專利名稱：一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種尾巨桉轉(zhuǎn)基因組織培養(yǎng)生根苗的一種簡易移栽方法。
背景技術(shù)：
桉樹(E.ucaIyptus)主要是桃金娘科(M. grtaceae)桉屬(E. ucalyptus)植物的統(tǒng)稱，是世界三大速生樹種之一。尾巨桉、E. urophyllaXE. grand is)是尾葉桉{E. urophylla)與巨桉iB. grandis)的雜交種，具有明顯的雜種優(yōu)勢,其樹干通直、均勻，具有適應(yīng)性廣、耐寒性強，速生豐產(chǎn)等優(yōu)點，是優(yōu)良的工業(yè)材料，其種植面積已占到了桉樹人工林面積的40%，成為我國南方熱帶、亞熱帶地區(qū)最重要的速生豐產(chǎn)造林樹種之一。近年來， 隨著桉樹人工林種植面積的不斷擴大和新品種的引進，桉樹病害爆發(fā)頻繁，給生產(chǎn)帶來巨大的損失。桉樹病害至今已發(fā)現(xiàn)有33種,其中葉部病害20種，枝干病害4種,根部病害5 種，苗期病害4種，在這些病害中，青枯病、猝倒病、灰霉病、白絹病、褐斑病、紫斑病、潰瘍病等是我國桉樹的常見病害。傳統(tǒng)育種方法雖然能利用作物本身或親緣種的抗性基因選育抗病品種，但存在著可利用的抗性品種資源少，選育時間長，耗資大等缺點。施用化學(xué)藥劑來防治桉樹病害并非完全有效，而且污染環(huán)境，易使病原物產(chǎn)生耐藥性等。近年來植物基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展以及對植物和病原物相互作用的逐漸了解， 使得將外源抗性基因?qū)胫参飦硖岣呖共⌒猿蔀橐粭l有效途徑。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以打破傳統(tǒng)育種中種間不親和現(xiàn)象，消除雜交障礙，極大地拓寬了抗性基因的來源?；蚬こ逃N可以通過外源基因的導(dǎo)入，針對目標性狀進行改良，具有快速性和定向性。因此，通過基因工程技術(shù)培育具有青枯菌抗性在內(nèi)的廣譜抗性的桉樹新品種，可提高桉樹單位面積產(chǎn)量、 改善產(chǎn)品品質(zhì)、減少農(nóng)藥的用量，具有重要的經(jīng)濟效益和生態(tài)效益。建立高效穩(wěn)定的植物再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系是轉(zhuǎn)基因的關(guān)鍵，而再生體系的建立又以高的移栽成活率為前提。在組培苗的培育過程中，尾巨桉苗從無菌室被移栽到外界環(huán)境時，由于各種因素的影響，使得移栽成活率受到很大的影響，嚴重時成活率為零。影響尾巨桉組培苗移栽成活率的因素很多，主要包括器官結(jié)構(gòu)、生理功能和外界環(huán)境三個方面。器官結(jié)構(gòu)方面，有些組培苗的根無根毛或有很少根毛，或是其輸導(dǎo)系統(tǒng)與莖的輸導(dǎo)系統(tǒng)不連通，移栽以后，根系吸收的水分和養(yǎng)分滿足不了植物本身的需求。葉片部分主要包括組培苗葉表角質(zhì)層、蠟質(zhì)層不發(fā)達或無；葉面無表皮毛或極少；葉組織間隙大，柵欄組織薄，易失水導(dǎo)致植株死亡。另外，由于組培苗幼嫩，結(jié)構(gòu)較松散且含水量高，機械組織很不發(fā)達極易發(fā)生機械損傷，對病蟲害的抵抗力又很弱，組培苗移栽以后容易導(dǎo)致莖葉甚至整株死亡。生理功能方面，移栽前組培苗所需要的營養(yǎng)主要從培養(yǎng)基中獲得，光合作用效率低下，在這種情況下，葉片中的葉綠素含量很低，并且光合作用能力很弱。組培苗移栽以后會因為得不到足夠的有機營養(yǎng)而死亡，從而不利于移栽成活。外界環(huán)境方面，主要包括溫度、濕度、光照、微生物等因素。轉(zhuǎn)化植株由于被轉(zhuǎn)入了外源基因，在器官結(jié)構(gòu)、生理和生化方面與未轉(zhuǎn)化的再生苗存在著一定的差異，同時又由于從子葉預(yù)培養(yǎng)到得到轉(zhuǎn)基因苗的培養(yǎng)時間與單純再生得到組培苗的時間相比明顯延長。長時間的高濕度生長環(huán)境影響了轉(zhuǎn)基因苗葉片的形態(tài)結(jié)構(gòu)，如角質(zhì)層變薄、氣孔調(diào)節(jié)失靈，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因苗移栽后散失的水分多于吸收的水分，對外界環(huán)境的變化所做出的反應(yīng)也相應(yīng)較大，因此，對轉(zhuǎn)基因苗來說，移栽成活變得更加因難。綜上所述，關(guān)于尾巨桉遺傳轉(zhuǎn)化過程中組培苗移栽方法偶見國內(nèi)外文獻，但不系統(tǒng)，未見簡便有效的組培生根苗移栽管理方法的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題在于提供一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，以提高尾巨桉轉(zhuǎn)基因組培苗的移栽成活率。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，包括以下步驟
