專利名稱：一種輔助鑒定綠殼蛋雞的方法及其專用引物對(duì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種輔助鑒定綠殼蛋雞的方法及其專用引物對(duì)。
背景技術(shù)：
禽蛋的蛋殼顏色按主要色系可分為三種類型，白殼、褐殼和綠殼(Lang，Μ. R.， and J. W. Wells. 1987. A review of eggshell pigmentation. World' s Poult. Sci. J. 43 238-245.)。綠殼蛋以其獨(dú)特的蛋殼顏色，一直以來都吸引著國(guó)內(nèi)外研究者的目光。國(guó)外研 究比較多的是智利的安克納(Araucano)綠殼蛋雞。在我國(guó)，產(chǎn)綠殼蛋的品種有四川舊院 雞、河南盧氏雞、湖北江漢雞及江西東鄉(xiāng)綠殼蛋雞。在這些品種中，研究最多的是東鄉(xiāng)綠殼 蛋雞。Punnett (1933)發(fā)現(xiàn)綠殼性狀是由顯性單基因控制的質(zhì)量性狀(Purmett RC. Genetic studies in poultry IX. The blue egg. J Genet，1933，27 :465 470.)，顯性 純合子和雜合子均表現(xiàn)出綠殼特性。這意味著對(duì)于綠殼個(gè)體，無法根據(jù)表型來判斷其基因 型是否純合，也就無法徹底從群體中淘汰隱性(非綠殼)基因。綠殼蛋雞生產(chǎn)中存在的一 個(gè)關(guān)鍵問題是綠殼性狀很難提純，后代經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)褐殼個(gè)體。綠殼雞蛋在市場(chǎng)上非常受消費(fèi)者歡迎，不僅在我國(guó)，日本的綠殼雞蛋價(jià)格也遠(yuǎn)高 于其他雞蛋?，F(xiàn)在，綠殼蛋雞飼養(yǎng)量在逐步加大，江西、上海、湖北、河南、北京等地是綠殼蛋 雞主要飼養(yǎng)地。目前，綠殼蛋雞品種選育和商品化生產(chǎn)面臨著一些技術(shù)難題，主要問題是蛋 殼顏色的保持和產(chǎn)蛋數(shù)量的提高。蛋殼顏色方面，由于綠殼性狀由顯性基因控制，隱性基因 不易淘汰，使得綠殼蛋雞群體中總是出現(xiàn)一些產(chǎn)褐殼蛋的個(gè)體，群體的純度難以提高；產(chǎn)蛋 數(shù)量方面，由于綠殼基因還沒有被克隆，綠殼蛋雞的雜交利用受到限制，雜交以后易出現(xiàn)綠 殼基因的分離。在實(shí)際生產(chǎn)中，因蛋殼顏色屬限性性狀，只能在母雞產(chǎn)蛋后表現(xiàn)。所以，利 用常規(guī)育種手段，選育綠殼群體至少要等24周后個(gè)體開產(chǎn)才能進(jìn)行，而對(duì)公雞的選擇也只 能通過后裔測(cè)定來完成，選擇的周期長(zhǎng)，進(jìn)展緩慢。此外，要想在綠殼群體中徹底淘汰隱性 基因，需要通過測(cè)交的方法檢出雜合個(gè)體。當(dāng)對(duì)某一待測(cè)個(gè)體進(jìn)行測(cè)交時(shí)，需觀測(cè)到5個(gè)以 上的后代均產(chǎn)綠殼時(shí)，才有95%的把握認(rèn)定待測(cè)個(gè)體基因型為顯性純合。這樣需要進(jìn)行大 量的測(cè)交，不僅延長(zhǎng)選育的周期，還造成很高的財(cái)力、人力負(fù)擔(dān)。盡管，對(duì)綠殼基因的定位工作已經(jīng)開展了有30多年，但目前該基因尚未被準(zhǔn)確定 位。早在上世紀(jì)30年代Bruckner和Zartman就注意到綠殼(0)和豆冠(P)存在連鎖關(guān)系 (Bruckner, J. H. ,and F. B. Hutt,1939. Linkage of pea comb and blue egg in the fowl. Science 90 :88.)。在1973年Zartman利用兩個(gè)轉(zhuǎn)座子標(biāo)記將豆冠基因定位于1號(hào)染色 體短臂上，從而證明綠殼基因也位于雞1號(hào)染色體上(Zartman DL. Location of the pea comb gene. Poult Sci.，1973，52(4) 1455-62.) Bitgood 等(1980，1983，1985，2000)通 過回交設(shè)計(jì)，首次將綠殼基因定位于雞1號(hào)染色體短臂，并得出綠殼和豆冠間的遺傳距離 是3. 1-4. 