專利名稱：姜荷花的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種花卉植物姜荷花的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
姜荷花(Curcuma alismatifolia Gagnep.)為姜科姜荷屬多年生熱帶草本宿根花卉，原產(chǎn)泰國(guó)清邁一帶。由于其粉紅色的苞片酷似荷花且為姜科故稱之為姜荷花。姜荷花為穗狀花序，花梗高出葉面，花色美麗、鮮艷，花期持久，是一種新型的鮮切花品種，觀賞價(jià)值高，品質(zhì)優(yōu)良，具有很高的經(jīng)濟(jì)效益，開發(fā)利用前景廣闊。姜荷花因其獨(dú)特的花型，鮮艷的花色以及花期長(zhǎng)，在日本和臺(tái)灣深受人們的青睞，目前大陸市場(chǎng)幾乎是空白，市場(chǎng)前景極為看好。但目前只能靠常規(guī)繁殖方法，繁殖速度很慢，遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)對(duì)其種苗的需求，故采用組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，可獲得優(yōu)質(zhì)整齊的種苗，為其快速繁殖開辟一條有效途徑?！敖苫ńM織培養(yǎng)技術(shù)研究”(牟小翎，2006，北方園藝)和“姜荷花新品種紅觀音的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)”(商宏莉，2010，北方園藝)雖公開了有關(guān)姜荷花的組織培養(yǎng)方法，但上述方法仍具有如下不足之處不定芽的繁殖系數(shù)較低，僅為2-4倍；而且在不定芽的增殖過(guò)程中，其根原基被誘導(dǎo)后易發(fā)育成大量的根系，這種不定芽和不定根同時(shí)生長(zhǎng)的現(xiàn)象不僅嚴(yán)重影響了增殖效率，而且使不定芽的繼代分割不易操作，最終導(dǎo)致種苗質(zhì)量下降和移栽成活率較低，一般僅82 %左右。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是，針對(duì)已有姜荷花組培技術(shù)中存在的不定芽繁殖系數(shù)偏低而根系生長(zhǎng)過(guò)旺，從而影響增殖效率與種苗質(zhì)量的缺陷，提供一種能快速、高效獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗的姜荷花組織培養(yǎng)快速繁殖方法。本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)。姜荷花的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，該方法按以下步驟進(jìn)行(一 )培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量為1)基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基；2)無(wú)菌苗培養(yǎng)基1/2MS+ 白糖 20-30g/L，瓊脂 5_8g/L，pH5. 6-5. 8 ；3)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+6-BAl. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L+ 白糖 20_30g/L，瓊脂 5-8g/L, ρΗ5· 6-5. 8 ；4) ±曾殖培養(yǎng)基:MS+6-BAl. 0-3. Omg/L+NAA 0. 1-0. 3mg/L+ 白糖 20_30g/L，瓊脂 5-8g/L, pH5. 6-5. 8 ；5)生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0. 5-1. 5mg/L+ 白糖 20_30g/L，瓊脂 5_8g/L， ρΗ5· 6-5. 8 ；( 二)塊根小芽培養(yǎng)與滅菌選擇無(wú)病斑、無(wú)蟲瘦、健壯飽滿的姜荷花塊根放入生化培養(yǎng)箱中，在26-28°C、暗培養(yǎng)下催芽至長(zhǎng)成0. 5-2. Ocm的小芽；取小芽經(jīng)流水、無(wú)菌水沖洗干凈，用70%酒精消毒45s，0. 升汞水溶液浸泡IOmin滅菌，無(wú)菌水沖洗5_6次后，備用；(三)外植體無(wú)菌苗的培養(yǎng)將滅菌后小芽在超凈臺(tái)上剝?nèi)?_5mm的莖尖作為外植體，接種到無(wú)菌苗培養(yǎng)基中，在25士2°C、光強(qiáng)1500Lx、光照Uh/d組培條件下培養(yǎng)6_7天至莖尖長(zhǎng)到1. 0-2. Ocm時(shí)成外植體無(wú)菌苗；(四)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將外植體無(wú)菌苗接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)22-25天至形成初代不定芽并長(zhǎng)到1. 0-3. Ocm ；(五)不定芽增殖培養(yǎng)將上述的初代不定芽苗接種到增殖培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)10-15天至形成繼代不定芽苗并長(zhǎng)到3. 0-6. Ocm ；(六)小苗生根培養(yǎng)將上述的繼代不定芽苗接種到生根培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)12-15天，小苗長(zhǎng)至4-8cm且至少具有3條彡長(zhǎng)2cm的根時(shí)，即成可以出培養(yǎng)室的組培瓶苗；(七)組培苗的煉苗馴化與移栽將組培苗瓶移至普通大棚溫室中；先擰松組培瓶蓋培養(yǎng)2天，再開蓋培養(yǎng)5天后，出瓶、洗凈根部培養(yǎng)基移栽入泥炭珍珠巖=4 1的基質(zhì)中，按常規(guī)肥水管理至長(zhǎng)成成品苗，出圃。