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青霉素在葡萄試管簡易繁殖上的應(yīng)用及葡萄試管繁殖新技術(shù)的制作方法

文檔序號:205591閱讀:562來源:國知局
專利名稱:青霉素在葡萄試管簡易繁殖上的應(yīng)用及葡萄試管繁殖新技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是涉及ー種青霉素在葡萄試管簡易繁殖上的應(yīng)用及葡萄試管繁殖新技木。
背景技術(shù)
葡萄試管脫毒繁殖是ー項最有成效的生物技木,一個脫毒或新育良種和稀缺葡萄品種用試管繁殖能在短期內(nèi)快速大量提供整齊一致的無病毒葡萄苗木,但試管繁殖需要具備一定的設(shè)備和技術(shù)手段,成本高(含糖瓊脂培養(yǎng)基成本是常規(guī)繁殖的4-8倍)(見曹效 東、曹孜義,1996,植物試管繁殖的成本與效益淺析。植物生理學(xué)通訊,32(4),284-291);在含糖瓊脂培養(yǎng)基上容易滋生微生物,造成污染;試管苗根無根毛,移栽不易(表6);含糖瓊脂培養(yǎng)基耗電大、用エ多,費(fèi)用高(見表5)。若采用只加有無機(jī)營養(yǎng)成分的簡易蛭石培養(yǎng)基,則雜菌無法生長,培養(yǎng)基簡単,省エ、省電,且可大幅降低成本,但是該蛭石培養(yǎng)基中沒有有機(jī)成分和生長素,導(dǎo)致葡萄試管苗生根較慢,加入青霉素有促進(jìn)生根作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種青霉素在葡萄試管簡易繁殖上的應(yīng)用;本發(fā)明的另ー個目的是提供ー種エ藝簡便,成本低廉,不易污染,同時既能防治雜菌,又可有效地促進(jìn)生長和生根的葡萄試管繁殖新技木。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的所采用的技術(shù)方案為一種青霉素在葡萄試管簡易繁殖上的應(yīng)用。ー種葡萄試管簡易繁殖新技術(shù),其特征是將從田間選取的葡萄脫病毒優(yōu)良植株,采用綜合無傷消毒技術(shù)獲取無菌苗,然后在GS瓊脂培養(yǎng)基上,在25-28°C、1500-3000Lx光照條件下進(jìn)行初代培養(yǎng),至試管苗長至瓶ロ吋,剪成單芽莖段轉(zhuǎn)入另瓶GS瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng),在移栽前2月用加入低濃度青霉素的GN營養(yǎng)液+蛭石培養(yǎng)基,在25-28°C、1500-3000Lx光照條件下培養(yǎng)18-20天,長成苗即可進(jìn)行移栽。所述的青霉素、蛭石和GN營養(yǎng)液的用量配比為每80_90mlGN營養(yǎng)液中加入50-60g蛭石和25-50mg的青霉素;其中GN營養(yǎng)液組成為每IL水中含有如下mg的物質(zhì)KNO3475
NH4 NO3412
MgSO4 · 7H2092.5
KHP0485
CaCl2 · 2H20150
MnSO4 4 H2O5.5
Zn SC). · 7H202.2
H,B0,1.6
KI0.2
NaMo04*2H200.06
CuSO4 · 4 H2O0.06
CoCI · 6 H.O0.06
Niた-EDTA37.3