23cM(Bitgood JJ,Shoffner RN,Otis JS,Briles WE. Mapping of the genes for pea comb,blue egg, barring,silver,and blood groups A, E,H,and P in the domesticfowl. Poult Sci.，1980，59(8) :1686-93· ；Bitgood JJ, Otis JS，Shoffner RN. Refined Linkage Value for Comb and Blue Egg :Lack of Effect of Pea Comb，Blue Egg，and Naked on Aage at First egg in the Domestic Fowl. Poult Sci.，1983，62 :235_238.； Bitgood J. J. Locating pea comb and blue egg in relation to the centromere of chromosome 1 in the chicken. Poult Sci. ,1985,64 1411 1414. ；Bitgood JJ, Briles RW, Briles WE. Further tests for genetic linkages of three morphological traits，three blood groups，and break points of two chromosome translocations on chromosome one in the chicken. Poult Sci.2000,79(3) :293_5·)。Bartlett 等(1996) 利用雞的內(nèi)源病毒evl對(duì)綠殼基因進(jìn)行了定位，結(jié)果是O和P間的距離是4. lcM(Bartlett, J. R. , C. P. Jones, and Ε. J. Smith. 1996. Linkage analysis of endogenous viral elementl,blue eggshell, and pea comb loci in chickens. J. Hered. 1996,87 :67_70.)。 這項(xiàng)工作較Bitgood改進(jìn)之處在于Bartlett所用的evl標(biāo)記，在染色體上插入位點(diǎn)已知 (Chrlp :68，099，410bp-68，099，950bp)。王曉通(2008)利用 1 個(gè) SNP 標(biāo)記和 3 個(gè)微衛(wèi)星 標(biāo)記，將綠殼基因定位到Chrlp :67，296，991bp-69，140，571bp之間1. 8Mb的區(qū)段內(nèi)(王曉 通.雞綠殼蛋色素形成的生理學(xué)與遺傳學(xué)分析.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)博士論文，2008，6)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種輔助鑒定綠殼蛋雞的方法及其專用引物對(duì)。本發(fā)明提供的專用引物對(duì)是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA 組成的引物對(duì)。本發(fā)明還保護(hù)所述引物對(duì)在輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子(00)、綠殼基 因雜合子(Oo)和非綠殼基因純合子(OO)中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子(00)、綠殼基因雜合子 (Oo)和非綠殼基因純合子(Q0)的方法，包括如下步驟(1)提取待測(cè)雞的基因組DNA ；(2)以基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；(3)根據(jù)PCR產(chǎn)物輔助鑒定如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，且如序列表的序列3所 示，待測(cè)雞為候選的綠殼基因純合子；如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有兩種，分別如序列表的序列3和 序列4所示，則待測(cè)雞為候選的綠殼基因雜合子；如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，且如序列表 的序列4所示，則待測(cè)雞為候選的非綠殼基因純合子。