(1)、將生根良好的組培苗和培養(yǎng)瓶一起從恒溫光照培養(yǎng)箱移至室外自然環(huán)境中煉
苗；
(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養(yǎng)瓶內(nèi)的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈；
(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，取出后，用無菌水漂洗；
(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質(zhì)中，植入時以栽培基質(zhì)覆蓋住組培苗的根系即
可；
(5)、移植完成后，用多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質(zhì)上部1/3 1/2即可；
(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發(fā)；
(7 )、組培苗新芽萌發(fā)一個星期后，移入田間栽培。優(yōu)選的，在步驟(I)中，煉苗時間為10 15天。優(yōu)選的，所述的高錳酸鉀溶液的質(zhì)量百分比濃度為0. 1%。優(yōu)選的，在步驟(3)中，無菌水漂洗時間為I分鐘。優(yōu)選的，所述的栽培基質(zhì)由黃心土與腐殖土組成，黃心土與腐殖土的質(zhì)量比例為 2 I0優(yōu)選的，在步驟(4)中，先將所述的栽培基質(zhì)置于高壓滅菌鍋中121°C滅菌50min， 栽培基質(zhì)冷卻后再移植組培苗。優(yōu)選的，所述的多菌靈的質(zhì)量百分比濃度為0. 25%。優(yōu)選的，在步驟(6)中，對組培苗進行保濕保溫的具體步驟為用透明塑料袋套住移栽組培苗的花盆，花盆邊緣四周用四根玻璃棒支撐塑料袋以形成一定的空間，用橡皮筋扎緊花盆外緣塑料袋以保濕，溫度維持在26°C 30°C。由于采用了上述的方法，本發(fā)明具有下述的有益效果
(I)操作簡便，容易實施，實用性強。(2)管理容易，成本低廉，移栽成活率可以達到98%以上。
具體實施方式
本發(fā)明所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，具體包括以下步驟
(I)、將生根良好的轉(zhuǎn)基因尾巨桉組培苗和培養(yǎng)瓶一起從恒溫光照培養(yǎng)箱移至室外自然環(huán)境中煉苗，煉苗時間為10 15天。(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養(yǎng)瓶內(nèi)的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈，無菌水漂洗時間為I 2分鐘。(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，高錳酸鉀溶液的質(zhì)量百分比濃度為0. 1%，浸泡后取出組培苗，用無菌水漂洗I分鐘，漂洗后的組培苗置于搪瓷盤上。(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質(zhì)中。所述的栽培基質(zhì)由黃心土 (或山地紅壤)與腐殖土組成，黃心土與腐殖土的質(zhì)量比例為2 I。植入時，先將栽培基質(zhì)裝于花盆當(dāng)中，澆透水，然后置于高壓滅菌鍋中121°C滅菌50min。待滅菌栽培基質(zhì)冷卻后，將組培苗移植入栽培基質(zhì)中，以栽培基質(zhì)輕輕覆蓋住組培苗的根系即可。(5)、移植完成后，用質(zhì)量百分比濃度為0. 25%的多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質(zhì)上部1/3 1/2即可。(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發(fā)。對組培苗進行保濕保溫的具體步驟為用透明塑料袋套住移栽組培苗的花盆，花盆邊緣四周用四根玻璃棒支撐塑料袋以形成一定的空間，用橡皮筋扎緊花盆外緣塑料袋以保濕，溫度維持在26 °C 30 °C，2周后可見新芽萌發(fā)，此時除去塑料袋。( 7 )、組培苗新芽萌發(fā)一個星期后，尾巨桉組培苗生長正常，移入田間栽培?？傊?