專利名稱：：一種庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及花粉檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
。具體的說，本發(fā)明涉及一種授粉用梨花粉質(zhì)量檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：梨是一種重要的溫帶落葉果樹，大多數(shù)栽培梨品種多為異花授粉型，栽培時(shí)須配置合適的授粉樹才能保證其產(chǎn)量品質(zhì)。傳統(tǒng)上解決這一問題的辦法是在同一果園中隔行或相鄰配置授粉樹，或在主栽品種上高位嫁接授粉品種。近年來農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展改變了傳統(tǒng)的梨種植方式，為了提高種植效益，許多商業(yè)栽培梨園在建園時(shí)不配置授粉樹，授粉問題通過在花期購買專用授粉用花粉通過人工授粉解決。授粉用梨花粉是一種重要生產(chǎn)資料，作為一種特殊的活體生物資源，其質(zhì)量的檢測技術(shù)難度較大。而花粉質(zhì)量的檢測意義重大，一是授粉用花粉作為一種商品在農(nóng)資市場上在現(xiàn)實(shí)流通，其質(zhì)量的科學(xué)檢測可為因質(zhì)量問題引起的權(quán)利糾紛提供法律服務(wù)，二是授粉用花粉質(zhì)量實(shí)際上直接關(guān)系到梨果的品質(zhì)和產(chǎn)量，影響到梨產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，所以一種授粉用梨花粉的科學(xué)檢測體系的研發(fā)是當(dāng)前梨產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的客觀需要。然而，長期以來，梨花粉質(zhì)量的檢測一直沿用傳統(tǒng)上單純對花粉發(fā)芽率的檢測方式。此種方式只能判斷出花粉的生活力，而對花粉所屬的樹種和品種、以對授粉后與主栽品種的親合性、花粉質(zhì)感作用的檢測是缺位的，作出的評價(jià)結(jié)果不能滿足生產(chǎn)和市場的要求。因此，亟需建立一套科學(xué)的授粉用花粉質(zhì)量檢測體系。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有花粉質(zhì)量檢測方法的不足，提供一種科學(xué)、簡便的庫爾勒香梨授粉專用梨花粉質(zhì)量檢測技術(shù)體系，既能為農(nóng)業(yè)行政管理部門提供一種花粉質(zhì)量的檢測技術(shù)體系，也能為相關(guān)花粉生產(chǎn)企業(yè)提供合格花粉的檢驗(yàn)技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明提供了一種庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的確證和定量方法。本發(fā)明的技術(shù)方案通過花粉生產(chǎn)商提供的花粉生產(chǎn)和質(zhì)檢文件初步認(rèn)定供檢花粉所屬的樹種和品種名，此種花粉用以庫爾勒香梨授粉時(shí)的質(zhì)量檢測由實(shí)驗(yàn)室檢測和田間檢測組成。實(shí)驗(yàn)室檢測主要從農(nóng)業(yè)生物學(xué)角度檢測花粉的純度、形態(tài)，以及檢測花粉群體的生活力；田間檢測主要是通過連被去雄結(jié)合人工授粉技術(shù)實(shí)現(xiàn)，通過考量花序坐果率、花朵坐果率和特種花粉的果實(shí)質(zhì)感特性來最終判斷花粉的內(nèi)在質(zhì)量。