專利名稱：一種番茄培養(yǎng)基和番茄栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)技術(shù)，特別涉及一種番茄培養(yǎng)基和番茄栽培方法。
背景技術(shù)：
Micro-Tom是一個(gè)番茄矮化品種，屬有限生長(zhǎng)型，極矮生，植株高僅10 20cm， 由 FloridaBasket 禾口 Ohio 4013—3 雜交而成(1、Scott Jff, Harbaugh BK. Micro-Tom-a miniature dwarftomato. Florida Agric Exp Station Circ,1989, 370 :1-6)。Micro-Tom 番茄的根系發(fā)達(dá)，莖蔓非常緊湊，葉色深綠，果實(shí)味道甜美，是一種深受大眾歡迎的盆栽觀果植物。近年來，隨著人們生活水平的提高，作為觀賞價(jià)值高、管理簡(jiǎn)易、不受季節(jié)影響、攜帶方便的新型室內(nèi)觀賞花卉，Micro-Tom番茄備受人們的歡迎。通過組織培養(yǎng)的方法，誘導(dǎo) Micro-Tom番茄在試管內(nèi)開花結(jié)果，這種研究具有潛在的實(shí)際應(yīng)用和廣闊的市場(chǎng)前景。果實(shí)是植物有性生殖最后階段形成的器官，也是植物個(gè)體發(fā)育最后階段所分化的器官。通過組織培養(yǎng)的方法誘導(dǎo)Micro-Tom番茄在試管內(nèi)開花結(jié)果，在探討器官分化機(jī)理以及全能性的表達(dá)方面也具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種番茄開花結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)基。本發(fā)明的第二目的在于提供一種番茄芽增殖培養(yǎng)基。本發(fā)明的第三目的在于提供一種番茄栽培方法。所述番茄開花結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為6-芐基嘌呤0. 1 0. 3mg/L或玉米素 0. 1 0. 3mg/L, 3-吲哚乙酸 0. 02 0. 05mg/L,蔗糖 20 40g/L 和瓊脂粉 6. 0 8. 0g/L, 其余為MS培養(yǎng)基，pH值為5. 5 5. 9。所述番茄芽增殖培養(yǎng)基的配方為玉米素0. 1 0. 3mg/L,蔗糖20 40g/L和瓊脂粉6. 0 8. 0g/L,其余為MS培養(yǎng)基，pH值為5. 5 5. 9。所述一種番茄栽培方法包括以下步驟1)番茄種子的無菌播種將經(jīng)過處理的番茄種子播種到番茄培養(yǎng)基中，于番茄生長(zhǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得番茄種子無菌苗；2)番茄愈傷組織的誘導(dǎo)和不定芽的形成將番茄種子無菌苗的子葉剪接成小葉片，接種于誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽形成的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得番茄不定芽；3)番茄試管內(nèi)開花結(jié)果將番茄不定芽接種到開花結(jié)果的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，番茄植株長(zhǎng)出花苞并結(jié)果。在步驟1)中，所述處理的具體方法為將番茄種子用清水浸泡10 60min后催芽，再用含體積百分比為0. 0. 2%的洗潔精的水浸泡1 池，浸泡后的番茄種子用水沖洗30 60min，移入超凈臺(tái)，依次用乙醇和HgCl2溶液消毒，然后用無菌水沖洗3 6次； 所述番茄培養(yǎng)基的配方可為蔗糖20 40g/L，瓊脂粉6. 0 8. 0g/L,余為1/2MS培養(yǎng)基 (即所含大量元素減半后的MS培養(yǎng)基)，調(diào)節(jié)pH值為5. 5 5. 9 ；所述番茄生長(zhǎng)條件可為溫度為25°C 士2°C，光照強(qiáng)度為1500 ;35001ux，光周期為16h光照/8h暗。在步驟2)中，所述小葉片的長(zhǎng)度最好為0. 5 1. Ocm0所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方可為 6-芐基嘌呤1. 0 2. Omg/L或玉米素1. O 2. Omg/L, 3-吲哚乙酸0. 2 0. 5mg/L,蔗糖 20 40g/L，瓊脂粉6. O 8. Og/L,其余為MS培養(yǎng)基，調(diào)pH值為5. 5 5. 9 ；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為溫度25°C 士2°C，光照強(qiáng)度1500 20001uX，每天IMi光照/ 暗的光周期下培養(yǎng)，每15d更換一次新鮮誘導(dǎo)培養(yǎng)基。在步驟幻中，所述番茄不定芽可預(yù)先接種到芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得番茄幼苗后再接種到開花結(jié)果的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；所述培養(yǎng)的條件為25°C 士2°C、光照強(qiáng)度 1500 32001uX，每天IMi光照/8h暗的光周期下培養(yǎng)，每30d更換一次新鮮培養(yǎng)基。