專利名稱：一種富硒北冬蟲夏草的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種富硒北冬蟲夏草的培育方法。
背景技術(shù)：
硒是人體必需的微量元素之一，它具有防癌、抗癌、抗氧化，保護(hù)機(jī)體免受活性氧 自由基的損害，保護(hù)心臟，抗肝壞死，提高免疫力，延緩衰老等多種藥理作用，被譽為“抗癌 之王”?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，人體多種疾病如癌癥、心腦血管疾病、糖尿病、高血壓等都與缺 硒有關(guān)。硒在自然環(huán)境中的分布極不均勻，我國三分之二的地區(qū)處于缺硒狀態(tài)，為了增進(jìn) 人體健康，眾多科研機(jī)構(gòu)和生物工程企業(yè)將無機(jī)硒通過微生物、植物、動物轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒生 產(chǎn)出安全、無毒、便于人體吸收利用的富硒保健食品。隨著人們對硒與免疫功能，心腦血管 病以及防癌抗癌認(rèn)識的普及，富硒保健食品的需求日益增多，為富硒保健食品的開發(fā)提供 了廣闊的市場。富硒北冬蟲夏草是在培養(yǎng)基中添加微量元素硒，通過對菌絲在生長過程中的吸 收，轉(zhuǎn)化，結(jié)合將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒富集在子實體中，生產(chǎn)出富硒北冬蟲夏草?，F(xiàn)有技術(shù) 都是在培養(yǎng)基中添加無機(jī)亞硒酸或亞硒酸鈉，微量的亞硒酸或亞硒酸鈉對北冬蟲夏草菌 絲的生長有促進(jìn)作用，但當(dāng)無機(jī)硒在培養(yǎng)基中達(dá)到20mg/L時菌絲生長即受到抑制，超過 30mg/L菌絲不能生長，因而限制了無機(jī)硒在培養(yǎng)基中的添加量，使培育的北冬蟲夏草含硒 量一般在10-20mg/L內(nèi)，未能充分體現(xiàn)富硒北冬蟲夏草在防癌、抗癌、增強(qiáng)免疫力、抗衰老、 防治克山病、糖尿病等的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種富硒北冬蟲夏草的培育方法，是采用有機(jī)硒酵母，避免 無機(jī)亞硒酸、亞硒酸鈉對菌絲生長的毒害，使培養(yǎng)基的含硒量達(dá)到50mg/L，從而培育出的富 硒北冬蟲夏草的含量達(dá)到35-50mg/L。本發(fā)明包括如下步驟一、試管斜面富硒菌種的培養(yǎng)1、培養(yǎng)基成份、配制方法馬鈴薯200克，葡萄糖10-30克，蛋白陳10-20克，瓊脂15-30克，磷酸二氫鉀1_3 克，含硒量2000mg/kg的硒酵母10-50克。稱取洗凈去皮馬鈴薯簿片200克，加入1000毫升煮沸20分鐘，過濾，取馬鈴薯汁 放入1000毫升燒杯中，加入葡萄糖20克，瓊脂20克，蛋白陳10克，磷酸二氫鉀05克，硒酵 母15克，水浴加熱至瓊脂完全溶化，加水補足1000毫升，分裝在φ20Χ200 ιιηι試管內(nèi)，每 支試管裝12毫升，用棉塞塞緊，在高壓滅菌鍋120°C保持滅菌40分鐘，出鍋后趁熱將試管擺 成培養(yǎng)基離棉塞5-6cm的斜面，冷卻后斜面成固體狀備用。2、菌種分離、接斜面菌種