具體而言，本發(fā)明提供了一種庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的確證和定量方法，步驟如下1、在顯微鏡下通過計(jì)量學(xué)原理從形態(tài)上判斷供檢花粉的純度，主要依據(jù)的指標(biāo)是授粉用常規(guī)梨品種花粉的形態(tài)。2、通過發(fā)芽實(shí)驗(yàn)檢測花粉群體的活力，主要依據(jù)的指標(biāo)是將花粉播種在特殊配方的培養(yǎng)基上，通過特定的培養(yǎng)皿保濕，在25°C下培養(yǎng)4h，在顯微鏡下計(jì)量花粉的萌發(fā)率。3、通過連被去雄結(jié)合人工授粉技術(shù)實(shí)現(xiàn)。連被去雄技術(shù)的理論基礎(chǔ)是庫爾勒香梨為嚴(yán)格的蟲媒花植物類型，實(shí)驗(yàn)證明當(dāng)人工去除花被后，排除了因風(fēng)傳和蟲媒導(dǎo)致的天然雜交，免除了傳統(tǒng)上花前套袋、授粉后套袋的煩瑣。最后結(jié)合人工授粉，通過考量花序坐果率、花朵坐果率和果實(shí)質(zhì)感特性來最終判斷花粉的內(nèi)在質(zhì)量。進(jìn)一步，本發(fā)明提供了一種庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的確證和定量方法步驟如下1、將供檢花粉均勻撒落在厚度在0.8-1.Omm的載玻片上，光學(xué)顯微鏡下(X100)觀察其外觀形態(tài)。合格花粉的標(biāo)準(zhǔn)為形態(tài)飽滿，花粉壁無內(nèi)陷，橢圓形或卵圓形，具三條明顯萌發(fā)溝?；ǚ蹣O軸40μm士5μm，赤軸20μm士5μm?；ǚ奂兌仍?0%-100%，雜質(zhì)顆粒數(shù)0-15%。2、當(dāng)?shù)禺?dāng)年新采的花粉可直接用于花粉發(fā)芽力檢測，如供檢花粉是上年低溫貯存的花粉或外地經(jīng)冷鏈運(yùn)來的花粉，必須在25-30°C常溫下回潮處理方可用于花粉發(fā)芽力檢測。回潮的辦法是在一個(gè)干燥器中放一杯水，將花粉晾開在一張油光紙上，置于干燥器托盤上，然后上蓋密封8h?；ǚ郯l(fā)芽檢測用的培養(yǎng)基配方為蔗糖10%、瓊脂1%、硼酸0.03%，配制用水為蒸餾水。培養(yǎng)基配制過程中必須加熱并用玻棒攪拌均勻，高溫105°C滅菌0.5h。選用底壁厚度<Imm培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基層厚度<2mm，用頭發(fā)絲把花粉均勻播于培養(yǎng)基中，播種量控制在每一視野100士20(X100)，置于25°C室溫下培養(yǎng)4h，在顯微鏡下測定花粉萌發(fā)的百分率(X100)，加培養(yǎng)皿蓋。檢測時(shí)不斷微調(diào)對焦，在不同焦距下檢測每一花粉管是否伸長。隨機(jī)測定10個(gè)視野，計(jì)算均值，合格花粉平均花粉發(fā)芽率應(yīng)在>50%。3、在香梨氣球期選無風(fēng)早晚無風(fēng)時(shí)間，用左手捏住花柄，用右手大拇指和食指指甲將花被沿萼端環(huán)狀摘除，僅存子房和柱頭，即雌蕊花器部分，即柱頭、花柱、胎座和子房，對柱頭用棉簽或香煙濾嘴頭授以供檢花粉，每一花序數(shù)授粉花朵數(shù)2-3個(gè)，選邊花進(jìn)行去雄和授粉，將中心花疏除。每種花粉共設(shè)10次重復(fù)，單株小區(qū)或單枝小區(qū)，每一處理>50個(gè)花序。在7月上旬(六月生理落果后)調(diào)查每一處理田間花朵坐果率和花序坐果率，求其均值。授粉香梨果實(shí)應(yīng)具香梨典型的品種特性和商品果特征紡錘形，果實(shí)平均單果重^120g，天然脫萼率75%以上，特級(jí)果率>80%。合格花粉的花序坐果率>70%，花朵坐果率彡30%。本發(fā)明中采用的花粉發(fā)芽率的計(jì)算公式花粉發(fā)芽率=每一視野花粉管伸長花粉數(shù)/視野中花粉總數(shù)X100%。