專利名稱：一種用于小型實(shí)驗(yàn)動物灌注固定的器械的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種實(shí)驗(yàn)動物固定器械，特別是涉及一種用于小型實(shí)驗(yàn)動 物灌注固定的器械。
背景技術(shù)：
灌注固定法在腦缺血/缺氧相關(guān)疾病的研究中應(yīng)用十分廣泛，它對神經(jīng)組織 (腦、脊髓)的快速沖洗、固定作用是任何一種離體固定法都無法替代的。有 文獻(xiàn)報(bào)道該固定法應(yīng)用于較大動物的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)(貓、兔、狗)中較多見。迄今 為止，對于體重極小的動物使用此種固定法卻少有報(bào)道，相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)裝置也未
見涉及。本裝置正是利用體重只有10-20克，C57BL/6N基因缺陷型小鼠，采用 灌注固定技術(shù)而研制的用于動物醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的實(shí)用型機(jī)械。
二十一世紀(jì)危害人類健康的常見病、多發(fā)病中以心血管病居于榜首，其中 不管是原發(fā)或是繼發(fā)的，均以不同誘因所導(dǎo)致的腦組織、心血管組織最終缺血/ 缺氧為其主要的發(fā)病機(jī)制。顯而易見，腦和心血管缺血/缺氧的研究就顯得迫在 眉睫。為此，我們利用C57BL/6N小鼠腦底動脈環(huán)(Willis)先天缺如(缺血/ 缺氧發(fā)生時，腦血流供應(yīng)代償消失)這一生理學(xué)特性，將其雙側(cè)頸總動脈與迷 走神經(jīng)夾閉10分鐘，造成整個腦組織完全的缺血/缺氧，而后恢復(fù)血流，即為 再灌注，待動物存活24小時止，在2個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓的高壓氧艙中持續(xù)治療45 分鐘，然后將動物快速致死取腦，進(jìn)行隨后的抗缺氧/缺血及高壓氧治療機(jī)制方 面的相關(guān)研究。
基于C57BL/6N小鼠體重極輕這一生物學(xué)特性，可推測其腦組織 加細(xì)小、 嬌嫩(約幾克)。事實(shí)也證明了我們推測的正確性。稍有醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)知識的人可知，腦組織位于顱腔內(nèi)，其表面還有與之相連的十二對腦神經(jīng)根出入顱腔，其外周 又被若干塊顱骨所包繞，在生理學(xué)上講，這是腦組織的先天屏障作用；但這也 為我們?nèi)〉猛暾娜X組織進(jìn)行科學(xué)研究增加了很大難度?？上攵?，稍有操 作不慎，既可前功盡棄，造成取材的失敗。還有，動物處死血流供應(yīng)停止后， 腦組織在短時間內(nèi)極易造成自身的融解腐敗。故在摘取腦組織時操作確保迅速、 快捷，以盡量保持組織結(jié)構(gòu)的新鮮與完整。否則，時間稍久，腦細(xì)胞將發(fā)生一 系列的變性、壞死，同樣影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)、可靠性。
再者，血液中含有大量的生物大分子，其中不乏許多內(nèi)源性的過氧化物酶 類。而我們探討的正是超氧化物歧化酶(SOD-1)在腦缺血/缺氧中蛋白表達(dá)發(fā) 生的變化，如若不將腦組織中的血液沖洗干靜，定會發(fā)生內(nèi)源、外源氧化物酶 的相互干擾。
因此，經(jīng)心灌注固定是在摘取腦組織實(shí)驗(yàn)過程中唯一可行的客觀選擇。本 實(shí)用新型的目的是提供一種用于小型實(shí)驗(yàn)動物灌注固定的器械。
