專利名稱：白蟻鏈霉菌(Streptomyces termitum)ACT-2菌株及其培養(yǎng)物和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其涉及白蟻鏈霉菌QStr印tomyces termitum) ACT-2菌株及其培養(yǎng)物和用途。
背景技術(shù)：
放線菌廣泛存在于土壤、空氣和水中，絕大部分放線菌具有產(chǎn)抗生素的能力。鏈霉菌所產(chǎn)生抗生素的占據(jù)了放線菌類產(chǎn)生抗生素類數(shù)量的80%。鏈霉菌在抗生素的工業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著非常重要的作用。某些鏈霉菌所產(chǎn)生的抗生素類物質(zhì)可以對(duì)有些植物病原菌有特異性的拮抗作用， 可抑制病原微生物的生長和繁殖。對(duì)由該種病原菌引起的植物病害有一定程度的防治效^ ο水稻白葉枯病是由水稻黃單胞桿菌(Z oryzae)引起的，對(duì)水稻生產(chǎn)具有嚴(yán)重的危害性。篩選對(duì)某種水稻白葉枯病菌具有一定拮抗作用的鏈霉菌，并使用到植物病害的防治中，具有較好的應(yīng)用前景。目前，已見報(bào)道的對(duì)白葉枯病菌具有拮抗作用的微生物主要是細(xì)菌類，如枯草芽孢桿菌和腸桿菌等，而且抑菌效價(jià)較低，難以滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的生物防治要求，而具有拮抗白葉枯病菌活性的放線菌類鮮見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了拮抗水稻白葉枯病，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供白蟻鏈霉菌QStr印tomyces term! turn ) ACT-2菌株；本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供上述的白蟻鏈霉菌(^仕印tomyces termitum) KC1-2菌株的培養(yǎng)物；本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種上述的培養(yǎng)物的制備方法；本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種上述的培養(yǎng)物的用途；本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種具有對(duì)白葉枯病菌具有高拮抗活性的生物農(nóng)藥。為了實(shí)現(xiàn)上述第一個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案
白蟻鏈霉菌termitum) ACT-2菌株，該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，其保藏編號(hào)為 CCTCCC NO: M 2011008，保藏日期是 2011 年 1 月 7 日。為了實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案
一種對(duì)白葉枯病菌具有高拮抗活性的發(fā)酵液，該發(fā)酵液由上述的白蟻鏈霉菌 {Streptomyces termitum) ACT-2 菌株發(fā)酵得到。為了實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案 一種發(fā)酵液的制備方法，其特征在于該方法包括以下的步驟
(一)上述的白蟻鏈霉菌(份termitum) ACT-2菌株經(jīng)高氏1號(hào)固體培養(yǎng)基活化后，用無菌水配成IXlO6個(gè)/ml的孢子懸浮液；(二)取1 ml接入高氏1號(hào)培養(yǎng)液，28 ！活化培養(yǎng)M h ；
(三》50 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號(hào)培養(yǎng)液，取培養(yǎng)M h的種子培養(yǎng)液，按0. 2% 的接種量接種，28 180 r/min，搖瓶培養(yǎng)48 h，得到對(duì)水稻白葉枯病菌具有高拮抗活性的發(fā)酵液。為了實(shí)現(xiàn)上述第四個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案
上述的白蟻鏈霉菌istr印tomyces termitum) ACT-2菌株或者該菌株的發(fā)酵液用于制備拮抗水稻白葉枯病菌的藥物中的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述第五個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案
一種對(duì)白葉枯病菌具有高拮抗活性的生物農(nóng)藥，該生物農(nóng)藥至少包括上述的白蟻鏈霉菌Uti^ptomyces termituni) ACT-2菌株和該菌株的發(fā)酵液中的一種。本發(fā)明由于采用了上述的技術(shù)方案，Streptomyces termitum) ACT-2菌株及其發(fā)酵產(chǎn)物可以作為生物農(nóng)藥，用于水稻白葉枯病菌等的防治。


圖1為蟻鏈霉菌Utreptomyces terniituni)kCl~2菌株的培養(yǎng)特征和形態(tài)特征；上左菌落正面；上右抑菌圈；下左基內(nèi)菌絲和氣生菌絲；下右氣生菌絲和孢子絲。生物材料保藏說明
白蟻鏈霉菌termituni) ACT-2菌株，該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，其保藏編號(hào)為 CCTCCC NO: M 2011008，保藏日期是 2011 年 1 月 7 日。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
從水稻田土壤中分離篩選得到一株拮抗水稻白葉枯病菌白蟻鏈霉菌 termitum ) ACT-2 菌株。(一)培養(yǎng)基
高氏1號(hào)液體培養(yǎng)基可溶性淀粉20 g，KNO3 1 g，K2HPO4 0. 5 g，MgSO4 0. 5 g，NaCl 0.5 g，F(xiàn)eSO4 0.01 g，蒸餾水 1000 ml，pH 值 7. 2-7. 5。牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基牛肉膏3 g，蛋白胨10 g,NaCl 5 g，瓊脂20 g，水1000 ml, pH 值 7· 0-7. 2。(二)方法
