專利名稱：Rdr701蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種RNA依賴的RNA聚合酶RDR701蛋白以及其在培育水稻溫度敏感型不育中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
RDR是RNA依賴的RNA聚合酶，最早是在病毒中發(fā)現(xiàn)的，其作為病毒的RNA復(fù)制酶來(lái)復(fù)制病毒的基因組(Wang and Metzlaff，2005)。真核生物中，首次被證明具有RNA依賴的RNA合成活性的RDR為番茄中的RDR1，接著粗糙脈胞菌(Neurospora crassa)的QDE-I 蛋白也被發(fā)現(xiàn)具有RNA依賴的RNA聚合酶的活性。隨即在線蟲，擬南芥以及酵母中發(fā)現(xiàn)存在RNA依賴的RNA聚合酶。采用生化手段純化的番茄RDRl以及擬南芥的RDR6在體外能夠利用長(zhǎng)的單鏈RNA為模版合成其序列互補(bǔ)鏈，而且這一活性在有無(wú)引物的條件下都能夠進(jìn)行，揭示了它們的生化功能。在生物體內(nèi)，并不是所有的單鏈的RNA都可以作為RDR模版， 目前“aberrant RNA”假說(shuō)比較合理的詮釋了真核生物的RDR靶向位點(diǎn)的特征。該假說(shuō)認(rèn)為真核生物體內(nèi)或體外的一些異常RNA(aberrant RNA)，例如3’端缺少多聚腺苷酸的尾巴 (polA-)或者5’端缺少帽子(uncapped)結(jié)構(gòu)，可以作為RDR的靶向位點(diǎn)，從而轉(zhuǎn)變成雙鏈。在真核生物中，RDR合成的雙鏈RNA被Dicer加工成各種長(zhǎng)度，各種類型的SiRNA 介導(dǎo)了各種各樣的沉默過(guò)程。通常依賴于RDR的作用介導(dǎo)產(chǎn)生次級(jí)或多級(jí)的小分子RNA使得RNA沉默的信號(hào)得以擴(kuò)增，是廣泛被采用的方式。這樣，即使存在很少量的初級(jí)沉默的小 RNA，也能夠介導(dǎo)和維持持續(xù)的沉默。這種現(xiàn)象在植物和線蟲中非常普遍。外源或內(nèi)源的 dsRNA前體在Dicer的加工下形成初級(jí)的小RNA，裝配到相應(yīng)的AGO蛋白中，對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行切割后，在RDR的作用下形成次級(jí)小分子RNA。在線蟲中，初級(jí)的小分子RNA首先同特異的AG0-RDE-1結(jié)合后，介導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄本的切割，從而將RDR招募到切割位點(diǎn)。RDR 以切斷的轉(zhuǎn)錄本為模版，直接合成次級(jí)的小分子RNA。而對(duì)于RDR直接合成時(shí)如何確定每個(gè)單元的長(zhǎng)度，目前還不清楚。由于該小分子RNA為直接合成，并不是Dicer的產(chǎn)物，因此線蟲中的次級(jí)小分子RNA為雙磷或三磷的5’末端，而且這種次級(jí)小分子RNA全部起源于初級(jí)的小RNA靶mRNA的反義鏈。與線蟲不同的是，植物的次級(jí)小分子RNA是DCL的產(chǎn)物，因此它們的5’末端是單磷的。植物的RDR能夠利用初級(jí)的小分子RNA的靶mRNA被切斷的產(chǎn)物為模版，合成一條長(zhǎng)的dsRNA，從而被DCL加工形成次級(jí)小分子RNA。植物的RDR蛋白可以分為四個(gè)家族，即RDR1、RDR2、RDR3以及RDR6。目前在擬南芥中的研究發(fā)現(xiàn)，它們單獨(dú)或以部分功能冗余的方式參與到了各種小分子RNA的合成途徑。其中RDRl和RDR6共同參與了外源病毒或轉(zhuǎn)基因過(guò)程中的小分子RNA的合成，從而在抵抗病毒的侵入方面發(fā)揮作用；RDR2負(fù)責(zé)一些與重復(fù)序列及轉(zhuǎn)座子的異染色質(zhì)化相關(guān)的 siRNA-hcsiRNA的生成，從而介導(dǎo)它們的沉默；另外RDR6還參與了許多內(nèi)源的siRNA的生成途徑從而調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，例如tasiRNA和natsiRNA。