專利名稱：一種觀音座蓮試管花卉的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術領域，涉及一種觀音座蓮的栽培方法，特別涉及一種觀音座蓮試管花卉的制作方法。
背景技術：
觀音座蓮kSetnpervinmi tectorum)，又稱長生草、佛座蓮花等，為景天科長生草屬觀葉植物，植株呈低矮的叢生狀，葉片螺旋狀排列成蓮座形葉盤，其直徑從3厘米一直到15 厘米以上，肉質(zhì)葉匙形或長倒卵形，頂端尖，葉表面被有白粉或多毛，葉色依品種不同從灰綠、黃綠、深綠到紅褐色的都有，葉頂端的尖有綠色、紅色、褐色或紫色，其大小也不一樣，葉緣具細密的鋸齒。其株形端莊，猶如一朵盛開的蓮花，葉色富于變化，并依品種不同而異，紫紅色的葉尖極為別致，適合做中小型盆栽或組合盆栽。發(fā)育良好的植株在大蓮座下面會著生一圈小蓮座，非?？蓯邸Ｃ磕甑拇耗┻€會從葉叢下部抽出類似吊蘭的紅色走莖，走莖前端長有蓮座狀小葉叢，具有很高的觀賞價值。此外，觀音座蓮還具有較高藥用價值和保健作用 。提取液用于治療咽喉潰瘍，口腔疾病，支氣管炎，以及燒傷、燙傷、蚊蟲叮咬等皮膚疾病，其保健作用主要體現(xiàn)在其對肌膚的滋養(yǎng)、護肝作用以及泡茶飲用有提神的作用。試管花卉是利用植物組織培養(yǎng)技術，在實驗室人工控制條件下，將事先培養(yǎng)好的小植株種植在具有較好觀賞性的透明容器中，在密封空間里控制生長的一系列迷你微型植物的總稱。試管花卉又被稱之為“天使花房”或“迷你花屋”。試管花卉因其具有無須水肥管理、觀賞時間長等優(yōu)點，近年來受到都市人的青睞，因而也給試管花卉帶來了巨大的商業(yè)潛力。盡管目前有關試管花的報道已有不少，但應用于試管花制作的植物類型還十分有限。由于觀音座蓮具有較高的觀賞特性，因此，以觀音座蓮為材料進行試管花卉的制作顯得很有必要。CN1300537A公開了一種觀音蓮的快速繁殖方法，其技術要點是取觀音蓮的小塊莖為外植體，誘導產(chǎn)生愈傷組織，再誘導出叢生芽，將其切成單芽繼續(xù)在培養(yǎng)基中進行連續(xù)擴大培養(yǎng)，便可在短期內(nèi)繁殖出大量的幼苗，出瓶移栽上盆培養(yǎng)成商品。該方法獲得是天南星科植物觀音蓮的幼苗，需要將繁殖好的幼苗出瓶移栽上盆培養(yǎng)，并不能得到迷你微型的試管花卉。綜上所述，目前觀音座蓮試管花卉的制作方法在現(xiàn)有技術中未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
為了豐富試管花卉材料，本發(fā)明的目的在于對觀音座蓮的最佳擴繁條件進行探索，從而提供一種觀音座蓮試管花卉的制作方法。本發(fā)明的目的是這樣試驗的
一種觀音座蓮試管花卉的制作方法，以觀音座蓮的小塊莖為外植體，在擴繁培養(yǎng)基中誘導產(chǎn)生小芽，將小芽接在裝有彩色培養(yǎng)基的玻璃瓶內(nèi)培養(yǎng)，獲得可供觀賞的觀音座蓮試管花卉。所述的外植體按照如下方法獲得將觀音座蓮從底部剪斷，去掉莖干周圍的葉片，使其露出一段莖，保留頂芽周圍6-8個葉片，走莖也做類似處理；用流水沖洗，洗掉灰塵和夾在葉片中的雜質(zhì)，用蒸餾水洗2-3遍，再用70%酒精浸泡2分鐘，不斷搖動；兩分鐘后倒掉酒精，用30% 84消毒液滅菌30分鐘，用84消毒液消毒期間也不斷搖動；30分鐘后倒掉84 消毒液，用無菌水清洗3-4遍；將洗凈的小芽底部發(fā)白的莖段剪掉，下垂的葉子剪掉。所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其中擴繁培養(yǎng)基為MS+0. 6 mg/L NAA、瓊脂8 g/L、糖40 8/1、？!1值為5.8-6.2。