所述待測(cè)雞具體可為東鄉(xiāng)綠殼蛋雞。步驟(3)中，具體可通過SSCP電泳檢測(cè)所述PCR產(chǎn)物。目前有多種SNP分型方法，如SNP芯片、時(shí)間飛行質(zhì)譜、直接測(cè)序、焦磷酸測(cè)序、 SNPlex, taqman探針法等；這些方法雖然通量高、準(zhǔn)確性好，但也存在費(fèi)用昂貴、對(duì)儀器 試劑要求高的缺點(diǎn)；在很大程度上限制了這些技術(shù)的推廣普及。在傳統(tǒng)的SNP分型方法 中，應(yīng)運(yùn)最普遍的是 SSCP 法(single strand conformation polymorphism)禾口 RFLP 法 (restriction fragment length polymorphism)。這兩禾中方法雖然在通量上無法與上述方 法相比，但具有操作簡(jiǎn)便、廉價(jià)、對(duì)儀器試劑要求低，易普及推廣的優(yōu)點(diǎn)。SSCP是基于DNA構(gòu) 象檢測(cè)PCR產(chǎn)物單鏈堿基微小差異的方法，因其檢測(cè)敏感、快速和所需裝置簡(jiǎn)便而在分子生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用；但該方法的試驗(yàn)結(jié)果受多種因素的影響，如試驗(yàn)操作的技巧、環(huán) 境溫度、PCR產(chǎn)物濃度、PCR擴(kuò)增位點(diǎn)堿基構(gòu)成、電壓、PAGE膠的濃度和交聯(lián)度等，因而重復(fù) 性比較差。SSCP操作時(shí)必須經(jīng)過變性的步驟，對(duì)于一些高GC位點(diǎn)，因?yàn)橥嘶饻囟容^高，一 般很難維持單鏈狀態(tài)，這樣的位點(diǎn)不適合用此項(xiàng)技術(shù)來分型。本發(fā)明提供的標(biāo)記的本質(zhì)是 13bp缺失，多堿基缺失遠(yuǎn)比單堿基的轉(zhuǎn)換或顛換對(duì)單鏈構(gòu)像的影響大，所以更適合用SSCP 技術(shù)檢測(cè)標(biāo)記的基因型。所述的引物對(duì)可用于制備輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子、綠殼基因雜合 子和非綠殼基因純合子的試劑盒。本發(fā)明還保護(hù)一種輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子、綠殼基因雜合子和非 綠殼基因純合子的試劑盒，包括所述的引物對(duì)。所述引物對(duì)，所述方法或所述試劑盒均可用于綠殼蛋雞育種。如需對(duì)綠殼蛋雞進(jìn) 行雜交以提高產(chǎn)蛋數(shù)，而同時(shí)要求保留綠殼特性，該標(biāo)記可用以對(duì)綠殼位點(diǎn)的變化進(jìn)行跟 蹤，從而在雜交后代中保持綠殼性狀。本發(fā)明還保護(hù)一種綠殼蛋雞育種方法，是采用綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子進(jìn)行 育種；所述綠殼基因純合子是所述方法鑒定的。本發(fā)明可以彌補(bǔ)常規(guī)育種方法的不足，縮短育種周期，提高育種的準(zhǔn)確性。本發(fā)明 的優(yōu)點(diǎn)(1)建立在綠殼基因精細(xì)定位的基礎(chǔ)之上，在定位區(qū)域內(nèi)找到13bp缺失標(biāo)記，該標(biāo) 記與綠殼性狀顯著關(guān)聯(lián)，根據(jù)標(biāo)記基因型推斷個(gè)體為綠殼的準(zhǔn)確性大于93 %，依據(jù)標(biāo)記基 因型推斷綠殼基因型的準(zhǔn)確性可達(dá)92. 16% ； (2)不受性別限制；(3)綠殼蛋雞開產(chǎn)時(shí)間通 常為21-24周，本發(fā)明在個(gè)體雛雞階段即可推斷出個(gè)體表型及基因型，可以早選擇早淘汰， 可縮短育種時(shí)間，加快育種進(jìn)程，節(jié)省飼養(yǎng)成本。


