專(zhuān)利名稱(chēng)：一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大花萱草組織培育技術(shù)，具體涉及一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組培 方法。
背景技術(shù)：
大花萱草(Hemerocallis middendorfii)是百合科萱草屬多年生宿根草本植物， 色彩華麗，葉似蘭草，花如百合，花期較長(zhǎng)。大花萱草花色品種繁多，有淡黃，金黃，鵝黃，淺 紅，大紅，深紅等顏色，更有粉色相間和紅黃相間的復(fù)色。近幾年，我國(guó)陸續(xù)從國(guó)外引進(jìn)大 花萱草新品種滿(mǎn)足市場(chǎng)需求，其中的大花萱草“御衣黃”是剛引入的新品種，花形較大，花色 為醒目的橙黃色，6月初開(kāi)花持續(xù)到十月上旬，花期長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月，適應(yīng)性強(qiáng)管理較粗放，同時(shí) “御衣黃”在江浙地區(qū)四季常綠，在大花萱草中頗為稀少；它不僅是優(yōu)秀的地被植物，而且還 可應(yīng)用于庭院綠化，盆栽觀賞，花境設(shè)計(jì)以及藝術(shù)插花中，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景?！坝曼S” 品種自然結(jié)實(shí)率低，種子萌芽率低，目前采用分株等無(wú)性繁殖方式，繁殖率低，一般年增殖 系數(shù)為4-5，很難滿(mǎn)足市場(chǎng)商業(yè)化的需求。組織培養(yǎng)技術(shù)是大量快速繁殖優(yōu)良種質(zhì)的最有 效途徑，同時(shí)也是植物進(jìn)行遺傳改良的重要基礎(chǔ)；如郭達(dá)初等在1990年，就以大花萱草雜 交品種的花莖為外植體，以MS+IBAO. 4mg · L-I +BA4. Omg · L -1誘導(dǎo)愈傷組織，并在不同外 源激素下比較不定芽的增殖情況，獲得最佳的增殖培養(yǎng)基MS+NAA1. Omg · L-I +BA5. Omg · L -1，成功獲得生根苗。王漢海等也以莖尖為外植體，成功獲得大花萱草“金娃娃”品種組培 苗。但對(duì)“御衣黃”的組培研究尚未見(jiàn)報(bào)道，因此探索”御衣黃”的組培技術(shù)，實(shí)現(xiàn)其規(guī)?；?繁殖，不但可豐富園林綠化植物品種，滿(mǎn)足市場(chǎng)需求，也對(duì)百合科其它植物的組培技術(shù)研究 具有重要的借鑒意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組培方法，該方 法具有滅菌效果較好，死亡率較低，不定芽培育周期短和質(zhì)量較好的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組 培方法，包括下述步驟
a、于晴天中午采下形成一周以?xún)?nèi)的大花萱草“御衣黃”花蕾，先用洗潔精浸泡lh，后用 流水沖洗4 5次，再用質(zhì)量百分濃度為75%的乙醇浸泡30秒，然后用質(zhì)量百分濃度為0. 1% 的HgCl2溶液浸泡10分鐘，無(wú)菌水沖洗5 6次，得到無(wú)菌花蕾；
b、切除上述無(wú)菌花蕾的頂部露出子房，然后對(duì)半切開(kāi)，再接種于含有6-芐基嘌呤 (6-BA)、萘乙酸(NAA)和蔗糖的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)培養(yǎng)55 66天，愈傷組織形成，得到愈 傷花蕾，該誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為5.0 mg/L，所述萘乙酸濃度為5.0 mg/ L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；
c、將上述愈傷花蕾再接種于含有6-芐基嘌呤、萘乙酸和蔗糖的分化培養(yǎng)基上，分化 培養(yǎng)至不定芽形成，得到“御衣黃”組培苗，該分化培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為1. 5mg/L，所述萘乙酸濃度為0. 3 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；
d、上述步驟b的誘導(dǎo)培養(yǎng)和步驟c的分化培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度都為M ^TC,光照都為 2000 Lux，每日光照時(shí)間都為16 h。上述誘導(dǎo)培養(yǎng)基和分化培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)液為MS (Murashige and Skoog)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組培方法，花 蕾依次通過(guò)洗潔精、75%乙醇和0. 1% HgCl2溶液浸泡獲得無(wú)菌花蕾，滅菌效果較好，后續(xù)培 養(yǎng)污染較少，而花蕾死亡率較低，再用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)形成愈傷組織，得到愈傷花蕾； 然后用分化培養(yǎng)基培養(yǎng)至不定芽形成，得到“御衣黃”組培苗；愈傷和不定芽的分級(jí)培育，不 定芽增殖較快，且質(zhì)量較好，一朵大花萱草“御衣黃”花蕾一年內(nèi)可繁殖出2萬(wàn)株苗可用的 生根組培苗，不定芽每1個(gè)月可增殖一次，且增殖系數(shù)始終保持在4. 2 5. 2之間，因此培 育周期短，為實(shí)現(xiàn)大花萱草“御衣黃”大規(guī)模，高繁殖率的工廠化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。 