專利名稱：用于治療糖尿病性視網(wǎng)膜病的組合物和方法
用于治療糖尿病性視網(wǎng)膜病的組合物和方法本申請要求于2007年10月19日提交的美國臨時申請60/999571的優(yōu)先權(quán)，其整 個公開通過引用全部并入本文。
背景技術(shù)：
在世界范圍內(nèi)，引起失明的最重要原因之一是糖尿病性視網(wǎng)膜病(DR)，其通常包 括相關(guān)的病癥_糖尿病黃斑水腫(DME)，黃斑水腫是造成微血管系統(tǒng)損傷、身體特別是眼部 的損傷和退化的糖尿病并發(fā)癥之一。該視覺功能喪失之后工作及個人功能的喪失對個體以 及個體周圍社會整體具有嚴重的影響。幾乎所有的糖尿病患者都顯示出一定程度的糖尿病 性視網(wǎng)膜病，并且糖尿病患者數(shù)量逐漸增加，因此需要更有效的治療視力喪失以及DR和相 關(guān)黃斑水腫的癥狀的方法。

發(fā)明內(nèi)容
一方面，本發(fā)明提供了治療患糖尿病性視網(wǎng)膜病的受試者的方法，包括向需要的 所述受試者施用治療有效量的能夠抑制LFA-I和ICAM之間相互作用的治療劑。第二方面，本發(fā)明提供了治療患黃斑水腫的受試者的方法，包括向需要的所述受 試者施用治療有效量的能夠抑制LFA-I和ICAM之間相互作用的治療劑，從而降低和/或預(yù) 防所述受試者眼睛的黃斑水腫。在本發(fā)明的第三方面，提供了治療受試者的糖尿病性視網(wǎng)膜病的方法，包括對所 述受試者進行糖尿病性視網(wǎng)膜病的診斷測試；基于所述診斷測試的結(jié)果來確定所述受試者 是否患糖尿病性視網(wǎng)膜?。灰约霸谠\斷為所述糖尿病性視網(wǎng)膜病之后，向所述受試者施用 在藥學(xué)上可接受的制劑中的有效量的(LFA-I)拮抗劑。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種降低和/或預(yù)防患糖尿病的受試者術(shù)后眼部炎 癥的方法，包括向需要的所述受試者施用治療有效量的LFA-I拮抗劑，從而降低和/或預(yù)防 所述受試者眼睛的術(shù)后炎癥。在一些實施方案中，術(shù)后炎癥是由于玻璃體切割術(shù)、激光凝固療法、光動力療法或 LASIK導(dǎo)致的。在其他的實施方案中，所述診斷步驟是通過使所述受試者的眼睛成像或分析 所述受試者的眼睛的生物樣品進行的。在本發(fā)明的一些實施方案中，ICAM為ICAM-1、ICAM-2或ICAM-3。在一些實施方 案中，ICAM為ICAM-1。在本發(fā)明的一些實施方案中，治療劑為LFA-I拮抗劑。在本發(fā)明的 一些實施方案中，LFA-I拮抗劑能結(jié)合與ICAM-I結(jié)合位點重疊的LFA-I α L亞單元中的高 親和力結(jié)合位點。在本發(fā)明的其他實施方案中，LFA-I拮抗劑直接與LFA-I α L亞單元上的 ICAM-I的結(jié)合相競爭。在本發(fā)明的一些實施方案中，LFA-I拮抗劑為LFA-I與ICAM-I之間 相互作用的競爭性抑制劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述LFA-I拮抗劑為LFA-I α L亞 單元上的ICAM-I的結(jié)合的變構(gòu)拮抗劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，糖尿病性視網(wǎng)膜病是非增生性的。在本發(fā)明的一些 實施方案中，糖尿病性視網(wǎng)膜病是增生性的。在本發(fā)明的一些實施方案中，糖尿病性視網(wǎng)膜病引起的損傷為黃斑水腫、視網(wǎng)膜新生血管形成、視網(wǎng)膜上的纖維血管生長、失明、基底膜 增厚、視網(wǎng)膜水腫或視網(wǎng)膜缺血。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供的LFA拮抗劑為抗體。在本發(fā)明的一些實施方 案中，提供的LFA拮抗劑為式I、II、III、IV、V或VI的化合物。


在本發(fā)明的一些實施方案中，提供的LFA拮抗劑為式IA、IIA或IIB的化合物。
式IA 式IIA 式IIB
在本發(fā)明的一些實施方案中，LFA-I拮抗劑為具有以下結(jié)構(gòu)之一的化合物 及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。在本發(fā)明的一些實施方案中，LFA-I拮抗劑為式VII、VIII、IX、X或XI的化合物或 其對映體、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
在本發(fā)明的一些實施方案中，治療劑經(jīng)局部、口服、眼周、眼內(nèi)、注射、經(jīng)鼻、氣溶 膠、經(jīng)插入物、經(jīng)植入裝置或點滴施用。在本發(fā)明的其他實施方案中，治療劑在運載體中施 用，該運載體為液滴、液體洗液、噴霧液、凝膠、軟膏、氣溶膠、噴霧、聚合物微粒和納米顆粒、 溶液、懸浮液、固體、生物可降解基質(zhì)、粉末、晶體、泡沫或脂質(zhì)體。在本發(fā)明的一些實施方案 中，治療有效量的所述治療劑經(jīng)局部或系統(tǒng)施用被遞送到所述受試者的眼中。在本發(fā)明的 一些實施方案中，可注射的施用是經(jīng)眼內(nèi)或眼周進行的。在本發(fā)明的一些實施方案中，施用 是通過施用所述化合物的凝膠、乳膏、粉末、泡沫、晶體、脂質(zhì)體、噴霧、聚合物微球或納米球 或液體懸浮液形式的眼內(nèi)滴注實現(xiàn)的。在一些實施方案中，聚合物微球或納米球用于經(jīng)眼 周或眼內(nèi)注射或植入來遞送治療劑。在一些實施方案中，治療有效量的治療劑經(jīng)局部或系統(tǒng)施用被遞送至受試者的眼 睛。
在本發(fā)明的一些實施方案中，治療劑是在運載體中施用的，該運載體為液滴、液體洗液、噴霧液、凝膠、軟膏、氣溶膠、噴霧、聚合物微粒和納米顆粒、溶液、懸浮液、固體、生物 可降解基質(zhì)、粉末、晶體、泡沫或脂質(zhì)體。在本發(fā)明的一些實施方案中，局部施用包括使用裝 置將所述化合物輸注到所述眼中，該裝置選自泵_導(dǎo)管系統(tǒng)、插入物、連續(xù)或選擇性釋放裝 置、生物可吸收植入物、連續(xù)或緩釋制劑和隱形眼鏡。在本發(fā)明的一些實施方案中，可注射 的施用是在眼內(nèi)、玻璃體內(nèi)、眼周、皮下、結(jié)膜下、目艮球后或眼房內(nèi)進行的。本發(fā)明的一些實 施方案中還提供了控釋制劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，本發(fā)明的化合物被配制為前藥。 在本發(fā)明的一些實施方案中，治療劑的制劑中不合防腐劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，治 療劑的制劑中包含至少一種防腐劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，治療劑的制劑中包含增 稠劑。在本發(fā)明的其他實施方案中，治療劑的制劑中使用PLGA微粒或納米顆粒。在本發(fā)明的一些實施方案中，以足以達到約1χ10_8至約Ixlir1摩爾/升的眼內(nèi)或 視網(wǎng)膜濃度的量向受試者施用所述化合物。在本發(fā)明的一些實施方案中，化合物每年至少 施用一次。在本發(fā)明的其他實施方案中，化合物每天至少施用一次。在本發(fā)明的其他實施方 案中，化合物每周至少施用一次。在本發(fā)明的一些實施方案中，化合物每月至少施用一次。在本發(fā)明的一些實施方案中，在施用所述LFA-I拮抗劑之前、一起、同時或之后施 用第二治療劑。在一些實施方案中，第二治療劑選自抗氧化劑、抗炎劑、抗微生物劑、類固 醇、蛋白激酶C抑制劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、抗血管生成劑、補體抑制劑和抗細胞凋 亡劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，該第二治療劑為結(jié)合在LFA-I上的變構(gòu)結(jié)合位點的抗 粘附治療劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，第二治療劑為抗粘附治療抗體或抗體片段。在本發(fā)明的一些實施方案中，診斷測試包括在使用LFA-I拮抗劑的治療方法中。 在一些實施方案中，進行糖尿病性視網(wǎng)膜病的診斷測試，且在做出疾病的診斷之后，向受試 者使用在此描述的LFA-I拮抗劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，診斷測試是通過使受試者 的眼睛成像或分析受試者的眼睛的生物樣品進行的。在另一方面，本發(fā)明提供了為眼部遞送而配制的藥物組合物，其包含抑制LFA-I 和ICAM之間相互作用的治療劑和藥學(xué)上可接受的載體。在一些實施方案中，藥物組合物 包含抑制LFA-I和ICAM之間相互作用的治療劑，該治療劑為式I、II、III、IV、V、VI、VII、 VIII、IX、X或XI的化合物。在一些實施方案中，藥物組合物適于局部施用。在一些實施方 案中，藥物組合物適于經(jīng)注射施用。在一些實施方案中，藥物組合物適于作為植入物施用。另一方面，提供了在本發(fā)明方法中使用的化合物?？捎糜诒景l(fā)明方法中的化合物 包括抗體、抗體片段、多肽、肽、聚合物和有機小分子。在本發(fā)明方法的另一個實施方案中， 在治療糖尿病性視網(wǎng)膜病的眼睛制劑中使用抗體Raptiva。援引說明本說明書中提到的所有出版物和專利申請均全部通過引用在此并入本文，就如同 各出版物或?qū)＠暾埦唧w和獨立地通過引用完整地并入本文。


所附權(quán)利要求具體闡述了本發(fā)明的新特征。參考以下發(fā)明詳述和附圖可以更好地 理解本發(fā)明的特征和優(yōu)點，所述發(fā)明詳述中闡述了應(yīng)用本發(fā)明原理的說明性實施方案，在 附圖中