本發(fā)明中采用的花序坐果率的計(jì)算公式花序坐果率=坐果花序數(shù)/授粉花序總數(shù)X100%o本發(fā)明中采用的花朵坐果率的計(jì)算公式花朵坐果率=每一處理的坐果總數(shù)/(每一處理授粉花朵總數(shù))X100%。本發(fā)明中采用的天然脫萼率期計(jì)算公式天然脫萼率=脫萼果數(shù)/100個(gè)隨機(jī)采果X100%o本發(fā)明中采用的花粉純度的計(jì)算公式為花粉純度=合格花粉數(shù)/視野中顆?？倲?shù)X100%；雜質(zhì)顆粒數(shù)百分率=非花粉形態(tài)顆?？倲?shù)/視野中顆粒總數(shù)X100%本發(fā)明中采用香梨特級(jí)果執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)是NY/T585-2002，突頂果不超過10%，單果重在120-160g，無粗皮病、畸形果，果面清潔，果梗完整。以上本發(fā)明采用的計(jì)算方法、公式，以及執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)都為本領(lǐng)域常用，也為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的范圍。本發(fā)明涉及到的上述人工授粉方法為單花點(diǎn)授方式。如通過背負(fù)式噴霧器、梨專用授粉器或人工抖授方式進(jìn)行授粉亦可?；ǚ叟c填料的配比與授粉作業(yè)方法按常規(guī)進(jìn)行。通過實(shí)施本發(fā)明具體的
發(fā)明內(nèi)容，可以達(dá)到以下效果1.本發(fā)明通過從受檢花粉純度、活力和品種(花粉質(zhì)感)三個(gè)方面實(shí)現(xiàn)了對授粉用花粉授粉前和授粉后的全程和外觀形態(tài)以及內(nèi)在種性的全面檢測，檢測項(xiàng)目周全，檢測程序完整，檢測過程既充分考慮了庫爾勒香梨對授粉花粉要求的特殊性，也兼顧了目前我國授粉用花粉制備和經(jīng)營的現(xiàn)實(shí)國情一部分花粉是上年花期所制備，在低溫下貯藏了一個(gè)生長季。同時(shí)，本發(fā)明創(chuàng)造性地將花粉形態(tài)鑒定和花粉的人工培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室分析與坐果率調(diào)查和果實(shí)特征調(diào)查的田間調(diào)查分析有機(jī)結(jié)合，建立了一套完整適用性強(qiáng)的庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的確證和定量方法。2.檢測技術(shù)簡便、適用，本發(fā)明所需實(shí)驗(yàn)設(shè)備和材料一般縣級(jí)農(nóng)技中心實(shí)驗(yàn)室完全具備，檢測方法快速、便捷，在本發(fā)明中，第一、二步檢測可授粉前1-2天完成，第三步可在7月中旬完成，適合于市場管理部門、農(nóng)業(yè)行政管理部門以及花粉生產(chǎn)企業(yè)對花粉產(chǎn)品質(zhì)量的實(shí)時(shí)監(jiān)控。3.本發(fā)明中用連被去雄法不進(jìn)行人工套袋的前提下，通過人工授粉來檢測特種花粉的坐果率是科學(xué)的，也是可靠的，這種方法免去了傳統(tǒng)上人工套袋的煩瑣，是一個(gè)創(chuàng)新，不僅可以用以花粉檢測，此項(xiàng)技術(shù)也可廣泛用于雜交育種工作中以提高工作效率。圖1是供檢花粉生活力檢測時(shí)花粉在培養(yǎng)基上的播種示意圖，圖中，1為花粉粒、2為培養(yǎng)皿蓋、3為培養(yǎng)基、4為培養(yǎng)皿。圖2是氣球期梨單花花器形態(tài)示意圖，圖中，5為花被、6為柱頭、7為子房。圖3是對氣球期梨單花進(jìn)行人工連被去雄后雌花器形態(tài)示意圖，圖中，8為花柱、9為胎座。