實(shí)施例一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組培方法，在晴天的中午，用剪刀將大花萱草“御衣 黃”形成一周以?xún)?nèi)的花蕾小心剪下帶回，用洗潔精浸泡lh，再流水沖洗4 5次，分裝好后移 至超凈工作臺(tái)采用質(zhì)量濃度75%乙醇浸泡30秒，然后用質(zhì)量百分濃度為0. 1%的HgCl2溶液 浸泡10分鐘，無(wú)菌水沖洗5 6次，得到無(wú)菌花蕾，這樣處理滅菌效果較佳，死亡率也較低； 將無(wú)菌花蕾作為誘導(dǎo)愈傷組織的外植體，切除花蕾的頂部露出子房，然后對(duì)半切開(kāi)，再接種 于含有6-BA、NAA和蔗糖的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為M ，光照為2000 Lux,每日 光照時(shí)間為16 h條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)55 66天，70%以上已形成愈傷組織，得到愈傷花蕾，該 誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，6-芐基嘌呤的濃度為5.0 mg/L，萘乙酸濃度為5.0 mg/L，蔗糖的質(zhì)量百分 濃度為3. 0% ；將已形成愈傷組織的愈傷花蕾再接種于含有6-BA、NAA和蔗糖的分化培養(yǎng)基 上，在培養(yǎng)溫度為M ，光照為2000 Lux,每日光照時(shí)間為16 h條件下分化培養(yǎng)至不 定芽形成，得到“御衣黃”組培苗，該分化培養(yǎng)基中，6-芐基嘌呤的濃度為1.5mg/L，萘乙酸 濃度為0. 3 mg/L,蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；以上愈傷組織的誘導(dǎo)周期為2個(gè)月，而形成 周期為1個(gè)月，增殖周期為1個(gè)月，循環(huán)往復(fù)，只要獲得不定芽，每隔1個(gè)月增殖一次，平均 一個(gè)花蕾一年可獲得生根的組培苗20000株。根據(jù)我們的設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)得出，在升汞處理時(shí)間一定的條件下，外植體的死亡率隨 乙醇的處理時(shí)間增加而升高，同時(shí)外植體的污染率也隨升汞與乙醇的處理時(shí)間增加而減 少；當(dāng)乙醇處理時(shí)間一致的情況下外植體的污染率隨著升汞處理的時(shí)間增加而減少，但死 亡率也同步上升；因此結(jié)合滅菌效率和死亡率我們選取用75%乙醇浸泡30秒和0. 1% HgCl2 溶液浸泡10分鐘的滅菌方式，對(duì)大花萱草“御衣黃”花蕾適宜。先用較高濃度的NAA和6-BA的誘導(dǎo)，可使花蕾外植體愈傷化較好，而僅出現(xiàn)膨大 不能愈傷的現(xiàn)象較少；再用較低濃度的NAA和6-BA的分化，愈傷組織較好分化出不定芽，且 不定芽的葉片不會(huì)卷曲甚至畸形，以及褐變等現(xiàn)象的發(fā)生，因此不定芽分化較好，且質(zhì)量較佳。
權(quán)利要求
1. 一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組培方法，其特征在于包括下述步驟a、于晴天中午采下形成一周以?xún)?nèi)的大花萱草“御衣黃”花蕾，先用洗潔精浸泡lh，后用 流水沖洗4 5次，再用質(zhì)量百分濃度為75%的乙醇浸泡30秒，然后用質(zhì)量百分濃度為0. 1% 的HgCl2溶液浸泡10分鐘，無(wú)菌水沖洗5 6次，得到無(wú)菌花蕾；b、切除上述無(wú)菌花蕾的頂部露出子房，然后對(duì)半切開(kāi)，再接種于含有6-芐基嘌呤、萘 乙酸和蔗糖的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)培養(yǎng)陽(yáng) 66天，愈傷組織形成，得到愈傷花蕾，該誘導(dǎo)培 養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為5.0 mg/L，所述萘乙酸濃度為5.0 mg/L，所述蔗糖的質(zhì) 量百分濃度為3. 0% ；c、將上述愈傷花蕾再接種于含有6-芐基嘌呤、萘乙酸和蔗糖的分化培養(yǎng)基上，分化 培養(yǎng)至不定芽形成，得到“御衣黃”組培苗，該分化培養(yǎng)基中，所述6-芐基嘌呤的濃度為 1. 5mg/L，所述萘乙酸濃度為0. 3 mg/L，所述蔗糖的質(zhì)量百分濃度為3. 0% ；d、上述步驟b的誘導(dǎo)培養(yǎng)和步驟c的誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度都為M ^TC,光照都為 2000 Lux，每日光照時(shí)間都為16 h。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種大花萱草“御衣黃”花蕾的組培方法，花蕾依次通過(guò)洗潔精、75%乙醇和0.1%HgCl2溶液浸泡獲得無(wú)菌花蕾，滅菌效果較好，后續(xù)培養(yǎng)污染較少，而花蕾死亡率較低，再用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)形成愈傷組織，得到愈傷花蕾，然后用分化培養(yǎng)基培養(yǎng)至不定芽形成，得到“御衣黃”組培苗；愈傷和不定芽的分級(jí)培育，不定芽增殖較快，且質(zhì)量較好，一朵大花萱草“御衣黃”花蕾一年內(nèi)可繁殖出2萬(wàn)株苗可用的生根組培苗，不定芽每1個(gè)月可增殖一次，且增殖系數(shù)始終保持在4.2~5.2之間，因此培育周期短，為實(shí)現(xiàn)大花萱草“御衣黃”大規(guī)模，高繁殖率的工廠化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102144550SQ20111002121
公開(kāi)日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月19日
發(fā)明者何月秋, 林樂(lè)靜, 王志龍, 祝志勇 申請(qǐng)人:寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院