本發(fā)明通過番茄種子無菌播種，切取子葉和胚軸為外植體，誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽形成，進(jìn)行芽增殖培養(yǎng)，并在試管內(nèi)開花結(jié)果。本發(fā)明中的番茄組織培養(yǎng)及試管內(nèi)開花結(jié)果的培育周期短，不受季節(jié)影響，番茄開花誘導(dǎo)率可達(dá)45% 60%，番茄結(jié)果誘導(dǎo)率可達(dá) 30 % 45 %。本發(fā)明所用的MS培養(yǎng)基為國際通用的植物組織培養(yǎng)基，其成分和配制方法可參考文獻(xiàn)(2、H. S.喬拉.植物生物技術(shù)導(dǎo)論(影印版)[M].北京科學(xué)出版社，2004 20)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1一、番茄種子的無菌播種1)將番茄種子用清水浸泡10min，5(TC溫水中催芽30min，然后將番茄種子用含 0. 1% (ν/ν)洗潔精的水中浸泡Ih。2)浸泡后的番茄種子用流水沖洗30min，移入超凈臺(tái)，75%乙醇消毒0.5min， 0. 1% HgCl2溶液消毒5min，無菌水沖洗3次后將種子播種到1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)。3)在25°C 士2°C、光照強(qiáng)度15001UX，每天16h光/8h暗的光周期下培養(yǎng)。所用培養(yǎng)基含蔗糖20g/L，瓊脂粉6g/L，pH 5. 5 5. 9 ；培養(yǎng)5d后種子陸續(xù)發(fā)芽， 培養(yǎng)IOd后，種子發(fā)芽率95 %，種子消毒成功率100 %。二、番茄愈傷組織的誘導(dǎo)和不定芽的形成將番茄種子無菌播種IOd后，在超凈臺(tái)上將充分展開的番茄無菌苗的子葉剪成 0. 5cm長(zhǎng)、下胚軸0. 5cm長(zhǎng)的小段，接種于設(shè)計(jì)好的誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽形成的培養(yǎng)基中，25°C 士2°C、光照強(qiáng)度15001UX，每天IMi光/8h暗的光周期下培養(yǎng)，每15d更換一次新
鮮培養(yǎng)基。所用培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤1. Omg/L或玉米素1. Omg/L, 3_吲哚乙酸0. 2mg/L, 蔗糖20g/L和瓊脂粉6. 0g/L,其余為MS培養(yǎng)基，pH 5. 5 5. 9。培養(yǎng)3d后番茄葉片出現(xiàn)皺縮，5d左右番茄子葉明顯加厚，切口卷曲，葉片切口上靠近主脈部分出現(xiàn)深綠色斑塊，胚軸變粗，兩端切口膨大、外翻，有大量愈傷組織形成，7d左右深綠色斑塊處開始出現(xiàn)圓形突起，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，突起逐漸增多。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明子葉的出愈率為97% 100%，芽分化率85. 6% 98. 5% ；胚軸的出愈率為90% 95%，芽分化率為43. 5% 57%。三、番茄芽增殖培養(yǎng)將步驟二誘導(dǎo)獲得的番茄不定芽，單芽切下接種到芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，250C 士2°C、光照強(qiáng)度1500 20001uX，每天IMi光/8h暗的光周期下培養(yǎng)，每20d更換一
次新鮮培養(yǎng)基。所用培養(yǎng)基含有玉米素0. lmg/L，蔗糖20g/L和瓊脂粉6.0g/L，其余為MS培養(yǎng)基，pH5. 5 5. 9 ；培養(yǎng)20d后芽增殖倍數(shù)為5 8倍，繼續(xù)5代后仍然保持增殖率。四、番茄試管苗的試管內(nèi)開花結(jié)果將苗高2 3cm，2 4片番茄葉，切下并接種到開花結(jié)果的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中， 25 V 士2°C、光照強(qiáng)度1500 32001uX，每天16h光/8h暗的光周期下培養(yǎng)，每30d更換一