圖1描述了由LFA-1 :ICAM_1之間的相互作用引起的白細胞的翻滾、粘附和穿過內(nèi) 皮的遷移。圖2描述了 LFA-1 JCAM-1之間的相互作用的抗原活化。圖3描述了 LFA-1 JCAM-1之間的相互作用的共刺激功能。圖4描述了可用于識別方法中的小分子拮抗劑。圖5描述了化合物5交聯(lián)的LFA-1的SDS-PAGE分析。圖6描述了化合物2B和ICAM-1-Ig與表達野生型LFA-1或缺少結(jié)構(gòu)域I的LFA-1 的293細胞的結(jié)合。圖 7 描述了 LFA-1/ICAM-1 和 LFA-1/ 小分子 ELISA 中，化合物 2A、3、A-286982 和 sICAM-1的拮抗劑競爭作用。圖8描述了 LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISA中由拮抗劑競爭得到的IC5(1值 的相關(guān)性。圖9描述了 LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISA中，拮抗劑對配體結(jié)合的影響。圖10描述了 sICAM-1和化合物3的拮抗作用的Schild回歸。圖11是與環(huán)孢菌素(CsA)的作用相比較，本發(fā)明的直接競爭性LFA-1拮抗劑對葡 萄球菌腸毒素B(SEB)刺激的人單核細胞(PBMC)中炎性細胞因子釋放的影響的圖示。圖12為通過局部施用14C標(biāo)記的本發(fā)明的直接競爭性LFA-1拮抗劑，在施用后30 分鐘時間點和4小時時間點經(jīng)檢測放射性標(biāo)記確定的眼中分布的圖示。發(fā)明詳述I.生物學(xué)和疾病糖尿病性視網(wǎng)膜病(DR)以及LFA-1拮抗劑在治療DR中的用途糖尿病通常被描述為一種全身疾病，在患有該病的個體的全身均可觀察到有害作 用，且隨著年齡的增加逐漸惡化。在世界范圍內(nèi)，糖尿病的眼部并發(fā)癥是導(dǎo)致視力喪失和失 明的主要原因。一個總的作用是發(fā)生導(dǎo)致微毛細管自身調(diào)節(jié)喪失的視網(wǎng)膜微血管系統(tǒng)的改變，這 種狀況被稱為糖尿病性視網(wǎng)膜病(DR)。為了臨床疾病的管理，糖尿病性視網(wǎng)膜病通常被分為兩類非增生性的(或背景 期)和晚期增生期。已證實非增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病(NPDR)在發(fā)作時有正常微血管系統(tǒng)的異常， 該異常是以視網(wǎng)膜毛細管退化、囊狀毛細管小動脈瘤形成、周皮細胞毛細管缺陷和毛細管 閉塞和閉合為特征的。作用機理包括糖尿病誘導(dǎo)的血管炎癥，導(dǎo)致白細胞和血小板堵塞血 管腔，隨后周皮細胞和內(nèi)皮細胞最終死亡。炎癥過程引起的白細胞對血管壁的吸引和粘附 導(dǎo)致白細胞臨時地粘附在內(nèi)皮上(白細胞停滯)、釋放毒性因子和損傷或殺死內(nèi)皮細胞。受 損的內(nèi)皮表面啟動血小板粘附、聚積、微血栓形成、血管閉塞和局部缺血。內(nèi)皮損傷的另一 后果是血液-視網(wǎng)膜屏障(BRB)中的改變，其導(dǎo)致了血管通透性的增加。這可由在熒光素 血管造影術(shù)中的熒光素滲漏或通過光學(xué)相干斷層攝影術(shù)(OCT)評估的視網(wǎng)膜增厚來進行 證明。該滲漏的后果可能是臨床上顯著的黃斑水腫和導(dǎo)致視網(wǎng)膜增厚的視網(wǎng)膜內(nèi)脂蛋白的 沉積(硬性滲出物)。隨著進程的發(fā)展，視網(wǎng)膜的神經(jīng)節(jié)細胞損失，導(dǎo)致了視力喪失或失明。 由內(nèi)皮細胞血管系統(tǒng)改變、周皮細胞死亡和毛細管閉塞導(dǎo)致的自動調(diào)整破壞和視網(wǎng)膜血流 降低是DR進展的標(biāo)志，并導(dǎo)致了視網(wǎng)膜缺血的發(fā)展，其使得DR發(fā)展到更嚴重的增生期。
增生性DR包括由視網(wǎng)膜的視盤或其他位置的視網(wǎng)膜缺血誘發(fā)的新生血管形成或 血管生成。該新的血管系統(tǒng)會導(dǎo)致玻璃體液的出血和從收縮纖維組織上的視網(wǎng)膜脫落。在糖尿病性視網(wǎng)膜病這一進展中的任何時間均可發(fā)生黃斑水腫或糖尿病黃斑水 腫(DME)，對視覺功能具有嚴重的影響。該相關(guān)病癥的進展通過視網(wǎng)膜血管的滲漏進行預(yù) 測，并且導(dǎo)致激光凝固治療，以降低視力喪失的風(fēng)險。由于大部分糖尿病性視網(wǎng)膜病患者同 時也患有該病癥，因此它是相關(guān)的臨床干預(yù)目標(biāo)。所有的這些損傷或退行性損傷可導(dǎo)致視 力的損害或甚至于完全喪失，并為治療干預(yù)提供了目標(biāo)。目前還沒有有 效的治療選擇。激 光凝固術(shù)包括使用激光燒灼眼睛的不同位置，并用于治療許多新生血管形成相關(guān)病癥。具 體地，新生血管形成通常使用散射或全視網(wǎng)膜激光凝固術(shù)進行治療。但是，激光治療可引起 對應(yīng)于治療區(qū)域的永久性盲點。激光治療還可引起持久或復(fù)發(fā)性的出血，增加視網(wǎng)膜脫落 的風(fēng)險或誘發(fā)新生血管形成或纖維化。用于眼部相關(guān)病癥的其他治療選擇包括溫?zé)岑煼ā?玻璃體切割術(shù)、光動力療法、放射療法、手術(shù)(例如去除過多的眼組織)等。但是，在絕大多 數(shù)情況下，所有可獲得的治療選擇均有有限的治療效果、需要重復(fù)的、昂貴的操作，和/或 與危險的副作用相關(guān)。高血糖控制經(jīng)證明并不能有效地終止該進展。包括小血栓形成、凋亡和促炎性改 變的許多過程被確定為可引起DR中的視網(wǎng)膜毛細管閉塞和毛細管閉合，其可作為防止DR 進展和/或逆轉(zhuǎn)已經(jīng)發(fā)生的損傷的有用的干預(yù)點。此外，BRB破壞和毛細管無灌注開始的 早期事件似乎是白細胞粘附到糖尿病視網(wǎng)膜血管系統(tǒng)上。在使用鏈脲霉素在大鼠中誘導(dǎo)試驗性糖尿病1周內(nèi)，粘附性白細胞與視網(wǎng)膜內(nèi)皮 細胞損傷和死亡在時間和空間上相關(guān)。基于抗體的ICAM-I和CD18中和顯示能夠防止白細 胞粘附和視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞損傷和死亡。(A. M. Joussen,T. Murata,A. Tsujikawa,B. Kirchof, S-E. Bursell,A. P. Adamis"Leukocyte-Mediated Endothelial Cell Injury andDeath in the Diabetic Retina" (2001) A, J. Pathol. 158(1) 147-162) 抑制粘附事件、破壞促炎癥反應(yīng)循環(huán)以及防止缺血性組織中形成非細胞毛細血管 (均在該疾病狀態(tài)中發(fā)生)均是有利的治療策略。淋巴細胞功能相關(guān)抗原-I(LFA-I)/細胞 內(nèi)粘附分子-I(ICAM-I)的相互作用介導(dǎo)這些分子事件中的每一個。因此，本發(fā)明的LFA-I 拮抗劑可用于治療該疾病中觀察到的一種或多種病理癥狀。并不希望局限于作用機理，本發(fā)明的方法包括通過抑制LFA-I與ICAM-I之間的相 互作用來抑制糖尿病性視網(wǎng)膜病(DR)的發(fā)生和進展。LFA-I和ICAM-I為具有參與淋巴細 胞/白細胞粘附、遷移和增殖過程的細胞外受體結(jié)構(gòu)域的分子，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的級聯(lián)。在優(yōu) 選的實施方案中，該方法提供了如以下詳細描述的體外和體內(nèi)抗炎作用，并且可用于治療 DR0人體血液包含白血細胞(白細胞)，其進一步被分為嗜中性粒細胞、淋巴細胞(B和 T亞型)、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞。白細胞中的一些類型_嗜中性粒細胞、 嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和淋巴細胞-參與炎性病癥。LFA-I是在大多數(shù)白細胞上表達 的一組白整聯(lián)蛋白中的一種，并被認為是與作為配體的多種ICAM相作用的淋巴整聯(lián)蛋白。 破壞這些相互作用，因此破壞免疫/炎癥反應(yīng)，降低了炎癥，特別是眼睛的炎癥。例如，ICAM-I (CD54)是免疫球蛋白超家族中粘附受體ICAM家族(ICAM_1、ICAM_2、 ICAM-3、ICAM-4)的一個成員，在激活的白細胞、皮膚成纖維細胞和內(nèi)皮細胞上表達。它通常在襯于血管系統(tǒng)內(nèi)層的內(nèi)皮細胞上表達，且在免疫/炎癥起始中接觸細胞因子如IL-1、LPS 和TNF后被上調(diào)。過去的幾十年里進行的研究幫助闡明了在免疫系統(tǒng)中細胞的移動和激活所涉及 的分子事件，集中在級聯(lián)中細胞與細胞觸發(fā)的相互作用。細胞間粘附分子(ICAM)與白整聯(lián) 蛋白之間的相互作用在免疫系統(tǒng)的功能中起作用。免疫過程例如抗原遞呈、白細胞介導(dǎo)的 細胞毒性、T細胞介導(dǎo)的細胞毒性和白細胞跨內(nèi)皮遷移(血細胞滲出)可能需要由ICAM與 白整聯(lián)蛋白之間相互作用介導(dǎo)的細胞粘附。已證明ICAM-I與LFA-I之間的相互作用(LFA-1也稱為α LP 2禾Π CDlla/CD18) 涉及粘附、白細胞跨內(nèi)皮遷移、向受損部位遷移和淋巴細胞在激活目標(biāo)部位增殖等過程，如 圖1所示。例如，目前認為，在白細胞粘附和跨內(nèi)皮遷移之前，炎癥反應(yīng)的要件-存在細胞 因子/趨化因子-激活了在白細胞上組成型表達的整聯(lián)蛋白。血管內(nèi)皮細胞還響應(yīng)于相同 細胞因子/趨化因子的存在上調(diào)ICAM-1。當(dāng)翻滾的白細胞接近激活的內(nèi)皮細胞時，它們的 進程首先被這些上調(diào)的ICAM-I受體減緩。這之后是LFA-I與在血管內(nèi)皮細胞表面表達的 ICAM-I之間的配體/受體作用，其進一步阻止了淋巴細胞的翻滾。然后淋巴細胞變平，并發(fā) 生游出。該過程對于通過血管內(nèi)皮的淋巴細胞游出以及淋巴細胞從外周血向淋巴 結(jié)的運輸 都是重要的。但是，在糖尿病性視網(wǎng)膜病(DR)中，如上所述，白細胞停滯是損害和/或殺死 局部區(qū)域內(nèi)皮細胞的細胞毒性因子釋放的最初觸發(fā)事件。該損傷導(dǎo)致血管滲漏和炎癥，其 持續(xù)和/或擴大有害的反應(yīng)。LFA-I在創(chuàng)建和維持免疫突觸中起作用，免疫突觸可定義為T細胞與抗原遞呈細 胞(APC)的相互作用表面的物理結(jié)構(gòu)，如圖2所示。LFA-I穩(wěn)定T細胞與APC的嚙合，因此 導(dǎo)致了 T細胞的激活。LFA-I與ICAM-I之間的相互作用似乎還向靜息T細胞提供了共刺激 信號，如圖3所示。CD4+細胞增殖和細胞因子合成是由該相互作用介導(dǎo)的，作為炎癥反應(yīng)的 一部分?？紤]到ICAM-I與LFA-I之間的相互作用在免疫/炎癥反應(yīng)中起作用，希望能夠 調(diào)控這些相互作用以實現(xiàn)理想的治療結(jié)果(例如，在過度活躍的炎癥反應(yīng)的事件中抑制該 相互作用)。同時，由于LFA-I在涉及許多信號傳導(dǎo)途經(jīng)的ICAM家族(ICAM-1、ICAM-2和 ICAM-3)內(nèi)具有幾種配體，在本發(fā)明的一些實施方案中，希望選擇性地調(diào)控這些相互作用。 在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了干擾LFA-I與ICAM-l、ICAM-2和/或ICAM-3結(jié)合的治 療劑，從而調(diào)控每對相互作用的各自的信號傳導(dǎo)途經(jīng)。在此描述的方法和組合物可以調(diào)控在此描述的途經(jīng)的一個或多個成分。除了抑制 LFA-I與ICAM-I之間的相互作用以外，本發(fā)明的方法和組合物還可干預(yù)炎癥過程的早期或 晚期階段。例如，在圈合和跨內(nèi)皮遷移之前，內(nèi)皮細胞或白細胞上的ICAM-I或LFA-I的上 調(diào)(激活)可用在此描述的方法和組合物進行調(diào)控。本發(fā)明可用于調(diào)控在白細胞運輸過程 中激活I(lǐng)CAM-I和LFA-I的細胞因子或趨化因子的表達、調(diào)控細胞因子或趨化因子的轉(zhuǎn)運、 阻止捕獲的白細胞的游出、通過涉及損傷或炎癥部位白細胞增殖的其他機理調(diào)控信號傳導(dǎo)寸。本發(fā)明提供了干擾LFA-I與ICAM-I結(jié)合的治療劑，其可阻斷免疫系統(tǒng)細胞的粘 附、遷移、增殖和向周圍組織釋放炎癥信號。