專利名稱：馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液及其配制方法和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動物精液保存的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液及其配制方法和使用方法。
背景技術(shù)：
精液稀釋是向精液中加入適宜精子體外存活并保持精子活力的稀釋保護液，其目的在于擴大精液的容量，延長精子的存活時間，保證精子的活率和精子頂體完整率，增強受精能力，充分提高精液的利用率和優(yōu)良公畜配種的效率。精液稀釋應(yīng)在采集后盡快進行，不經(jīng)稀釋的精液不利于精子存活，特別是精液處于溫度較低時(20°C以下)，精子受低溫打擊， 易出現(xiàn)冷休克。只有經(jīng)過稀釋的精子才適于保存、運輸及輸精等，所以精液稀釋處理是動物人工授精中的一個重要技術(shù)環(huán)節(jié)。目前，我國馬屬動物的繁育主要以自然交配和人工輔助兩種方式進行，但是在自然交配或人工輔助交配的情況下，一般一匹種公馬只能配20-30匹母馬，優(yōu)秀種公馬的利用率嚴重受限。因此，精液稀釋、保存和人工授精技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用就顯得非常重要。近年來，家畜精液稀釋液的研究不斷取得可喜的成果，尤其是在牛、羊等反芻動物方面。馬屬動物精液稀釋液的研究也日漸成效，但是仍然存在諸多弊端，主要表現(xiàn)在精液稀釋液對精子活力的保存時間短，比如常溫保存時間不足24小時(活率低于O. 3)，低溫保存時間不足96小時(活率低于O. 3);受胎率低；精液稀釋液需新鮮，必須現(xiàn)用現(xiàn)配，所以操作繁瑣復(fù)雜。因此開發(fā)出保存時間長，保存效果好，成本低，受胎效果好的精液稀釋液對人工授精而言有重要的經(jīng)濟效益。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決傳統(tǒng)的精液稀釋液對精子活力的保存時間短、受胎率低及現(xiàn)用現(xiàn)配等問題，本發(fā)明提供了一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液及其配制方法和使用方法。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液，所述基礎(chǔ)液包括A液和脫脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。其中，所述A液和所述脫脂奶的混合體積比例優(yōu)選為1:1。每500ml的所述A液中，各組分的含量為葡萄糖22 26g、棉子糖1.5 1.78、0_乳糖單水合物I. 5 I. 7g、檸檬酸三鈉Na3C6H5O7 ·2Η20 O. 2 O. 25g、檸檬酸鉀O. 35 O. 45g、HEPES
4. 6 4. 8g0每500ml的所述A液中，各組分的含量為葡萄糖22 26g、棉子糖1.5 1.7&、0-乳
3糖單水合物I. 5 I. 7g、檸檬酸三鈉Na3C6H5O7 ·5Η20 O. 25 O. 3g、檸檬酸鉀O. 35 O. 45g、HEPES 4. 6^4. 8g。所述葡萄糖為無水葡萄糖，其分子式為C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式為 C18H32O6 · 5H20 ;所述D-乳糖單水合物的分子式為C12H22O11 · H2O ;所述檸檬酸鉀的分子式為 K3C6H5O7 · H2O ;所述 HEPES 的分子式為 C8H18N2O4S15
本發(fā)明還提供了上述任意一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的配制方法，所述配制方法包
括
(1)稱取所需要量的葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES ，放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解后，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液；
(2)將經(jīng)過嚴格滅菌、密封的A液標記配制時間，置于(T5°C保存，隨用隨??；
(3)取所需要量的A液加入適量的脫脂奶混合均勻后，即得基礎(chǔ)液。
本發(fā)明還提供了一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的使用方法，其特征在于，將所述基礎(chǔ)液置于37°C恒溫水浴鍋中I小時后，對馬屬動物新鮮精液進行稀釋，用于鮮精的人工授精。
本發(fā)明又提供了一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的使用方法，當精液需要常溫或低溫保存時，所述基礎(chǔ)液的使用方法為