糖作為培養(yǎng)基中的碳源，優(yōu)選為白砂糖。所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其中在擴繁培養(yǎng)基中誘導培養(yǎng)的條件為 溫度為22士 1°C，每天光照10小時，四十天繼代一次。所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其中彩色培養(yǎng)基為MS+瓊脂8 g/L、糖40 g/L、色素 0. 2-25g/L、pH 值為 5. 8-6. 2。所述的色素優(yōu)選為檸檬黃、葡萄紫、蘋果綠或胭脂紅。本發(fā)明任何地方所述的培養(yǎng)基中，其中
MS是國際通用的培養(yǎng)基，其成分和配制方法參見文獻(譚文澄、戴策剛主編，觀賞植物組織培養(yǎng)技術，北京中國國林業(yè)出版社，1991)
BA也縮寫為6-BA，化學成分為6-芐氨基嘌呤，使用時配置成高濃度母液，即0. 5mg/mL。 具體配置方法稱取50毫克6-BA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸餾水定容至100毫升， 即可使用。NAA的化學成分為萘乙酸，使用時配置成0.5mg /mL的母液。具體配置方法稱取 50毫克NAA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸餾水定容至100毫升，即可使用。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明涉及的觀音座蓮試管花卉的制作方法具有如下優(yōu)點和顯著的進步
(1)擴繁效果好。觀音座蓮外植體在MS中添加NAA取得較好的擴繁效果，擴繁倍數(shù)達到 3. 81。(2)觀音座蓮試管花卉觀賞期較長。由于觀音座蓮生長比較緩慢，其在小培養(yǎng)瓶中可以存活4個月以上，如果培養(yǎng)容器增大，培養(yǎng)基含量增多，就會延長觀音座蓮的觀賞時間。(3)環(huán)保性強。觀音座蓮莖段消毒采用84消毒液消毒，培養(yǎng)基均是常用培養(yǎng)基，彩色培養(yǎng)基的顏色均是用食品色素調(diào)配，也不會給環(huán)境帶來泥土昆蟲等污染，既能美化室內(nèi)環(huán)境，又給人們帶來自然之美的享受。(4)經(jīng)濟效益和社會效益高。觀音座蓮的試管花卉制作工藝簡單，占用的空間小， 觀賞時間長，且試管花卉均在無菌條件下生長，無需澆水、施肥等管理，具有非常顯著的經(jīng)濟效益和社會效益。
具體實施例方式以下是本發(fā)明涉及的具體實施例，對本發(fā)明的技術方案做進一步作描述，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本實驗探索觀音座蓮最佳擴繁培養(yǎng)基，獲得大量觀音座蓮無菌苗，并以此為材料制作試管花卉，為豐富試管花卉產(chǎn)業(yè)的進一步發(fā)展奠定基礎。
1材料與方法
1. 1實驗材料
觀音座蓮購買于湖北武漢雄楚花卉大市場。1.2實驗方法
1. 2. 1外植體的消毒及無菌苗的獲得
將觀音座蓮從底部剪斷，去掉莖干周圍的葉片，使其露出一段莖，保留頂芽周圍6-8個葉片，走莖也做類似處理；用流水沖洗，洗掉灰塵和夾在葉片中的雜質(zhì)，用蒸餾水洗2-3遍， 再用70%酒精浸泡2分鐘，不斷搖動；兩分鐘后倒掉酒精，一半材料用20% 84消毒液(市售， 產(chǎn)于溫州)滅菌30分鐘，另一半用30% 84消毒液滅菌30分鐘，用84消毒液消毒期間也不斷搖動；30分鐘后倒掉84消毒液，用無菌水清洗3-4遍，直至水中不出現(xiàn)泡沫為止。將洗凈的小芽底部發(fā)白的莖段剪掉，下垂的葉子剪掉，接入MS培養(yǎng)基中，每瓶接一株，兩種滅菌條件各15株，在溫度為22士 1 °C，每天光照10小時的條件下培養(yǎng)。七天后觀察并記錄污染情況，四十天繼代一次。不同白砂糖濃度對觀音座蓮擴繁系數(shù)的影響