本發(fā)明的有益效果一、本發(fā)明方法選擇健康飽滿的姜荷花塊根進(jìn)行催芽，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得大量的無(wú)菌苗；采用本發(fā)明的方法，一般僅需50-62天即可大量得到可出瓶種植的種苗，是一種不受季節(jié)等因素影響，高效、快速提供優(yōu)質(zhì)姜荷花種苗的方法，可以加速良種推廣速度，提高田間品種種植產(chǎn)量。二、本發(fā)明通過(guò)特有培養(yǎng)基的配方，顯著縮短了姜荷花不定芽的增殖培養(yǎng)期 (10-15天)，從而大大提高了組培繁殖系數(shù)，由已有的2-4倍提高到5-8倍。三、本發(fā)明通過(guò)對(duì)增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中激素成分的選擇與含量的調(diào)節(jié)，在增殖階段有效抑制了對(duì)根原基的發(fā)育誘導(dǎo)，提高了不定芽的繁殖系數(shù)，并保持了較好增殖一致性，也進(jìn)一步提高了種苗的質(zhì)量，使移栽成活率高達(dá)95%以上；四、本發(fā)明建立的姜荷花組織培養(yǎng)體系將為工廠化育苗提供技術(shù)支撐，方法操作簡(jiǎn)單、污染率低、植株再生成功率高。
具體實(shí)施例方式通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例1 姜荷花的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，該方法按以下步驟進(jìn)行(一 )培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量為1)基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基均按常規(guī)配方配制而成；2)無(wú)菌苗培養(yǎng)基1/2MS+ 白糖 20g/L+ 瓊脂 8g/L，pH5. 6 ；3)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BAl. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+ 白糖 20g/L+ 瓊脂 8g/L， ρΗ5· 6 ；
4) ±曾殖培養(yǎng)基:MS+6-BA 2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+ 白糖 25g/L+ 瓊脂 5g/L，ρΗ5· 6 ；5)生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0. 5mg/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂 8g/L，ρΗ5· 6 ；( 二 )塊根小芽培養(yǎng)與滅菌選擇無(wú)病斑、無(wú)蟲癭、健壯飽滿的姜荷花塊根放入生化培養(yǎng)箱中，在26-28°C、暗培養(yǎng)下催芽至長(zhǎng)成0. 5-2. Ocm的小芽；取小芽經(jīng)流水、無(wú)菌水沖洗干凈，用70%酒精消毒45s，0. 升汞水溶液浸泡IOmin滅菌，無(wú)菌水沖洗5_6次后，備用；(三)外植體無(wú)菌苗的培養(yǎng)將滅菌后小芽在超凈臺(tái)上剝?nèi)?_5mm的莖尖作為外植體，接種到無(wú)菌苗培養(yǎng)基中，在25士2°C、光強(qiáng)1500Lx、光照Uh/d組培條件下培養(yǎng)6_7天至莖尖長(zhǎng)到1. 0-2. Ocm時(shí)成外植體無(wú)菌苗；(四)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將外植體無(wú)菌苗接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在同上 (25士2°C、光強(qiáng)1500Lx、光照12h/d)組培條件下培養(yǎng)22-25天至形成初代不定芽并長(zhǎng)到 1. 0-3. Ocm ；(五)不定芽增殖培養(yǎng)將上述的初代不定芽苗接種到增殖培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)10-15天至形成繼代不定芽苗并長(zhǎng)到3. 0-6. Ocm ；以后每隔10-15天可重復(fù)增殖培養(yǎng)一批，直至滿足生產(chǎn)對(duì)種苗數(shù)量的需求；(六)小苗生根培養(yǎng)將上述的繼代不定芽苗接種到生根培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)12-15天，小苗長(zhǎng)至4-8cm且至少具有3條彡長(zhǎng)2cm的根時(shí)，即成可以出培養(yǎng)室的組培瓶苗；(七)組培苗的煉苗馴化與移栽將組培苗瓶移至普通大棚溫室中；先擰松組培瓶蓋培養(yǎng)2天，再開蓋培養(yǎng)5天后，出瓶、洗凈根部培養(yǎng)基移栽入泥炭珍珠巖=4 1的基質(zhì)中，按常規(guī)肥水管理至長(zhǎng)成成品苗，出圃；依照上述方法，只需50-62天即可獲得組培苗；該組培苗的移栽成活率可達(dá)到 95%以上。實(shí)施例2 本例中，步驟(一)培養(yǎng)基的配制，包括各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量為2)無(wú)菌苗培養(yǎng)基為1/2MS+白糖25g/L+瓊脂5g/L，pH5. 7 ；3)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. lmg/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂 5g/L， ρΗ5· 7 ；4)增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. lmg/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂 7g/L，pH5. 