(1)向所述基礎(chǔ)液中分別按1000單位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加雙氫鏈霉素，混合均勻后得到稀釋液；
(2)將所述步驟(I)中得到的稀釋液置于37°C恒溫水浴鍋中I小時后，對馬屬動物新鮮精液進行稀釋，然后將稀釋后的精液常溫保存或低溫保存；所述稀釋液與精液的體積比例優(yōu)選為1:廣1:10。
本發(fā)明還提供了一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的使用方法，當精液需要冷凍保存時， 所述基礎(chǔ)液的使用方法為
(1)將所述基礎(chǔ)液置于37°c恒溫水浴鍋中I小時后，對馬屬動物新鮮精液進行第一次稀釋，稀釋后經(jīng)過離心去掉基礎(chǔ)液；
(2)向所述基礎(chǔ)液中分別按1000單位/ml的量添加青霉素、1000ug/ml的量添加雙氫鏈霉素、2. 5^3. 5%的量添加蛋黃和2. 5^3. 5%的量添加甘油，混合均勻后得到稀釋液；
(3)將所述步驟(2)中得到的稀釋液置于22°C恒溫水浴鍋中I小時，然后對所述步驟
(I)中經(jīng)第一次稀釋后的精液進行第二次稀釋，將稀釋后的精液冷凍保存；所述稀釋的體積比例優(yōu)選為I: f 1:10。
本發(fā)明實施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是本發(fā)明的基礎(chǔ)液能夠直接用于馬屬動物新鮮精液的稀釋，適用于鮮精的人工授精；當需要對馬屬動物的新鮮精液進行常溫或低溫保存時，向基礎(chǔ)液中適量加入青霉素和雙氫鏈霉素，即可用于馬屬動物精液的稀釋， 稀釋后能夠?qū)哼M行常溫保存或低溫保存；當需要對馬屬動物的新鮮精液進行冷凍保存時，向基礎(chǔ)液中適量加入青霉素、雙氫鏈霉素、蛋黃和甘油，即可用于馬屬動物精液的稀釋，稀釋后能夠?qū)哼M行冷凍保存；且在常溫保存、低溫保存或是冷凍保存的條件下，使用本發(fā)明馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液進行精液的稀釋保存，效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的稀釋液，馬屬動物精液的保存效果好，延長了稀釋精液中精子的存活時間，保證精子的活率和精子頂體完整率，增強受精能力，充分提高了精液的利用率和優(yōu)良公畜配種的效率；本發(fā)明的基礎(chǔ)液配制簡單，使用方便，可置于0-5°C保存，隨用隨取且可一液多用，省時省力，適于規(guī)?；a(chǎn)和應(yīng)用。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述。實施例I
稱取葡萄糖24g、棉子糖I. 6g、D-乳糖單水合物I. 6g、朽1檬酸三鈉Na3C6H5O7 · 2H20 O. 24g、檸檬酸鉀O. 4g和HEPES 4. 7g，放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解后，定容、過濾、分裝、 滅菌、密封，即得A液；將經(jīng)過嚴格滅菌、密封的A液標記配制時間，置于(T5°C保存，隨用隨??；取適量的A液加入等量體積的脫脂奶混合均勻后，得到本實施例I的基礎(chǔ)液。向基礎(chǔ)液中分別按1000單位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加雙氫鏈霉素混合均勻后，得到本實施例I的稀釋液。對比試驗I
將傳統(tǒng)的稀釋液葡萄糖-卵黃稀釋液(對照組I)和牛奶稀釋液(對照組2)，與實施例I 的稀釋液(實施例組I)分別稀釋馬的精液。其中，將實施例I的稀釋液置于37°C恒溫水浴鍋中I小時后，按體積比1:5對馬的新鮮精液(活率> O. 8)進行稀釋，然后將稀釋后的精液置于常溫(15 25°C)下保存。在(Γ48小時內(nèi)觀察對照組I、對照組2和實施例組I的精子活力，每隔12個小時測定精子的活率，結(jié)果如表I所示。表I :不同稀釋液常溫保存(15 25°C)精液對馬精子活率的影響
權(quán)利要求
