專利名稱：棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物生理學(xué)和農(nóng)藥學(xué)，具體地，本發(fā)明涉及棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法。
背景技術(shù)：
目前，棉花除草劑抗性鑒定常常是種子萌發(fā)鑒定法、不同時期不同濃度除草劑噴施法、蕾期葉片點涂生長點法、細胞系等培養(yǎng)物除草劑處理法等，但是種子萌發(fā)鑒定法要求種子量足夠大，而不同時期不同濃度除草劑噴施法則要求各時期苗量較大，也會因噴灑不均、藥液飄逸導(dǎo)致實驗誤差，另外蕾期葉片點涂生長點法中，生長點不可以代表整個棉株的生長水平，且較高濃度處理會引起棉株生長點受控、嚴重畸形，棉株不能開花結(jié)實，并且以上各種方法均可能將材料致死，而且，在同時對大量材料進行鑒定時，要求實驗規(guī)模較大， 不便于實現(xiàn)。同時，在對有限或是珍稀棉花材料進行除草劑抗性鑒定時，由于材料量的限制，按照上述各方法處理極有可能會毀滅材料，也不能確保會找到材料的抗性水平或致死濃度。 這時，有效的方法是對棉株進行局部鑒定，這樣既可以找到材料的抗性水平，又可以保存材料。本發(fā)明的發(fā)明人了解到，棉花的功能葉可以代表棉株的生長狀況，可以處理棉株功能葉進行棉花對除草劑抗性的鑒定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人長期探索棉株除草劑抗性鑒定方法，發(fā)現(xiàn)利用不同濃度的除草劑同時處理棉株功能葉，既可快速精準找出棉株的抗性水平，又可以繼續(xù)保存、繁殖有限或珍稀棉花材料；既適用于大量棉花材料的除草劑抗性鑒定，也適用于有限或珍稀材料的除草劑抗性鑒定，即棉球定位鑒定法。因此，本發(fā)明的目的是提供棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法。根據(jù)本發(fā)明的棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法，包括以下步驟I)材料處理葉片的選擇選擇完好無損無受害現(xiàn)象的功能葉或其鄰位葉；2)棉球定位處理在每株的功能葉正面自葉柄順時針或逆時針方向設(shè)定作用位置，將大小基本一致的棉球蘸滿設(shè)定濃度的除草劑工作液，按固定方向依序放置各種濃度藥劑浸泡的棉球于葉片表面的相應(yīng)作用位置；3)觀察處理部位反應(yīng)情況來確定其抗性水平。根據(jù)本發(fā)明的棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法，其包括棉球定位鑒定的步驟，其中，處理為局部處理。根據(jù)本發(fā)明的要求，除草劑處理的葉片選取功能葉或其鄰位葉，一般為倒三或倒四葉，即光合作用最強的葉片，因為過幼嫩組織對外界條件反應(yīng)敏感， 施用較低濃度草甘膦時，極易表現(xiàn)出藥害癥狀，不能代表材料的抗性水平；而過老組織代謝不旺盛，處理后葉片可能不反應(yīng)，葉片組織的一些自然生理生化變化也容易影響鑒定結(jié)果。根據(jù)本發(fā)明的棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法，對天氣狀況要求比較高，要保證處理后6小時無雨，且最好在無風(fēng)晴朗的上午無露水時進行處理，保證精確濃度的藥液與葉片充分作用；對棉株的生育期要求不需要太嚴格，即苗期、蕾期、花鈴期都可。根據(jù)本發(fā)明的棉球定位法對棉花除草劑抗性的鑒定，其中，藥棉要按照固定的順序進行放置，或順時針，或逆時針；藥棉藥量要充足，但要保證棉球置于葉片而沒有藥液流動；棉球藥液濃度不可無限制增大，否則可能導(dǎo)致幼苗死亡或生長點畸形，嚴重受控；藥棉大小要合適，切勿出現(xiàn)不同濃度藥棉粘連現(xiàn)象；棉球要使用脫脂棉，保證吸水性。根據(jù)本發(fā)明的具體實施方式
