專利名稱：體內(nèi)誘導(dǎo)刺參產(chǎn)卵的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種體內(nèi)誘導(dǎo)刺參產(chǎn)卵方法，尤其是一種操作簡單，耗時短， 同步產(chǎn)卵且卵子排放量大、質(zhì)量好，可極大提高催產(chǎn)效率、受精率及孵化率的 體內(nèi)誘導(dǎo)刺參產(chǎn)卵的方法。
背景技術(shù)：
海參做為我國和東南亞等太平洋和西印度洋沿岸國家人們餐桌上的佳肴美 昧早已聞名于世，特別是世界華人一直有吃海參"食補(bǔ)"的習(xí)慣，如今海參因 具有豐富的營養(yǎng)價值已越來越受人們的青睞。需求的增加導(dǎo)致采捕強(qiáng)度增大， 造成我國自然生長的剌參資源量和產(chǎn)量急劇下降，而刺參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)隨之迅猛發(fā) 展起來。剌參增養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展導(dǎo)致苗種需求量增加，然而現(xiàn)有剌參產(chǎn)卵效率卻 一直遏制苗種產(chǎn)量，直接影響了刺參養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。目前，海參產(chǎn)卵主要是通過自然產(chǎn)卵和人工剌激誘導(dǎo)產(chǎn)卵兩個途徑。自然 產(chǎn)卵要求親參性腺發(fā)育充分成熟，其產(chǎn)卵時間和產(chǎn)卵量不能人為控制，常因傍 晚或夜間產(chǎn)卵、排精、產(chǎn)卵量過大、精液過多等原因而造成水質(zhì)敗壞，繼而導(dǎo) 致受精卵大量解體的現(xiàn)象。人工刺激誘導(dǎo)產(chǎn)卵最大的優(yōu)點(diǎn)是能夠人為控制刺參 的產(chǎn)卵時間和產(chǎn)卵量，避免自然產(chǎn)卵所存在的水質(zhì)敗壞等問題，但是現(xiàn)有的人 工刺激誘導(dǎo)產(chǎn)卵方法還是存在著不同程度的問題，仍不能最大程度滿足刺參苗 種生產(chǎn)的需要。常用的人工刺激誘導(dǎo)產(chǎn)卵分為體外及體內(nèi)誘導(dǎo)兩種，體外誘導(dǎo)是通過溫差 法和陰干流水等刺激的方法，但誘導(dǎo)效果不穩(wěn)定，海參產(chǎn)卵量少(每只雌參產(chǎn)卵量一般在100萬粒以下)，約占總懷卵量的20%左右，往往需要隔天多次催 產(chǎn)才能滿足生產(chǎn)的需要，勞動強(qiáng)度高、育苗時間長，否則只能增加種參數(shù)量， 加大了育苗成本。體內(nèi)誘導(dǎo)有單純使用KC1注射催產(chǎn)的方法，此方法不但同自 然產(chǎn)卵一樣，存在著對親參的性腺成熟度要求高、產(chǎn)卵量極少的問題，而且因 注射量要求0.5mol/L、 l~2ml，很容易引起親參排出包括性腺在內(nèi)的內(nèi)臟，因此 不能應(yīng)用于剌參苗種的生產(chǎn)上。還有一種體內(nèi)誘導(dǎo)的方法，既是文獻(xiàn)(Developmental biology, 326 (2009): 169-175)關(guān)于五肽NGIWY酰胺及其衍生物NGLWY酰胺的報(bào)道(Asn-Gly-Leu-Trp-Tyr-NH2)。文獻(xiàn)雖然指出體內(nèi)注射NGLWY酰 胺能夠誘導(dǎo)刺參精卵排放并公開了每個個體的注射量為0.1% (v/w)、最佳濃 度為lnmol/L，但經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明單獨(dú)注射NGLWY產(chǎn)卵量少，如平均體重為210 克的成熟親參，平均產(chǎn)卵量只有43萬粒，浮游幼體期間成活率只有20~50%，稚 參變態(tài)率只有15~30%。 發(fā)明內(nèi)容-本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述技術(shù)問題，提供一種操作簡單， 耗時短，同步產(chǎn)卵且卵子排放量大、質(zhì)量好，可極大提高催產(chǎn)效率、受精率及 孵化率的體內(nèi)誘導(dǎo)刺參產(chǎn)卵的方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是 一種體內(nèi)誘導(dǎo)刺參產(chǎn)卵的方法，其特征在于按 如下步驟進(jìn)行a. 配制催產(chǎn)劑將NGLWY酰胺溶于超純水中配置成ljimol/L的母液，然后將母液溶于 0.5mol/L的KC1海水溶液中，制成lnmol/L的催產(chǎn)劑；b. 選取親參選取體重至少200克的性腺成熟親參；c. 注射催產(chǎn)劑將體積與親參體重比為0.1%ml/g且小于0.3ml的催產(chǎn)劑從刺參背部注入體 腔進(jìn)行體內(nèi)誘導(dǎo)；d. 收集精卵。本發(fā)明是將NGLWY酰胺和KC1的混合溶液作為人工催產(chǎn)劑對刺參進(jìn)行體 內(nèi)注射催產(chǎn)。NGLWY酰胺和KC1的合理配伍、相互作用，直接作用于刺參性 腺，誘導(dǎo)刺參卵母細(xì)胞成熟和脫濾泡， 一次催產(chǎn)基本保證全部個體都排放精卵， 催產(chǎn)率達(dá)到90%以上。