次新鮮培養(yǎng)基，所用培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤0. 1 0. 3mg/L或玉米素0. 1 0. 3mg/L，3_吲哚乙酸0. 02 0. 05mg/L,蔗糖20g/L和瓊脂粉6. Og/L,其余為MS培養(yǎng)基，pH 5. 5 5. 9 ；培養(yǎng)20d后，番茄植株出現(xiàn)第一個(gè)花苞，35d后開第一朵花，45d后結(jié)第一個(gè)果，最后統(tǒng)計(jì)開花率為45% 60%，結(jié)果率為30% 45%，結(jié)果株上結(jié)1 2果/株，結(jié)果30d后果實(shí)陸續(xù)轉(zhuǎn)為紅色。實(shí)施例2一、番茄種子的無菌播種1)將番茄種子用清水浸泡60min，5(TC溫水中催芽45min，然后將番茄種子用含 0.2% (ν/ν)洗潔精的水中浸泡池。2)浸泡后的番茄種子用流水沖洗60min，移入超凈臺(tái)，75%乙醇消毒5min，0. 1% HgCl2溶液消毒20min，無菌水沖洗6次后將種子播種到1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)。3)在25°C 士2°C、光照強(qiáng)度35001ux，每天16h光/8h暗的光周期下培養(yǎng)。所用培養(yǎng)基含蔗糖40g/L，瓊脂粉8. Og/L, pH 5. 5 5. 9 ；培養(yǎng)5d后種子陸續(xù)發(fā)芽，培養(yǎng)IOd后，種子發(fā)芽率96 %，種子消毒成功率100 %。二、番茄愈傷組織的誘導(dǎo)和不定芽的形成將番茄種子無菌播種IOd后，在超凈臺(tái)上將充分展開的番茄無菌苗的子葉剪成 0. 5 1. Ocm長(zhǎng)、下胚軸0. 5 1. Ocm長(zhǎng)的小段，接種于設(shè)計(jì)好的誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽形成的培養(yǎng)基中，250C 士2°C、光照強(qiáng)度1500 20001UX，每天IMi光/ 暗的光周期下培養(yǎng)，
每15d更換一次新鮮培養(yǎng)基。所用培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤2. Omg/L或玉米素2. Omg/L, 3_吲哚乙酸0. 5mg/L, 蔗糖40g/L和瓊脂粉8. Og/L,其余為MS培養(yǎng)基，pH 5. 5 5. 9。 培養(yǎng)3d后番茄葉片出現(xiàn)皺縮，5d左右番茄子葉明顯加厚，切口卷曲，葉片切口上靠近主脈部分出現(xiàn)深綠色斑塊，胚軸變粗，兩端切口膨大、外翻，有大量愈傷組織形成，7d左右深綠色斑塊處開始出現(xiàn)圓形突起，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，突起逐漸增多。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明子葉的出愈率為96% 100%，芽分化率86. 6% 98. 5% ；胚軸的出愈率為90% 96%，芽分化率為43. 5% 58%。三、番茄芽增殖培養(yǎng)將步驟二誘導(dǎo)獲得的番茄不定芽，單芽切下接種到芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 250C 士2°C、光照強(qiáng)度20001UX，每天1 光/ 暗的光周期下培養(yǎng)，每20d更換一次新鮮培養(yǎng)基。所用培養(yǎng)基含有玉米素0. 3mg/L,蔗糖40g/L和瓊脂粉8. 0g/L,其余為MS培養(yǎng)基，pH 5. 5 5. 9 ；培養(yǎng)20d后芽增殖倍數(shù)為5 8倍，繼續(xù)5代后仍然保持增殖率。四、番茄試管苗的試管內(nèi)開花結(jié)果將苗高2 3cm，2 4片番茄葉，切下并接種到開花結(jié)果的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中， 250C 士2°C、光照強(qiáng)度32001UX，每天1 光/ 暗的光周期下培養(yǎng)，每30d更換一次新鮮培養(yǎng)基。所用培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤0. 3mg/L或玉米素0. :3mg/L，3_吲哚乙酸0. 05mg/L, 蔗糖40g/L和瓊脂粉8. Og/L,其余為MS培養(yǎng)基，pH 5. 5 5. 9 ；培養(yǎng)20d后，番茄植株出現(xiàn)第一個(gè)花苞，36d后開第一朵花，47d后結(jié)第一個(gè)果，最后統(tǒng)計(jì)開花率為48% 60%，結(jié)果率為33% 45%，結(jié)果株上結(jié)1 2果/株，結(jié)果30d后果實(shí)陸續(xù)轉(zhuǎn)為紅色。
權(quán)利要求
1.番茄開花結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于其配方為6-芐基嘌呤0.1 0. 3mg/L或玉米素0. 1 0. 3mg/L, 3-吲哚乙酸0. 02 0. 05mg/L,蔗糖20 40g/L和瓊脂粉6. 0 8. Og/ L,其余為MS培養(yǎng)基，pH值為5. 5 5. 9。
2.番茄芽增殖培養(yǎng)基，其特征在于其配方為玉米素0.1 0. :3mg/L，蔗糖20 40g/L 和瓊脂粉6. 0 8. Og/L，其余為MS培養(yǎng)基，pH值為5. 5 5. 9。