目前，關(guān)于RDR蛋白家族的功能研究主要還停留在理論研究階段，不清楚其關(guān)鍵的功能位點(diǎn)，也難以研究該位點(diǎn)的突變所導(dǎo)致的功能性缺失。由于缺少明確的預(yù)示，因此關(guān)于RDR蛋白功能關(guān)鍵位點(diǎn)的研究需要大量的工作。本發(fā)明人通過(guò)長(zhǎng)期艱苦的研究，令人意外地發(fā)現(xiàn)了水稻中RDR6的同源蛋白R(shí)DR701的關(guān)鍵位點(diǎn)，通過(guò)突變RDR701關(guān)鍵位點(diǎn)獲得了溫度敏感不育的水稻突變體，具有廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供RDR701蛋白的關(guān)鍵位點(diǎn)，該關(guān)鍵位點(diǎn)的缺失或替代將導(dǎo)致RDR701蛋白功能的改變，RDR701蛋白的序列是序列表中SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列，其關(guān)鍵位點(diǎn)是第172位的色氨酸。RDR701蛋白是由序列表中SEQ ID NO :1所示的核苷酸編碼的。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種培育溫度敏感不育水稻的方法，具體地是將水稻細(xì)胞中序列表中SEQ ID NO :2所示的RDR701蛋白的第172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變，優(yōu)選為將第172位的色氨酸突變成半胱氨酸，更優(yōu)選為將序列表中SEQ ID NO :1第516位的核苷酸由“G”變?yōu)椤癟”。本發(fā)明所述的“錯(cuò)義突變”是指編碼某種氨基酸的密碼子經(jīng)堿基替換以后，變成編碼另一種氨基酸的密碼子，從而使多肽鏈的氨基酸種類和序列發(fā)生改變。具體地，本發(fā)明提供了一種RDR701的蛋白，該蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO :2。更具體地，本發(fā)明提供了上述蛋白的錯(cuò)義突變蛋白，該蛋白氨基酸序列為SEQ ID NO 2的第172位的色氨酸發(fā)生錯(cuò)義突變。具體地，SEQ ID NO 2中第172位的色氨酸發(fā)生錯(cuò)義突變?yōu)樯彼徨e(cuò)義突變?yōu)榘?br> 胱氨酸。本發(fā)明還提供了一種編碼上述蛋白的基因，該基因的核苷酸序列為SEQ ID NO :1。更具體的，本發(fā)明提供了上述基因的堿基突變基因，其特征在于SEQ ID N0:1的核苷酸序列中的第516位的“G”突變?yōu)椤癟”。本發(fā)明還提供了一種培育溫度敏感不育水稻的方法，其特征在于將水稻細(xì)胞中上述蛋白的第172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變。優(yōu)選地，將色氨酸錯(cuò)義突變?yōu)榘腚装彼帷＞唧w地，將水稻細(xì)胞中上述蛋白的172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變是通過(guò)組織培養(yǎng)、化學(xué)試劑誘變或定點(diǎn)T-DNA插入，將序列為SEQ ID NO 1的蛋白的第172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變。優(yōu)選通過(guò)組織培養(yǎng)將序列為SEQ ID NO 1的蛋白的第172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變。本發(fā)明還提供了一種包含RDR701蛋白的第516位的色氨酸突變成非色氨酸的水稻細(xì)胞。一旦利用上述提供的方法培育成溫度敏感不育水稻，本領(lǐng)域的技術(shù)人員很容易地利用雜交、回交等手段將水稻溫度敏感不育的性狀轉(zhuǎn)移到其它水稻品種或野生稻中，由此得到的溫度敏感不育的水稻品種或野生稻也納入本發(fā)明的保護(hù)范圍。