，所述棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法，具體包括1)材料處理葉片的選擇選擇完好無損無受害現(xiàn)象的功能葉，一株一片；2)棉球定位法處理，在每株的功能葉正面自葉柄處開始順時針方向設(shè)定5個位置，用鑷子將大小基本一致的棉球(脫脂棉)蘸滿設(shè)定濃度的除草劑工作液，依序放置于葉片表面相應(yīng)位置。3) 于處理后第四天調(diào)查，觀察處理部位反應(yīng)情況來確定其抗性水平。本發(fā)明是基礎(chǔ)科研事業(yè)中一項重要技術(shù)發(fā)明，在國際和國內(nèi)為獨創(chuàng)，其具有以下優(yōu)點I、噴灑法處理會因噴灑不均，五級藥害法定義材料抗性水平，會因肉眼觀察，估計受害面積或受害嚴重程度差異不準而造成人為誤差，成苗率等定義會因調(diào)查時間選擇不當(dāng)造成實驗誤差；棉球定位法按濃度大小分級，以處理部位是否反應(yīng)為標(biāo)準定義材料抗性，大大減少人為誤差，結(jié)果精確可靠。2、對于有限或珍稀材料，采用棉球定位法鑒定，為材料繼續(xù)正常生長提供了保障， 對精確定義材料抗性水平提供了技術(shù)保障，也為材料當(dāng)代單株進行深入的抗性研究提供保證。3、對于大量材料對除草劑抗性的篩選，采用棉球定位法鑒定可大大節(jié)省材料，減小實驗規(guī)模。4、所述方法較其它方法快速，周期短，一般的方法要在處理后10-15天調(diào)查，但棉球定位鑒定法在4天內(nèi)即出現(xiàn)結(jié)果，這大大減少了鑒定周期，有效提高了鑒定效率。5、所述方法在一株棉株上可以同時設(shè)置幾個不同濃度，一次處理即可確定棉株的反應(yīng)區(qū)間，大大節(jié)省材料，縮短鑒定時間，提高鑒定效率，顯示了該方法快速，省材、批量的優(yōu)勢。6、采用棉球定位法對大量材料進行除草劑鑒定時，不僅可以知道各材料抗性水平，同時可以在同一水平下比較材料抗性差異。7、用藥量少，大幅度的降低實驗成本，同時，對環(huán)境基本無污染，對環(huán)保做巨大貢獻。而且，操作極其簡單，容易掌握。


圖I棉球定位法處理棉葉，棉葉上1-5除草劑濃度依次增高。圖2棉球定位鑒定法觀察結(jié)果，從a_f為高抗至高感，其中，a.高抗，葉片無反應(yīng)， I級；b.抗，5反應(yīng)，1-4不反應(yīng)，2級；c.耐，4-5有反應(yīng)，1-3無反應(yīng)，3級；d.不耐，3-5有反應(yīng)，1-2無反應(yīng)，4級；e.感，2-5有反應(yīng)，I無反應(yīng)，5級；f.高感，1_5有明顯反應(yīng)，6級。
具體實施例方式
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實施例I棉球定位法鑒定棉花對除草劑草甘膦的抗性I、處理材料葉片選擇材料種植、管理等沒有具體要求，常規(guī)種植管理或自然生長的材料都可。葉片選擇從棉株部位上講沒有特殊要求，主莖、營養(yǎng)枝、果枝、二級或三級分枝均可，但要求完好無損無受害現(xiàn)象的功能葉，一株一片；從棉株生育期上講，沒有嚴格要求，苗期、蕾期、花鈴期都可。處理前對葉片進行標(biāo)記，但標(biāo)記時間不可提前太長，否則對于除草劑處理來講，葉片生長太快，葉片會偏老，結(jié)果出現(xiàn)誤差。2、藥液配制藥液配制首先將原液按一定比例配制成母液(每10毫升41 %草甘膦原液充分溶于400毫升水中配制成母液為I %的草甘膦溶液)，再進一步稀釋成工作液(分別將6毫升、 30暈升、90暈升、150暈升和200暈升的I %的草甘膦母液充分溶于994暈升、970暈升、910 毫升、850毫升和800毫升的水中，分別配制成O. 006%,O. 03%,O. 09%,O. 15%和O. 2%的草甘膦工作液)。原液、母液最好保存于冰箱，且母液和工作液不可長時間保存，工作液不可在陽光下暴曬，也不可置于風(fēng)口，最好置于陰涼處。3、棉球定位處理棉球定位處理是在每株的功能葉正面自葉柄處開始順時針方向設(shè)定幾個位置，用鑷子將蘸滿設(shè)定濃度草甘膦的棉球(脫脂棉)，依序放置于葉片表面相應(yīng)位置，見附圖I。關(guān)鍵是棉球大小基本一致，藥棉藥量充足，但不要太多以防在葉片上流動。另外，要使用鈍頭鑷子，以免尖頭鑷子劃傷葉片。4、調(diào)查處理后第4天左右調(diào)查，反應(yīng)情況很明顯，依反應(yīng)情況將材料抗性分級評價，見附圖2，a.高抗，葉片無反應(yīng)，I級；b.抗，5反應(yīng)，1-4不反應(yīng)，2級；c.