi)生成的血液之槽泊一膽汁輸送之膽囊。胃位于膈下上腹部，上接食道，下通小腸，希拉之總位，也是病變巴達(dá)干竄行之道，五元中之土元素精華之槽泊聚集于胃中。另外消化三能一磨碎巴達(dá)干、消化希拉和調(diào)火赫依共存于胃內(nèi)。食物借司命赫依之作用被咽進(jìn)胃內(nèi)，而后為磨碎巴達(dá)干所腐熟成甘味泡沫狀乳糜，此時(shí)巴達(dá)干亦得滋養(yǎng)；其次被消化希 拉所溶解轉(zhuǎn)化為酸味，此時(shí)亦能滋養(yǎng)希拉；最后被調(diào)火赫依分解成苦味的精華和槽泊，同時(shí)赫依亦能得到滋養(yǎng)。因此，蒙醫(yī)理論把肝損傷歸因于胃血癥，認(rèn)為肝病的發(fā)病機(jī)理是猶豫邪熱傷肝致使水谷精華不能化生為血，卻惡血激增溢于胃，即“胃血癥而引起肝損傷”?；谏鲜稣J(rèn)識(shí)，蒙醫(yī)在肝損傷治療中采用了一系列獨(dú)特的治療方法和用藥原則，并且具有良好的治療效果。顯然，我們?cè)诿舍t(yī)理論的基礎(chǔ)上進(jìn)行肝損傷研究的時(shí)候，如果不是采用胃血癥的方法，而是采用其他方法來(lái)建立肝損傷模型，在理論上難以自圓其說(shuō)，其治療方法和用藥原則的考量也會(huì)遇到障礙。因此，我們希望有一種與蒙醫(yī)理論一致的肝損傷模型的建立方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種與蒙醫(yī)有關(guān)肝損傷形成的理論相一致的肝損傷模型的
建立方法。上述目的是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的提供一種肝損傷模型的建立方法，其特點(diǎn)是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行胃幽門結(jié)扎，造成胃液在胃中滯留，進(jìn)而形成肝損傷模型。所說(shuō)的胃幽門結(jié)扎的過(guò)程是把實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2—4天后，禁食24h，此間不禁水，每只大鼠按3mg/kg的給藥標(biāo)準(zhǔn)先用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，在大鼠肚皮胃幽門處剪成小口，找到胃幽門后用縫合線結(jié)扎，然后縫合腹腔，造成胃液在胃中滯留，致潰瘍因素增強(qiáng)，胃壁防御因素相對(duì)減弱，導(dǎo)致潰瘍形成，肝損傷的各項(xiàng)指標(biāo)隨之產(chǎn)生。所說(shuō)的縫合腹腔后到肝損傷模型形成需要14-16小時(shí)。所說(shuō)的肝損傷模型的驗(yàn)證方法是術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，禁食禁水14_16h，然后腹腔注射10%水合氯醛麻醉，打開(kāi)腹腔取肝臟，稱重，計(jì)算肝臟指數(shù)，取一部分肝臟，固定于10%甲醛，做病理備用，再?gòu)母怪鲃?dòng)脈取血，水浴36 37°C保溫30min，取出4°C冰箱放置30min,離心 IOmin (3000r/min),分取血清，測(cè)定血清中的 AST、ALT、CHE、NO、NOS 含量。
本發(fā)明的有益效果是所建模型的各項(xiàng)表征與肝損傷的指標(biāo)相吻合，能夠代表肝損傷的實(shí)際過(guò)程，模型的形成過(guò)程符合蒙醫(yī)理論，為蒙醫(yī)蒙藥有關(guān)肝病的治療研究帶來(lái)了方便，在蒙藥以及蒙醫(yī)方劑作用機(jī)制研究方面有著不可替代的作用，對(duì)于蒙醫(yī)傳統(tǒng)理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的結(jié)合，發(fā)揮民族醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)，解除肝病患者的痛苦，具有重要的意義。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的實(shí)施方式是把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物開(kāi)腹，將胃幽門結(jié)扎后縫合腹部，即可形成肝損傷模型。具體做法是將大鼠適應(yīng)于環(huán)境2—4天后，做手術(shù)之前禁食不禁水24h，每只大鼠先用10%水合氯醛腹腔注射(給藥標(biāo)準(zhǔn)為3mg/kg)麻醉，在大鼠肚皮胃幽門處剪成小口，找到胃幽門后用縫合線結(jié)扎，然后縫合腹腔。關(guān)腹后14-16小時(shí)肝損傷模型形成，通過(guò)檢驗(yàn)有關(guān)指標(biāo)，確定肝損傷模型是否建立。為證明上述方法的效果，本研究進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明采用胃幽門結(jié)扎能夠形成肝損傷，其穩(wěn)定性和可復(fù)現(xiàn)性均滿足肝損傷治療研究的需求。下面僅介紹一個(gè)實(shí)驗(yàn)例I.實(shí)驗(yàn)儀器及材料I. I儀器AUY120電子天平(日本島津公司)；TG16—WS臺(tái)式高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；HH — W600數(shù)顯三用恒溫水箱(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)；分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司型號(hào)T6新世紀(jì))；全自動(dòng)生化分析儀(意大利奔騰)；電子天平(型號(hào)YB1201，精確度0. lg)，購(gòu)自上海?？