FeSO4 · 7 H2O27.8,本發(fā)明采用含有低濃度青霉素的蛭石培養(yǎng)基進(jìn)行葡萄試管簡易繁殖,具有如下技術(shù)優(yōu)勢I、成本低,青霉素蛭石培養(yǎng)基是瓊脂培養(yǎng)基成木的1/4 (瓊脂180元/kg斤,蛭石150 元 /m3)。2、青霉素蛭石培養(yǎng)基,因沒有糖和有機(jī)成份,不易茲生雜菌(見表4)。3、受不良條件影響的葡萄瓊脂培養(yǎng)基試管苗,可以用青霉素蛭石培養(yǎng)基進(jìn)行挽救,從而減少損失(見表3)。4、青霉素蛭石培養(yǎng)基透氣好,葡萄試管苗根上有根毛,吸收好,移栽較易(表1、2、6)。5、青霉素蛭石培養(yǎng)基,容器和水不用嚴(yán)格清洗,簡少エ序,節(jié)省用エ、用電和設(shè)備。6、青霉素蛭石培養(yǎng)基葡萄試管苗,繁殖速度是原有方法的I. 5倍。綜上所述,本發(fā)明エ藝簡便,成本低廉,不易污染,同時既能防治雜菌,又可有效、快速地促進(jìn)葡萄生長和生根,加快繁殖速度。本發(fā)明對于快速高效的繁殖脫毒葡萄、新育良種和稀缺葡萄品種迅速、低成本的繁殖推廣有重要意義。


圖I為初代長成的無苗葡萄試管苗;圖2為加青霉素的蛭石培養(yǎng)基繁殖20天生長情況;圖3為光培開瓶后2D,簡易蛭石試管繁殖苗(前排)與瓊脂繁殖試管苗(后排)的生長情況;圖4為蛭石試管苗根有根毛,容易移栽;圖5為瓊脂三角瓶試管苗根無根毛,不易移栽;圖6為沙培煉苗后葡萄試管苗根多根壯。
具體實施方式
I、無菌脫毒良種葡萄試管苗的獲得從田間選取的葡萄脫病毒優(yōu)良植株,采用綜合無傷消毒技術(shù)獲取無菌苗,然后在GS瓊脂培養(yǎng)基上,在25-28°C、1500-3000Lx光照條件下進(jìn)行初代培養(yǎng),具體過程為I)用無菌操作技術(shù)剪取嫩梢,放入無菌的廣ロ瓶內(nèi)。2)先用無菌水沖洗1-2次。3)倒入清潔劑(84消毒液,濃度按說明書)搖洗15分鐘,無菌水沖洗2次,倒入70%酒精迅速過ー下,不超過5秒鐘,去酒精,無菌水浸泡和沖洗2次。4)去無菌水,加入O. 1%升汞(內(nèi)加2%的95%酒精),浸沒材料,并劇烈搖動3 8分鐘(根據(jù)材料老幼變動,嫩的短,老的長),去升汞,無菌水沖四次備用。 5)接種剪去受傷藥面,剪成單芽莖段,接入GS培養(yǎng)基中,一瓶接I 2個帶芽莖段,在25 28°C、1500 3000Lux連續(xù)光下培養(yǎng)。若帶病毒,就要用熱處理并配合莖尖剝離培養(yǎng),經(jīng)檢測無主要葡萄病毒即為脫毒無菌葡萄試管苗。2、無菌良種脫毒葡萄試管苗的繼代增值當(dāng)初代葡萄試管苗長至瓶ロ,進(jìn)行繼代,即剪成單芽莖段轉(zhuǎn)入另瓶GS瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng),每瓶放3 5個單芽莖段,30D后多數(shù)葡萄品種又長至瓶ロ,再剪成單芽莖段轉(zhuǎn)入另瓶同一培養(yǎng)基中培養(yǎng),仍在25 28°C、1500 3000Lx連續(xù)光下培養(yǎng),一代代繁殖下去,每月即有3倍的增值速度,這叫繼代繁殖。3、無菌脫毒良種葡萄試管苗的簡易蛭石培養(yǎng)基擴(kuò)大繁殖GS瓊脂培養(yǎng)基含有糖及有機(jī)成分,不僅成本高而且易滋生雜菌,也難以移栽,本發(fā)明在移栽前2月先轉(zhuǎn)入無糖和無有機(jī)成分的低濃度青霉素+蛭石+GN營養(yǎng)液培養(yǎng)基中培養(yǎng),具體為用大口瓶或廢舊罐頭瓶,裝50 60g蛭石,加入80 90ml GN營養(yǎng)液(即原GS培養(yǎng)基,只加1/2的無機(jī)成分,鐵鹽濃度不變,不加有機(jī)成分、糖和貴重的瓊脂。),然后加入25 50mg的青霉素,經(jīng)高溫滅菌備用。GN營養(yǎng)液組成為如前述的GN營養(yǎng)液組成成分。接種時,每瓶放入8 10個雙芽莖段,上蓋透光好的培養(yǎng)皿或透氣膜,在25 28度,1500 3000Lux連續(xù)光下培養(yǎng),20D即可成苗,即準(zhǔn)備移栽。表I :蛭石培養(yǎng)基20D后葡萄試管苗的成活和增值倍數(shù)