本文中所使用的蛋白及氨基酸、基因及核苷酸的表示方法均為所屬領(lǐng)域公認(rèn)的表示方法，如表1所示的氨基酸或氨基酸殘基符號(hào)，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)它可以反推出相應(yīng)的三核苷酸密碼子。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，所使用的編碼如SEQ ID NO :2所示的蛋白的基因序列如SEQ ID N0:1所示。表1氨基酸縮寫表
氨基酸三字母縮寫一字母縮寫氨基酸三字母縮寫一字母縮寫丙氨酸AlaA亮氨酸LeuL精氨酸ArgR賴氨酸LysK天冬酰胺AsnN蛋氨酸MetM天冬氨酸AspD苯丙氨酸PheF半胱氨酸CysC脯氨酸ProP谷氨酰胺GlnQ絲氨酸SerS谷氨酸GluE蘇氨酸ThrT甘氨酸GlyG色氨酸TrpW組氨酸HisH酪氨酸TyrY異亮氨酸IleI纈氨酸ValV為了便于理解，以下將通過(guò)具體的附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，具體實(shí)例和附圖僅是為了說(shuō)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。顯然本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以根據(jù)本文說(shuō)明，在本發(fā)明的范圍內(nèi)對(duì)本發(fā)明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明引用了公開文獻(xiàn)，這些文獻(xiàn)也是為了更清楚地描述本發(fā)明，它們的全文內(nèi)容均納入本發(fā)明進(jìn)行參考，就好像它們的全文已經(jīng)在本發(fā)明說(shuō)明書中重復(fù)敘述過(guò)一樣。


圖1突變體rl中RDR701基因上一個(gè)保守位點(diǎn)發(fā)生無(wú)義突變(A) RL基因示意圖。 黑色方塊代表基因外顯子；白色方塊表示基因5’及3’ UTR ；黑線表示內(nèi)含子。下方左側(cè)長(zhǎng)條框中列出了野生型及rl突變體中突變位點(diǎn)及附近的序列。對(duì)應(yīng)的氨基酸序列列在右側(cè)框中。其中突變體中突變的位點(diǎn)序列以紅色標(biāo)注。(B)幾種粳稻及秈稻品種中，RL基因的核苷酸比對(duì)?！?”標(biāo)注突變體突變堿基所在位置?！癐n”代表秈稻品種；“Ja”代表粳稻品種。 各品種的具體信息見表2-1。(C)幾種植物的RDR701家族成員氨基酸序列的比對(duì)?！?”標(biāo)注突變體突變氨基酸所在位置。所用蛋白序列編號(hào)為RL(Q8LHH9)、At RDR701 (NP_190519)、 Nt RDR701(AAU21242)、Hv RDR701(AAR91036)、Pp RDR701(ARF82437)。圖2RDR701基因互補(bǔ)了 rl突變體的表型(A)RDR701基因的功能載體構(gòu)建示意圖。酶切位點(diǎn)及基因編碼起始及終止位點(diǎn)標(biāo)注于上方；對(duì)應(yīng)的位置信息標(biāo)注于下方。編碼起始位點(diǎn)定義為1。(B)高溫下野生型及轉(zhuǎn)基因后代的表型。WT 野生型中花11 ；Control rl中轉(zhuǎn)空載體的轉(zhuǎn)基因后代；pRL =RL為rl中轉(zhuǎn)功能互補(bǔ)載體的轉(zhuǎn)基因后代。圖3rl突變體小花的表型分析A、B分別為野生型中花11的小花外部及內(nèi)部形態(tài)。C-K為突變體rl的小花。Ie:外穎；pa:內(nèi)穎；St:雄蕊；pi:雌蕊?！?lt;”標(biāo)注外穎。圖4rl突變體種子的表型分析:A 野生型中花11的種子；B-J 突變體rl的種子。