惦娮觾x器廠；lml注射器；剪刀；鑷子。I. 2試劑、藥品及制備AST、ALT、CHE、URE、TP試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批號(hào)20111203。NO、N0S、試劑盒(南京建成生物生物工程研究所)，批號(hào)20111212。CH0、TG、LDL-C試劑盒(南京建成生物生物工程研究所)，批號(hào)20120311。I. 3試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK (遼)2011-0023。2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2. I實(shí)驗(yàn)方法買來(lái)的大鼠適應(yīng)于環(huán)境2— 4天后，按體重隨機(jī)分為正常組和模型組，每組12只。手術(shù)之前24h禁食不禁水，模型組每只大鼠先用10%水合氯醛腹腔注射(給藥標(biāo)準(zhǔn)為3mg/kg)麻醉，然后打開(kāi)腹腔結(jié)扎幽門關(guān)腹。術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，禁食禁水14-16h后腹腔注射10%水合氯醛麻醉。打開(kāi)腹腔取肝臟，稱重，計(jì)算肝臟指數(shù)，取一部分肝臟，固定于10%甲醛，做病理備用。再?gòu)母怪鲃?dòng)脈取血，水浴36 37°C保溫30min，取出4°C冰箱放置30min，離心IOmin (30001'/111111)，分取血清，測(cè)定血清中的451\41^、0^、勵(lì)、勵(lì)5含量。2. 2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2. 2. I幽門結(jié)扎法對(duì)大鼠血清AST、ALT、CHE、URE含量的影響測(cè)定之前把血清稀釋14倍，按照試劑盒說(shuō)明測(cè)定的結(jié)果見(jiàn)表I。表I幽門結(jié)扎法大鼠血清AST、ALT、CHE、URE含量的影響(X土S)權(quán)利要求
1.一種肝損傷模型的建立方法，其特征在于將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行胃幽門結(jié)扎，造成胃液在胃中滯留，進(jìn)而形成肝損傷模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的肝損傷模型的建立方法，其特征在于所說(shuō)的胃幽門結(jié)扎的過(guò)程是把實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2—4天后，禁食24h，此間不禁水，每只大鼠按3mg/kg的給藥標(biāo)準(zhǔn)先用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，在大鼠肚皮胃幽門處剪成小口，找到胃幽門后用縫合線結(jié)扎，然后縫合腹腔，造成胃液在胃中滯留，致潰瘍因素增強(qiáng)，胃壁防御因素相對(duì)減弱，導(dǎo)致潰瘍形成，肝損傷的各項(xiàng)指標(biāo)隨之產(chǎn)生。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肝損傷模型的建立方法，其特征在于所說(shuō)的縫合腹腔后到肝損傷模型形成需要14-16小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肝損傷模型的建立方法，其特征在于所說(shuō)的肝損傷模型的驗(yàn)證方法是術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，禁食禁水14-16h，然后腹腔注射10%水合氯醛麻醉，打開(kāi)腹腔取肝臟，稱重，計(jì)算肝臟指數(shù)，取一部分肝臟，固定于10%甲醛，做病理備用，再?gòu)母怪鲃?dòng)脈取血，水浴36 37°C保溫30min,取出4°C冰箱放置30min,離心IOmin (3000r/min),分取血清，測(cè)定血清中的AST、ALT、CHE、NO、NOS含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種方法，即一種肝損傷模型的建立方法。其特點(diǎn)是將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行胃幽門結(jié)扎，造成胃液在胃中滯留，進(jìn)而形成肝損傷模型。其有益效果是肝損傷模型的形成過(guò)程符合蒙醫(yī)關(guān)于肝損傷的理論，為蒙醫(yī)蒙藥有關(guān)肝病的治療研究帶來(lái)了方便，在蒙藥以及蒙醫(yī)方劑作用機(jī)制研究方面有著不可替代的作用，對(duì)于蒙醫(yī)傳統(tǒng)理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的結(jié)合，發(fā)揮民族醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)，解除肝病患者的痛苦，具有重要的意義。
文檔編號(hào)A61D1/00GK102727322SQ201210238680
公開(kāi)日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月11日
發(fā)明者烏恩其, 烏日罕, 代秀平, 海晶晶, 王歡, 王秀蘭 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古民族大學(xué)