專利名稱：一種二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物離體組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，具體為二十年生木荷大樹的高效離體組培快繁方法。
背景技術(shù)：
木荷(Schima superba)屬山茶科木荷屬，為亞熱帶地帶性常綠大喬木,作為速生景觀防火特色樹種廣泛分布于南方12個(gè)省區(qū)。木荷生長(zhǎng)迅速，少病蟲害，對(duì)土壤條件要求不嚴(yán)，耐旱力強(qiáng)，同時(shí)樹冠濃密，葉片厚革質(zhì)、含水量大、含油脂少、燃點(diǎn)較高、萌芽力強(qiáng)，是南方生物防火林帶構(gòu)建的當(dāng)家樹種和優(yōu)良的高抗生態(tài)防護(hù)樹種(70%以上的生物防火林帶和大量的生態(tài)防護(hù)林由木荷構(gòu)建而成)；木荷樹干端直，木材堅(jiān)重致密，結(jié)構(gòu)均勻，力學(xué)性質(zhì)良好，是木地板、木制家具、木制玩具、木制工藝品等優(yōu)質(zhì)木制工藝用材樹種，如浙江70% 的木制玩具用材都來自木荷。大徑階木荷工藝材銷價(jià)在1500元/m3以上。木荷已列為國(guó)家林業(yè)局珍貴用材發(fā)展名錄；木荷栽培容易、早期速生，宜與杉木、馬尾松等混交培育大徑階優(yōu)質(zhì)用材，是杉木、馬尾松二代跡地更新的優(yōu)良替代樹種，廣為南方各省重視和喜愛，每年用種量都達(dá)到數(shù)萬(wàn)kg，是亞熱帶地區(qū)第一大珍貴優(yōu)質(zhì)闊葉用材造林樹種。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)該樹種開展了一系列的研究工作，如有良種選育、播種、組織培養(yǎng)育苗，生物防火機(jī)理、防火林帶構(gòu)建配套等技術(shù)。在現(xiàn)有繁殖技術(shù)中，組織培養(yǎng)的方法已有報(bào)道，但報(bào)道中研究對(duì)象為種子、二至十年生樹木頂芽和嫩枝莖段，采用原有方法對(duì)江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院種源試驗(yàn)林的二十年生大樹開展組織培養(yǎng)研究未能成功。原因是利用原有方法培養(yǎng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)外植體啟動(dòng)培養(yǎng)困難、增殖系數(shù)偏低、容易發(fā)生褐變和玻璃化苗、生根率低等問題。說明原方法對(duì)二十年生木荷大樹進(jìn)行組織培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)有明顯缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種適合木荷大樹的高效離體組培快繁方法，為優(yōu)良品種選育、良種規(guī)?；敝程峁┘夹g(shù)支撐。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種二十年生木荷大樹的高效離體繁殖方法，按下列步驟進(jìn)行(I):準(zhǔn)備基本培養(yǎng)基每升基本培養(yǎng)基中含有四水硝酸鈣371-556mg，硝酸銨268_400mg，硫酸鉀600-900mg，七水硫酸鎂248-370mg，磷酸二氫鉀115_170mg，二水氯化鈣70_96mg，四水硫酸錳22. 5mg,七水硫酸鋅8. 6mg,硼酸6. 2mg,五水硫酸銅O. 25mg, 二水鑰酸鈉O. 25mg,七水硫酸亞鐵41. Omg,乙二胺四乙酸鈉56. Omg,維生素B1 I. Omg,維生素B6 O. 5mg, VB5 O. 5mg,甘氨酸2. Omg,肌醇90mg,鹿糖20000mg,卡拉膠6500mg。(2):外植體的接種采用經(jīng)選育的二十年生木荷優(yōu)良單株腋芽莖段為外植體，經(jīng)70%酒精消毒20-30s，再用添加Tween-20 1-2滴/IOOml的O. I %的升汞溶液消毒9_13min，用無菌水沖洗3-5次，作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)；(3):芽苗培養(yǎng)在超凈的工作臺(tái)上，無菌條件下，將外植體接種在經(jīng)消毒的含有啟動(dòng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，先將其置于黑暗條件下7-12d后，再置于普通日光燈為光源、光照強(qiáng)度為1500-20001x下，每日光照16h，溫度23_25°C、濕度為50% -60 %，培養(yǎng)40d，分化長(zhǎng)成試管 芽苗。所述的啟動(dòng)培養(yǎng)基由以下重量含量的原料組成每升基本培養(yǎng)基含玉米素(ZT)O. 5-1. 5mg ;6-芐基嘌呤(BA) I. 0-2. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O.01-0. Img ；(4):增殖培養(yǎng)將上述(2)步中長(zhǎng)成的芽苗，剪切轉(zhuǎn)接于經(jīng)消毒的含有增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖規(guī)模達(dá)1000瓶進(jìn)入下一步。所述的增殖培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基含玉米素(ZT)I. 0-1. 5mg ；6-芐基嘌呤 I. 5-2. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O. 01-0. 05mg ；朽1樣酸(Citric acid) 80_100mg ;(5):壯苗培養(yǎng)將(3)中培養(yǎng)的試管芽苗，剪切接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，32d后進(jìn)入下一步。所述的壯苗培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基含玉米素(ZT)O. 5-1. Omg ;6-芐基嘌呤 I. 0-1. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O.05-0. Img ；朽1樣酸(Citric acid) 80_100mg。(6)生根培養(yǎng)將(4)步中的試管壯苗，剪除基部愈傷組織和部分葉片，保留3-4片葉片，接種于經(jīng)消毒的含有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行生根培養(yǎng)12-15d。所述的生根處理產(chǎn)生根原基培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基含α -萘乙酸(NAA) O. 3-0. 5mg ；吲哚丁酸(IBA)O. 5-1. Omg ；朽1樣酸(Citric acid) 100_150mg ；硝酸鑭(La(NO3)3· 6H20) 8-1 Omg。(7):移栽