發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型的器械包括支架、液體盛放裝置、液體輸送管道、三通管、液 體選擇/切換裝置、流速調(diào)控裝置以及穿剌裝置。利用該裝置，首先通過液體選 擇/切換裝置選擇用足量的室溫生理鹽水沖凈固定在試驗(yàn)臺上的小鼠全身的血 液，然后選擇/切換固定液經(jīng)心灌注后，沿全身血管完成一次體循環(huán)和肺循環(huán)， 而后回到右心室。因此，固定液流經(jīng)了動物全身的所有組織，所有的組織均得 到固定。當(dāng)然腦組織也不例外。經(jīng)過固定液浸泡的腦，具有了一定硬度。同時 也將其所有的組織形態(tài)維持在生活狀態(tài)。這時，我們開顱取腦勢必就顯得輕而 易舉了。所以，選用經(jīng)心灌注固定法對維持腦組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)乃至全腦的完 好性具有關(guān)鍵意義。

圖1是本實(shí)用新型的用于小型實(shí)驗(yàn)動物灌注固定的器械的示意圖。
，具體實(shí)施方式
參照附圖1，我們將對本實(shí)用新型的器械的構(gòu)成和使用進(jìn)一步進(jìn)行說明。 本實(shí)用新型的用于小型實(shí)驗(yàn)動物灌注固定的器械包括
支架1:該支架是具有穩(wěn)固底座的鐵質(zhì)"T"型支架，選用具有穩(wěn)定底座的 鐵架，目的保持裝置的穩(wěn)定性，架高可視動物實(shí)驗(yàn)臺的不同需求可調(diào)。支架兩 側(cè)是左右等長且與地面平行的側(cè)臂，臂外側(cè)端向下制成"V"型彎勾，以分別懸 掛裝有生理鹽水和灌注液的液體盛放裝置所用，液體盛放裝置與動物水平面相 距50厘米。其原因有二第一，根據(jù)液體壓強(qiáng)計(jì)算公式可知，液體壓強(qiáng)與液面 的高度呈正相關(guān)。經(jīng)過作者反復(fù)摸索，液面與動物水平面相距50厘米的高度所 產(chǎn)生的靜液壓剛好滿足可將沖洗液、灌注液輸送到動物全身各級大、中、小 血管，進(jìn)而達(dá)到?jīng)_洗、固定的目的；第二，這個壓力的恒定也可維持各級血管 的結(jié)構(gòu)完整性，不會引起由于壓力大小變化，造成動物血管的破裂，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn) 的失敗。另外，動物開胸將液體導(dǎo)入心臟等操作均需在體視顯微鏡下進(jìn)行，一 旦手術(shù)完成，要求沖洗、灌注液事先備好，以達(dá)到爭分奪秒的效果，更重的是， 還可避免由于液體的更換，將空氣帶入液體內(nèi)，近一步造成血管的堵塞，同樣 可致灌注結(jié)果的不理想。
液體盛放裝置2:可選用兩個玻璃質(zhì)帶有標(biāo)準(zhǔn)刻度，、上端留有開口、下端 逐漸變細(xì)呈直徑約為1厘米、長約5厘米的玻璃管的吊瓶，其上口保持開放， 與外界相通，以維持一定的靜液壓。
液體輸送管道3和三通管6:液體輸送管道可由三根乳膠管組成，兩根乳膠 管的一端分別與液體盛放裝置，如吊瓶相緊密連通，兩乳膠管各長50厘米，乳膠管另一端分別與硬塑料質(zhì)地的三通管6的兩個開口連通，三通管6的第三開 口與一根帶有透明懸液壺的乳膠管相連，通過透明的懸液壺可觀察液體灌注時 的流速，以便隨時調(diào)節(jié)流速，控制流量。
液體選擇/切換裝置4和液體選擇/切換裝置5:液體選擇/切換裝置位于與 吊瓶相連通的乳膠管上，用于進(jìn)行液體的選擇/切換。
流速調(diào)控裝置7:流速調(diào)控裝置位于透明懸液壺的下方，可以隨時調(diào)節(jié)流速、 控制流量。
穿刺裝置8:將插入動物心臟的穿刺裝置設(shè)計(jì)為lmm直徑軟管，其原因有二-首先，動物心臟極??；其次，太硬的裝置極易將心臟毀壞。 裝置使用過程如下