選生長粗壯圓形、色澤桔紅的野生北冬蟲夏草子實體或人工培育的北冬蟲夏草子 實體，用75%酒精滅菌1分鐘，用滅菌水洗去酒精，在接種箱中將子實體切成2mm簿片接入 試管培養(yǎng)基中間，切口向上，在20°C恒溫箱中培養(yǎng)15天取出見光，散射光照3天轉(zhuǎn)色，選出 菌絲生長平整，色澤桔紅，無雜菌的富硒北冬蟲夏草母種，放入5°C恒溫箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩６?、富硒北冬蟲夏草液體菌種的培養(yǎng)營養(yǎng)液的配方葡萄糖20克，蛋白陳10克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克，硒酵母15克，水1000毫升。操作方法稱取配方所列的原料放入1000毫升水中煮沸10分鐘，冷卻至室溫后用多層紗布 過濾，將清液裝入500毫升鹽水瓶中，每瓶裝250毫升，用棉塞塞緊，放入高壓滅菌鍋，120°C 保持滅菌30分鐘，冷卻至室溫后連同母種放入接種箱中，用接種刀切母種一片約0. 5平方 厘米接入浮在液面上，放入暗室，控制溫度20-22°C靜置培養(yǎng)3天，母種長出白色菌絲，放在 搖床中5天即成富硒北冬蟲夏草液體菌種。三、富硒北冬蟲夏草的培育1、固體培養(yǎng)基營養(yǎng)液的配制稱取葡萄糖20克，蛋白陳10克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克，維生素B1 100毫 克，硒蛋白35克，放入1000毫升70-80°C熱水中，攪拌至物料溶解。2、固體培養(yǎng)基的配制在600毫升大口玻璃瓶中，每瓶裝入大米40克，營養(yǎng)液60毫升，用聚丙烯簿膜封 瓶口，放入高壓滅鍋內(nèi)，在120°C溫度下保持滅菌60分鐘，緩慢排放壓力后出鍋，冷卻待用。3、接種、培育在超凈臺上用帶噴咀的接種槍每瓶接入富硒北冬蟲夏草液體菌種3毫升，移入暗 室控制溫度20-22°C發(fā)菌，經(jīng)過8天避光發(fā)菌，培養(yǎng)基表面全部長滿白色菌絲即可見光，在 散射光照下3-5天菌絲轉(zhuǎn)為桔黃至桔紅色，控制溫度20-22°C，相對濕度80-85%，10-天出 現(xiàn)子實體原基，再經(jīng)30-天的生長，子實體長到4-8厘米，形成孢子時子實體成熟即可采收， 及時干燥至水份不超過5 %，用塑料袋密封包裝。本發(fā)明采用對北冬蟲夏草生長抑制最少的有機(jī)硒酵母，使培養(yǎng)基的含硒量達(dá)到 50mg/L，培育出的富硒北冬蟲夏草含硒量達(dá)到35-50mg/kg，比添加無機(jī)硒的含硒量高2倍， 產(chǎn)量高20%。
具體實施例方式實施例1在本發(fā)明中，第一步，試管斜面富硒菌種的培養(yǎng)1、稱取洗凈去皮馬鈴薯200克切成簿片，加入1000毫升煮沸20分鐘，用紗布過 濾，取濾液放入1000毫升燒杯中，加入瓊脂20克，蛋白陳10克，葡萄糖20克，磷酸二氫鉀 0. 5克，含硒量2000mg/kg的硒酵母15克，水浴加熱至瓊脂完全溶化，加入熱水補足1000 毫升，分裝在cp20X200nrm試管內(nèi)，每支試管裝12毫升，用棉塞塞緊，在手提高壓滅菌鍋120°C保持滅菌40分鐘，出鍋后趁熱將試管擺成培養(yǎng)基離棉塞5-6cm的斜面，冷卻后斜面成 固體狀備用；2、菌種分離選生長粗壯、色澤桔紅的野生北冬蟲夏草子實體或人工培育的北冬蟲夏草子實 體，放入燒杯中，再用75%酒精滅菌1分鐘，去掉酒精，用滅菌水浸沒清洗3次，去酒精，去掉 清洗水備用；3、接斜面菌種在接種箱中將滅菌清洗過的北冬蟲夏草子實體用接種刀橫切成2mm簿片，接一片 入試管斜面培養(yǎng)基中間處，切口向上，塞好棉塞，在20°C恒溫箱中培養(yǎng)15天，移出恒溫箱， 保持20-22°C在室內(nèi)散射光照3天讓菌絲轉(zhuǎn)色，選出菌絲生長平整，色澤桔紅，無雜菌的富 硒北冬蟲夏草母種，用黑色紙包好放入5。C恒溫箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩５诙?