專(zhuān)利名稱(chēng)：具有抑菌作用的茶樹(shù)菇發(fā)酵液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抑菌作用的茶樹(shù)菇發(fā)酵液的制備方法。屬生物工程技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
茶樹(shù)菇屬擔(dān)子菌綱，糞銹傘科，田菇屬，又名茶菇、油茶菇、神菇。是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種食用菌新品種。茶樹(shù)菇營(yíng)養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)含量高，含有人體必需的氨基酸，并且有豐富的B族維生素和鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、鋅等礦質(zhì)元素。中醫(yī)認(rèn)為該菇性平、甘溫、無(wú)毒，具有較高的藥用價(jià)值，有清熱、平肝、明目、健脾的功效。是一種集營(yíng)養(yǎng)、保健、理療于一身的綠色食品。通過(guò)深層發(fā)酵獲得一種天然的具有抑菌作用的發(fā)酵液，可應(yīng)用于化妝品的抑菌防腐。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抑菌作用的茶樹(shù)菇發(fā)酵液的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案為將茶樹(shù)菇子實(shí)體通過(guò)組織分離法接入固體斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待長(zhǎng)好后移至搖瓶種子液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的種子液接入搖瓶發(fā)酵液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，脫蛋白，透析后得到澄清的黃色液體，濾過(guò)除菌后進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。上述過(guò)程中，斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，搖瓶種子培養(yǎng)基為PDAlL加磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，pH6. 0，發(fā)酵培養(yǎng)基為玉米粉2g/100mL、酵母粉 0. 3g/100mL、磷酸二氫鉀 0. 2g/100mL、硫酸鎂 0. 05g/100mL,培養(yǎng)條件為起始 pH6. 0，250mL 三角瓶裝培養(yǎng)基IOOmL于25°C，150r/min，振蕩培養(yǎng)7d，離心后上清液用Sevage法去除游離蛋白質(zhì)，蒸餾水透析去除無(wú)機(jī)鹽，得到茶樹(shù)菇發(fā)酵液。濾過(guò)除菌后用濾紙片法進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)例將具體說(shuō)明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對(duì)本發(fā)明的限定。實(shí)例一1.發(fā)酵液制備出發(fā)菌種為市售茶樹(shù)菇(Agrocybe aegirit)；(1)組織分離法斜面培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基，含1.5% 2.0%瓊脂，pH自然；組織分離方法將子實(shí)體外表用酒精進(jìn)行表面消毒后，放入超凈工作臺(tái)上，用消毒過(guò)的刀片與鑷子切取菌柄與菌蓋交界處組織塊接入斜面培養(yǎng)基上，PH自然，置于25°C溫度下暗培養(yǎng)，5d后菌絲開(kāi)始萌發(fā)，每隔2d檢查1次，除去污染，選擇菌絲生長(zhǎng)速度快和長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)的試管作為純母種；(2)搖瓶種子培養(yǎng)
搖瓶種子培養(yǎng)基PDA1L加磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg， ρΗ6· 0 ；培養(yǎng)方法從斜面菌種中取3 4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養(yǎng)基中，250mL三角瓶裝培養(yǎng)基IOOmL于25°C，150r/min，振蕩培養(yǎng)7d ；(3)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉2g/100mL、酵母粉0. 3g/100mL、磷酸二氫鉀0. 2g/100mL、硫酸鎂 0.05g/100mL ；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)好的種子以15%的接種量接入搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中25°C，150r/ min,振蕩培養(yǎng)7d ；(4)發(fā)酵液濃縮，脫蛋白，透析培養(yǎng)后離心，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后用kvage法去除游離蛋白，即按發(fā)酵液1/5的體積加入氯仿，然后加入氯仿體積1/5的正丁醇，混合后振蕩20min。蛋白質(zhì)與氯仿-正丁醇生成凝膠，4000rpm離心20min，收集上清液，反復(fù)操作8次至氯仿-正丁醇層不渾濁為止。然后取上清液中裝入透析袋中，扎緊袋口，懸浮于蒸餾水中，透析48h，中間每隔 12小時(shí)換水一次，得發(fā)酵液。2.濾過(guò)除菌上述液體通過(guò)0. 22 μ m的濾膜除菌。實(shí)例二對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵液樣品進(jìn)行了氨基酸組成，單糖組成的測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表明，所含氨基酸中谷氨酸占18%以上，天冬氨酸占12%以上，甘氨酸占8%以上，賴(lài)氨酸占7%以上，丙氨酸占6%以上，所含單糖以葡萄糖為主，用苯酚-硫酸法測(cè)得多糖含量為76.3%。茶樹(shù)菇發(fā)酵液的氨基酸組成及含量見(jiàn)表1。表1茶樹(shù)菇發(fā)酵液的氨基酸組成及含量