具體實(shí)施例方式下面，舉實(shí)施例說明本發(fā)明，但是，本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施例。另外，在下述的說明中，如無特別說明，％皆指m/m質(zhì)量百分比。本發(fā)明中涉及到的主要設(shè)備和材料有設(shè)備普通光學(xué)顯微鏡，載玻片，計(jì)數(shù)器，培養(yǎng)皿，干燥器，高壓滅菌鍋，光照培養(yǎng)箱材料蔴糖(化學(xué)純)、瓊脂(化學(xué)純)、硼酸(化學(xué)純)，蒸餾水本發(fā)明中選用的所有試劑和儀器都為本領(lǐng)域熟知選用的，但不限制本發(fā)明的實(shí)施，其他本領(lǐng)域熟知的一些試劑和設(shè)備都可適用于本發(fā)明以下實(shí)施方式的實(shí)施。實(shí)施例一1、將供檢花粉均勻撒落在厚度在0.8-1.Omm的載玻片上，在光學(xué)顯微鏡下(X100)觀察其形態(tài)。選擇合適視野，調(diào)整好焦距，對視野中一顆粒進(jìn)行形態(tài)判斷。合格花粉形態(tài)飽滿，花粉壁無內(nèi)陷，橢圓形或卵圓形，具三條明顯萌發(fā)溝，極軸40士5μm，赤軸在20士5μπι。合格花粉純度應(yīng)在80%以上，雜質(zhì)顆粒數(shù)低于15%。供檢每品種花粉觀察視野不小于10?；ǚ奂兌鹊挠?jì)算公式為花粉純度=合格花粉數(shù)/視野中顆?？倲?shù)χιοο%。雜質(zhì)顆粒數(shù)百分率=非花粉形態(tài)顆?？倲?shù)/視野中顆?？倲?shù)X100%。2、花粉發(fā)芽檢測用的培養(yǎng)基配方為蔗糖10%、瓊脂1%、硼酸0.03%，配制用水為蒸餾水。培養(yǎng)基配制過程中必須加熱并用玻棒攪拌均勻，高溫(105°C)滅菌0.5h。選用底壁厚度<Imm培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基層厚度<2mm，用頭發(fā)絲把花粉均勻播于培養(yǎng)基中，播種量控制在每一視野100士20(X100)，加培養(yǎng)皿蓋。置于光照培養(yǎng)箱中在30°C下培養(yǎng)4h，在顯微鏡下測定花粉萌發(fā)率(X100)。檢測時(shí)不斷微調(diào)對焦，在不同焦距下檢測每一花粉管是否伸長。隨機(jī)測定10個(gè)視野，計(jì)算均值。合格花粉平均花粉發(fā)芽率應(yīng)在>50%。3、在香梨氣球期選無風(fēng)早晚時(shí)間，用左手捏住花柄，右手大拇指和食指指甲將花被沿萼端環(huán)狀摘除，僅存雌蕊花器部分，即柱頭、花柱、胎座和子房。對柱頭用棉簽或香煙濾嘴頭授以供檢花粉，每一花序數(shù)授粉花朵數(shù)不小于3，選邊花進(jìn)行去雄和授粉，將中心花疏除。以授粉器或抖授方式進(jìn)行人工授粉亦可。每種花粉共設(shè)10次重復(fù)，單株小區(qū)或單枝小區(qū)，每一處理>50個(gè)花序。在7月上旬調(diào)查每一處理田間花朵坐果率和花序坐果率，求其均值。授粉香梨果實(shí)應(yīng)具香梨典型的品種特性和商品果特征紡錘形，果實(shí)平均單果重^120g，脫萼率75%以上，一級(jí)果率>80%。合格花粉的花序坐果率>70%，花朵坐果率彡20%。實(shí)施例二本領(lǐng)域熟知，去雄和套袋技術(shù)是人工雜交育種中常用的兩項(xiàng)基本技術(shù)。去雄技術(shù)的目的之一是人工雜交兩性完全花時(shí)為防止發(fā)生天然自交的技術(shù)，而套袋技術(shù)的目的則是防止發(fā)生風(fēng)力傳粉或昆蟲傳粉導(dǎo)致的天然雜交。梨的花器是完全花，并且大多數(shù)品種表現(xiàn)為異花植物，自交授粉坐果率極低，如香梨不足2%。傳統(tǒng)上對去雄的花一般要結(jié)合套袋以防止發(fā)生風(fēng)力傳粉或昆蟲傳粉導(dǎo)致的天然雜交。