，本發(fā)明雖然例舉了上述優(yōu)選實施方式，但是應(yīng)該說明，雖然本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以進行各種變化和改型，除非這樣的變化和改型偏離了本發(fā)明的范圍，否則都應(yīng)該包括在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于，包括以下步驟(1)、將生根良好的組培苗和培養(yǎng)瓶一起從恒溫光照培養(yǎng)箱移至室外自然環(huán)境中煉苗；(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養(yǎng)瓶內(nèi)的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈；(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，取出后，用無菌水漂洗；(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質(zhì)中，植入時以栽培基質(zhì)覆蓋住組培苗的根系即可；(5)、移植完成后，用多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質(zhì)上部1/3 1/2即可；(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發(fā)；(7)、組培苗新芽萌發(fā)一個星期后，移入田間栽培。
2.按照權(quán)利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于在步驟(I) 中，煉苗時間為10 15天。
3.按照權(quán)利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于所述的高錳酸鉀溶液的質(zhì)量百分比濃度為0. 1%。
4.按照權(quán)利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于在步驟(3) 中，無菌水漂洗時間為I分鐘。
5.按照權(quán)利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于所述的栽培基質(zhì)由黃心土與腐殖土組成，黃心土與腐殖土的質(zhì)量比例為2 I。
6.按照權(quán)利要求5所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于在步驟(4) 中，先將所述的栽培基質(zhì)置于高壓滅菌鍋中121°C滅菌50min，待栽培基質(zhì)冷卻后再移植組培苗。
7.按照權(quán)利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于所述的多菌靈的質(zhì)量百分比濃度為0. 25%。
8.按照權(quán)利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于，在步驟(6) 中，對組培苗進行保濕保溫的具體步驟為用透明塑料袋套住移栽組培苗的花盆，花盆邊緣四周用四根玻璃棒支撐塑料袋以形成一定的空間，用橡皮筋扎緊花盆外緣塑料袋以保濕， 溫度維持在26°C 30°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法。本發(fā)明包括以下步驟(1)、將生根良好的組培苗和培養(yǎng)瓶一起從恒溫光照培養(yǎng)箱移至室外自然環(huán)境中煉苗；(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養(yǎng)瓶內(nèi)的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈；(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，取出后，用無菌水漂洗；(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質(zhì)中，植入時以栽培基質(zhì)覆蓋住組培苗的根系即可；(5)、移植完成后，用多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質(zhì)上部1/3～1/2即可；(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發(fā)；(7)、組培苗新芽萌發(fā)一個星期后，移入田間栽培。本發(fā)明的移栽成活率可以達到98%以上。
文檔編號A01H4/00GK102524074SQ20121002492
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月6日
發(fā)明者曾富華, 歐陽樂軍, 黃真池 申請人:湛江師范學(xué)院