權(quán)利要求
1.一種具有抑菌作用的茶樹(shù)菇發(fā)酵液，其特征在于外觀為淡黃色液體，是茶樹(shù)菇通過(guò)深層發(fā)酵獲得的發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濃縮，脫蛋白，透析，濾過(guò)除菌后制得。其中發(fā)酵液所含氨基酸中谷氨酸占18%以上，天冬氨酸占12%以上，甘氨酸占8%以上，賴(lài)氨酸占7%以上，丙氨酸占6%以上，然后通過(guò)濾紙片法進(jìn)行抑菌活性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明其對(duì)常見(jiàn)致病菌，尤其是腸道致病菌有一定抑制作用。
2.權(quán)利要求1所述的發(fā)酵液的制備方法。該方法由下列步驟組成(1)菌種培養(yǎng)出發(fā)菌種為市售茶樹(shù)菇(Agrocybe aegirit)；①組織分離法斜面培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基，含丨；^ ？^^瓊脂，？!！自然；組織分離方法將子實(shí)體外表用酒精進(jìn)行表面消毒后，放入超凈工作臺(tái)上，用消毒過(guò)的刀片與鑷子切取菌柄與菌蓋交界處組織塊接入斜面培養(yǎng)基上，PH自然，置于25°C溫度下暗培養(yǎng)，5d后菌絲開(kāi)始萌發(fā)，每隔2d檢查1次，除去污染，選擇菌絲生長(zhǎng)速度快和長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)的試管作為純母種；②搖瓶種子培養(yǎng)搖瓶種子培養(yǎng)基PDA1L加磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，pH6. O ；培養(yǎng)方法從斜面菌種中取3 4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養(yǎng)基中， 250mL三角瓶裝培養(yǎng)基IOOmL于25°C，150r/min，振蕩培養(yǎng)7d ；③搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉2g/100mL、酵母粉0. 3g/100mL、磷酸二氫鉀0. 2g/100mL、硫酸鎂 0.05g/100mL ；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)好的種子以15%的接種量接入搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中25°C，150r/min， 振蕩培養(yǎng)7d ；(2)發(fā)酵液濃縮，脫蛋白，透析培養(yǎng)后離心，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后用kvage法去除游離蛋白，然后取上清液透析。(3)濾過(guò)除菌上述液體通過(guò)0. 22 μ m的濾膜除菌。
3.如權(quán)利要求1所述的抑菌實(shí)驗(yàn)所用濾紙片的制備方法，其特征在于用打孔器將新華 1號(hào)定性濾紙打成直徑6mm的小圓片，于培養(yǎng)皿中121°C濕熱滅菌30min，將滅菌濾紙片浸入茶樹(shù)菇發(fā)酵液中，浸泡24h后取出。
4.如權(quán)利要求1所述的抑菌實(shí)驗(yàn)菌種包括金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、枯草芽胞桿菌、 傷寒桿菌、面包酵母、黑根霉、曲霉。
5.如權(quán)利要求2所述的發(fā)酵液的制備方法，其特征在于所述用kvage法去除游離蛋白，是按發(fā)酵液1/5的體積加入氯仿，然后加入氯仿體積1/5的正丁醇，混合后振蕩20min。 蛋白質(zhì)與氯仿-正丁醇生成凝膠，4000rpm離心20min，收集上清液，反復(fù)操作8次至氯仿-正丁醇層不渾濁為止。
6.如權(quán)利要求2所述的發(fā)酵液的制備方法，其特征在于所述的透析是指將去除游離蛋白質(zhì)的發(fā)酵液裝入透析袋中，扎緊袋口，懸浮于蒸餾水中，透析48h，中間每隔12小時(shí)換水一次。
全文摘要
本發(fā)明屬生物工程技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及具有抑菌作用的茶樹(shù)菇發(fā)酵液的制備方法。該茶樹(shù)菇發(fā)酵液為黃色液體，是茶樹(shù)菇深層發(fā)酵后的液體經(jīng)過(guò)濃縮，脫蛋白，透析得到的。該發(fā)酵液所含氨基酸中谷氨酸占18％以上，天冬氨酸占12％以上，甘氨酸占8％以上，賴(lài)氨酸占7％以上，丙氨酸占6％以上，具有一定的抑菌作用，可應(yīng)用于化妝品的抑菌防腐。
文檔編號(hào)A01G1/04GK102523916SQ20111041989
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者滕麗萍, 程詠梅, 鄧超, 陳敬華, 陳荊曉 申請(qǐng)人:江南大學(xué)