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了施用能抑制 LFA-I與ICAM之間相互作用的治療劑的方法。在一個例子中，治療劑結(jié)合LFA-I或結(jié)合ICAM。更特別地，本發(fā)明提供了結(jié)合LFA-I的治療劑，以抑制LFA-I與ICAM_1、ICAM_2和/或ICAM-3的結(jié)合，因此作為LFA-I拮抗劑。在一些實施方案中，本發(fā)明提供的治療劑在與 ICAM-I結(jié)合位點重疊的α L亞單元中的高親和力結(jié)合位點處結(jié)合，ICAM-I為LFA-I的直接 競爭性拮抗劑。在一些實施方案中，本發(fā)明提供的治療劑抑制LFA-I與ICAM-I之間的相互 作用，但是不完全阻斷與ICAM-I結(jié)合位點重疊的α L亞單元中的高親和力結(jié)合位點，并且 是LFA-I的競爭性的但不是直接競爭性的拮抗劑。在一些實施方案中，本發(fā)明提供的治療 劑在與ICAM-I結(jié)合位點重疊的α L亞單元中的高親和力位點以外的位點處結(jié)合，并且是變 構(gòu)拮抗劑。在一些實施方案中，本發(fā)明提供的治療劑為變構(gòu)拮抗劑，并且是LFA-I的競爭性 的但不是直接競爭性的拮抗劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述治療劑可用于治療糖尿 病性視網(wǎng)膜病和與該疾病相關(guān)的病癥。II.本發(fā)明方法中有用的化合物如本文中所用的術(shù)語“脂肪族的”包括飽和的和不飽和的直鏈(非支鏈)或支鏈脂 肪族烴，其任選地被一個或多個官能團取代。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，本文中的“月旨 肪族的”包括但不限于烷基、烯基、炔基部分。因此，本文使用的術(shù)語“烷基”包括直鏈和支 鏈烷基。類似的規(guī)則適用于其他通用術(shù)語，例如“烯基”、“炔基”等。此外，如本文中所用的術(shù)語“烷基”、“烯基”、“炔基”等包括取代的和未取代的基 團。在某些實施方案中，如本文中所用的“低級烷基”用于指具有約1-6個碳原子的那些烷 基(取代的、未取代的、支鏈的或非支鏈的)。在某些實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基、烯基和炔基包含約1-20個脂肪族碳原 子。在某些其他的實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基、烯基和炔基包含約1-10個脂肪族碳 原子。在另外其他的實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基、烯基和炔基包含約1-8個脂肪族碳 原子。在另外其他的實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基、烯基和炔基包含約1-6個脂肪族碳 原子。在另外其他的實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基、烯基和炔基含約1-4個碳原子。因 此示例性的脂肪族基團包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、烯丙基、正丁基、仲 丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、異戊基、叔戊基、正己基、仲己基部分等，同時這些基 團可具有一個或多個取代基。烯基包括但不限于例如乙烯基、丙烯基、丁烯基等。代表的炔基包括但不限于乙炔 基、2-丙炔基等。如本文中所用的術(shù)語“低級亞烷基”是指將另外兩個基團連接在一起的烴鏈，即在 兩末端各與另一基團鍵合，例如亞甲基、亞乙基、亞丁基等。這種取代基優(yōu)選地具有1-10個 碳原子，更優(yōu)選地具有1-5個碳原子。這種基團可為被取代的，優(yōu)選地被氨基、乙酰氨基(經(jīng) 由氮原子鍵合的低級烷基羰基)或環(huán)狀低級烷基取代。后者是指飽和烴環(huán)、優(yōu)選地具有總 共3-10個亞甲基(包括連接碳)，更優(yōu)選3-6個亞甲基。如本文中所用的術(shù)語“脂環(huán)的”是指結(jié)合了脂肪族和環(huán)狀化合物的特性的化合物， 包括但不限于單環(huán)或多環(huán)脂肪族烴和橋連環(huán)烷基化合物，其任選地被一個或多個官能團取 代。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，本文中的“脂環(huán)的”意圖包括但不限于環(huán)烷基、環(huán) 烯基和環(huán)炔基部分，其任選地被一個或多個官能團取代。因此，示例性的脂環(huán)基包括但不限于例如環(huán)丙基、-CH2-環(huán)丙基、環(huán)丁基、-CH2-環(huán)丁基、環(huán)戊基、-CH2-環(huán)戊基、環(huán)己基、-CH2-環(huán)己基、環(huán)己烯基乙基、環(huán)己烷基乙基、降冰片基部分等，同時其可包含一個或多個取代基。如本文中所用的術(shù)語“烷氧基”或“烷基氧基”是指通過氧原子的飽和或不飽和母 體分子部分。在某些實施方案中，烷基包含約1-20個脂肪族碳原子。在某些其他的實施方 案中，烷基包含約1-10個脂肪族碳原子。在另外其他的實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基 包含約1-8個脂肪族碳原子。在另外其他的實施方案中，烷基包含約1-6個脂肪族碳原子。 在另外其他的實施方案中，烷基包含約1-4個脂肪族碳原子。烷氧基的例子包括但不限于 甲氧基、乙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等。如本文中所用的術(shù)語“低級烷氧基”是指通過氧與另一基團鍵合的(即烷基醚)、 可為如上定義的支鏈或非支鏈的上述定義的低級烷基。如本文中所用的術(shù)語“烷硫基(thioalkyl) ”是指通過硫原子連到母體分子部分 的飽和或不飽和(即S-烯基和S-炔基)基團。在某些實施方案中，烷基包含約1-20個脂 肪族碳原子。在某些其他的實施方案中，烷基包含約1-10個脂肪族碳原子。在另外其他的 實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基包含約1-8個脂肪族碳原子。在另外其他的實施方案中， 烷基包含約1-6個脂肪族碳原子。在另外其他的實施方案中，烷基包含約1-4個脂肪族碳 原子。烷硫基的例子包括但不限于甲基硫基、乙基硫基、丙基硫基、異丙基硫基、正丁基硫基等。如本文中所用的術(shù)語“低級烷基硫基”是指通過二價硫原子鍵合的低級烷基，例如 甲基巰基或異丙基巰基。低級亞烷基硫基是指在各末端鍵合的這種基團。術(shù)語“烷基氨基”是指具有結(jié)構(gòu)-NHR'的基團，其中R'為如上定義的烷基。術(shù)語 “氨基烷基”是指具有結(jié)構(gòu)NH2R'-的基團，如此處所定義。在某些實施方案中，烷基含有約 1-20個脂肪族碳原子。在其他的某些實施方案中，烷基含有約1-10個脂肪族碳原子。在另 外其他的實施方案中，本發(fā)明中使用的烷基包含約脂肪族碳原子。在另外其他的實施方案 中，烷基包含約1-6個脂肪族碳原子。在另外其他的實施方案中，烷基包含約1-4個脂肪族 碳原子。烷基氨基的例子包括但不限于甲基氨基等。本發(fā)明化合物的上述脂肪族(和其他)部分的取代基的一些例子包括但不限于脂 肪族；脂環(huán)族；雜脂肪族；雜環(huán)；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基芳基； 烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳氧基；雜烷氧基；雜芳氧基；烷基硫基；芳基硫基； 雜烷基硫基；RX獨立地包括但不限于脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳基、雜芳基、烷基芳 基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基，其中上述和此處的任何脂肪族、脂環(huán)族、雜脂 肪族、雜環(huán)、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可為取代或未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或 不飽和的，并且其中上述和此處的任何芳基或雜芳基取代基可為取代或未取代的。常用取 代基的其他例子通過此處描述的實施例中所示的具體實施方案來闡明。通常，如本文中所用的術(shù)語“芳香族部分”是指優(yōu)選地具有3-14個碳原子的穩(wěn)定 的單環(huán)或多環(huán)不飽和部分，其中每一個可為取代或未取代的。在某些實施方案中，術(shù)語“芳 香族部分”是指在各環(huán)原子處具有與環(huán)的平面垂直的P-軌道且滿足休克爾規(guī)則(環(huán)中η 電子的數(shù)目為(4Π+2)，其中η為整數(shù))的平面環(huán)。不滿足一個或所有這些芳香族性標(biāo)準(zhǔn)的 單環(huán)或多環(huán)不飽和部分在此被定義為“非芳香族的”并包括在術(shù)語“脂環(huán)族”中。
通常，如本文中所用的術(shù)語“雜芳香族部分”是指優(yōu)選地具有3-14個碳原子的穩(wěn) 定的單環(huán)或多環(huán)不飽和部分，其中每一個可為取代或未取代的；并且在環(huán)內(nèi)包含至少一個 選自0、S和N的雜原子代替環(huán)碳原子。在某些實施方案中，術(shù)語“雜芳香族部分”指包含至 少一個雜原子、在每個環(huán)原子上具有垂直于環(huán)平面的P-軌道并且滿足休克爾規(guī)則(環(huán)中的