本發(fā)明采用在蕾期，即氣球期，通過人工連被去雄，由于梨花此時(shí)尚未開放，花藥也未開裂，完全排除了天然雜交和自交的可能性。本發(fā)明采用對去雄的花不進(jìn)行套袋，在連被去雄條件下，對于蟲媒傳粉的梨而言，發(fā)生天然雜交的可能性極低，原因是去雄后蜂類和蠅類等傳粉昆蟲無法在無花被的胎座上因缺乏足夠的支撐力而著陸，二則對蟲媒植物而言，空氣中花粉密度在理論上很低，落在柱頭上的幾率更低，無法完全滿足梨正常發(fā)育所需的萌發(fā)花粉數(shù)(至少要>6個(gè)花粉/單花)。本發(fā)明為了檢驗(yàn)這一技術(shù)的可靠性，證實(shí)我們的上述推測，實(shí)施了如下田間實(shí)驗(yàn)一是調(diào)查去雄后單花在單位時(shí)間的訪問量，二是統(tǒng)計(jì)了去雄后不進(jìn)行套袋前提下梨花的花序天然結(jié)實(shí)率。上述兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均以不去雄作為對照。有關(guān)結(jié)果如下表所示表1香梨和鴨梨人工連被去雄后昆蟲訪問量統(tǒng)計(jì)品種處理花序數(shù)坐果花序數(shù)天然花序坐果率(％)備注<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>通過表1和2的結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明中用連被去雄法在不進(jìn)行人工套袋的前提下，通過人工授粉來檢測特種花粉的坐果率是科學(xué)的，也是可靠的。這種方法免去了傳統(tǒng)上人工套袋的煩瑣，是一個(gè)創(chuàng)新，不僅可用以花粉檢測，也可廣泛用于雜交育種工作中以提高工作效率。權(quán)利要求一種庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的方法，通過對花粉純度、發(fā)芽率和人工授粉后的香梨坐果率進(jìn)行三級(jí)檢測，其特征在于，授粉用梨花粉質(zhì)量檢測方法步驟如下(1)在顯微鏡下通過計(jì)量學(xué)原理從形態(tài)上判斷供檢花粉的純度，花粉純度在80％-100％，雜質(zhì)顆粒數(shù)0-15％；(2)通過發(fā)芽實(shí)驗(yàn)檢測花粉群體的活力，將花粉播種在培養(yǎng)基上，培養(yǎng)皿保濕，在25℃下培養(yǎng)4h，在顯微鏡下計(jì)量花粉的萌發(fā)率，合格花粉平均花粉發(fā)芽率應(yīng)在≥50％；(3)通過連被去雄結(jié)合人工授粉技術(shù)實(shí)現(xiàn)，通過考量花序坐果率、花朵坐果率和特種花粉的果實(shí)質(zhì)感特性來最終判斷花粉的內(nèi)在質(zhì)量。2.依照權(quán)利要求1所述的庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的方法，其特征在于，所述的授粉用梨花粉質(zhì)量檢測方法步驟如下(1)在顯微鏡下通過計(jì)量學(xué)原理從形態(tài)上判斷供檢花粉的純度，被檢測的晾干供檢花粉用毛筆均勻撒播于厚度0.8-1.0mm的載玻片上，置于光學(xué)顯微鏡下觀察；供檢花粉應(yīng)具有梨花粉典型的外部特征形態(tài)飽滿，花粉壁無內(nèi)陷，橢圓形或卵圓形，具三條明顯萌發(fā)溝，極軸40士5iim，赤軸在20士5iim，花粉粒占被檢顆粒數(shù)比率，即花粉純度在80%-100%，雜質(zhì)顆粒數(shù)0-15%；(2)通過發(fā)芽實(shí)驗(yàn)檢測花粉群體的活力，選擇培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，底壁厚度<lm，鋪成<2mm厚度的一薄層，冷卻，用頭發(fā)絲把花粉均勻播于培養(yǎng)基中，播種量控制在每一視野100士20(X100)，