培奍瓶 -py-,rP雜 M-Mr itm 威活 ^■增W倍
_ &株數(shù)緣 數(shù)f- fg*
(% )
m if
20D 6 姪イj'";*27 10 27 100 28 2.68
41
20D 6 I ィ I— マト 14 28 10 100 17 1.7
Ai表2 :轉(zhuǎn)接入蛭石培養(yǎng)基中不同葡萄品種成苗率和增值倍數(shù)
權(quán)利要求
1.一種青霉素在葡萄試管簡易繁殖上的應(yīng)用。
2.ー種葡萄試管簡易繁殖新技術(shù),其特征是將從田間選取的葡萄脫病毒優(yōu)良植株,采用綜合無傷消毒技術(shù)獲取無菌苗,然后在GS瓊脂培養(yǎng)基上,在25-28°C、1500-3000Lx光照條件下進(jìn)行初代培養(yǎng),至試管苗長至瓶ロ吋,剪成單芽莖段轉(zhuǎn)入另瓶GS瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng),在移栽前2月用加入低濃度青霉素的GN營養(yǎng)液+蛭石培養(yǎng)基,在25-28°C、1500-3000Lx光照條件下培養(yǎng)18-20天,長成苗即可進(jìn)行移栽。
3.按照權(quán)利要求2所述的葡萄試管簡易繁殖新技術(shù),其特征是所述的青霉素、蛭石和GN營養(yǎng)液的用量配比為每80-90mlGN營養(yǎng)液中加入50_60g蛭石和25_50mg的青霉素; 其中GN營養(yǎng)液組成為每IOOOml水中含有如下mg的物質(zhì)
全文摘要
本發(fā)明涉及一種青霉素在葡萄試管簡易繁殖上的應(yīng)用及葡萄試管繁殖新技術(shù),該技術(shù)將從田間選取的葡萄脫病毒優(yōu)良植株,采用綜合無傷消毒技術(shù)獲取無菌苗,然后在GS瓊脂培養(yǎng)基上,在25-28℃、1500-3000Lx光照條件下進(jìn)行初代培養(yǎng),至試管苗長至瓶口時,剪成單芽莖段轉(zhuǎn)入另瓶GS瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng),在移栽前2月用加入低濃度青霉素的GN營養(yǎng)液+蛭石培養(yǎng)基,在25-28℃、1500-3000Lx光照條件下培養(yǎng)18-20天,長成苗即可進(jìn)行移栽。本發(fā)明工藝簡便,成本低廉,不易污染,同時既能防治雜菌,又可有效、快速地促進(jìn)葡萄生長和生根,加快繁殖速度。
文檔編號A01H4/00GK102668991SQ20121019605
公開日2012年9月19日 申請日期2012年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月14日
發(fā)明者任彥青, 何金柱, 康宏, 曹孜義, 李玉霞, 李觀華, 楊貴荷, 王宏, 管建寧, 董少軍, 郎鳳紅, 郭惠萍, 高學(xué)花, 齊霞 申請人:寧夏農(nóng)墾西夏王實業(yè)有限公司
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