沖洗液的灌注先將造模成功的小鼠9仰臥位固定于手術(shù)臺10上，兩側(cè)
盛液瓶2裝有事先配制的室溫的沖洗液及4。C保存的固定液，暴露動物心臟， 于左心尖部將軟塑管8端口小心插入至右心耳，先灌沖洗液(生理鹽水)，流 速控制以快為最佳。要求10min內(nèi)完成，在這一過程中，可見右心耳流出液的 顏色由開始的鮮紅逐漸變淡粉色為止，總液量為30毫升。整個操作在體視鏡 下完成。
沖洗液灌注完成后，關(guān)閉同側(cè)的螺懸夾，打開對側(cè)螺懸夾，進(jìn)行固定液 的灌注，流速控制為前1/2液量流速稍快(30滴/分鐘)，后1/2緩慢(20滴/ 分鐘)，其流速控制通過懸液壺流速觀查決定，要求30min內(nèi)完成。隨后剪 開右心耳，拔出穿刺心臟裝置，動物翻轉(zhuǎn)呈腹臥狀。快速剪開頭部皮膚，撬開 顱骨，剪開硬、軟腦膜，迅速摘取全腦，沿正中裂輕輕剖開呈左右相等的兩部 分，用生理鹽水稍沖洗，將腦組織重新放入固定液中，進(jìn)行后固定。待條件成 熟，既可進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究
權(quán)利要求1、一種用于小型實(shí)驗(yàn)動物灌注固定的器械，包括支架，該支架是具有穩(wěn)固底座的鐵質(zhì)“T”型支架，架高可視動物實(shí)驗(yàn)臺的不同需求可調(diào)；支架兩側(cè)是左右等長且與地面平行的側(cè)臂，臂外側(cè)端向下制成“V”型彎勾，以分別懸掛裝有生理鹽水和灌注液的液體盛放裝置所用；液體盛放裝置，可選用兩個玻璃質(zhì)帶有標(biāo)準(zhǔn)刻度、上端留有開口、下端逐漸變細(xì)呈直徑為1厘米、長5厘米的玻璃管的吊瓶，其上口保持開放，與外界相通，以維持一定的靜液壓；液體輸送管道，液體輸送管道可由三根乳膠管組成，兩根乳膠管的一端分別與液體盛放裝置相緊密連通，兩乳膠管各長50厘米，兩根乳膠管另一端分別與硬塑料質(zhì)地的三通管的上端兩個開口連通，三通管的下端開口與一根帶有透明懸液壺的乳膠管相連，通過透明的懸液壺可觀察液體灌注時的流速，以便隨時調(diào)節(jié)流速，控制流量；液體選擇/切換裝置，位于與吊瓶相連通的乳膠管上，用于進(jìn)行液體的選擇/切換；流速調(diào)控裝置，位于透明懸液壺的下方，可以隨時調(diào)節(jié)流速、控制流量；穿刺裝置，將插入動物心臟的穿刺裝置設(shè)計(jì)為1mm直徑軟管。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于小型實(shí)驗(yàn)動物灌注固定的器械，其中所述液體盛 放裝置與動物水平面相距50厘米。
專利摘要本實(shí)用新型的器械包括支架、液體盛放裝置、液體輸送管道、三通管、液體選擇/切換裝置、流速調(diào)控裝置以及穿刺裝置。利用該裝置，首先通過液體選擇/切換裝置選擇用足量的生理鹽水沖凈固定在試驗(yàn)臺上的實(shí)驗(yàn)動物全身的血液，然后選擇/切換固定液經(jīng)心灌注后沿全身血管完成一次體循環(huán)和肺循環(huán)，而后回到右心室。由此，得到固定的腦組織。經(jīng)過固定液浸泡的腦，具有了一定硬度。同時也將其所有的組織形態(tài)維持在生活狀態(tài)。因此，利用本器械經(jīng)心灌注固定法對維持腦組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)乃至全腦的完好性具有關(guān)鍵意義。
文檔編號A61D7/00GK201394094SQ20092015200
公開日2010年2月3日 申請日期2009年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月23日
發(fā)明者李寶紅, 旭 賀 申請人:首都醫(yī)科大學(xué)