專利名稱：一種黑龍江茴魚人工繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于漁業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種魚的人工繁殖方法，特別涉及一種黑龍江茴魚的人工繁殖方法。
背景技術(shù)：
黑龍江茴魚(Thymallus arcticus grubei Dybowski)俗稱斑蹲子、紅鱗魚、魚華等，英文名Amur grayling,屬于鮭形目、茴魚科、茴魚屬，系北冷溫帶一種典型的山澗溪流棲居的冷水性魚類。其肉質(zhì)鮮美，為黑龍江省特有的名貴食用魚類。黑龍江茴魚個體較小，生長速度相對稍慢且數(shù)量不多，未形成一定的捕撈量。近年來隨著生活水平的提高，人們消費(fèi)觀念發(fā)生了轉(zhuǎn)變，黑龍江茴魚逐漸成為廣大消費(fèi)者青睞的名優(yōu)水產(chǎn)品。由于天然水域的產(chǎn)量非常有限，難以滿足日益增長的市場需求，加之當(dāng)?shù)貪O民多在洄游期進(jìn)行捕撈，捕撈強(qiáng)、度過大，使原來就不多的資源量顯著下降。此外，由于在河流上興修水庫和水利設(shè)施，改變了黑龍江茴魚的產(chǎn)卵、攝食、越冬環(huán)境，對其繁殖和生存也造成了影響，使黑龍江茴魚成為瀕危魚類，被列入《中國瀕危動物紅皮書魚類》和《中國珍稀名貴魚類》名錄。人工養(yǎng)殖是保護(hù)與恢復(fù)瀕危物種資源最重要的途徑。為了充分開發(fā)利用這一名貴的土著魚類，為人工養(yǎng)殖的發(fā)展提供大量苗種，同時也為更有效地保護(hù)黑龍江茴魚的自然資源，研究其人工繁殖技術(shù)方法成為必然。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于為了保護(hù)黑龍江茴魚的自然資源，為規(guī)模化養(yǎng)殖提供充足的苗種，而提供一種黑龍江茴魚的人工繁殖方法。其技術(shù)方案為一種黑龍江茴魚人工繁殖方法，包括以下步驟I)野生親魚采捕、培育親魚采捕于牡丹江支流海浪河。親魚在沙礫底質(zhì)的池塘中馴養(yǎng)培育，投喂鮮活餌料魚，水源為冷泉流水；2)雌雄親魚性別鑒別根據(jù)黑龍江茴魚婚姻色及生殖孔形態(tài)，區(qū)別成熟期黑龍江茴魚的性別；3)人工催熟、催產(chǎn)人工注射激素進(jìn)行催熟、催產(chǎn)，促進(jìn)黑龍江茴魚同步產(chǎn)卵、排精，將步驟2)黑龍江茴魚放入催產(chǎn)池，所用催產(chǎn)劑為絨毛膜促性腺激素(HCG)、馬來酸地歐酮(D0M+LRHA2)和鮭魚促性腺激素釋放激素類似物(S-GnRH-A)。成熟雄魚有明顯的婚姻色，其生殖孔略顯長形，不紅腫外突，擠壓腹部時會有乳白色精液流出；接近成熟雄性親魚按壓后腹部時有少許乳白色精液流出；成熟較差的雄性親魚婚姻色不明顯，腹部較硬無彈性，擠壓時沒有乳白色精液流出。成熟雌魚婚姻色與雄性相比不甚明顯，其腹部略隆起，柔軟并有彈性，生殖孔近圓形，紅腫外突，用手輕輕按壓有摸到卵粒的感覺，稍作擠壓即有卵粒流出；接近成熟雌性親魚婚姻色不明顯，生殖孔可見紅腫外突，輕壓后腹部有柔軟感；成熟較差的雌性親魚婚姻色亦不明顯，生殖孔不紅腫外突，腹部無柔軟感覺。成熟較差的親魚，先催熟，再催產(chǎn)；接近成熟親魚直接催產(chǎn)；已成熟親魚不需催產(chǎn)。