電子數(shù)為(4n+2)，其中n為整數(shù))的平面環(huán)。應(yīng)該理解，此處定義的芳香族和雜芳香族部分可通過烷基或雜烷基部分連接，因 此還包括_ (烷基)芳香族、"(雜烷基)芳香族、"(雜烷基)雜芳香族和_ (雜烷基)雜芳 香族部分。因此，如本文中所用的短語“芳香族或雜芳香族部分”和“芳香族、(雜烷基)芳 香族、_(雜烷基)雜芳香族和(雜烷基)雜芳香族的”可互換。取代基包括但不限于任何 前述取代基，例如描述的用于脂肪族部分或用于在此公開的其他部分的取代基，造成形成 穩(wěn)定的化合物。此處使用的術(shù)語“芳基”與本領(lǐng)域?qū)υ撔g(shù)語的常規(guī)理解并無顯著差別，是指含有至 少一個芳香族環(huán)的不飽和環(huán)狀部分。在某些實施方案中，“芳基”是指含有1個或2個芳香 族環(huán)的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)系統(tǒng)，包括但不限于苯基、萘基、四氫萘基、茚滿基、茚基等。此處使用的術(shù)語“雜芳基”與本領(lǐng)域?qū)υ撔g(shù)語的常規(guī)理解并無顯著差別，是指含有 5-10個環(huán)原子、其中一個環(huán)原子選自S和N的環(huán)狀芳香族基團；0、1或2個環(huán)原子為獨立地 選自S和N的其他雜原子；其余的環(huán)原子為碳，該基團通過任何環(huán)原子連接到分子的其它部 分上，例如，如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、 噻二唑基、噁二唑基、噻吩基(thiophenyl)、呋喃基、喹啉基、異喹啉基等。應(yīng)該理解，芳基和雜芳基(包括雙環(huán)芳基)可為未取代的或取代的，其中取代包括 獨立地使用任何一個或多個以下部分來取代其上的一個或多個氫原子，該部分包括但不限 于脂肪族；脂環(huán)族；雜脂肪族；雜環(huán)；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基 芳基；烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳氧基；雜烷氧基；雜芳氧基；烷基硫基；芳基 硫基；雜烷基硫基；雜芳基硫基；F ；C1 ；Br ；I ；-0H ；-N02 ；-CN ；-CF3 ；_CH2CF3 ；-CHC12 ；-CH20H ；-CH2CH20H ；-CH2NH2 ；-CH2SO2CH3 ；-C( = 0)Rx ；-C( = 0)N (Rx) 2 ；-0C( = 0) Rx ；-0C02Rx ；-0C( = 0) N(RX)2 ；-N(Rx)2 ；-S(O)2Rx ；-NRx(CO)Rx，其中每次出現(xiàn)的Rx獨立地包括但不限于脂肪族、脂 環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基 或雜烷基雜芳基，其中上述和在此描述的任何脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、烷基芳基或 烷基雜芳基取代基可為取代或未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或不飽和的，且其中上述和 在此描述的任何芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳基、-(烷基)芳基或-(烷基)雜芳基取代基 可為取代或未取代的。此外，還應(yīng)該理解，任何兩個相鄰的基團連接在一起可以代表4、5、6 或7元取代或未取代的脂環(huán)族或雜環(huán)部分。常用取代基的其它例子在本文所述實施例所示 的具體實施方案中說明。如本文中所用的術(shù)語“環(huán)烷基”具體指具有3-7個，優(yōu)選3-10個碳原子的基團。合 適的環(huán)烷基包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等，它們?nèi)缭谥咀?、?環(huán)族、雜脂肪族或雜環(huán)部分的情況下一樣可以任選地被取代基取代，所述取代基包括但不 限于脂肪族；脂環(huán)族；雜脂肪族；雜環(huán)；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基 芳基；烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳氧基；雜烷氧基；雜芳氧基；烷基硫基 ’雜芳 基硫基；F ；C1 ；Br ； I ；-0H ；-N02 ；-CN ；_CF3 ；_CH2CF3 ；_CHC12 ；_CH20H ；_CH2CH20H ；-CH2NH2 ；_CH2S02CH3 ；-c ( = 0) Rx ；-C (O)N (Rx)2 ；-OC (O)Rx ；-OCO2Rx ；-OC (O)N (Rx)2 ；-N (Rx)2 ；-S (O)2Rx ；-NRx (CO) Rx，其中每次出現(xiàn)的Rx獨立地包括但不限于脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳香族、雜芳 香族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基，其中上述和此處 描述的任何脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可以為取代或 未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或不飽和的，而且其中上述和此處描述的任何芳香族、雜 芳香族、芳基或雜芳基取代基可以為取代或未取代的。常用取代基的其它例子在本文所述 實施例所示的具體實施方案中說明。如本文中所用的術(shù)語“雜脂肪族”指主鏈上的一個或多個碳原子已被雜原子取 代的脂肪族部分。因此，雜脂肪族基團指含有一個或多個代替碳原子的氧、硫、氮、磷或 硅原子的脂肪族鏈。雜脂肪族部分可以為直鏈或支鏈、飽和或不飽和的。在某些實施方 案中，雜脂肪族部分通過其上的一個或多個氫原子獨立地被一個或多個包括但不限于 下述基團的部分代替而被取代脂肪族；脂環(huán)族；雜脂肪族；雜環(huán)；芳香族；雜芳香族；芳 基；雜芳基；烷基芳基；烷基雜芳基；烷氧基；芳氧基；雜烷氧基；雜芳氧基；烷基硫基； 芳基硫基；雜芳基硫基；F ；Cl ；Br ；I ；-OH ；-NO2 ；-CN ；-CF3 ；-CH2CF3 ；-CHCl2 ；-CH2OH ；-CH2CH 20H ；-CH2NH2 ；-CH2SO2CH3 ；-C( = 0)RX ；-C (C = 0) N (Rx)2 ；-0C( = 0)RX ；-OCO2Rx ；-0C( = 0) N(Rx)2 ；-N(Rx)2 ；-S(O)2Rx ；-NRx(CO)Rx，其中每次出現(xiàn)的Rx獨立地包括但不限于脂肪族、月旨 環(huán)族、雜 脂肪族、雜環(huán)、芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基 或雜烷基雜芳基，其中上述和此處描述的任何脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、烷基芳基或 烷基雜芳基取代基可以為取代或未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或不飽和的，而且上述和 此處描述的任何芳香族、雜芳香族、芳基或雜芳基取代基可以為取代或未取代的。常用取代 基的其它例子在本文所述實施例所示的具體實施方案中說明。如本文中所用的術(shù)語“雜環(huán)烷基”、“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”指結(jié)合了雜脂肪族和環(huán)狀 化合物的性質(zhì)的化合物，其包括但不限于具有5-16個原子的飽和和不飽和單環(huán)或多環(huán)體 系，其中至少一個環(huán)原子為選自S和N的雜原子(其中氮和硫雜原子可以任選地被氧化)， 其中環(huán)體系任選地被一個或多個本文中定義的官能團取代。在某些實施方案中，術(shù)語“雜 環(huán)烷基”、“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”指其中至少一個環(huán)雜原子選自S和N(其中氮和硫雜原子可 以任選地被氧化)的非芳香族5、6或7元環(huán)或多環(huán)基團，其包括但不限于雙環(huán)或三環(huán)基團， 包括具有1-3個獨立地選自氧、硫和氮的雜原子的稠合六元環(huán)，其中(i)各5元環(huán)具有0-2 個雙鍵，各6元環(huán)具有0-2個雙鍵，各7元環(huán)具有0-3個雙鍵，(ii)氮和硫雜原子可以任選 地被氧化，(iii)氮雜原子可以任選地被季銨化，且(iv)上述任何雜環(huán)可以與芳環(huán)或雜芳 環(huán)稠合。代表性的雜環(huán)包括但不限于雜環(huán)，例如呋喃基、吡喃基、吡咯基、噻吩基、吡咯烷基、 吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、異 噁唑烷基、二噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、三唑基、噻三唑基、噻二唑基、噁二唑基、 嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、異噻唑烷基、二噻唑基、二噻唑烷基、四氫呋喃基，及 其苯并稠合的衍生物。在某些實施方案中，使用“取代的雜環(huán)或雜環(huán)烷基或雜環(huán)”基團，且 如本文中所用的，其指上述定義的雜環(huán)或雜環(huán)烷基或雜環(huán)基，其上的一個、兩個或三個氫原 子獨立地被下述但并不限于此的基團取代脂肪族；脂環(huán)族；雜脂肪族；雜環(huán)；芳香族 ’雜 芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基芳基；烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳基 氧；雜烷氧基；雜芳基氧；烷基硫基；芳基硫基；雜烷基硫基；雜芳基硫基；F ；Cl ；Br ； I ；-OH；-NO2 ；-CN ；-CF3 ；-CH2CF3 ；-CHCl2 ；-CH2OH ；-CH2CH2OH ；-CH2NH2 ；-CH2SO2CH3 ；-C (C = O)Rx ；-CC = 0) N (Rx)2 ；-OC (O)Rx ；-OCO2Rx ；-0C( = 0) N (Rx)2 ；-N (Rx)2 ；-S (O)2Rx ；-NRx (CO) Rx，其中每次出 現(xiàn)的Rx獨立地包括但不限于脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳 基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基，其中上述和此處所述的任何脂肪 族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可以為取代或未取代的、支鏈或 非支鏈的、飽和或不飽和的，而且其中上述和此處所述的任何芳香族、雜芳香族、芳基或雜 芳基可以為取代或未取代的。此外，應(yīng)該理解，上述和此處所述的任何脂環(huán)族或雜環(huán)部分可 以包括與之稠合的芳基或雜芳基部分。本文中所用的術(shù)語“鹵代”和“鹵素”是指選自氟、氯、溴和碘的原子。術(shù)語“鹵代烷基”意指連接有一個、兩個或三個鹵素原子的如上定義的烷基，其例