其用量可保證親身不排臟且排卵率大大提高，平均產(chǎn)卵 量可提高到400萬粒，達(dá)到了總懷卵量的70%以上，極大的提高了親參利用率， 即避免了單獨(dú)注射KC1所存在的引用量大引起親參排臟的問題，也解決了單獨(dú) 使用NGLWY酰胺所存在的產(chǎn)卵量小的問題，具有操作簡單、耗時短、成本低 等優(yōu)點(diǎn)。卵子同步排放且質(zhì)量好，直接提高了受精率和孵化率(均在98%以上)， 浮游幼體期間成活率達(dá)到50~90%,稚參變態(tài)率達(dá)到40~80%，大大提高苗種產(chǎn) 量。本發(fā)明所使用的催產(chǎn)劑無毒副作用且所需劑量少，催產(chǎn)后的親參仍可正常 養(yǎng)殖、生長，進(jìn)一步降低了苗種培育成本，增加了企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施方式
-實(shí)施例1:a. 配制催產(chǎn)劑將購于上海生工生物公司，純度大于98%的NGLWY酰胺溶于超純水中配 置成lpmol/L的母液，-20°(:冰箱保存，注射前將母液溶于0.5mol/L的KC1海 水溶液中，制成lnmol/L的催產(chǎn)劑。b. 選取親參5月份采集來自大連仙浴灣養(yǎng)殖場的親參28頭，親參體重在200g 260g之 間，平均體重為224g，采集的親參運(yùn)至?xí)吼B(yǎng)池中暫養(yǎng)24h。c. 注射催產(chǎn)劑用lml的醫(yī)用一次性注射器將催產(chǎn)劑注射入剌參性腺周圍，注射劑量(ml) 為親參體重(g)的0.1% (0.20 (X26m)，親參經(jīng)注射催產(chǎn)劑后分別置于裝有溫 度為17.5°C的過濾海水塑料箱體中，雄性刺參在30min內(nèi)開始沿塑料箱壁爬行 至海水表面，頭部開始左右擺動，40min后開始排放精子。從60min開始，雌 參迅速沿箱壁爬行到水面并排放卵子，有的雌參在箱底即進(jìn)行排卵，精卵排放 持續(xù)大約40min。d. 按照現(xiàn)有技術(shù)收集精卵。 用血球計(jì)數(shù)板檢測卵子密度并計(jì)算排卵量。催產(chǎn)效果28頭親參全部排精產(chǎn)卵(排精16頭，產(chǎn)卵12頭)，12頭雌性 親參排卵量在270萬粒到520萬粒之間，平均排卵量為350萬粒左右。檢測排卵量后，按照現(xiàn)有技術(shù)人工受精和孵化、選育、浮游幼體培育及幼 體的變態(tài)、附著、培育并在顯微鏡下檢測受精率和孵化率。觀察結(jié)果表明卵子 的受精率和受精卵的孵化率均在98%以上，受精卵在12h后發(fā)育成旋轉(zhuǎn)囊胚、 24h后發(fā)育成小耳幼體。浮游幼體的成活率為73%、稚參變態(tài)率為67.2%。實(shí)施例2:除b步驟選取親參與實(shí)施例1不同外，其他步驟同實(shí)施例1。5月份采集來自大連普蘭店石河的親參110頭，親參體重在240g 350g之間，平均體重為274g，采集的親參在暫養(yǎng)池中暫養(yǎng)72h，暫養(yǎng)期間不投喂馎料。催產(chǎn)劑的注射量為0.24 0.3ml。排精產(chǎn)卵時間與實(shí)例1基本一致，共有54頭親參排精，52頭親參產(chǎn)卵，雌參產(chǎn)卵量在292萬粒到600萬粒之間，平均產(chǎn)卵量為495.4萬粒。人工受精和孵化、選育、浮游幼體培育及幼體的變態(tài)、附著及培育均同實(shí)施例1，浮游幼體成活率為74.6%,幼體變態(tài)率為68%。
權(quán)利要求
1.一種體內(nèi)誘導(dǎo)刺參產(chǎn)卵的方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行a.配制催產(chǎn)劑將NGLWY酰胺溶于超純水中配置成1μmol/L的母液，然后將母液溶于0.5mol/L的KCl海水溶液中，制成1nmol/L的催產(chǎn)劑；b.選取親參選取體重至少200克的性腺成熟親參；c.注射催產(chǎn)劑將體積與親參體重比為0.1％ml/g且小于0.3ml的催產(chǎn)劑從刺參背部注入體腔進(jìn)行體內(nèi)誘導(dǎo)；d.收集精卵。
全文摘要
本發(fā)明公開一種操作簡單，耗時短，同步產(chǎn)卵且卵子排放量大、質(zhì)量好，可極大提高催產(chǎn)效率、受精率及孵化率的體內(nèi)誘導(dǎo)刺參產(chǎn)卵的方法，是按如下步驟進(jìn)行將NGLWY酰胺溶于超純水中配置成1μmol/L的母液，然后將母液溶于0.5mol/L的KCl海水溶液中，制成1nmol/L的催產(chǎn)劑；選取體重至少200克的性腺成熟親參；將體積與親參體重比為0.1％ml/g且小于0.3ml的催產(chǎn)劑從刺參背部注入體腔進(jìn)行體內(nèi)誘導(dǎo)；收集精卵。
文檔編號A01K61/00GK101595847SQ20091001232
公開日2009年12月9日 申請日期2009年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月1日
發(fā)明者堅(jiān) 宋, 常亞青, 龐振國, 沖 趙 申請人:大連水產(chǎn)學(xué)院