4)人工采卵、采精；采用常規(guī)方法實(shí)施人工采卵、采精；5)等滲液洗卵，人工授精用BSS等滲溶液洗卵，采用濕法人工授精；6)受精卵吸水膨脹、發(fā)眼孵化人工授精5min后，將受精卵迅速移入孵化筐中，并將孵化筐懸吊于孵化槽中部， 使得黑龍江茴魚的受精卵在流水中吸水膨脹，并溢出多余精液及卵皮，吸水膨脹Ih后，在原槽中轉(zhuǎn)入孵化期；7)人工剔除死卵在孵化過程中，使用自制的死卵剔除夾將死卵剔除，以免滋生水霉菌，影響其它健康卵；8)仔魚出膜孵化在積溫達(dá)到110°C (!時，受精卵發(fā)育到發(fā)眼期時，將孵化筐撤掉，將受精卵直接平鋪于平列槽中，流水孵化至仔魚全部破膜。上述方法中，步驟3)中所述催產(chǎn)藥物在催產(chǎn)前Ih配好，并置于4°C冰箱中保存。步驟3)中所述催產(chǎn)藥物的用量為絨毛膜促性腺激素(HCG) 1250IU、馬來酸地歐酮(D0M+LRHA2) 2. 5mg、鮭魚促性腺激素釋放激素類似物(S-GnRH-A) 12. 5 Ugo步驟3)中所述催產(chǎn)藥物的注射部位為黑龍江茴魚背鰭基部無鱗處。步驟3)中所述催產(chǎn)藥物的注射方法為二次注射法，注射間隔36h。步驟3)中所述催產(chǎn)池的水流速度為0. 001-0. 01m3/s。步驟3)中所述催產(chǎn)效應(yīng)時間為4-5天。步驟4)中所述的采精方法為人工采集3-5條雄性親魚精液置于同一燒杯中，混合置于4°C環(huán)境備用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為(I)解決了野生黑龍江茴魚親魚的馴化培育問題。(2)提出了黑龍江茴魚親魚成熟期的雌雄鑒別方法。(3)確定了黑龍江茴魚親魚的催產(chǎn)時機(jī)、催產(chǎn)藥物種類及用量、注射部位和效應(yīng)時間，避免了錯誤注射催產(chǎn)劑對人工繁殖造成的影響。(4)開發(fā)了等滲液(BSS)洗卵、濕法授精的黑龍江茴魚人工授精方法。改善了孵化槽內(nèi)直接孵化的方法，開發(fā)了孵化筐懸吊于孵化槽內(nèi)微流水孵化的黑龍江茴魚孵化方法。(5)簡化了受精卵靜水吸水膨脹2. 5h的操作程序，開發(fā)出吸水膨脹與流水孵化相連續(xù)的作業(yè)技術(shù)，避免了靜水吸水膨脹易引起缺氧的危險。(6)開發(fā)出孵化過程中人工剔除死卵的操作程序，避免了使用藥物防治水霉病而影響受精卵的孵化效果，使排卵時間縮短了 8-10天。


圖I為本發(fā)明流程示意圖；圖2為本發(fā)明用于黑龍江茴魚受精卵孵化的孵化筐；圖3為本發(fā)明的死卵剔除夾。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖與具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。參照圖I，一種黑龍江茴魚人工繁殖方法，包括下列步驟 野生親魚采捕、培育野生親魚采捕于牡丹江支流海浪河，共采捕到雌性親魚112尾，雄性親魚125尾。采捕到的親魚用專用運(yùn)輸簍充氧運(yùn)回后，放于池塘中培育。其中培育親魚的池塘為3335m2，沙碌底質(zhì)，水源為地下自涌冷泉水，流量為I. 2m3/s,水溫為8-13°C,水質(zhì)清澈無污染。放養(yǎng)親魚前清除池內(nèi)一切的野雜魚及敵害生物，以免與黑龍江茴魚親魚爭食。飼料采用專塘培育的鯽魚苗及自然水域中采捕的洛氏臟等小型鮮活餌料魚，在親魚放養(yǎng)7天之后進(jìn)行投喂。