耐，4_5有反應(yīng)，1-3無反應(yīng)，3級；d.不耐，3-5有反應(yīng)，1-2無反應(yīng)，4級；e.感，2_5有反應(yīng)，I無反應(yīng)，5級；f.高感，1-5有明顯反應(yīng)，6級。棉球定位鑒定棉花時，每棉株都處理功能葉，具有一致性和代表性，且每功能葉都處理特定位置，具有針對性，每處理部位精確濃度的藥量夠充足，可以保證每處理位置組織與精確濃度的藥液充分作用，而噴灑法常常會出現(xiàn)噴灑不均、每材料各重復(fù)噴灑藥量大小不等、不同濃度藥液飄逸的現(xiàn)象，導(dǎo)致該方法存在隨機性、難控制性，誤差較大。另外，棉球定位法處理四天時調(diào)查每處理位置是否出現(xiàn)反應(yīng)定義抗性水平，是定性調(diào)查，人為主觀誤差較小，而五級藥害法調(diào)查則要估計受害面積或受害程度嚴重性，是定量調(diào)查，人為主觀誤差較大，可能會受肉眼觀察的影響，并且噴灑藥液均勻度對結(jié)果影響很大，成苗率調(diào)查法會因處理時較難統(tǒng)一的藥量水平差異造成的反應(yīng)遲緩、嚴重不同，從而調(diào)查時間把握不當(dāng)造成實驗誤差。棉球定位鑒定只是給棉株局部施藥，且藥量很小，盡管除草劑草甘膦和草胺膦有一定的傳導(dǎo)性，只要不在棉株上棉球定位過大濃度除草劑，就不至于完全抑制或致死棉株。 因此，本方法鑒定處理后的棉株，基本可以正常生長發(fā)育。
權(quán)利要求
1.棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟1)材料處理葉片的選擇選擇完好無損無受害現(xiàn)象的功能葉或其鄰位葉；2)棉球定位處理在每株的功能葉正面自葉柄處開始順時針或逆時針方向設(shè)定作用位置，將大小基本一致的棉球蘸滿設(shè)定濃度的除草劑工作液，按固定方向依序放置各種濃度藥劑浸泡的棉球于葉片表面的相應(yīng)作用位置；3)觀察處理部位反應(yīng)情況來確定其抗性水平。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述材料處理葉片為光合作用最強的葉片。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，處理棉株時在無風(fēng)、晴朗的上午無露水時進行。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，以棉球處理葉片后的6小時以內(nèi)無雨，或不見水。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，棉球浸泡的除草劑藥量達到放置藥液浸泡的棉球在葉片上無藥液流動的標(biāo)準。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述除草劑是草甘膦或草胺膦。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物生理學(xué)和農(nóng)藥學(xué)，具體地，本發(fā)明涉及棉花葉片棉球定位鑒定除草劑抗性的方法。根據(jù)本發(fā)明的方法，包括步驟1)材料處理葉片的選擇選擇完好無損無受害現(xiàn)象的功能葉或其鄰位葉；2)棉球定位處理在每株的功能葉正面自葉柄處開始順時針或逆時針方向設(shè)定作用位置，將大小基本一致的棉球蘸滿設(shè)定濃度的除草劑工作液，按固定方向依序放置各種濃度藥劑浸泡的棉球于葉片表面的相應(yīng)作用位置；3)觀察處理部位反應(yīng)情況來確定其抗性水平。該方法可大大節(jié)省材料，減小實驗規(guī)模，大大減少人為誤差，結(jié)果精確可靠，對精確定義材料抗性水平提供了技術(shù)保障，也為材料當(dāng)代單株進行深入的抗性研究提供保證，操作極其簡單，容易掌握。
文檔編號A01G7/06GK102577857SQ20121001968
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月24日
發(fā)明者劉方, 張香娣, 王園園, 王坤波, 王春英, 王玉紅, 蔡小彥, 黎紹惠 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所