子為氯甲基、溴乙基、三氟甲基等基團。如本文中所用的術(shù)語“氨基”指伯胺(-NH2)、仲胺(-NHRx)、叔胺(-NRxRy)或季胺(-N+RxRyRz),其中Ry和Rz獨立地為本文中定義的脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳香族或 雜芳香族部分。氨基的例子包括但不限于甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、二 乙基氨基羰基、異丙基氨基、哌啶子基、三甲基氨基和丙基氨基。如本文中所用的術(shù)語“?；敝妇哂型ㄊ?C( = 0)R的基團，其中R為本文中定義 的脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳香族或雜芳香族部分。如本文中所用的術(shù)語“磺酰氨基”指通式-SO2NRxRy的基團，其中Rx和Ry獨立地為 氫，或本文中定義的脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳香族、雜芳香族或?；糠?。如本文中所用的術(shù)語“苯甲酰氨基”指通式PhNRx的基團，其中Rx為氧，或本文中 定義的脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳香族、雜芳香族或酰基部分。如本文中所用的術(shù)語“Cm亞烷基”指具有1-6個碳原子、在基團的兩端都具有自 由價“_”、僅由碳和氫原子組成的取代或未取代的、直鏈或支鏈的飽和二價基團。如本文中所用的術(shù)語“C2_6亞烷基”指具有2-6個碳原子、在基團的兩端都具有 自由價“_”、僅由碳和氫原子組成的取代或未取代的、直鏈或支鏈的不飽和二價基團，而且 其中的不飽和狀態(tài)僅以雙鍵形式存在，且雙鍵可以存在于鏈的第一個碳原子和其余分子之 間。如本文中所用的術(shù)語“脂肪族”、“雜脂肪族”、“烷基”、“烯基”、“炔基”、“雜烷基”、 “雜烯基”、“雜炔基”等包括取代和未取代的、飽和和不飽和的、直鏈和支鏈基團。類似地， 術(shù)語“脂環(huán)族”、“雜環(huán)”、“雜環(huán)烷基”、“雜環(huán)”等包括取代和未取代的、飽和和不飽和的基團。 此夕卜，術(shù)語“環(huán)烷基”、“環(huán)烯基”、“環(huán)炔基”、“雜環(huán)烷基”、“雜環(huán)烯基”、“雜環(huán)炔基”、“芳香族”、 “雜芳香族”、“芳基”、“雜芳基”等包括被取代和未被取代的基團。如本文中所用的術(shù)語“天然氨基酸”是指在天然存在的蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的任何一種 常見的、天然存在的L-氨基酸甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、 異亮氨酸(He)、賴氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、組氨酸(His)、脯氨酸(Pro)、絲氨酸(Ser)、 蘇氨酸(Thr)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸 (Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gin)、半胱氨酸(Cys)和甲硫氨酸(Met)。如本文中所用的術(shù)語“非天然氨基酸”是指不是天然氨基酸的所有氨基酸。其包 括，例如α-、β-、D_、L-氨基酸殘基，和下列通式的化合物 其中，側(cè)鏈R不同于天然存在的氨基酸側(cè)鏈。更通常地，如本文中所用的術(shù)語“氨基酸”包括天然氨基酸和非天然氨基酸。如本文中所用的術(shù)語“生物電子等排體”通常指具有類似的分子形狀和/或體積 的兩個或多個化合物或部分。在某些實施方案中，生物電子等排體具有大約相同的電子分 布。在另外的某些實施方案中，生物電子等排體顯示類似的生物學(xué)性質(zhì)。在優(yōu)選的實施方 案中，生物電子等排體具有類似的分子形狀和體積；具有大約相同的電子分布；并且顯示 類似的生物學(xué)性質(zhì)。如本文中所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的衍生物”意指該化合物的任何藥學(xué)上可接 受的鹽、酯或這種酯的鹽，或施用于受試者后能夠提供(直接或間接地)如本文中另外描述 的化合物的任何其他加合物或衍生物，或其代謝物或殘余物。因此，藥學(xué)上可接受的衍生物 尤其包括前藥。前藥是通常具有顯著降低的藥理活性的化合物衍生物，其含有在體內(nèi)易于 除去而產(chǎn)生作為藥理活性物質(zhì)的母體分子的另外部分。前藥的一個例子是酯，其在體內(nèi)裂 解產(chǎn)生目標(biāo)化合物。各種化合物和物質(zhì)的前藥以及衍生母體化合物產(chǎn)生前藥的方法是已知 的，而且可以用于本發(fā)明。下文中將詳細討論某些示例性藥物組合物和藥學(xué)上可接受的衍 生物。如本文中所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指適于藥物用途，優(yōu)選地適用于人和低 等動物組織且沒有不適當(dāng)?shù)拇碳?、過敏反應(yīng)等的那些鹽。胺、羧酸和其它類型化合物的藥學(xué) 上可接受的鹽是本領(lǐng)域已知的。例如,S. M. Berge等人在J Pharmaceutical Sciences,66 1-19(1977)中詳細描述了藥學(xué)上可接受的鹽，其在此引入作為參考。該鹽可以在本發(fā)明化 合物的最后分離和純化過程中就地制備，或者如下文中一般性描述的，通過使游離堿或游 離酸的官能團與適當(dāng)?shù)脑噭┓磻?yīng)而單獨制備。例如，游離堿官能團可以與適當(dāng)?shù)乃岱磻?yīng)。此 夕卜，當(dāng)本發(fā)明的化合物帶有酸性部分時，其適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的鹽可以包括金屬鹽，例如 堿金屬鹽，如鈉或鉀鹽；和堿土金屬鹽，如鈣或鎂鹽。藥學(xué)上可接受的無毒酸加成鹽的例子 為氨基與無機酸形成的鹽，所述無機酸例如為鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或與有機 酸形成的鹽，所述有機酸例如為醋酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、或丙二酸，或 利用本領(lǐng)域采用的其它方法，例如離子交換法制備的鹽。其它藥學(xué)上可接受的鹽包括己二 酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟 腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡糖 庚酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、 乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、煙 酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、櫛酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3_苯基丙酸鹽、 磷酸鹽、苦味酸鹽、三甲基乙酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸 鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。代表性的堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂鹽等。如果適當(dāng)，其它藥學(xué)上可接受的鹽包括無毒銨鹽、季銨鹽，和使用抗衡離子形 成的胺陽離子，所述抗衡離子例如為鹵素離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、磺 酸根和芳基磺酸根。如本文中所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的酯”是指在體內(nèi)發(fā)生水解的酯，包括那些在 人體內(nèi)容易分解釋放出母體化合物或其鹽的酯。適當(dāng)?shù)孽セ鶊F包括例如衍生自藥學(xué)上可接 受的脂肪族醇化合物的那些酯基團，尤其是烷、烯、乙二醇、環(huán)烷等，其中各烷基或烯基部分 有利地具有不多于6個碳原子。這些只是示例，絕不是限制本領(lǐng)域已知的酯的可能性。如本文中所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的前藥”指適于藥物用途的本發(fā)明化合物的 那些前藥，優(yōu)選地用于人和低等動物的身體組織并且沒有不當(dāng)?shù)亩拘?、刺激、過敏反應(yīng)等， 而且對于預(yù)期的用途而言是有效的，以及如果可能的話指本發(fā)明化合物的兩性離子形式。 術(shù)語“前藥”指在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化得到上式的母體化合物的化合物，例如通過在血液中水解 進行轉(zhuǎn)化。T. Higuchi 和 V. Stella，Pro-drugs as NovelDelivery Systems, A. C. S.專題 論文集系列 14 卷，禾P Edward B. Roche, ed. , Bioreversible Carriers in Drug Design, AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987 中共了i羊J^ 的ife^， 該兩篇文獻在此引入作為參考。C.可用于本發(fā)明的化合物，其為LFA-1與ICAM-1之間相互作用的直接競爭性拮抗 劑或變構(gòu)拮抗劑在與ICAM-1結(jié)合位點重疊的LFA-1 a L亞單元中的高親和力結(jié)合位點上，作為 LFA-1與ICAM-1之間相互作用的直接競爭性拮抗劑的拮抗劑，可以通過例如進行競爭 性結(jié)合試驗進行識別，該競爭性結(jié)合試驗如S.M. Keating，K. R. Clark, L. D. Stepanich, F. Arellano, C. P. Edwards, S. C. Bodary, S. A. Spencer, T. R. Gadek, J. C, Marsters Jr., M. H. Beresini,"Competition between intercellualr adhesion molecule-land a small molecule antagonist for a common binding site on the a lsubunit of lymphocyte function-associated antigen-1. ”(2006) ProteinScience，15 :290_303 所述。與 ICAM-1 結(jié)合位點重疊的LFA-1上的該高親和力位點已顯示包含LFA-1 a L亞單元的結(jié)構(gòu)域I的 MIDAS基序。使用該試驗設(shè)計還能識別變構(gòu)拮抗作用，該作用可以是競爭性的但不是直接競 爭性的。1. LFA-1與ICAM之間相互作用的直接競爭性拮抗劑的結(jié)合位點的識別a.化合物5與LFA-1 a L亞單元的交聯(lián)該類型的小分子拮抗劑的結(jié)合位點是通過使化合物5結(jié)合到LFA-1上、然后再進 行光致交聯(lián)進行識別的，其中化合物5是氚標(biāo)記的化合物3的光活化類似物(圖4)。為了最 大化特異性的高親和力交聯(lián)，需要在輻射之前通過凝膠過濾樣品來去除未結(jié)合的或結(jié)合弱 的化合物5 (圖5，泳道e與f，和g與h)。在不進行凝膠過濾的情況下，化合物5與LFA-1 a 亞單元、3亞單元和異二聚體顯著交聯(lián)(條帶在大約200000)，而在進行凝膠過濾的樣品中 未觀察到非特異性的交聯(lián)(數(shù)據(jù)未顯示)。在進行凝膠過濾的情況下，化合物5僅與aL亞 單元特異性交聯(lián)(圖5，泳道c和g)。此外，在溫育過程中化合物3的存在顯著減少了氚向 aL亞單元中的引入(圖5，泳道e與g)。類似地，在化合物3存在的情況下，在不進行凝 膠過濾的情況下，氚向a L亞單元、0 2亞單元和異二聚體中的引入略有減少(圖5，泳道f 與h)。當(dāng)使用凝膠過濾的分離的、結(jié)構(gòu)完整的aL或02亞單元的樣品時，化合物5不發(fā)生