7 ；5)生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1. 0mg/L+ 白糖 25g/L+ 瓊脂 6g/L，ρΗ5· 7 ；其余步驟、工藝同于實(shí)施例1。實(shí)施例3 本例中，步驟(一)培養(yǎng)基的配制，包括各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量為2)無(wú)菌苗培養(yǎng)基1/2MS+ 白糖 30g/L+ 瓊脂 6g/L，pH5. 8 ；3)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L+ 白糖 25g/L+ 瓊脂 7g/L， ρΗ5· 8 ；4) ±曾殖培養(yǎng)基:MS+6-BAl. 0mg/L+NAA0. 3mg/L+ 白糖 20g/L+ 瓊脂 8g/L，ρΗ5· 8 ；
5)生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA1. 5mg/L+ 白糖 20g/L+ 瓊脂 5g/L，ρΗ5· 8 ；其余步驟、工藝同于實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1.姜荷花的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行(一)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量為1)基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基；2)無(wú)菌苗培養(yǎng)基:1/2MS+白糖 20-30g/L，瓊脂 5_8g/L，ρΗ5· 6-5. 8 ；3)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+6-BAl.0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L+ 白糖 20_30g/L，瓊脂 5-8g/L, pH5. 6-5. 8 ；4)增殖培養(yǎng)基:MS+6-BAl.0-3. Omg/L+NAA 0. 1-0. 3mg/L+ 白糖 20_30g/L，瓊脂 5_8g/L， ρΗ5· 6-5. 8 ；5)生根培養(yǎng)基:1/2MS+NAA0.5-1. 5mg/L+ 白糖 20_30g/L，瓊脂 5_8g/L，ρΗ5· 6-5. 8 ；(二 )塊根小芽培養(yǎng)與滅菌選擇無(wú)病斑、無(wú)蟲瘦、健壯飽滿的姜荷花塊根放入生化培養(yǎng)箱中，在^5-28°C、暗培養(yǎng)下催芽至長(zhǎng)成0. 5-2. Ocm的小芽；取小芽經(jīng)流水、無(wú)菌水沖洗干凈，用70%酒精消毒45s，0. 升汞水溶液浸泡IOmin滅菌，無(wú)菌水沖洗5_6次后，備用；(三)外植體無(wú)菌苗的培養(yǎng)將滅菌后小芽在超凈臺(tái)上剝?nèi)?-5mm的莖尖作為外植體， 接種到無(wú)菌苗培養(yǎng)基中，在25士2°C、光強(qiáng)1500Lx、光照Uh/d組培條件下培養(yǎng)6_7天至莖尖長(zhǎng)到1. 0-2. Ocm時(shí)成外植體無(wú)菌苗；(四)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將外植體無(wú)菌苗接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)22-25天至形成初代不定芽并長(zhǎng)到1. 0-3. Ocm ；(五)不定芽增殖培養(yǎng)將上述的初代不定芽苗接種到增殖培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)10-15天至形成繼代不定芽苗并長(zhǎng)到3. 0-6. Ocm ；(六)小苗生根培養(yǎng)將上述的繼代不定芽苗接種到生根培養(yǎng)基中，在同上組培條件下培養(yǎng)12-15天，小苗長(zhǎng)至4-8cm且至少具有3條彡長(zhǎng)2cm的根時(shí)，即成可以出培養(yǎng)室的組培瓶苗；(七)組培苗的煉苗馴化與移栽將組培苗瓶移至普通大棚溫室中；先擰松組培瓶蓋培養(yǎng)2天，再開蓋培養(yǎng)5天后，出瓶、洗凈根部培養(yǎng)基移栽入泥炭珍珠巖=4 1的基質(zhì)中，按常規(guī)肥水管理至長(zhǎng)成成品苗，出圃。
全文摘要
本發(fā)明公開了姜荷花的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。方法包括(一)培養(yǎng)基的配制；(二)塊根小芽培養(yǎng)與滅菌；(三)外植體無(wú)菌苗的培養(yǎng)；(四)不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；(五)不定芽增殖培養(yǎng)；(六)小苗生根培養(yǎng)；(七)組培苗的煉苗馴化與移栽等步驟。具有增殖培養(yǎng)期短(14-20天)，繁殖系數(shù)高(由2-4倍提高到5-8倍)，不定芽一致性好，組培繁育周期短(50-60天)，種苗質(zhì)量好，移栽成活率可高達(dá)95％以上，是一種高效、快速提供優(yōu)質(zhì)姜荷花種苗的方法。本方法可在園林綠化與組培苗企業(yè)推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102257963SQ201110177559
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2011年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月28日
發(fā)明者劉建新, 劉慧春, 周江華, 朱開元, 鄒清成 申請(qǐng)人:浙江省蕭山棉麻研究所