采用梯度稀釋分離法。取ι g 土壤，加入9 ml蒸餾水，進(jìn)行梯度稀釋(KT1-KT4),選擇合適的濃度(10_2)100 μ 1涂布高氏1號(hào)培養(yǎng)基平板，28 °C培養(yǎng)M h，出現(xiàn)圓形白色干燥菌落，可初步確定該菌株為放線菌。挑取單菌落，進(jìn)一步分離、純化后，對(duì)所分離純化的菌株進(jìn)行拮抗白葉枯病菌的能力測定。選取對(duì)白葉枯病菌具有拮抗能力的放線菌菌株編號(hào)，置 4 °C冰箱中保存，備用。用高氏1號(hào)斜面培養(yǎng)基進(jìn)行菌種活化傳代，菌株每4 w轉(zhuǎn)接一次; 菌種使用之前需先活化。對(duì)選出的菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化和16S rDNA序列鑒定。該白蟻鏈霉菌(Streptomyces termi turn )菌落表面干燥、粗糙，邊緣整齊，為白色不透明；氣生菌絲色澤較深，直、柔曲，分枝較多，無橫隔，粗壯，不斷裂，菌絲直徑約為2. 53/3頁
μm0基內(nèi)菌絲較氣生菌絲色澤淺，呈網(wǎng)狀交織，菌絲短，分枝多，無橫隔，易斷裂，菌絲直徑約為2.0 μπι。孢子絲多呈直線，存在分叉，極少部分呈彎曲狀。孢子呈橢圓形、長圓形，表面光潔(圖1)。16S rDNA測序結(jié)果表明，與白蟻鏈霉菌QStr印tomyces termituni)菌株的同源性達(dá)99%，該菌株的16S rDNA序列在GeneBank的登錄號(hào)為HQ680451。在高氏1號(hào)培養(yǎng)基上，28 °C培養(yǎng)10 d條件下，經(jīng)15代連續(xù)傳代培養(yǎng)，其培養(yǎng)特征、 形態(tài)特征和對(duì)白葉枯病菌的拮抗能力基本穩(wěn)定。實(shí)施例2
對(duì)水稻白葉枯病菌具有拮抗作用的白蟻鏈霉菌QStr^tomyces termitum) ACT-2菌株發(fā)酵液的制備方法。(一)菌株:ACT_2菌株。(二)方法
菌種經(jīng)高氏1號(hào)固體培養(yǎng)基活化后，用無菌水配成1 X IO6個(gè)/ml的孢子懸浮液，取1 ml 接入高氏1號(hào)培養(yǎng)液，28 °C活化培養(yǎng)對(duì)h;250 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號(hào)培養(yǎng)液， 按洲接種量，28 150 r/min，搖瓶培養(yǎng)48 h，獲取對(duì)白葉枯病菌具有拮抗活性的發(fā)酵液， 以牛津杯法測定抑菌效果，抑菌圈直徑為21. 73 mm。經(jīng)發(fā)酵條件初步優(yōu)化，當(dāng)250 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號(hào)培養(yǎng)液，取培養(yǎng)M h的種子培養(yǎng)液，按0. 2%的接種量接種，28 V，180 r/min,搖瓶培養(yǎng)48 h，可以得到對(duì)水稻白葉枯病菌具有高拮抗活性的發(fā)酵液，以牛津杯法測定抑菌效價(jià)，獲得最大抑菌圈直徑為 26. 20 mm。將白葉枯病菌均勻涂布到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，將在高氏1號(hào)固體培養(yǎng)基上活化后的ACT-2菌株，通過打孔法取直徑為5 mm的小塊菌餅，移接到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上。28 °C培養(yǎng)72 h。經(jīng)檢測，獲得最大抑菌圈直徑為38.00 mm。
權(quán)利要求
1.白蟻鏈霉菌菌株，其特征在于該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCCC NO: M 2011008，保藏日期是2011年1月7日。
2.一種對(duì)白葉枯病菌具有高拮抗活性的發(fā)酵液，其特征在于該發(fā)酵液由權(quán)利要求1 所述的白蟻鏈霉菌i^tr^tomyces termitum) ACT-2菌株發(fā)酵得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種發(fā)酵液的制備方法，其特征在于該方法包括以下的步驟權(quán)利要求1所述的白蟻鏈霉菌(份termitum) ACT-2菌株經(jīng)高氏1號(hào)固體培養(yǎng)基活化后，用無菌水配成1 X IO6個(gè)/ml的孢子懸浮液； 取1 ml接入高氏1號(hào)培養(yǎng)液，28 ！活化培養(yǎng)M h ；250 ml三角瓶中裝入50 ml高氏1號(hào)培養(yǎng)液，取培養(yǎng)M h的種子培養(yǎng)液，按0.洲的接種量接種，28 180 r/min，搖瓶培養(yǎng)48 h，得到對(duì)水稻白葉枯病菌具有高拮抗活性的發(fā)酵液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白蟻鏈霉菌termitum)KCX-2菌株或者該菌株的發(fā)酵液用于制備拮抗水稻白葉枯病菌的藥物中的應(yīng)用。
5.一種具有對(duì)白葉枯病菌具有高拮抗活性的生物農(nóng)藥，其特征在于該生物農(nóng)藥至少包括權(quán)利要求1所述的白蟻鏈霉菌iStr印tomyces termitum) ACT-2菌株和該菌株的發(fā)酵液中的一種。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域，尤其涉及白蟻鏈霉菌(Streptomycestermitum)ACT-2菌株及其培養(yǎng)物和用途。白蟻鏈霉菌(Streptomycestermitum)ACT-2菌株，該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，其保藏編號(hào)為CCTCCCNO:M2011008，保藏日期是2010年1月7日。從水稻田土壤中分離篩選得到具有拮抗白葉枯病菌作用的白蟻鏈霉菌(Streptomycestermitum)ACT-2菌株及其發(fā)酵產(chǎn)物可以作為生物農(nóng)藥，用于水稻白葉枯病菌等的防治。
文檔編號(hào)A01P1/00GK102363753SQ20111005316
公開日2012年2月29日 申請(qǐng)日期2011年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月7日
發(fā)明者宋迤明, 董夏夢(mèng), 蔣冬花 申請(qǐng)人:浙江師范大學(xué)