56交聯(lián)(數(shù)據(jù)未顯示)。因此，凝膠過濾以后交聯(lián)所需的高親和力結(jié)合位點是由完整的LFA-I 異二聚體提供的。通過使用羥胺破碎親和力標(biāo)記的α L亞單元、電泳分離片段、然后對放射性標(biāo)記 的片段進行N末端測序以確定它們在蛋白質(zhì)序列中的位置來進一步確定交聯(lián)位點。識別出 兩個序列，第一個開始于殘基1(序列為YNLDVRGARSFS(SEQ ID NO 1))，第二個開始于殘基 30(序列為GVIVGAPGEGNST(SEQ ID NO 2))。通過它們在SDS-PAGE上的大小判斷出這兩 個肽的長度為約500個氨基酸(50-60kDa)；該片段大小與緊挨的兩個預(yù)測的羥胺切割位點 (N-G) N507和N530 —致。亞單元的C末端部分未引入標(biāo)記。b.化合物2B不能結(jié)合缺少結(jié)構(gòu)域I的LFA-I 結(jié)構(gòu)域I在化合物2B和相關(guān)類似物與LFA-I結(jié)合中的作用通過制備缺少結(jié)構(gòu)域 I的α L亞單元構(gòu)建體進行闡明。β 2構(gòu)建體單獨(假)或與缺少結(jié)構(gòu)域I的構(gòu)建體或野 生型α L—起轉(zhuǎn)染到293細胞中，并且檢測化合物2Β與轉(zhuǎn)染的細胞的結(jié)合(圖6)?；?物2Β顯示出與野生型α L轉(zhuǎn)染的細胞具有顯著結(jié)合，但是相對于與假(β2)轉(zhuǎn)染的細胞的 結(jié)合，化合物2Β與用缺少結(jié)構(gòu)域I的aL轉(zhuǎn)染的細胞無顯著結(jié)合。還檢測了轉(zhuǎn)染子粘附 ICAM-I-Ig的能力，正如預(yù)期的，缺少結(jié)構(gòu)域I的LFA-I轉(zhuǎn)染的細胞和假轉(zhuǎn)染子顯示出不能 辨別的背景結(jié)合水平，而野生型aL轉(zhuǎn)染的細胞顯示出強的粘附(圖6B)。通過評估一組 LFA-I抗體與轉(zhuǎn)染的細胞之間的結(jié)合表明，除了喪失定位(mapped)到結(jié)構(gòu)域I的抗體的結(jié) 合以外，LFA-I異二聚體看起來在缺少α L結(jié)構(gòu)域I的轉(zhuǎn)染的細胞中是完整的(數(shù)據(jù)未顯 示)°該數(shù)據(jù)支持以下結(jié)論化合物3和相關(guān)分子結(jié)合到與ICAM-I結(jié)合位點重疊的 LFA-I的高親和力位點上，上文已顯示該高親和力位點包括LFA-I α L亞單元中結(jié)構(gòu)域I的 MIDAS基序。通過刪除結(jié)構(gòu)域I對ICAM-I-Ig和化合物2Β結(jié)合的共同影響可以得出在LFA-I上 ICAM-I結(jié)合位點和小分子拮抗劑結(jié)合位點非常鄰近的確證證據(jù)?；衔?Β和ICAM-I均不 能結(jié)合缺少結(jié)構(gòu)域I的LFA-1，其中ICAM-I結(jié)合位點位于該結(jié)構(gòu)域中。此外，Α-286982變構(gòu) 修飾ICAM-I-Ig和化合物2Β的結(jié)合的能力同它們的結(jié)合位點與LFA-I α亞單元的結(jié)構(gòu)域 I的IDAS基序中的A-286982結(jié)合位點緊密靠近相一致?；衔?與LFA-I α鏈的選擇性 光化學(xué)交聯(lián)將其結(jié)合位點定位在該亞單元的殘基30-507內(nèi)。上述所有發(fā)現(xiàn)與位于LFA-I α 鏈的結(jié)構(gòu)域I中的單個高親和力小分子結(jié)合位點相一致。使用相對高濃度的化合物5(4. 1 μ Μ，圖5)仔細研究光化學(xué)交聯(lián)，提供了 LFA-I上 其他低親和力小分子結(jié)合位點的直接證據(jù)。在進行或不進行凝膠過濾時，觀察到顯著不同 的蛋白質(zhì)和交聯(lián)模式。當(dāng)樣品在輻射之前被凝膠過濾以去除未結(jié)合或結(jié)合弱的分子時，僅 觀察到α亞單元的高親和力標(biāo)記。但是，當(dāng)不進行凝膠過濾步驟時，對化合物5與LFA-I的 復(fù)合物的輻射造成了與α亞單元的高強度的交聯(lián)，以及與β亞單元中低親和力位點的低 強度的交聯(lián)，其中β亞單元與化合物5的復(fù)合物太弱以致于在凝膠過濾后不能存留。在這 兩種情況下，觀察到的交聯(lián)被大量過量(290 μ Μ)的化合物3部分抑制(圖5，泳道e和g，f 和h)，表明與這兩個位點的結(jié)合具有特異性的特性。使化合物5與分離的α或β亞單元 交聯(lián)的嘗試不能產(chǎn)生能夠在凝膠過濾過程后存留的高親和力復(fù)合物。因此，看起來由化合 物3代表的該類化合物的高親和力競爭性結(jié)合需要完整的全長LFA-I異二聚體的存在。在LFA-I亞單元或分離的結(jié)構(gòu)域I的構(gòu)建體中捕獲該結(jié)合位點的嘗試使得LFA-I對ICAM-I和 化合物3的小分子類似物(例如XVA143)的親和力減弱。特別值得關(guān)注的是，存在次要的 LFA-I異二聚體條帶，該條帶在不進行凝膠過濾時才出現(xiàn)(圖5，條帶> 200000道爾頓)。 由考馬斯藍染色和放射自顯影法鑒定的LFA-I條帶的強度與穩(wěn)定異二聚體的β鏈上的第 二位點的低親和力結(jié)合相一致。用于穩(wěn)定LFA-I與SDS-PAGE的結(jié)合位點可以位于β亞單元的I樣結(jié)構(gòu)域中。如 上所示，該β亞單元結(jié)合位點與α亞單元上的高親和力結(jié)合位點無關(guān)，后者負責(zé)ICAM-I 結(jié)合的直接競爭性抑制。但是，負責(zé)化合物3穩(wěn)定LFA-I的β亞單元結(jié)合位點可以與低親 和力β亞單元交聯(lián)位點相同。對于本文中使用的LFA-I小分子拮抗 劑探針類型，存在兩個截然不同的結(jié)合位 點。第一個位點是LFA-I的aL亞單元中的高親和力結(jié)合位點，小分子和LFA-I通過該結(jié) 合位點形成足以在凝膠過濾過程后存留的穩(wěn)定(例如Kd<25nM)的復(fù)合物。在本文報告 的結(jié)合試驗中已經(jīng)表征該小分子結(jié)合位點與ICAM-I結(jié)合位點重疊，并且與以下特性相關(guān) 化合物3和4對LFA-1/ICAM-1結(jié)合的強烈抑制(化合物4IC5(1 = 1. 4nM)；對體外LFA-I誘 導(dǎo)的淋巴細胞增殖的強烈抑制(化合物4IC5(I = 3nM)；和對體內(nèi)免疫系統(tǒng)應(yīng)答的抑制。第 二個位點是參與在SDS-PAGE下穩(wěn)定LFA-I異二聚體的β亞單元中的較低親和力結(jié)合位點 (例如Kd > 1 μ Μ)。該位點的動力學(xué)性質(zhì)更強(即較快的解離速率)，且在凝膠過濾/光分 解過程后不能存留。該第二低親和力位點的特征與β亞單元的I樣結(jié)構(gòu)域中α/β I樣變 構(gòu)拮抗劑結(jié)合位點的特征相同。本文描述的ICAM-I模擬物與LFA-I β亞單元的低親和力 結(jié)合(假定與I樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合)可能是由于結(jié)構(gòu)域I和I樣結(jié)構(gòu)域之間的序列同源性，特 別是MIDAS基序的相似性和它們對于該類拮抗劑共有的羧酸部分的親和力?？紤]到整聯(lián)蛋 白3 2家族(包括嫩(>1)共有該亞單元，化合物對于β 2亞單元中I樣結(jié)構(gòu)域的親和力必 需減弱，以選擇LFA-I特異性拮抗劑。上述試驗證明了化合物3和4與LFA-I的高親和力結(jié)合，該結(jié)合的方式同ICAM-I 與LFA-I的結(jié)合類似，且該結(jié)合的位點與包括LFA-I α亞單元結(jié)構(gòu)域I內(nèi)的MIDAS基序 的ICAM-I結(jié)合位點重疊。這與提出的對ICAM-I表位的模擬一致，但是與它們作為LFA-I/ ICAM-I的α β I樣變構(gòu)拮抗劑的任何結(jié)論不一致。這些ICAM-I模擬物與β 2整聯(lián)蛋白亞 單元的結(jié)合雖然親和力較低，但是提出了 ICAM-I自身是否結(jié)合在I樣結(jié)構(gòu)域的第二位點上 作為反饋機理的一部分的問題。上文已經(jīng)顯示小分子能夠以高親和力結(jié)合α-L亞單元，該α-L亞單元是LFA-I 特有的。因此，這些化合物對于LFA-I (a LP 2)比對于Mac-I ( α M β 2)具有更強的選擇性。 本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案是使用LFA-I的選擇性抑制劑，其可提供治療安全性的優(yōu)點。2.競爭性結(jié)合試驗a. LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISA中的拮抗劑競爭通過滴定到LFA-1/ICAM-1ELISA 中，利用化合物 2A 和 3、A-286982 和 sICAM-1 表 明ICAM-I-Ig與LFA-I的結(jié)合的競爭性抑制。該形式的LFA-1/ICAM-1測定的形式和結(jié)果 更可靠，這是由于LFA-I被抗體捕獲而不是直接包被在ELISA板上。該試驗是通過添加1/5 系列稀釋的化合物 3 (- ·-)、化合物 2A(- ▲ -)、A-286982 (- -)和 sICAM-1 (-▼-)、然 后再與ICAM-I-Ig(A)或化合物2B(B)在含捕獲的LFA-I的板上溫育而進行的。顯示的數(shù)據(jù)為一次試驗中兩個板的平均值，且是幾個獨立測量的代表。實線為數(shù)據(jù)的擬合。IC5tl值 (riM)在圖例中提供。ELISA中這些抑制劑的典型競爭曲線示于圖7A中?；衔?強烈抑制ICAM_l_Ig 與LFA-I的結(jié)合，IC50為2nM?；衔?A為化合物3的類似物，其抑制結(jié)合，但是具有大約 高10倍的IC50值。A-286982和siCAM-I抑制ICAM-I-Ig與LFA-I的結(jié)合，但是其IC50值 比化合物3的IC5tl值高100倍以上。還證明了這些相同的化合物抑制FITC標(biāo)記的小分子拮抗劑一化合物2B與LFA-I 的結(jié)合的能力(圖7B)。作為化合物2B結(jié)合的抑制劑的化合物2A和3和可溶性ICAM-I的 效力與ICAM-I-Ig結(jié)合的抑制劑的效力類似?；衔?、化合物2A和sICAM_l抑制化合物 2B與LFA-I的結(jié)合，其IC5tl值分別為3、5 6和1200nM。A-286982不是抑制而是增強化合物 2B與LFA-I的結(jié)合，其證據(jù)是吸光度值暫時增加，在下降之前達到約4μ M的最大效果。在LFA-I/小分子和LFA-1/ICAM-1ELISA中進行的IC5tl值的評估擴展到更多的化 合物，包括一組蝮蛇毒素衍生的肽和代表該類LFA-I小分子拮抗劑進化的小分子。如圖8 所示(在LFA-I與ICAM-I的ELISA和LFA-I與小分子的ELISA中拮抗劑競爭的IC5tl值的 相關(guān)性)。一組不同的化合物(4個肽、5個小分子和sICAM-1)與化合物2B相競爭的IC5tl 值相對于在與ICAM-I-Ig競爭結(jié)合LFA-I中確定的IC5tl值作圖。斜率為0. 964，y-截距為 0. 237, R = 0. 940。每個數(shù)據(jù)點為兩個板的IC5tl值的平均值，在對于該不同組的化合物(包 括sICAM-1、化合物2A和3)的兩個配體結(jié)合測定中的每一個中，在5個log單位的效力中， 在競爭IC5tl值之間存在良好的相關(guān)性(R = 0.94)。