將(5)步生長(zhǎng)的帶有根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭、黃土、珍珠巖體積比為泥炭黃心土 珍珠巖=2 I I的基質(zhì)中，澆透水，保持溫度25-28 °C，相對(duì)濕度85%以上，前IOd遮光70%，后逐漸見光，25d后生根成活，生根率達(dá)96%以上，50d左右，全光照。上述二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法，所有培養(yǎng)基其pH值均調(diào)至5. 8左右，所述的基本培養(yǎng)基配方見表I。表I每升基本培養(yǎng)基中含有物質(zhì)種類和質(zhì)量
權(quán)利要求
1.一種二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法，其特征是按下列步驟進(jìn)行 (1)、準(zhǔn)備基本培養(yǎng)基，每升基本培養(yǎng)基中含有四水硝酸鈣371-556mg，硝酸銨268-400mg，硫酸鉀600_900mg，七水硫酸鎂248_370mg，磷酸二氫鉀115_170mg，二水氯化鈣70-96mg,四水硫酸錳22. 5mg,七水硫酸鋅8. 6mg,硼酸6. 2mg,五水硫酸銅O. 25mg, 二水鑰酸鈉O. 25mg,七水硫酸亞鐵41. Omg,乙二胺四乙酸鈉56. Omg,維生素BI I. Omg,維生素B6O. 5mg, VB5 O. 5mg,甘氨酸 2. Omg,肌醇 90mg,鹿糖 20000mg,卡拉膠 6500mg。
(2)、采用經(jīng)選育的二十年生木荷大樹優(yōu)良單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)70%酒精消毒20-35s,再用添加吐溫20 1-2滴/IOOml的O. I %的升汞溶液滅菌9_13min，用無菌水沖洗3-5 次； (3)、在超凈的工作臺(tái)上，無菌條件下，將消毒的外植體接種在經(jīng)消毒的含有啟動(dòng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，先將其置于黑暗條件下7-12d后，再置于普通日光燈為光源、光照強(qiáng)度為1500-20001x下，每日光照16h，溫度23_25°C、濕度為50% -60%，培養(yǎng)40d，分化長(zhǎng)成試管芽苗； 所述的啟動(dòng)培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基含玉米素O. 5-1. 5mg、6-芐基嘌呤I. 0-2. 5mg和吲哚丁酸O. 01-0. Img ； (4)、將從(2)步中長(zhǎng)成的芽苗，剪切，轉(zhuǎn)接于經(jīng)消毒的含有增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖規(guī)模達(dá)1000瓶進(jìn)入下一步； 所述的增殖培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基含玉米素I. ο-l. 5mg、6-節(jié)基嘌呤I. 5-2. 5mg、吲哚丁酸O. 01-0. 05mg和檸檬酸80-100mg ； (5)、將(3)步中培養(yǎng)的試管芽苗，剪切、接種于經(jīng)消毒的含有壯苗培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，32d后進(jìn)入下一步； 所述的壯苗培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基含玉米素O. 5-1. 0mg、6-芐基嘌呤I. 0-1. 5mg、吲哚丁酸O. 05-0. Img和檸檬酸80-100mg ； (6)、將(4)步中的試管壯苗，剪除基部愈傷組織和部分葉片，保留3-4片葉片，接種于經(jīng)消毒的含有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，進(jìn)行生根培養(yǎng)12-15d ； 所述的生根培養(yǎng)基為每升基本培養(yǎng)基含α-萘乙酸O. 3-0. 5mg、吲哚丁酸O. 5-1. Omg、朽1 樣酸 100_150mg 和硝酸倆 8-lOmg ； (7)、將(5)步中生長(zhǎng)的帶有根的小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭、黃土、珍珠巖體積比為泥炭黃心土 珍珠巖=2 I I的基質(zhì)中，澆透水，保持溫度25-28°C，相對(duì)濕度85%以上，前IOd遮光70%，后逐漸見光，25d后生根成活，生根率達(dá)96%以上，50d左右，全光照。
全文摘要
一種二十年生木荷大樹高效離體繁殖方法，采用二十年生木荷大樹上生長(zhǎng)的腋芽莖段為外植體，經(jīng)消毒滅菌后，接種于啟動(dòng)培養(yǎng)基中，先放置于黑暗條件下培養(yǎng)7-12d，再放置于普通日光燈下，每日光照16h，溫度23-25℃、濕度50％-60％，培養(yǎng)40d分化長(zhǎng)成試管芽苗；將長(zhǎng)成的試管芽苗剪切、轉(zhuǎn)接于經(jīng)高壓滅菌的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，然后再將增殖的試管芽苗剪切后接種于經(jīng)高壓滅菌的壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，32d后剪除基部愈傷組織和部分葉片，保留3-4片葉片，接種于經(jīng)高壓滅菌的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)12-15d，取出清洗，移栽到含有泥炭、黃心土、珍珠巖的混合基質(zhì)中，其體積比為泥炭∶黃心土∶珍珠巖＝2∶1∶1，25d后生根成活，生根率達(dá)96％以上。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102613089SQ20121012192
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月25日
發(fā)明者周志春, 董筱昀, 蔣澤平, 黃利斌 申請(qǐng)人:江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院