圖5不同溫度處理下野生型及rl突變體小花的形態(tài)(A) 一晝夜的溫度曲線。不同的曲線顏色代表不同的溫度處理。DAT代表日平均溫度，用以衡量不同溫度處理。(B)日平均溫度為^°C，野生型及突變體的小花。W代表野生型，M表示突變體。 箭頭表明外穎的位置。(C-E)分別為日平均溫度為30°C，32°C及34°C時(shí)，野生型及突變體的小花。下方的百分比為一個(gè)穗子中，不同表型小花所占的比例。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明，均為常用分子生物學(xué)、組織培養(yǎng)技術(shù)和農(nóng)學(xué)手冊(cè)所記載的方法。實(shí)施例1. RDR701蛋白關(guān)鍵位點(diǎn)的獲得我們從組織培養(yǎng)中篩選得到一個(gè)具有高溫下穎殼發(fā)育缺陷的突變體，命名為rl。 將136株種在高溫條件下突變體rl與野生型回交的F2后代植株的表型，我們發(fā)現(xiàn)其中四株表現(xiàn)為穎殼發(fā)育異常的表型。大致符合正常植株與異常植株3 1的分離比例，說(shuō)明rl 突變體的表型為一隱性單基因所控制。通過(guò)圖位克隆的方法分析rl與秈稻93-11雜交創(chuàng)建的368株F2群體，初步定位及STS marker的精細(xì)定位最終將突變位點(diǎn)鎖定在1號(hào)染色體介于markers RH1-4和RH1-8之間461Λ的范圍。在公用數(shù)據(jù)庫(kù)TIGR5. 0中分析該區(qū)域所包含的基因發(fā)現(xiàn)其間存在一個(gè)RNA依賴的RNA聚合酶-RL(0s01g34350)基因。在擬南芥中的研究表明該類蛋白廣泛參與各類siRNA的生物合成過(guò)程。擬南芥中共存在六個(gè)RDR，其中三個(gè)成員的功能已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)，RDRl參與到病毒侵染過(guò)程中siRNA的產(chǎn)生；RDR2主要負(fù)責(zé)與異染色質(zhì)相關(guān)的Mnt siRNA的產(chǎn)生從而維持基因組的穩(wěn)定；RDR701除參與病毒防御過(guò)程中siRNA的合成外，也負(fù)責(zé)一類參與調(diào)控葉片極性發(fā)育的tasiRNA的產(chǎn)生。用RDR蛋白保守的RdRp結(jié)構(gòu)域進(jìn)行同源搜索發(fā)現(xiàn)水稻中存在5個(gè)RDR成員，分別為RL-RDR705。利用擬南芥和水稻中RDR蛋白的全長(zhǎng)序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，從進(jìn)化樹的結(jié)構(gòu)上可以看出RL與擬南芥的RDR701高度同源，從而暗示出它們可能具有相似的功能，即參與植物側(cè)生器官極性的建立。因此我們確定RL為突變的候選基因。設(shè)計(jì)測(cè)序引物對(duì)RL進(jìn)行全基因測(cè)序，結(jié)果表明在第一個(gè)外顯子距離5’端516位發(fā)生了一個(gè)無(wú)義突變，核苷酸由“G”變成了 “T”;相應(yīng)氨基酸由色氨酸(W)變成了半胱氨酸 (C)(附圖1-A)。為了確定是否該突變位點(diǎn)對(duì)于蛋白的功能是必需的，我們?cè)谒編讉€(gè)典型的粳稻和秈稻品種中對(duì)該位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果表明該突變位點(diǎn)的核苷酸序列在各品種間為保守的(附圖1-B)。利用RL的蛋白序列在NCBI中進(jìn)行BLASTp搜索，比對(duì)同源性較高的幾個(gè)物種的RDR蛋白序列，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該突變位點(diǎn)的氨基酸在幾個(gè)物種中也是保守的(附圖 1-C)。這些結(jié)果說(shuō)明，rl突變體的這一突變位點(diǎn)在進(jìn)化上是保守的，該位點(diǎn)對(duì)于蛋白的功能是必需的。實(shí)施例2 :RDR701功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)通過(guò)酶切BAC，我們構(gòu)建了包含RDR701基因5，端209!3bp，整個(gè)基因區(qū)4890bp區(qū)以及3’端528bp的功能互補(bǔ)載體。