1.馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液，其特征在于，所述基礎(chǔ)液包括A液和脫脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液，其特征在于，所述A液和所述脫脂奶的混合體積比例為1:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液，其特征在于，每500ml的所述A液中，各組分的含量為葡萄糖22 26g、棉子糖I. 5^1. 7g、D-乳糖單水合物I. 5^1. 7g、檸檬酸三鈉 Na3C6H5O7 · 2H20 O. 2 O. 25g、檸檬酸鉀 O. 35 O. 45g、HEPES 4. 6 4. 8g。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液，其特征在于，每500ml的所述A液中，各組分的含量為葡萄糖22 26g、棉子糖I. 5^1. 7g、D-乳糖單水合物I. 5^1. 7g、檸檬酸三鈉 Na3C6H5O7 · 5H20 O. 25 O. 3g、檸檬酸鉀 O. 35 O. 45g、HEPES 4. 6 4. 8g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液，其特征在于，所述葡萄糖為無水葡萄糖，其分子式為C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式為C18H32O6 ·5Η20 ;所述0_乳糖單水合物的分子式為C12H22O11 · H2O ;所述檸檬酸鉀的分子式為K3C6H5O7 · H2O ;所述HEPES的分子式為C8H18N2O4S0
6.—種如權(quán)利要求1-5任意一項所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的配制方法,其特征在于，所述配制方法包括(O稱取所需要量的葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和 HEPES，放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解后，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液；(2)將經(jīng)過嚴格滅菌、密封的A液標記配制時間，置于(T5°C保存；(3)取所需要量的A液加入適量的脫脂奶混合均勻后，即得基礎(chǔ)液。
7.—種如權(quán)利要求1-6任意一項所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的使用方法，其特征在于，將所述基礎(chǔ)液置于37°C恒溫水浴鍋中I小時后，對馬屬動物新鮮精液進行稀釋，用于鮮精的人工授精。
8.—種如權(quán)利要求1-6任意一項所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的使用方法，其特征在于，當精液需要常溫或低溫保存時，所述基礎(chǔ)液的使用方法為(1)向所述基礎(chǔ)液中分別按1000單位/ml的量添加青霉素和1000ug/ml的量添加雙氫鏈霉素，混合均勻后得到稀釋液；(2)將所述步驟(I)中得到的稀釋液置于37°C恒溫水浴鍋中I小時后，對馬屬動物新鮮精液進行稀釋，然后將稀釋后的精液常溫保存或低溫保存。
9.一種如權(quán)利要求1-6所述的馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液的使用方法，其特征在于，當精液需要冷凍保存時，所述基礎(chǔ)液的使用方法為(1)將所述基礎(chǔ)液置于37°C恒溫水浴鍋中I小時后，對馬屬動物新鮮精液進行第一次稀釋，稀釋后經(jīng)過離心去掉基礎(chǔ)液；(2)向所述基礎(chǔ)液中分別按1000單位/ml的量添加青霉素、1000ug/ml的量添加雙氫鏈霉素、2. 5^3. 5%的量添加蛋黃和2. 5^3. 5%的量添加甘油，混合均勻后得到稀釋液；(3)將所述步驟(2)中得到的稀釋液置于22°C恒溫水浴鍋中I小時，然后對所述步驟(I)中經(jīng)第一次稀釋后的精液進行第二次稀釋，將稀釋后的精液冷凍保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種馬屬動物精液稀釋基礎(chǔ)液及其配制方法和使用方法，其中，基礎(chǔ)液包括A液和脫脂奶，A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES?；A(chǔ)液的配制方法為稱取A液的各種組分放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解后，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液，向A液加入等量的脫脂奶混合均勻。還可以向基礎(chǔ)液中加入青霉素和雙氫鏈霉素，或者青霉素、雙氫鏈霉素、蛋黃和甘油，其適用于馬屬動物精液稀釋、精液常溫保存、低溫保存及冷凍保存。本發(fā)明的有益效果是配制簡單，使用方便，馬屬動物精液的保存效果好，并且一液多用，省時省力，適于規(guī)?；a(chǎn)和應(yīng)用。
文檔編號A01N1/02GK102578079SQ20121002639
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月8日
發(fā)明者張志鵬, 榮美潔, 鄒志剛 申請人:青島德瑞駿發(fā)生物科技有限公司