將觀音座蓮無菌苗分別繼代到MS中添加不同濃度白砂糖的培養(yǎng)基中，即MSl,白砂糖濃度為30 g/L，MS2為35 g/L和MS3為40 g/L，每組36瓶，每瓶1株，分三次重復，具體配方見表1。40天后統(tǒng)計每株材料新長出的小芽個數(shù)，計算擴繁倍數(shù)。不同BA濃度對觀音座蓮擴繁倍數(shù)的影響
將無菌苗分別繼代到MS培養(yǎng)基添加不同濃度的6-BA培養(yǎng)基中，即MBl MS+0. 3 mg/ L NM +0. 5 mg/L 6_BA，NB2 MS+0. 3 mg/L NAA +1. 0 mg/L 6-BA，MB3 :MS+0. 3 mg/L NAA +1. 5 mg/L 6-BA,每組接種60瓶，每瓶接種1株，分三次重復，配方MNl為對照組，具體配方見表3。40天后統(tǒng)計每株觀音座蓮新長出的小芽個數(shù)(不包括接種進去的小芽，即頂芽)計算擴繁倍數(shù)。不同NAA濃度對觀音座蓮擴繁倍數(shù)的影響
將無菌苗分別繼代到MS培養(yǎng)基添加不同濃度的NAA培養(yǎng)基中，即MNl :MS+0. 3 mg/L NAA，MN2 MS+0. 6 mg/L NAA，MN3 :MS+0. 9 mg/L NAA，各 45 瓶，每瓶接種 1 株，分三次重復， 具體配方見表2，配方MS3為本實驗設計的對照組。40天后統(tǒng)計每株材料新長出的小芽個數(shù)，比較每組培養(yǎng)基中觀音座蓮的擴繁倍數(shù)。以上三種調(diào)控方法在繼代時，都要先剪掉觀音座蓮底部幾個葉片，露出約兩毫米的一段莖，再插入以上不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件均是以MS為基本培養(yǎng)基，除特殊要求外，白砂糖濃度為40 g/L,瓊脂8 g/L, pH值為5. 8-6. 2，溫度22士 1°C，光周期為10小時。1. 3試管花卉的制作 1. 3. 1彩色培養(yǎng)基的配置
在培養(yǎng)基MS中添加四種不同色素即檸檬黃(0.05 g/mL)、葡萄紫(0.05 g/ mL)、蘋果綠 (5 g/ mL)和胭脂紅(0.05 g/mL)，每升培養(yǎng)基添加量分別為4 mL、4 mL、5 mL和8 mL, 獲得具有觀賞價值的彩色培養(yǎng)基，所有色素均是食品添加劑，對環(huán)境沒有污染。試管花卉的制作
將彩色培養(yǎng)基分裝于小玻璃瓶里，每個小瓶倒入8 mL培養(yǎng)基，約占培養(yǎng)容器體積的
52/5，滅菌后，將直徑在1. 0 cm左右的觀音座蓮無菌苗接于玻璃瓶內(nèi)，每瓶一株，共30瓶。觀察記錄觀音座蓮在小玻璃瓶中的觀賞時間。2結果與分析
2. 1無菌苗獲得的結果分析
用70%的酒精浸泡2 min，不同濃度的84消毒液滅菌相同的時間，結果顯示20%的84 消毒液消毒后的污染率為80%，未染菌植株的成活率為66. 7% ；用30%的84消毒液消毒，污染率降為60%，未染菌植株的成活率也有所下降，為60%。說明，隨著84消毒液的濃度增加， 可以降低材料污染率，同時對植株的傷害也有所增強，導致未染菌材料的成活率有所下降， 但成活率下降的比例比污染率增高的比例要低，因此可以用30% 84消毒液進行消毒，可獲得較多無菌苗。并且用酒精和84消毒時，一定要不斷搖動液體，使得液體充分覆蓋材料表面，不讓其表面形成氣泡而影響消毒效果。不同糖濃度對觀音座蓮擴繁系數(shù)的影響結果分析