，富硒北冬蟲夏草液體菌種的培養(yǎng)稱取葡萄糖20克，蛋白陳10克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克，硒酵母15克，放 入1000毫升水中煮沸10分鐘，冷卻至室溫后用多層紗布過濾，將清液裝入500毫升鹽水瓶 中，每瓶裝250毫升，用棉塞塞緊，放入手提高壓滅菌鍋，在120°C保持滅菌40分鐘，冷卻至 室溫后連同母種放入接種箱中，按無菌操作，先將斜面母表面的菌絲用接種刀輕輕刮掉，切 取菌塊的0. 5平方厘米，去掉培養(yǎng)基，將菌塊放入鹽水瓶，菌絲面向上，浮在液面上，塞好棉 塞，放入暗房，控制溫度20-22°C靜置培養(yǎng)3天，觀察菌塊表面及邊沿長出白色菌絲，營養(yǎng)液 澄明無混濁，移放在搖床培養(yǎng)5天即成富硒北冬蟲夏草液體菌種；第三步，富硒北冬蟲夏草的培育1、固體培養(yǎng)基營養(yǎng)液的配制稱取葡萄糖20克，蛋白陳10克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克，維生素B1 100毫 克，硒蛋白35克，放入1000毫升70-80°C熱水中，攪拌至物料溶解；2、固體培養(yǎng)基的配制在600毫升大口玻璃瓶中，每瓶裝入大米40克，營養(yǎng)液60毫升，用聚丙烯簿膜封 瓶口，放入高壓滅鍋內(nèi)，在120°C溫度下保持滅菌60分鐘，待緩慢排放壓力后出鍋，冷卻待 用；3、接種在超凈臺上用帶噴嘴的接種槍，每瓶接入富硒北冬蟲夏草液體菌種3毫升，均勻 噴在培養(yǎng)基面上，接種后移入無光培養(yǎng)室，控制溫度20-22°C發(fā)菌；4、富硒北冬蟲夏草的培育經(jīng)過8-10天避光發(fā)菌，培養(yǎng)基表面全部長滿白色菌絲，即可見光轉(zhuǎn)色，在散射光 照下3-5天，菌絲轉(zhuǎn)為桔黃至桔紅色，控制溫度20-22°C，相對濕度80-85%，10天出現(xiàn)米粒 狀子實體原基并長出子實體，用2-3毫升粗的不銹鋼針在瓶口簿膜上扎孔換氣及吸收空間 水份，控制濕度90°C，再經(jīng)30天的生長，子實體長到4-8厘米，形成孢子時子實體成熟即可 采收，及時干燥至水份不超過5%，放入塑料袋密封包裝，每瓶可得含硒量35-50mg/kg的富 硒北冬蟲夏草干品4-5克。
權(quán)利要求
1. 一種富硒北冬蟲夏草的培育方法，其特征是包括如下步驟(1)試管斜面富硒菌種的培養(yǎng)a、稱取洗凈去皮馬鈴薯200-克切成簿片，加入1000-毫升煮沸20-分鐘，用紗布過濾， 取濾液放入1000-毫升燒杯中，加入瓊脂15-30克，蛋白陳10-20克，葡萄糖10-30克，磷酸 二氫鉀1-3克，含硒量2000mg/k g的硒酵母10-15克，水浴加熱至瓊脂完全溶化，加入熱水 補足1000-毫升，分裝在φ 20 X 200mm試管內(nèi)，每支試管裝12-毫升，用棉塞塞緊，在手提 高壓滅菌鍋_120°C保持滅菌40-分鐘，出鍋后趁熱將試管擺成培養(yǎng)基離棉塞5-6c m的斜 面，冷卻后斜面成固體狀備用；b、菌種分離選生長粗壯、色澤桔紅的野生北冬蟲夏草子實體或人工培育的北冬蟲夏草子實體，放 入燒杯中，再用-75%酒精滅菌-1分鐘，去掉酒精，用滅菌水浸沒清洗3次，去酒精，去掉清 洗水備用；C、接斜面菌種在接種箱中將滅菌清洗過的北冬蟲夏草子實體用接種刀橫切成_2mm簿片，接一片入 試管斜面培養(yǎng)基中間處，切口向上，塞好棉塞，在-20°C恒溫箱中培養(yǎng)-15天，移出恒溫箱， 保持20-22°C在室內(nèi)散射光照-3天讓菌絲轉(zhuǎn)色，選出菌絲生長平整，色澤桔紅，無雜菌的富 硒北冬蟲夏草母種，用黑色紙包好放入-5。C恒溫箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?2)富硒北冬蟲夏草液體菌種的培養(yǎng)稱取葡萄糖-20克，蛋白陳-10克，磷酸二氫鉀-1克，硫酸鎂-1克，硒酵母-15克，放 入-1000毫升水中煮沸-10分鐘，冷卻至室溫后用多層紗布過濾，將清液裝入-500毫升鹽 水瓶中，每瓶裝-250毫升，用棉塞塞緊，放入手提高壓滅菌鍋，在-120°C保持滅菌-40分鐘， 冷卻至室溫后連同母種放入接種箱中，按無菌操作，先將斜面母表面的菌絲用接種刀輕輕 刮掉，切取菌塊的-0. 