在整個培育過程中，注意觀察餌料魚情況，總量減少時及時添加，保持池塘中餌料魚與親魚總重比為I. 0以上。翌年春季，部分親魚達(dá)到成熟期，其中雌親魚72尾，平均體重124. 8克，雄親魚102尾，平均體重為176. 4克。雌雄親魚鑒別根據(jù)婚姻色鑒別成熟期黑龍江茴魚雌雄，以確定催產(chǎn)劑使用劑量。黑龍江茴魚雄魚具有明顯的婚姻色，背鰭高大，其基部到邊緣有3 4行粉色斑點(diǎn)縱向排列而成的條紋，邊緣有一棕色的條紋；胸鰭淡黃色；體側(cè)有不規(guī)則的小黑斑，集中于側(cè)線鱗之上及體前部；腹鰭上有3 5條淡藍(lán)或粉紅色的縱行條紋，胸鰭至腹鰭之間的腹部兩側(cè)各有一條黃色條紋；成熟雄魚生殖孔略顯長形，不紅腫外突，腹部有彈性，擠壓時會有乳白色精液流出；接近成熟雄性親魚按壓后腹部時有少許乳白色精液流出；成熟較差的雄親魚婚姻色不明顯，腹部較硬，擠壓時沒有乳白色精液流出。成熟雌魚與雄魚相比婚姻色不甚明顯，其腹部略隆起，柔軟并有彈性，生殖孔接近圓形，紅腫外突，用手輕輕按壓有摸到卵粒的感覺，稍作擠壓即有卵粒流出；接近成熟雌性親魚婚姻色不明顯，生殖孔可見紅腫外突，輕壓前腹部較硬而后腹部有柔軟感；成熟較差的雌性親魚婚姻色亦不明顯，生殖孔紅腫外突不明顯，腹部較硬無彈性。人工催熟、催產(chǎn)為了使黑龍江茴魚親魚達(dá)到同步、集中產(chǎn)卵的目的，要注射催產(chǎn)劑進(jìn)行催熟、催產(chǎn)。所用為絨毛膜促性腺激素(HCG)、馬來酸地歐酮(D0M+LRHA2)和鮭魚促性腺激素釋放激素類似物(S-GnRH-A)。雌性黑龍江茴魚每千克體重注射2. 5毫克D0M+LRH_A2、1250國際單位HCG和12. 5微克S-GnRH-A的混合催產(chǎn)劑，雄魚劑量減半。成熟較差的親魚采用二次注射的方法，注射部位為背鰭基部無鱗處。第一次注射總劑量的20%，間隔36-48h第二次注射，注射劑量為總劑量的80%。接近成熟親魚采用一次注射法，注射劑量為總劑量的80%。在水溫7. 5°C條件下，未成熟親魚催產(chǎn)的效應(yīng)時間為100 160小時(平均為140小時)，多數(shù)親魚在催產(chǎn)后140小時卵完全游離。人工采卵、采精、等滲液洗卵、人工授精
人工采卵、采精，人工授精。選擇成熟較好的健康雌、雄親魚(輕壓腹部有成熟卵?；蛉榘咨号懦?，將魚體上的水及操作者手上的水用毛巾擦干，采用擠腹法采卵、采精。授精前檢查精子活力，健康、活力強(qiáng)的精子方可使用。每組卵用3尾以上雄魚的混合精液授精。人工授精在避光處進(jìn)行，采用濕法授精。授精前采用等滲液(BSS)洗卵，用量是每2000粒魚卵用400毫升BSS。洗卵后將等滲液緩緩倒出，再倒入少量干凈的等滲液，將精液滴于其中，迅速用手或羽毛攪動，使精卵充分混合受精。人工采卵時，魚類腹腔中的破損卵溢出物、卵皮以及魚的糞便、尿液等物質(zhì)會一并混入卵中，這些物質(zhì)會影響精子活力和受精率；此外，魚卵在腹腔中時受到腹腔液的保護(hù)，擠出體外后暴露在空氣中會對健康魚卵造成損傷。用等滲液(BSS)洗卵，既可以有效地保護(hù)卵子，又可以洗凈卵中的雜質(zhì)，從而避免了雜質(zhì)對精子活力的影響，提高了受精率。受精卵吸水膨脹、發(fā)眼孵化 受精卵靜置5min后，將受精卵迅速移入孵化筐5中，使卵在孵化筐底部均勻的鋪滿一層，之后將孵化筐懸吊于孵化槽中間，每個孵化槽中只懸吊一個孵化筐，使卵在流動泉水中吸水膨脹，水的流速控制在0. OOlmVs左右。Ih后，吸水膨脹過程結(jié)束，原槽轉(zhuǎn)入孵化期。