所使用的BAC(b005E01)來(lái)自中國(guó)科學(xué)院國(guó)家基因研究中心。采用Sal I和Xba I酶切BAC，回收一條長(zhǎng)度為7499bp的條帶。以回收產(chǎn)物為模版，利用 RL 基因上的引物 CX3107 (SEQ ID NO 3 :5，-ACCGAATCCGATTGATCTTC-3，)及 CX3109 (SEQ ID NO 4 :5，-CCAATGCAGGACGTCTTCTT-3，)擴(kuò)增以確定回收條帶為我們要的目的條帶。此片段包含了 RDR701基因的5，2086bp，基因區(qū)4890bp以及3，端523bp。同時(shí)，對(duì)表達(dá)載體 pCAMBIA2300-Actin I-ocs進(jìn)行相同的酶切。將從BAC上切下的目的片段連入表達(dá)載體 PCAMBIA2300上。PCR及酶切驗(yàn)證正確的克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌Agl I，用于轉(zhuǎn)化rl突變體的愈傷，在高溫條件下，轉(zhuǎn)有該載體的轉(zhuǎn)基因植株均恢復(fù)了穎殼異常發(fā)育的表型，而轉(zhuǎn)有空載體的植株則依然是外穎芒狀化的表型(附圖2)。這充分說(shuō)明RDR701基因上的這一點(diǎn)突變?cè)斐闪烁邷叵路f殼發(fā)育缺陷的表型，RDR701蛋白第172位的色氨酸是該蛋白的關(guān)鍵功能位點(diǎn)ο實(shí)施例3 :rl突變體的表型具有溫度依賴性rl的突變體同一個(gè)穗上小花的外穎表現(xiàn)出不同程度的發(fā)育缺陷(附圖3)，相應(yīng)的育性也各不相同(附圖4)。一些小花的外穎呈現(xiàn)頂端或者側(cè)部的部分芒狀，內(nèi)外穎分開不閉合。這部分小花可以結(jié)實(shí)，但種子不被穎殼包被；大多數(shù)小花的外穎完全變成針狀，花藥發(fā)育不飽滿，它們大部分是不結(jié)實(shí)的；個(gè)別小花的外穎或內(nèi)外穎完全消失，花器官裸露，雄蕊呈現(xiàn)皺縮，少數(shù)有花器官數(shù)目增多的現(xiàn)象。這部分小花是完全不育的。rl的表型受環(huán)境因素影響很大，在有些條件下表現(xiàn)發(fā)育異常的表型，但在有些條件下，突變體又發(fā)育正常。 在不同光照時(shí)間的地域種植，例如杭州的夏季(長(zhǎng)日照)及海南的冬季(短日照)，rl的表型呈現(xiàn)相似的變化，我們排除了光周期對(duì)于突變體的影響。水稻分蘗再生的特性給了我們很大的啟示，當(dāng)五月份在杭州播種，八月份開花時(shí)，rl呈現(xiàn)典型的外穎發(fā)育異常的表型，大部分小花不結(jié)果實(shí)。但將其已有的穗子割掉讓其重新長(zhǎng)分蘗再生時(shí)，隨著杭州九、十月份氣溫的轉(zhuǎn)低，新長(zhǎng)分蘗上的小花又發(fā)育正常而結(jié)實(shí)了。這提示我們可能溫度對(duì)于rl的表型有很大的影響。為了進(jìn)一步確定溫度與rl表型之間的關(guān)系，我們?cè)诳删_控制溫度的人工氣候箱中進(jìn)行了溫度處理實(shí)驗(yàn)。在同一光周期14. 5小時(shí)，及同一相對(duì)濕度75%的條件下，采用四個(gè)不同的日平均溫度(DAT)，分別對(duì)rl和野生型中花11進(jìn)行處理。日平均溫度分別為 28°C，30°C，32°C及34°C (附圖5-A)。當(dāng)DAT為28°C時(shí)，所有rl的小花均與野生型一樣發(fā)育正常(附圖5-B)；當(dāng)DAT為30°C時(shí)，盡管rl的同一穗子中約10%左右的小花出現(xiàn)內(nèi)外穎分開的現(xiàn)象，大部分小花發(fā)育正常(附圖5-C)；當(dāng)溫度升為DAT = 32°C，所有野生型的小花均發(fā)育正常，但rl的同一穗子中約有15%的小花出現(xiàn)外穎部分芒狀化的表型；約有70%的小花外穎完全變成芒狀，雄蕊皺縮；還有約15%的小花表現(xiàn)外穎消失或者內(nèi)外穎均變成芒狀(附圖5-D)。