在使用ICAM-I-Ig和化合物2B作為配 體的兩個拮抗劑競爭性ELISA之間的共同的效力趨勢表明各化合物以機理上類似的方式 破壞了 ICAM-I和小分子配體的結(jié)合。這種抑制效力的相似性表明=ICAM-I-Ig和化合物2B 與LFA-I上的相同的位點結(jié)合。因此，本發(fā)明的化合物為LFA-I的競爭性拮抗劑。b. LFA-1/ICAM-1ELISA和LFA-I/小分子ELISA中配體結(jié)合的拮抗劑調(diào)控通過與目的配體直接競爭來進行抑制的拮抗劑顯示出隨著拮抗劑濃度增加，配 體結(jié)合曲線向較高表觀EC5tl值非飽和性右向偏移，且配體的最大結(jié)合沒有下降。抑制是可 以消除的，但是需要在存在濃度增加的直接競爭性抑制劑的情況下增加配體的量。直接競 爭性化合物3、變構(gòu)拮抗劑A-286982和sICAM-1對ICAM-I-Ig和化合物2B與LFA-I的結(jié) 合曲線的影響示于圖9中，作為顯示直接競爭的拮抗劑的例子。在LFA-1/ICAM-1ELISA和 LFA-I/小分子ELISA中，在不存在(-O -)或存在拮抗劑的情況下滴定ICAM-I-Ig (A、C、E) 或化合物2B(B、D、F)。以兩倍稀釋添加拮抗劑，起始為2. 4 μ M(A)和2. 7 μ M(B)的sICAM-1、 0. 040 μ M(C)和 0. 10 μ M (D)的化合物 3 和 20 μ M (E)和 50 μ M(F)的 Α-286982。拮抗劑濃度 的順序為-□_(添加的最低拮抗劑濃度)、_Δ-、-〇-、- -、-■-、-▲-至-·-(最 高的拮抗劑濃度)。該數(shù)據(jù)的擬合如實線所示。顯示的數(shù)據(jù)來自一個板中，并代表至少兩 個試驗。(注釋A-286982(F)導(dǎo)致化合物與LFA-I的結(jié)合增加)。相反，變構(gòu)抑制劑通過 降低曲線向右偏移的最大結(jié)合或飽和可以改變配體結(jié)合曲線。如圖9A所示，當(dāng)存在濃度增 加的sICAM-1時，ICAM-I-Ig結(jié)合曲線明顯會向右偏移至較高的EC5tl值。此外，正如所預(yù)期 的，當(dāng)同一天然配體的兩種分子形式直接競爭與受體上一個位點的結(jié)合時，在存在和不存 在sICAM-1時觀察到相同最大程度的ICAM-I-Ig與LFA-I的結(jié)合。類似地，增加化合物3 的濃度還使ICAM-I-Ig的結(jié)合偏移至較高的EC5tl值，最大ICAM-I-Ig結(jié)合具有最小的變化(圖9C)。盡管在存在競爭性拮抗劑時配體結(jié)合曲線的向右偏移通常是平行的，但也不總是 這樣。在存在或不存在化合物3的情況下，LFA-1/ICAM-l-Ig結(jié)合曲線的不平行的斜率可 能是由于在使用該化合物的異源配體結(jié)合ELISA條件下不能夠?qū)崿F(xiàn)完全平衡。在配體結(jié)合 ELISA的LFA-I/化合物2B形式中，增加化合物3的濃度還明顯地使化合物2B結(jié)合曲線偏 移至較高的EC5tl值，且最大結(jié)合沒有降低(圖9D)。增加sICAM-1的濃度也顯示出類似的效 果(圖9B)，盡管曲線的偏移程度受限于可達到的最大sICAM-1濃度2.7 μΜ。因此，sICAM-1 和化合物3對ICAM-I-Ig和化合物2與LFA-I結(jié)合的影響是上述直接競爭的特征。
A-286982對ICAM_l_Ig和化合物2B與受體結(jié)合的影響是明顯不同的(圖9E和 9F)。在 LFA-1/ICAM-1ELISA 中，ICAM-1-Ig 曲線向右偏移至較高的 EC5tl 值；但是 ICAM-1-Ig 與LFA-I的最大結(jié)合隨著A-286982濃度的增加而顯著降低。隨著A-286982濃度的增加， 最大結(jié)合的降低和配體結(jié)合曲線的向右偏移反映了如上所述的變構(gòu)抑制。A-286982導(dǎo)致 配體親和力和結(jié)合能力都降低；這表明A-286982為ICAM-I-Ig結(jié)合的不可克服的拮抗劑。 相反，在LFA/小分子ELISA中，微摩爾濃度A-286982的存在使得化合物2B結(jié)合曲線向較 低的EC5tl值偏移，且看起來提高了化合物2B與LFA-I的結(jié)合(圖9F)。A-286982對化合物 2B和ICAM-I-Ig結(jié)合的相反影響可能是由于與LFA-I上的IDAS位點結(jié)合的化合物的已知 變構(gòu)效應(yīng)。A-286982結(jié)合數(shù)據(jù)用于表明在該方法中證明的結(jié)合試驗中對小分子和蛋白質(zhì)配 體結(jié)合LFA-I的變構(gòu)抑制。還可利用Schild分析研究化合物是否通過單個結(jié)合位點的直接競爭來抑制配體 的結(jié)合。該模型是基于以下假設(shè)測定中等活性的(equiactive)響應(yīng)是配體對受體的等同 占有的結(jié)果，且最大的結(jié)合在存在拮抗劑時未改變。在Schild分析中，劑量比為存在拮抗 劑與不存在拮抗劑時的EC5tl值比，且是導(dǎo)致等活性響應(yīng)的配體濃度的量度。確定拮抗劑各 濃度的該劑量比，Schild回歸的作圖示于圖10中。Schild回歸中斜率為1的線性響應(yīng)表明 拮抗劑的抑制是直接競爭性的和可逆的。在不導(dǎo)致最大結(jié)合降低的變構(gòu)抑制劑的情況下， Schild分析將產(chǎn)生非線性關(guān)系和/或顯著偏離1的斜率。sICAM-1和化合物3的Schild 回歸示于圖10中，分別具有相當(dāng)?shù)男甭?. 26和1. 24。LFA-1/ICAM-1配體結(jié)合ELISA中 s-ICAM-1 (-▲-)和化合物3(-·-)拮抗作用的Schild回歸分別根據(jù)圖5(A)和(C)中 的數(shù)據(jù)進行作圖?；衔?的圖線的斜率為1.24，y-截距為10. 9，R = 0.99832。sICAM-1 的圖線的斜率為1. 26，y-截距為8. 51，R = 0.99131。盡管Schild分析要求斜率接近1的 線性回歸以表明直接競爭性抑制，但是在大量的文獻中沒有關(guān)于什么范圍的Schild值是 可接受的教導(dǎo)。1. 24和1. 26的斜率落于用于支持競爭性結(jié)合結(jié)論的許多發(fā)表的Schild值 的范圍內(nèi)，因此，并不認為這些斜率值顯著不同于1?；貧w作圖的線性以及相關(guān)性斜率的相 似性與配體(ICAM-I-Ig)和兩個拮抗劑(sICAM-1和化合物3)以相似方式結(jié)合相同位點是 一致的。A.抗體幾種合適的抗體是本領(lǐng)域已知的。針對這些分子中的一種或兩種的抗體對 ICAM(例如ICAM-1)或白整聯(lián)蛋白(例如LFA-1)的阻斷能夠抑制炎性反應(yīng)。早先研究已 經(jīng)研究了抗CDlla MAb對體外的許多T細胞依賴性免疫功能和體內(nèi)的多種免疫應(yīng)答的影 口向。抗 CDllaMAb 在體外抑制 T 細胞活化(參見 Kuypers T. W.，Roos D. 1989〃 Leukocyte membrane adhesion proteins LFA-1, CR3 and pl50,95 :areview of functional andregulatory aspects “ Res. Immunol. , 140 461-465 ；Fischer A, Durandy A, Sterkers G, Griscelli C. 1986 "Roleof the LFA-1 molecule in cellular interactions required for antibodyproduction in humans" J. Immunol. , 136, 3198) > 細胞毒個生 T 淋巴細胞對靶細胞的裂解(Krensky et al.，同上)、免疫偶聯(lián)物的形成(SandersVM， Snyder JM, Uhr Jff, Vitetta ES. , "Characterization of the physical interaction between antigen-specific B and T cells". J. Immunol. ,137 2395 (1986) ；Mentzer SJ, Gromkowski SH, Krensky AM, BurakoffSJ, Martz E. 1985 “LFA-1 membrane molecule in the regulation ofhomotypic adhesions of human B lymphocytesn" J. Immunol., 135 9))和 T 細胞與血管內(nèi)皮的粘附(Lo SK, Van Seventer GA, Levin SM, WrightSD.， Two leukocyte receptors (CD1la/CD18 and CD1lb/CD18)mediatetransient adhesion to endothelium by binding to different ligands. , J. Immunol. , 143 :3325 (1989))。兩禾中 抗 CDlla MAb-HIll 和 G43-25B 可從 Pharmingen/BD Biosciences 購得。此外，包括 F8. 8、 CBR LFA 1/9、BL5、May. 035、TS1/11、TS1/12、TS1/22、TS2/14、25_3_1、MHM2 和依法珠單 抗的研究評價了這些抗體占據(jù)的LFA-1上的結(jié)合位點的范圍。參見Lu，C;Shimaoka，M.； Salas, A. ；Springer, T. A. 2004, "TheBinding Sites for Competitive Antagonistic, Allosteric Antagonistic, andAgonistic Antibodies to the I Domain of Integrin LFA-1” J. Immun. 173 :3972_3978及其中引用的文獻。已顯示在抗LFA-1抗體中，依法珠單 抗為LFA-1的直接競爭性拮抗劑。因此，多種抗LFA-1抗體，包括依法珠單抗(Raptiva)，可以用于治療糖尿病性視 網(wǎng)膜病。B.小分子1.肽已經(jīng)研究了肽在降低LFA-1與ICAM-1之間的相互作用中的應(yīng)用。不含IgG的Fc 域的多肽在美國專利No. 5，747’ 035中有所描述，其可用于治療LFA-1介導(dǎo)的病癥，特別是 糖尿病性視網(wǎng)膜病。美國專利No. 5，843，885描述了使用雙肽降低LFA-1與ICAM-1之間的 相互作用，第一個是ICAM-1的調(diào)節(jié)劑，第二個是具有來自LFA-1的序列的阻斷肽。美國專 利No. 6，630，447中描述了環(huán)肽作為LFA-1與ICAM-1之間相互作用的抑制劑。2.有機小分子a.作為LFA-1的直接競爭性抑制劑的示例性化合物“有機小分子”通常是指與藥品中常用的那些有機分子具有可比較的大小的有機 分子。該術(shù)語通常不包括有機生物高分子(例如蛋白質(zhì)、核酸等)。有機小分子通常的大小 為最高約5000Da，在一些實施方案中最高約2000Da，在其他的實施方案中，最高約1000Da。i.在一個實施方案中，在本發(fā)明的方法中有用的化合物包括式I的化合物
o
I
4
、(R>
AR1、 ^D.