如圖2所示，孵化筐5的框架為竹制，長35厘米，寬30厘米，底部固定15目篩絹。孵化槽4為玻璃鋼材質(zhì)，長50厘米，寬45厘米，高40厘米。內(nèi)側(cè)從4個底角開始，向上依次各有四個掛鉤，以固定孵化筐5。彈性繩6 —端連接孵化筐5底部，一端連接金屬掛鉤7，可隨需要將孵化筐5固定于水體內(nèi)不同深度。金屬掛鉤7連接孵化槽掛鉤8。孵化槽掛鉤8為玻璃鋼材質(zhì)，固定在孵化槽4上，連接金屬掛鉤7。尼龍繩9 一端連接孵化筐5頂端，一端連接孵化槽4頂端，起到固定孵化筐5的作用。采用孵化筐懸吊于孵化槽中的孵化方式即避免了局部缺氧造成受精卵窒息死亡的危險，又避免了由于孵化槽底部入水孔水流沖動受精卵而引起魚卵大批死亡。孵化期間人工剔除死卵。死卵發(fā)白，與正常發(fā)育的受精卵差別很大。所用工具為自制的死卵剔除夾。如圖3所示的死卵剔除夾是將兩個竹片I制成鑷子形狀，竹片的厚度為2-3毫米，長度為15-20厘米，表面打磨光滑，將頂端連接處削成斜面，對齊連接，用強(qiáng)力膠固定。在兩片竹片I的中部各打一個小孔，將長度不超過I. 5厘米、直徑2毫米的彈簧2，通過掛鉤固定在竹片上。再在末端分別固定一個用細(xì)銅絲制成的金屬環(huán)3，金屬環(huán)3直徑為I. 8毫米。撿卵操作時盡量避免光線直射，也盡量不要碰到周邊的正常發(fā)育受精卵。人工剔除死卵避免了水霉菌滋生，侵害正常發(fā)育受精卵的危險，也避免了使用藥物防治水霉菌而影響受精卵的正常發(fā)育。仔魚出膜孵化；在積溫達(dá)到110°C d，受精卵發(fā)育至發(fā)眼期時，受精卵對外部振動不敏感，不會因?yàn)楸灰苿佣劳?，因此將孵化筐撤掉，將其中的受精卵直接均勻的平鋪于平列槽中，流水孵化至仔魚全部破膜。按照上述本發(fā)明的方法試驗(yàn)親魚雌性親魚72尾，雄性親魚102尾。分為3組,每組各24尾雌魚,34尾雄魚。第一組催產(chǎn)效果雌魚催產(chǎn)18尾，雄魚催產(chǎn)33尾。催產(chǎn)率分別為75%，97%。第二組催產(chǎn)效果雌魚催產(chǎn)21尾，雄魚催產(chǎn)32尾。催產(chǎn)率分別為88%，94%。
第三組催產(chǎn)效果雌魚催產(chǎn)19尾，雄魚催產(chǎn)30尾。催產(chǎn)率分別為79%，85%。雌魚平均催產(chǎn)率為80. 6%，雄魚催產(chǎn)率為93. 1%。按照上述本發(fā)明的方法試驗(yàn)3組親魚分為3個試驗(yàn)組,每試驗(yàn)組各24尾雌魚,34尾雄魚。第一組卵子受精率達(dá)到了 81%，受精卵孵化率達(dá)到83% ；第二組卵子受精率達(dá)到了 94%，受精卵孵化率達(dá)到72% ； 第三組卵子受精率達(dá)到了 95%，受精卵孵化率達(dá)到85%。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式
，本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見地得到的技術(shù)方案的簡單變化或等效替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種黑龍江茴魚人工繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟 1)野生親魚采捕、培育 親魚采捕于牡丹江支流海浪河，親魚在水體底部具有沙礫的池塘中培育，池塘水源為冷泉流水； 