當(dāng)日平均溫度達(dá)到34°C的時(shí)候，盡管rl的小花呈現(xiàn)出更加嚴(yán)重的發(fā)育異常的表型，表現(xiàn)為外穎或內(nèi)外穎完全消失，花藥萎縮消失，花絲數(shù)目增多，完全不可育(附圖5-E)，但值得注意的是野生型的小花發(fā)育也受到了一定的影響，表現(xiàn)為穗子上有退化的小花。因此，溫度處理實(shí)驗(yàn)表明rl是一個(gè)溫度敏感的突變體，表型的嚴(yán)重性與溫度之間呈正相關(guān)。同時(shí)分析不同溫度下野生型及rl的表型也確定了該突變體的高、低溫條件分別為 32°C和28°C。另外在四個(gè)溫度條件下，野生型及rl之間在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段并沒有明顯的表型差異，說(shuō)明該溫敏突變體的表型主要體現(xiàn)在花器官的發(fā)育上。
權(quán)利要求
1.一種RDR701的蛋白，該蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO :2。
2.權(quán)利要求1所述蛋白的錯(cuò)義突變蛋白，該蛋白氨基酸序列為SEQID NO :2的第172 位的色氨酸發(fā)生錯(cuò)義突變。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所屬的蛋白，其中第172位的色氨酸發(fā)生錯(cuò)義突變?yōu)樯彼徨e(cuò)義突變?yōu)榘腚装彼帷?br> 4.一種編碼權(quán)利要求1所述蛋白的基因，該基因的核苷酸序列為SEQ ID NO :1。
5.權(quán)利要求4所述基因的堿基突變基因，其特征在于SEQID N0:1的核苷酸序列中的第516位的“G”突變?yōu)椤癟”。
6.一種培育溫度敏感不育水稻的方法，其特征在于將水稻細(xì)胞中權(quán)利要求1所述蛋白的第172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于將水稻細(xì)胞中權(quán)利要求1所述蛋白的第 172位的色氨酸錯(cuò)義突變?yōu)榘腚装彼帷?br> 8.權(quán)利要求6所述的培育溫度敏感不育水稻的方法，其特征在于將水稻細(xì)胞中權(quán)利要求1所述蛋白的172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變是通過(guò)組織培養(yǎng)、化學(xué)試劑誘變或定點(diǎn)T-DNA 插入，將序列為SEQ ID NO 1的蛋白的第172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于將水稻細(xì)胞中權(quán)利要求1所述蛋白的172 位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變是通過(guò)組織培養(yǎng)將序列為SEQ ID NO :1的蛋白的第172位的色氨酸進(jìn)行錯(cuò)義突變。
全文摘要
本發(fā)明涉及RDR701蛋白及其編碼基因與應(yīng)用，具體地涉及一種RNA依賴的RNA聚合酶RDR701蛋白的關(guān)鍵功能位點(diǎn)，其所對(duì)應(yīng)的具體表達(dá)RDR701蛋白的核苷酸序列為SEQ ID NO1，RDR701蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO2，對(duì)RDR701蛋白的功能位點(diǎn)進(jìn)行錯(cuò)義突變的水稻表現(xiàn)出溫度敏感型的不育，利用該種技術(shù)可以培育溫度敏感型的不育水稻突變體，應(yīng)用于水稻雜交育種，具有廣闊的前景。
文檔編號(hào)A01H5/00GK102174486SQ20111003073
公開日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月28日
發(fā)明者宋顯偉, 崔霞, 曹曉風(fēng), 汪得凱, 陶躍之 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院