圖1為SSCP檢測(cè)結(jié)果及對(duì)應(yīng)基因型測(cè)序結(jié)果；測(cè)序結(jié)果中，方框內(nèi)為13bp缺失序 列，箭頭標(biāo)出了缺失位置。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn) 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買得到的。下述實(shí)施例中的％，如無特殊說明，均為質(zhì)量百分含量。以 下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。Gene Amp PCR System 9700 PERKIN ELMER 公司，USA。凝膠成像系統(tǒng)Alpha Innotech 公司。實(shí)施例l、13bp缺失多態(tài)的發(fā)現(xiàn)及引物對(duì)的設(shè)計(jì)東鄉(xiāng)綠殼蛋雞是我國(guó)著名的綠殼蛋雞品種，因綠殼基因(0)為顯性基因，所以群 體中仍存在部分?jǐn)y帶隱性基因(ο)的雜合子。綠殼基因純合子之間產(chǎn)生的后代，產(chǎn)蛋性狀 不發(fā)生分離，都產(chǎn)綠殼蛋。綠殼基因純合子和綠殼基因雜合子之間會(huì)產(chǎn)生約1 1的綠殼基 因純合子和綠殼基因雜合子，從而使非綠殼基因傳代下去。綠殼基因雜合子之間產(chǎn)生的后 代，會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)褐殼蛋的個(gè)體(非綠殼基因純合子)，造成純種不純的尷尬局面。即東鄉(xiāng)綠殼 蛋雞中，根據(jù)綠殼基因(0)可分為三種基因型綠殼基因純合子(00)、綠殼基因雜合子(Oo)和非綠殼基因純合子(OO)；其中綠殼基因純合子和綠殼基因雜合子產(chǎn)綠殼蛋，為東鄉(xiāng)綠殼 群體；非綠殼基因純合子產(chǎn)褐殼蛋，為東鄉(xiāng)褐殼群體。一、13bp缺失多態(tài)的發(fā)現(xiàn)在測(cè)序時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)與綠殼性狀顯著關(guān)聯(lián)的SNP標(biāo)記。與東鄉(xiāng)綠殼群體相比，東鄉(xiāng) 褐殼群體存在13bp的缺失(Chrlp :67，419，892bp-67，419，904bp)。將該標(biāo)記命名為13bp缺失。二、引物對(duì)的設(shè)計(jì)基于該13bp缺失的上下游序列，設(shè)計(jì)特異引物對(duì)如下(5’ -3’ )F :ATCTATAAAGGAGCAAGG(序列表的序列 1)；R :ATGAGGGTAAGAGGACAC (序列表的序列 2)。目的片段長(zhǎng)度342bp。如果僅得到342bp的PCR產(chǎn)物，樣本為候選的綠殼基因純合 予；如果僅得到329bp的PCR產(chǎn)物，樣本為候選的非綠殼基因純合子；如果同時(shí)得到342bp 和329bp的PCR產(chǎn)物，樣本為候選的綠殼基因雜合子。實(shí)施例2、應(yīng)用引物對(duì)輔助鑒定東鄉(xiāng)綠殼蛋雞289只東鄉(xiāng)綠殼蛋雞購(gòu)自江西省東鄉(xiāng)縣華綠種禽養(yǎng)殖場(chǎng)。將每只東鄉(xiāng)綠殼蛋雞 分別與白來航雞雜交如果子一代都產(chǎn)綠殼蛋，該東鄉(xiāng)綠殼蛋雞為綠殼基因純合子；如果 子一代既有產(chǎn)綠殼蛋的個(gè)體又有產(chǎn)褐殼蛋的個(gè)體，該東鄉(xiāng)綠殼蛋雞為綠殼基因雜合子；如 果子一代都產(chǎn)褐殼蛋，該東鄉(xiāng)綠殼蛋雞為非綠殼基因純合子。289只東鄉(xiāng)綠殼蛋雞中，104 只為非綠殼基因純合子，150只為綠殼基因純合子，35只為綠殼基因雜合子。1、提取基因組DNA各個(gè)樣本翅靜脈采血，提取高鹽法提取基因組DNA。具體過程如下(1)配置溶液溶液A:100mM Tris-Cl (pH7. 5), IOOmM EDTA, IOOmM NaCl，0. 5% SDS，室溫保存。 溶液B 取200ml 5M乙酸鉀溶液和500ml 6M氯化鋰溶液，充分混勻，4°C保存。