專利名稱：緩釋激素誘導(dǎo)條斑星鰈精子成熟和活力提升方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬條斑星鰈生殖調(diào)控技術(shù)，是一種利用外源激素促進(jìn)條斑星鰈雄性親魚精 子最終成熟并提升精子活力的方法。
背景技術(shù)：
條斑星鰈(Verasper moseri)為一種冷水性底棲大型鰈類，主要分布于日本茨城 縣以北的太平洋沿岸和若狹灣以北的日本海沿岸，我國(guó)黃海和渤海以前也有分布，現(xiàn)在已 多年未見(jiàn)漁獲。條斑星鰈自然海域中多生活在近岸水域或海灣內(nèi)，生活水深一般為10-30m， 生存水溫1_20°C，適宜生長(zhǎng)水溫13-20°C，適宜生長(zhǎng)鹽度25-33，在適宜的養(yǎng)殖條件下，經(jīng)一 年的養(yǎng)成，體重可達(dá)到900克/尾以上，生長(zhǎng)速度快，成活率高，餌料轉(zhuǎn)換率高，養(yǎng)殖成本低， 病害發(fā)生率低，是一種優(yōu)良的養(yǎng)殖魚類，可在我國(guó)北方地區(qū)進(jìn)行廣泛養(yǎng)殖。2007年，條斑星 鰈人工繁育技術(shù)獲得突破，為該名優(yōu)魚種養(yǎng)殖的產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。人工養(yǎng)殖和溫光調(diào)控條件下，條斑星鰈雄性親魚常常會(huì)表現(xiàn)出精液粘稠度過(guò)高、 精子活動(dòng)率低(30% -40% )、精子壽命短(l-6min)等癥狀，嚴(yán)重影響了卵子受精率和批量 受精卵的獲取，阻礙了人工繁育技術(shù)的發(fā)展。結(jié)合精子結(jié)構(gòu)觀察研究結(jié)果，其原因可能在于 環(huán)境異常導(dǎo)致的腦垂體促性腺激素(GtH)釋放不足，從而血漿中性類固醇激素水平較低， 部分精子未能達(dá)到最終成熟(Mylonas et al.，1997)。先前的研究表明，在具有小葉型精巢 的硬骨魚類雄魚中，精液需借助內(nèi)源性性激素(GTH)的調(diào)控而稀釋，排放到輸精管中最終 排出體外，如果因環(huán)境脅迫導(dǎo)致性激素釋放不足將會(huì)導(dǎo)致精液質(zhì)量降低(Billard et al., 1982)。因此，從內(nèi)分泌角度出發(fā)，利用外源激素調(diào)控腦垂體活動(dòng)，促進(jìn)促性腺激素釋放和血 漿性類固醇激素升高可大大提高精子達(dá)到最終成熟的比率和活力。目前，對(duì)于親魚的緩釋 激素誘導(dǎo)，國(guó)內(nèi)外采用的都是肌肉埋植法和注射法，尚未有其它誘導(dǎo)方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種利用外源激素促進(jìn)條斑星鰈雄性親魚精子最終成熟并提 升精子活力的方法，該方法是對(duì)繁殖期采得精液的雄魚，于背部肌肉埋植鮭魚促性腺激素 釋放激素(sGnRH)，提升精子質(zhì)量，提高受精率，獲得批量受精卵。為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為選擇性成熟的雄性條斑星鰈親魚，對(duì)其進(jìn)行外源激素的誘導(dǎo)，促進(jìn)精子最終成熟 并提升精子活力。所述的雄魚在人工溫光調(diào)控措施下，可擠出乳白色精液的成熟雄性親魚。所述的外源激素是鮭魚促性腺激素釋放激素(sGnRH)。所述的復(fù)方鮭魚促性腺激素釋放激素sGnRH埋植劑量為35 μ g/kg，其方式為背部 肌肉埋植。所述的埋植其方式為背部肌肉埋植，埋植背部為靠近頭部側(cè)線上方2cm處。每隔 10天重復(fù)一次，每尾雄魚可埋植2次。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明利用處于正常繁殖期的性成熟的可采得乳白色精液的雄性親魚，采用激 素誘導(dǎo)，可大大提高精子達(dá)到最終成熟的比例，顯著提升精子活力，提高受精率，獲得批量 優(yōu)質(zhì)受精卵，保證人工繁殖的順利進(jìn)行。2、本發(fā)明采用背部肌肉埋植方法，對(duì)親魚生殖刺激小，便于生產(chǎn)實(shí)踐操作。3、本發(fā)明采用復(fù)方鮭魚促性腺激素釋放激素(35μ g/kg)誘導(dǎo)親魚，外源激素可 使血漿中性類固醇激素在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持較高表達(dá)水平，96h后精液粘稠度明顯下降，精子 活動(dòng)率、快速活動(dòng)率和精子受精大為提高，效果良好。激素效應(yīng)時(shí)間約為72-96h，誘導(dǎo)的效 果可維持4-6天，在第一次激素埋植10天后可進(jìn)行二次埋植，效果可以重復(fù)。4、本發(fā)明為條斑星鰈苗種規(guī)?；庇峁┝思夹g(shù)保障，對(duì)于養(yǎng)殖的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具 有重要意義。