在本實驗設計范圍內(nèi)，隨著白砂糖濃度的增高，觀音座蓮擴繁倍數(shù)逐漸增大(表1)，當白砂糖濃度增加到40 g/L時，擴繁系數(shù)從1. 30增加至2. 71，三組之間顯具有顯著差異，說明白砂糖濃度對觀音座蓮擴繁倍數(shù)有顯著影響。本實驗最高濃度用到40 g/L，擴繁倍數(shù)仍有顯著變化，因此將在以后實驗中進一步提高白砂糖濃度梯度，以期獲得更高的擴繁倍數(shù)的最佳白砂糖濃度。表1不同白沙糖濃度對觀音蓮擴繁倍數(shù)的影響
權利要求
1.一種觀音座蓮試管花卉的制作方法，其特征在于以觀音座蓮的小塊莖為外植體， 在擴繁培養(yǎng)基中誘導產(chǎn)生小芽，將小芽接在裝有彩色培養(yǎng)基的玻璃瓶內(nèi)培養(yǎng)，獲得可供觀賞的觀音座蓮試管花卉。
2.根據(jù)權利要求1所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其特征在于所述的外植體按照如下方法獲得將觀音座蓮從底部剪斷，去掉莖干周圍的葉片，使其露出一段莖，保留頂芽周圍6-8個葉片，走莖也做類似處理；用流水沖洗，洗掉灰塵和夾在葉片中的雜質(zhì)，用蒸餾水洗2-3遍，再用70%酒精浸泡2分鐘，不斷搖動；兩分鐘后倒掉酒精，用30% 84消毒液滅菌30分鐘，用84消毒液消毒期間也不斷搖動；30分鐘后倒掉84消毒液，用無菌水清洗3-4遍；將洗凈的小芽底部發(fā)白的莖段剪掉，下垂的葉子剪掉。
3.根據(jù)權利要求1所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其特征在于所述的擴繁培養(yǎng)基為:MS+0. 6 mg/L NAA、瓊脂 8 g/L、糖 40 g/L、pH 值為 5. 8-6. 2。
4.根據(jù)權利要求3所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其特征在于所述的糖為白砂糖。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其特征在于在擴繁培養(yǎng)基中誘導培養(yǎng)的條件為溫度為22士 1°C，每天光照10小時，四十天繼代一次。
6.根據(jù)權利要求1所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其特征在于所述的彩色培養(yǎng)基為=MS+ 瓊脂 8 g/L、糖 40 g/L、色素 0. 2-25g/L、pH 值為 5. 8-6. 2。
7.根據(jù)權利要求6所述的觀音座蓮試管花卉的制作方法，其特征在于所述的色素為檸檬黃、葡萄紫、蘋果綠或胭脂紅。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種觀音座蓮試管花卉的制作方法，以觀音座蓮的小塊莖為外植體，在擴繁培養(yǎng)基中誘導產(chǎn)生小芽，將小芽接在裝有彩色培養(yǎng)基的玻璃瓶內(nèi)培養(yǎng)，獲得可供觀賞的觀音座蓮試管花卉。本發(fā)明的觀音座蓮試管花卉擴繁效果好，觀賞期較長，環(huán)保性強，經(jīng)濟效益和社會效益高。
文檔編號A01H4/00GK102415335SQ201110254089
公開日2012年4月18日 申請日期2011年8月31日 優(yōu)先權日2011年8月31日
發(fā)明者位沙, 朱意, 李自河, 柳俊, 段德君, 袁繼紅, 齊迎春 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學