3.一種番茄栽培方法，其特征在于包括以下步驟1)番茄種子的無菌播種將經(jīng)過處理的番茄種子播種到番茄培養(yǎng)基中，于番茄生長(zhǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得番茄種子無菌苗；2)番茄愈傷組織的誘導(dǎo)和不定芽的形成將番茄種子無菌苗的子葉剪接成小葉片，接種于誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽形成的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得番茄不定芽；3)番茄試管內(nèi)開花結(jié)果將番茄不定芽接種到如權(quán)利要求1所述番茄開花結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，番茄植株長(zhǎng)出花苞并結(jié)果。
4.如權(quán)利要求3所述的一種番茄栽培方法，其特征在于在步驟1)中，所述處理的具體方法為將番茄種子用清水浸泡10 60min后催芽，再用含體積百分比為0. 0.2%的洗潔精的水浸泡1 池，浸泡后的番茄種子用水沖洗30 60min，移入超凈臺(tái)，依次用乙醇和HgC12溶液消毒，然后用無菌水沖洗3 6次。
5.如權(quán)利要求3所述的一種番茄栽培方法，其特征在于在步驟1)中，所述番茄培養(yǎng)基的配方為蔗糖20 40g/L，瓊脂粉6. 0 8. Og/L,余為1/2MS培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值為5. 5 5 · 9 。
6.如權(quán)利要求3所述的一種番茄栽培方法，其特征在于在步驟1)中，所述番茄生長(zhǎng)條件為溫度為25°C 士2°C，光照強(qiáng)度為1500 35001UX，光周期為16h光照/8h暗。
7.如權(quán)利要求3所述的一種番茄栽培方法，其特征在于在步驟2)中，所述小葉片的長(zhǎng)度為0. 5 1. Ocm ；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為6-芐基嘌呤1. 0 2. Omg/L或玉米素1. 0 2. Omg/L, 3-吲哚乙酸0. 2 0. 5mg/L,蔗糖20 40g/L,瓊脂粉6. 0 8. Og/L,其余為MS 培養(yǎng)基，調(diào)PH值為5. 5 5. 9。
8.如權(quán)利要求3所述的一種番茄栽培方法，其特征在于在步驟幻中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為溫度25°C 士2°C，光照強(qiáng)度1500 20001uX，每天IMi光照/ 暗的光周期下培養(yǎng)， 每15d更換一次新鮮誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
9.如權(quán)利要求3所述的一種番茄栽培方法，其特征在于在步驟幻中，所述將番茄不定芽接種到如權(quán)利要求1所述番茄開花結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)之前，番茄不定芽預(yù)先接種到如權(quán)利要求2所述芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
10.如權(quán)利要求3所述的一種番茄栽培方法，其特征在于在步驟；3)中，所述培養(yǎng)的條件為25°C 士2°C、光照強(qiáng)度1500 32001uX，每天IMi光照/ 暗的光周期下培養(yǎng)，每30d 更換一次新鮮培養(yǎng)基。
全文摘要
一種番茄培養(yǎng)基和番茄栽培方法，涉及植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。提供番茄開花結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)基和番茄芽增殖培養(yǎng)基；將經(jīng)過處理的番茄種子播種到番茄培養(yǎng)基中，于番茄生長(zhǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得番茄種子無菌苗；將番茄種子無菌苗的子葉剪接成小葉片，接種于誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽形成的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得番茄不定芽；將番茄不定芽接種到開花結(jié)果的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，番茄植株長(zhǎng)出花苞并結(jié)果。通過番茄種子無菌播種，切取子葉和胚軸為外植體，誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽形成，進(jìn)行芽增殖培養(yǎng)，并在試管內(nèi)開花結(jié)果。番茄組織培養(yǎng)及試管內(nèi)開花結(jié)果的培育周期短，不受季節(jié)影響，番茄開花誘導(dǎo)率達(dá)45％～60％，番茄結(jié)果誘導(dǎo)率達(dá)30％～45％。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102187811SQ20111006918
公開日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者張文珠, 林德欽, 林炳英, 童慶宣, 鄭國華 申請(qǐng)人:廈門華僑亞熱帶植物引種園