(2)取50-100 μ 1雞血，加500-550 μ 1溶液Α，充分混勻；(3) 65 V恒溫水浴2-4小時(shí)； (4)加溶液B 850 μ 1,充分混勻后冰浴15-30分鐘；(5) 12000rpm 常溫離心 I5 分鐘；(6)吸上清600-800 μ 1 (如有必要再次12000rpm常溫離心15分鐘，吸上清)；(7)加氯仿600 μ 1，充分混合2-3分鐘；(8) 12000rpm 離心 10 分鐘；(9)吸取上清約600 μ 1，加異丙醇600 μ 1，充分混合2_3分鐘；(10) 12000rpm 常溫離心 10 分鐘；(11)去上清，加Iml 70%的酒精洗滌沉淀；(12) 12000rpm 常溫離心 3-5 分鐘；(13)去上清，真空離心抽風(fēng)10分鐘；(14)加 TE 200-400 μ 1，55°C水浴 10 小時(shí)；(15)0. 7%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，電壓140-150伏，電泳30分鐘；
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(16) _20°C保存(基因組 DNA)。2、以基因組DNA為模板，用實(shí)施例1設(shè)計(jì)的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn) 物。PCR 反應(yīng)體系(25μ 1) 2. 5μ 1 IOXTaq DNA 聚合酶緩沖液(500mmol/L KCl, IOOmmol/ L Tris ‘ Cl, 15mmol/L MgCl2,0· 01 % 明膠)，2 μ 1 dNTPs (ATP、TTP、GTP、CTP 的濃度均為 2. 5mmol/L)，兩條引物的終濃度均為20ymol/L，lU Taq DNA聚合酶，50_100ng模板。PCR 反應(yīng)條件94°C 5min;然后 94°C 30S，57°C 30S，72°C 40S，36 個(gè)循環(huán)；最后 72°C 7min。3、將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳和基因分型以30%非變性聚丙烯酰胺貯液(丙烯酰胺甲叉雙丙烯酰胺=29 1)制作Imm 厚凝膠為例，具體過程如下(1)清洗制膠用的玻璃板并用蒸餾水沖洗干凈，烘干，用75%乙醇擦拭玻璃板，自 然晾干，裝板灌膠。(2)配置12%非變性丙烯酰胺凝膠。每35ml 12 %非變性丙烯酰胺膠14ml 30 %丙烯酰胺，3. 5ml 50%甘油，7ml 5 X TBE, 10. 2ml dH20, 280 μ 1 10% 過硫酸銨，20μ1 TEMED0(3)當(dāng)澆灌至離玻璃板上沿0. Icm時(shí)停止灌膠，插入梳子，室溫聚合1小時(shí)，多余的 丙烯酰胺4°C保存，隨時(shí)觀察凝膠聚合情況，并補(bǔ)加丙烯酰胺。(4)凝膠聚合好后，向電泳槽加入IXTBE，用注射器沖洗加樣孔。(5)預(yù)電泳10分鐘，同時(shí)準(zhǔn)備點(diǎn)樣。(6)取2ul步驟2的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物置于PCR管中，加8ul變性Buffer,離心混勻， 98°C變性10分鐘，迅速冰浴10分鐘，用微量移液器點(diǎn)樣。變性Bufffer 由98體積份的去 離子甲酰胺和2體積份的0. 5M pH = 8. OEDTA溶液組成。(7)打開電源，250伏電泳10分鐘，將電壓調(diào)至150伏，電泳18小時(shí)。(8)電泳結(jié)束后關(guān)上電泳儀，放出電泳液，小心剝下凝膠，置染色液中染色30min。 染色液由硝酸銀和ddH20組成，硝酸銀濃度為0. 2%。(9)染色結(jié)束，回收AgNO3,去離子水洗膠3遍，每次2分鐘，洗去多余染色液。(10)顯色液顯色，視單鏈清晰，背景淡黃(時(shí)間約10-20min)，立即倒掉顯色液，用 10%乙酸終止顯色反應(yīng)。顯色液為10% (體積百分含量)乙酸水溶液。(11)照相、保存。(12)根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行基因分型。將未發(fā)生缺失的等位基因定義為A，缺失的等位基因定義為a。AA基因型個(gè)體、Aa 基因型個(gè)體和aa基因型個(gè)體的電泳圖見圖1。綠殼基因純合子、綠殼基因雜合子和非綠殼 基因純合子中，各種基因型的頻率見表1。表113bp缺失標(biāo)記在綠殼基因純合子、綠殼基因雜合子和非綠殼基因純合子中的 頻率
權(quán)利要求
序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對(duì)。