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例目前，尚未有關(guān)于條斑星鰈雄魚精巢年周期發(fā)育、精子特性以及精子質(zhì)量的報(bào)道， 隨著條斑星鰈養(yǎng)殖業(yè)的興起，苗種生產(chǎn)業(yè)者對(duì)受精卵穩(wěn)定獲得技術(shù)的需求顯得越來(lái)越迫 切。本研究在于2009年3月-4月在青島忠海水產(chǎn)有限公司進(jìn)行，具體實(shí)施過(guò)程如下1).親魚選擇挑選人工溫光調(diào)控下正處于排精期可采得乳白色精液的條斑星鰈 雄魚8尾(全長(zhǎng)25-33cm，體重540_680g)，親魚以MS222 (150mg/L)麻醉后人工擠壓采得精 液，鏡檢發(fā)現(xiàn)精液粘稠度高，精子活動(dòng)率都低于45 %，精子快速活動(dòng)率低于30 %，精子壽命 l_6min。2).激素埋植親魚分為兩組，每組4尾，埋植sGnRH。使用專用埋植器具，按照 35 μ g/kg的劑量，在靠近頭部側(cè)線上方約2cm處肌肉埋植。3).取樣檢測(cè)及受精檢驗(yàn)埋植激素后親魚置于單獨(dú)培育池內(nèi)培育，培育條件同 未埋植緩釋激素的親魚。在埋植后2處、4811、7211、9611、19211分別采集精液，并在011，4811、9611 和192h分別采集1. Oml血液樣品。觀察精液粘稠度并立刻在鏡下檢查記錄精子密度、精子 活動(dòng)率、快速活動(dòng)率和精子壽命。血液樣品以12000rpm離心后收集血清，放射免疫法測(cè)定 性類固醇激素睪酮(T)的含量。在不同時(shí)間采集精液后，利用新鮮的優(yōu)質(zhì)卵子進(jìn)行受精實(shí) 驗(yàn)，檢驗(yàn)精液的受精效果。4).實(shí)驗(yàn)結(jié)果激素進(jìn)入魚體96h后，親魚精子質(zhì)量明顯提升。具體表現(xiàn)為精液 粘稠度顯著下降，精子活動(dòng)率提高到90. 5-98.2%，快速活動(dòng)率提高至84. 7% -92. 1%，精 子壽命11. 06-14. 3min，血漿睪酮表達(dá)水平由29. 5ng/dl (oh)上升到290ng/ml (96h)，并在 19211仍保持在194.8叫/(11。受精率由0-13.4% (激素誘導(dǎo)前)上升至45. 7-78.3% (96h)， 效果較為顯著。10天后，當(dāng)精液質(zhì)量開(kāi)始下降后，對(duì)親魚進(jìn)行二次埋植，重復(fù)效果較好。
權(quán)利要求
一種緩釋激素誘導(dǎo)條斑星鰈精子成熟和活力提升方法，其特征在于它的方法是選擇性成熟的雄性條斑星鰈親魚，對(duì)其進(jìn)行外源激素的誘導(dǎo)，促進(jìn)精子最終成熟并提升精子活力。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋激素誘導(dǎo)條斑星鰈精子成熟和活力提升方法，其特征 在于所述的雄性條斑星鰈親魚，是在人工溫光調(diào)控措施下可擠出乳白色精液的成熟雄性親魚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋激素誘導(dǎo)條斑星鰈精子成熟和活力提升方法，其特征在 于所述的外源激素，是鮭魚促性腺激素釋放激素sGnRH。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩釋激素誘導(dǎo)條斑星鰈精子成熟和活力提升方法，其特征在 于所述的鮭魚促性腺激素釋放激素sGnRH，埋植劑量為35 μ g/kg，其方式為背部肌肉埋植。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的緩釋激素誘導(dǎo)條斑星鰈精子成熟和活力提升方法，其特征在 于所述背部肌肉埋植，位置為靠近頭部側(cè)線上方2cm處；每隔10天重復(fù)埋植一次，每尾雄魚 可重復(fù)兩次。
全文摘要
一種激素誘導(dǎo)條斑星鰈精子成熟和活力提升方法，選擇性成熟的親魚，背部肌肉埋植鮭魚促性腺激素釋放激素(sGnRH)35μg/kg，促進(jìn)精子達(dá)到最終成熟，提升精子活力至85％-90％以上，受精率提高4-7倍。該方法對(duì)親魚生殖脅迫低，親魚成活和性腺成熟率高，產(chǎn)卵效果好，可獲得批量?jī)?yōu)質(zhì)受精卵。本發(fā)明是一套完整的控制技術(shù)方法。當(dāng)精液質(zhì)量開(kāi)始下降后，對(duì)親魚進(jìn)行二次埋植，重復(fù)效果較好。本方法可保證苗種人工繁殖規(guī)?；a(chǎn)的順利進(jìn)行。
文檔編號(hào)A01K61/00GK101889558SQ20101023092
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月20日
發(fā)明者蘭功鋼, 劉新富, 孫中之, 徐永江, 柳學(xué)周, 王妍妍, 陳超 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所