加蓋，置于25°C室溫下培養(yǎng)4h，在顯微鏡下測定花粉萌發(fā)率，合格花粉平均花粉發(fā)芽率應(yīng)在>50%；(3)通過連被去雄結(jié)合人工授粉方法實(shí)現(xiàn)，在香梨氣球期選無風(fēng)早晚時(shí)間，用左手捏住花柄，用右手大拇指和食指指甲將花被沿萼端環(huán)狀摘除，僅存子房和柱頭，對柱頭用棉簽或香煙濾嘴頭授以供檢花粉，每一花序數(shù)授粉花朵數(shù)2-3朵，選邊花進(jìn)行去雄和授粉，將中心花疏除；每種花粉共設(shè)10次重復(fù)，單株小區(qū)或單枝小區(qū)，每一處理>50個(gè)花序；在8月上旬調(diào)查每一處理田間花朵坐果率和花序坐果率，求其均值，授粉香梨果實(shí)應(yīng)具香梨典型的品種特性和商品果特征紡錘形，果實(shí)平均單果重>120g，脫萼率75%以上，一級(jí)果率彡80%，合格花粉的花序坐果率>70%，花朵坐果率>30%。3.依照權(quán)利要求1所述的庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)基配方為蔗糖10%、瓊脂1%、硼酸0.03%，配制用水均為蒸餾水。4.依照權(quán)利要求1或2任意所述的庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的方法，其特征在于，所述的花粉為當(dāng)?shù)禺?dāng)年新采的花粉時(shí)可直接用于花粉發(fā)芽力檢測。5.依照權(quán)利要求1或2任意所述的庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的方法，其特征在于，所述的花粉是上年低溫貯存的花粉或外地經(jīng)冷鏈運(yùn)來的花粉，應(yīng)在25-30°C常溫下回潮處理后用于花粉發(fā)芽力檢測。6.依照權(quán)利要求5所述的庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的方法，其特征在于，所述的回潮，是在一個(gè)干燥器中放一杯水，將花粉晾開在一張油光紙上，置于干燥器托盤上，然后上蓋密封8h。全文摘要本發(fā)明公開了一種庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測的方法，通過對花粉純度、發(fā)芽率和人工授粉后的香梨坐果率進(jìn)行三級(jí)檢測，具體采用在顯微鏡下通過計(jì)量學(xué)原理從形態(tài)上判斷供檢花粉的純度在80％-100％，雜質(zhì)顆粒數(shù)0-15％；通過發(fā)芽實(shí)驗(yàn)檢測花粉群體的活力，將花粉播種在培養(yǎng)基上，保濕在25℃下培養(yǎng)4h，在顯微鏡下計(jì)量花粉的萌發(fā)率，合格花粉平均花粉發(fā)芽率應(yīng)在≥50％；通過連被去雄結(jié)合人工授粉技術(shù)實(shí)現(xiàn)，通過考量花序坐果率、花朵坐果率和特種花粉的果實(shí)質(zhì)感特性來最終判斷花粉的內(nèi)在質(zhì)量。本發(fā)明創(chuàng)造性地將實(shí)驗(yàn)室分析與田間調(diào)查分析有機(jī)結(jié)合，建立了一套完整適用性強(qiáng)的庫爾勒香梨授粉用花粉質(zhì)量檢測方法，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。文檔編號(hào)A01H1/02GK101832943SQ20101018547公開日2010年9月15日申請日期2010年5月28日優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日發(fā)明者何天明,吳玉霞,李疆,覃偉銘,韓冰申請人:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)