2.權(quán)利要求1所述引物對(duì)在輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子、綠殼基因雜合子 和非綠殼基因純合子中的應(yīng)用。
3.輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子、綠殼基因雜合子和非綠殼基因純合子的方 法，包括如下步驟(1)提取待測(cè)雞的基因組DNA;(2)以基因組DNA為模板，用權(quán)利要求1所述引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；(3)根據(jù)PCR產(chǎn)物輔助鑒定如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，且如序列表的序列3所示，待 測(cè)雞為候選的綠殼基因純合子；如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有兩種，分別如序列表的序列3和序列4 所示，則待測(cè)雞為候選的綠殼基因雜合子；如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物只有一種，且如序列表的序列 4所示，則待測(cè)雞為候選的非綠殼基因純合子。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述待測(cè)雞為東鄉(xiāng)綠殼蛋雞。
5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于步驟(3)中，通過SSCP電泳檢測(cè)所述 PCR產(chǎn)物。
6.權(quán)利要求1所述的引物對(duì)在制備輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子、綠殼基因 雜合子和非綠殼基因純合子的試劑盒中的應(yīng)用。
7.一種輔助鑒定綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子、綠殼基因雜合子和非綠殼基因純合子 的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述的引物對(duì)。
8.權(quán)利要求1所述引物對(duì)，權(quán)利要求3至5中任一所述方法或權(quán)利要求7所述試劑盒 在綠殼蛋雞育種中的應(yīng)用。
9.一種綠殼蛋雞育種方法，是采用綠殼蛋雞中的綠殼基因純合子進(jìn)行育種；所述綠殼 基因純合子是通過權(quán)利要求3至5中任一所述方法鑒定得到的。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種輔助鑒定綠殼蛋雞的方法及其專用引物對(duì)。本發(fā)明提供了序列表的序列1和2所示DNA組成的引物對(duì)。本發(fā)明的方法包括如下步驟以基因組DNA為模板，用所述引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；如果PCR擴(kuò)增只有一種產(chǎn)物，且如序列3所示，待測(cè)雞為候選的綠殼基因純合子；如果PCR擴(kuò)增有兩種產(chǎn)物，分別如序列3和4所示，待測(cè)雞為候選的綠殼基因雜合子；如果PCR擴(kuò)增只有一種產(chǎn)物，且如序列4所示，待測(cè)雞為候選的非綠殼基因純合子。本發(fā)明在綠殼基因的定位區(qū)域內(nèi)找到與綠殼性狀顯著關(guān)聯(lián)的13bp缺失標(biāo)記，不論是公雞還是母雞均可在當(dāng)代的雛雞中進(jìn)行選擇。本發(fā)明可以彌補(bǔ)常規(guī)育種方法的不足，縮短育種周期，提高育種的準(zhǔn)確性。
文檔編號(hào)A01K67/027GK101935653SQ201010217329
公開日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2010年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月23日
發(fā)明者吳常信, 王哲鵬, 王曉通, 鄧學(xué)梅 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)