2)雌雄親魚鑒別 根據(jù)黑龍江婚姻色和生殖孔形態(tài)區(qū)別成熟期黑龍江茴魚的雌雄； 3)人工催熟、催產(chǎn) 將步驟2)黑龍江茴魚放入催產(chǎn)池，所用催產(chǎn)劑為絨毛膜促性腺激素(HCG)、馬來酸地歐酮(DOM+LRHA2)和鮭魚促性腺激素釋放激素類似物(S-GnRH-A)； 4)人工采卵、采精； 5)等滲液洗卵，人工授精 用BSS等滲溶液洗卵，采用濕法人工授精； 6)受精卵吸水膨脹、發(fā)眼孵化 人工授精5min后，將受精卵迅速移入孵化筐中，并將孵化筐懸吊于孵化槽中部，使得黑龍江茴魚的受精卵在流水中吸水膨脹，并溢出多余精液及卵皮，吸水膨脹Ih后，在原槽中轉(zhuǎn)入孵化期； 7)人工剔除死卵 在孵化過程中，使用死卵剔除夾將死卵剔除； 8)仔魚出膜孵化 在積溫達(dá)到110°C (!時，受精卵發(fā)育到發(fā)眼期時，將孵化筐撤掉，將受精卵直接平鋪于平列槽中，流水孵化至仔魚全部破膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述催產(chǎn)藥物在催產(chǎn)前Ih配好，并置于4°C冰箱中保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述催產(chǎn)藥物的用量為絨毛膜促性腺激素(HCG) 800IU、馬來酸地歐酮(DOM+LRHA2) I. 6mg、鮭魚促性腺激素釋放激素類似物(S-GnRH-A) 8 ii g。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述催產(chǎn)藥物的注射部位為黑龍江茴魚背鰭基部無鱗處。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述催產(chǎn)藥物的注射方法為二次注射法，注射間隔36h。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述催產(chǎn)池的水流速度為0. 001-0. 01m3/s。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述催產(chǎn)效應(yīng)時間為5天。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟4)中所述的采精方法為人工采集3-5條雄性親魚精液置于同一燒杯中，混合置于4°C環(huán)境備用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黑龍江茴魚人工繁殖方法，包括以下步驟1)野生親魚采捕、培育；2)雌雄親魚鑒別；3)人工催熟、催產(chǎn)；4)人工采卵、采精；5)等滲液洗卵，人工授精；6)受精卵吸水膨脹、發(fā)眼孵化7)人工剔除死卵；8)仔魚出膜孵化。本發(fā)明所述方法使得使排卵時間縮短了8-10天，適用于漁業(yè)技術(shù)領(lǐng)域。
文檔編號A01K61/00GK102657123SQ201210158660
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月22日
發(fā)明者張瀾瀾, 徐革鋒, 牟振波, 王琨, 趙吉偉, 趙榮偉, 郝其睿, 陳曉婷, 韓英 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)