5平方厘米，去掉培養(yǎng)基，將菌塊放入鹽水瓶，菌絲面向上，浮在液面 上，塞好棉塞，放入暗房，控制溫度20-22°C靜置培養(yǎng)-3天，觀察菌塊表面及邊沿長出白色 菌絲，營養(yǎng)液澄明無混濁，移放在搖床培養(yǎng)-5天即成富硒北冬蟲夏草液體菌種；(3)富硒北冬蟲夏草的培育a、固體培養(yǎng)基營養(yǎng)液的配制稱取葡萄糖-20克，蛋白陳-10克，磷酸二氫鉀-1克，硫酸鎂-1克，維生素仏-100毫 克，硒蛋白35克，放入-1000毫升70-80°C熱水中，攪拌至物料溶解；b、固體培養(yǎng)基的配制在-600毫升大口玻璃瓶中，每瓶裝入大米-40克，營養(yǎng)液-60毫升，用聚丙烯簿膜封瓶 口，放入高壓滅鍋內(nèi)，在-120°C溫度下保持滅菌-60分鐘，待緩慢排放壓力后出鍋，冷卻待 用；C、接種在超凈臺上用帶噴嘴的接種槍，每瓶接入富硒北冬蟲夏草液體菌種-3毫升，均勻噴在 培養(yǎng)基面上，接種后移入無光培養(yǎng)室，控制溫度20-22 °C發(fā)菌；d、富硒北冬蟲夏草的培育經(jīng)過8-10天避光發(fā)菌，培養(yǎng)基表面全部長滿白色菌絲，即可見光轉(zhuǎn)色，在散射光照下 3-5天，菌絲轉(zhuǎn)為桔黃至桔紅色，控制溫度20-22°C，相對濕度80-85%，-10天出現(xiàn)米粒狀子實體原基并長出子實體，用2-3毫升粗的不銹鋼針在瓶口簿膜上扎孔換氣及吸收空間水 份，控制濕度_90°C，再經(jīng)-30天的生長，子實體長到4-8厘米，形成孢子時子實體成熟即可 采收，及時干燥至水份不超過-5%，放入塑料袋密封包裝。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒北冬蟲夏草的培育方法，其特征是培養(yǎng)基成份、配制方法馬鈴薯-200克，葡萄糖10-30克，蛋白陳10-20克，瓊脂15-30克，磷酸二氫鉀1_3克， 含硒量-2000mg/k g的硒酵母10-50克。
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒北冬蟲夏草的培育方法，其特征是營養(yǎng)液的配方 葡萄糖-20克，蛋白陳-10克，磷酸二氫鉀-1克，硫酸鎂-1克，硒酵母-15克，水-1000毫升。
4.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富硒北冬蟲夏草的培育方法，其特征是固體培養(yǎng)基營養(yǎng)液 的配制稱取葡萄糖-20克，蛋白陳-10克，磷酸二氫鉀-1克，硫酸鎂-1克，維生素B1-IOO毫 克，硒蛋白-35克，放入-1000毫升70-80°C熱水中，攪拌至物料溶解。
全文摘要
一種富硒北冬蟲夏草的培育方法，是采用有機(jī)硒酵母，避免無機(jī)亞硒酸、亞硒酸鈉對菌絲生長的毒害，使培養(yǎng)基的含硒量達(dá)到50mg/L，從而培育出的富硒北冬蟲夏草的含量達(dá)到35-50mg/L。本發(fā)明采用對北冬蟲夏草生長抑制最少的有機(jī)硒酵母，使培養(yǎng)基的含硒量達(dá)到50mg/L，培育出的富硒北冬蟲夏草含硒量達(dá)到35-50mg/kg，比添加無機(jī)硒的含硒量高2倍，產(chǎn)量高20％。
文檔編號C05G1/00GK102138436SQ20101062157
公開日2011年8月3日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月28日
發(fā)明者徐景輝 申請人:湖北圣峰藥業(yè)有限公司