61
式1R1和R2各獨立地為氫、氨基酸側(cè)鏈、-(CH2)fflOH, -(CH2)m芳基、-(CH2)m雜芳 基(其中 m 為 0-6)、-CH(Ria) (ORib)、-CH(Ria) (NHRib)、U-T-Q 或任選地被 U-T-Q 取代 的脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族或雜脂環(huán)族部分；其中U可不存在或為下述之一 -0-、 -S(0)。_2-、-S02N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C( = 0)-、-N (Ria) C ( = 0) _0_、-N (Ria) C (= 0) -N(Rib)-, -N(Ria) -SO2-, -C( = 0)-、-C( = 0)_0_、-O-C ( = 0)-、芳基、雜芳基、烷 基芳基、烷基雜芳基、_C( = 0)-N(Ria)-, -OC( = 0)N(Ria)-, -C( = N-Rie)_C(= N-Rie) -0-、-C ( = N-Rie) -N (Ria) -、-O-C ( = N-Rie) -N (Ria) -、-N (Ria) C ( = N-Rie) -、-N (Ria) C (= N-Rie) -0-、-N (Ria) C ( = N-Rie) -N (Rib) -、-P ( = 0) (ORia) -0-或-P ( = 0) (Ria) _0_ ；其中 T 不存 在或為脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；Q為氫、鹵素、氰基、 異氰酸基(isocyanate)、-ORib、-SRib、-N(Rib)2、-NHC( = 0)0R1B、-NHC( = 0)N(Rib)2、-NHC(= 0) Rib、-NHSO2Rib、NHSO2N (Rib)2, -NHSO2NHC ( = 0) ORib、-NHC ( = 0) NHSO2Rib、-C ( = 0) NHC (= 0)0R1B、C( = 0)NHC( = 0)R1B、-C( = 0)NHC( = 0)N(Rib)2, -C( = 0)NHSO2Rib, _C( = 0) NHSO2N(RIB)2、C( = S)N(RIB)2, -SO2RIB、-SO2ORIB、-SO2N(RIB)2、-SO2-NHC( = 0)0R1B、-OC(= 0) -N(Rib)2,-OC ( = 0)R1B、-0C( = 0) NHC ( = 0)R1B、_0C( = 0) NHS02R1B、-OSO2Rib,或月旨肪族、
雜脂肪族、芳基或雜芳基部分，或其中R1和R2 —起為脂環(huán)族或雜環(huán)部分，或一起為 其中每次出現(xiàn)的Ria和Rib獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳基、 雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、"C( = 0)Rie、或-C( = 0)NR1cRid ；其中每次出現(xiàn)的 Ric和Rid獨立地為氫、羥基或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部 分；且Rie為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部 分、-CN、-ORic, -NRicRid 或-S02R1C ；其中R3 為-C ( = 0)0R3A、-C ( = 0)H、_CH20R3A、-CH2OC ( = 0)-烷基、-C ( = 0) NH(R3a) ,-CH2X0 ；其中每次出現(xiàn)的R3a獨立地為氫、保護基、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán) 族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基、雜烷基雜芳基部分，或藥學(xué)上可接受 的鹽或酯，或R3a與R1和R2 —起形成雜環(huán)部分；其中X°為選自F、Br或I的鹵素；每次出現(xiàn)的R4獨立地為氫、鹵素、-CN、-NO2,脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜 脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為GRe1，其中G為-0-、-S-、 NRG2-、-C0-、-S0-、-S02-、C( = 0)0-、-C( = 0) NRg2-, C ( = 0)-、-NRg2C ( = 0)-或-SO2NRg2-, 且Rei和Re2獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷 基雜芳基部分；η為0-4的整數(shù)；AR1為單環(huán)或多環(huán)芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、脂環(huán)族或雜環(huán)部分；A、B、D和E當(dāng)化合價允許時經(jīng)單鍵或雙鍵連接；其中每次出現(xiàn)的A、B、D和E獨立地 為C = 0,CRiRii,NRi,CRi,N,0,S,-S( = 0)或SO2 ；其中每次出現(xiàn)的Ri和Rii獨立地為氫、鹵 素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為-GRei 其中 G 為-O-、-S-、-NRe2、-CO-、-SO-、-C ( = 0) 0_、-C (= 0) NRG2-, -OC (= 0)-,-NRG2C ( = 0)-或-SO2NRe2-,且Rei和Re2獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán) 族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；或任何兩個相鄰的出現(xiàn)一起代表脂環(huán)族、雜 脂環(huán)族、芳基或雜芳基部分；ρ為0-4的整數(shù)；且L不存在或為V-W-X-Y-Z，其中每次出現(xiàn)的V、W、X、Y和Z獨立地為不存在、C = 0、 NRli、-0-、-C (Ru) =、= C (Ru) -、-C (Ru) (Rl2)、C ( = N-ORli)、C ( = NRli)、-N =、S (0) 0_2 ；取 代或未取代的Cp6亞烯基或C2_6alkenylidine鏈，其中最多兩個非相鄰的亞甲基單元獨立 地任選地被-C( = 0)-、-CO2-, -C( = 0)C( = 0)-、-C(C = 0)NRL3-、-OC( = 0)-、-OC(= 0) NRl3-, -NRl3NRl4-、-NRl3NRl4C ( = 0) -、-NRl3C ( = 0) -、NRl3CO2-、NRl3C ( = 0) NRl4-, -S ( = 0 )-、-SO2-、-NRl3SO2-、-SO2NRl3、-NRl3SO2NRl4、-0-、-S-或-NRl3-代替；其中每次出現(xiàn)的 Rl3 和 Rl4 獨立地為氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基或?；?；或脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳 基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；且每次出現(xiàn)的Ru和礦2獨立地為氫、羥基、保護的 羥基、氨基、保護的氨基、硫代、保護的硫代、商素、氰基、異氰酸基、羧基、羧基烷基、甲?；?、 甲酰氧基、疊氮基、硝基、脲基、硫脲基、氰硫基、烷氧基、芳氧基、巰基、磺酰氨基、芐酰氨基、 甲苯磺?；?，或脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基 部分，或其中一次或多次出現(xiàn)的Ru和儼一起或者與V、W、X、Y或Z中的一個一起形成脂環(huán) 族或雜環(huán)部分或形成芳基或雜芳基部分。本發(fā)明方法的一些優(yōu)選實施方案為式II的化合物 其中R28為以下基團之一 且R27為以下基團之一 且R29為氫、藥學(xué)上可接受的鹽或酯。本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案為式ΙΓ的化合物 式II'其中取代基如式II的取代基。本發(fā)明方法的化合物的一些特別優(yōu)選的實施方案為式IA、IIA和IIB的化合物 式IA 式 IIA 式 IIB其中R17為氫、藥學(xué)上可接受的鹽或酯，且R27為式II中的R27。該類化合物在美國 專利No. 7314938中公開。ii.本發(fā)明方法的化合物的另一類優(yōu)選實施方案為式III的化合物 式III其中Cy為任選地被羥基(-0H)、巰基(_SH)、烷硫基、鹵素(例如F、Cl、Br、I)、氧 代(=0)、硫代(=S)、氨基、氨基烷基、脒(-C(NH)-NH2)、胍(-NH2-C(NH)-NH2)、硝基、烷基 或烷氧基取代的芳香族碳環(huán)、芳香族雜環(huán)或非芳香族碳環(huán)或雜環(huán)。在一個特別的實施方案 中，Cy為3-5元環(huán)。在優(yōu)選的實施方案中，Cy為任選地被羥基、巰基、鹵素(優(yōu)選F或Cl)、 氧代(=0)、硫代(=S)、氨基、脒、胍、硝基、烷基或烷氧基取代的5或6元非芳香族雜環(huán)。 在更優(yōu)選的實施方案中，Cy為任選地被羥基、氧代、硫代、CKCh烷基(優(yōu)選甲基)或C"烷 ?；?優(yōu)選乙?；?、丙?；蚨□；?取代的5元非芳香族雜環(huán)。更優(yōu)選地，非芳香族雜環(huán) 包括一個或多個雜原子(N、0或S)，且任選地被羥基、氧、巰基、硫、甲基、乙?；?、丙?；?丁基取代。在特別的實施方案中，非芳香族雜環(huán)包括至少一個氮原子，且任選地被甲基或乙 ?；〈?。在特別優(yōu)選的實施方案中，非芳香族雜環(huán)選自任選地被羥基、氧代、巰基、硫代、 烷基或烷?；〈倪哙?、哌嗪、嗎啉、四氫呋喃、四氫噻吩、噁唑烷、噻唑烷。在最優(yōu)選的實 施方案中，Cy為選自四氫呋喃-2-基、噻唑烷-5-基、噻唑烷-2-酮-5-基和噻唑烷_2_硫 酮-5-基和吡咯烷的非芳香族雜環(huán)。在優(yōu)選的實施方案中，Cy為任選地被羥基、巰基、鹵素 (優(yōu)選F或Cl)、氧代(=0)、硫代(=S)、氨基、脒、胍、硝基、烷基或烷氧基取代的5或6 元芳香族碳環(huán)或雜環(huán)。在更優(yōu)選的實施方案中，Cy為任選地被羥基、氧代、硫代、Cl、Cy烷 基(優(yōu)選甲基)或Ch烷酰基(優(yōu)選乙?；?、丙?；蚨□；?取代的5元芳香族碳環(huán)或 雜環(huán)。更優(yōu)選地，芳香族或雜環(huán)包含一個或多個雜原子(N、0或S)，且任選地被羥基、氧代、 巰基、硫代、甲基、乙酰基、丙?；蚨』〈Ｔ诹硪粌?yōu)選的實施方案中，Cy為任選地被羥基、巰基、鹵素、氧、硫、氨基、脒、胍、烷 基、烷氧基或酰基取代的3-6元碳環(huán)。在特定的實施方案中，碳環(huán)為飽和或部分不飽和的。 在特定的實施方案中，Cy為選自環(huán)丙基、環(huán)丙烯基、環(huán)丁基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán) 己基或環(huán)己烯基的碳環(huán)。X2為任選地具有被N、0、S、S0或SO2替代的一個或多個碳原子并且任選地被羥基、 巰基、鹵素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代取代的Ci_5 二價烴連接基。在優(yōu)選的實施方案 中，X2具有至少一個碳原子。替代和取代可在烴鏈內(nèi)或一端或兩端形成酰胺部分(_NRC( = 0)-或-C( = 0)NR-)。X還是磺酰胺(-NRSO2-或-SO2NR)、?；?、醚、硫醚或胺。在特別優(yōu)選 的實施方案中，X2為-CH2-NRltl-C (0) _，其中其羰基-C (0)-部分鄰近(即共價結(jié)合)Cy，且Rw 為烷基，如甲基，或更優(yōu)選地為H。K為任選地被羥基、巰基、鹵素、氧代、硫代、烴、鹵素取代的烴、氨基、脒、胍、氰基、
硝基、烷氧基或酰基取代的碳環(huán)或雜環(huán)。在特別的實施方案中，K為任選地被鹵素或羥基取 代的芳基或雜芳基。在特別優(yōu)選的實施方案中，K為被鹵素(優(yōu)選Cl)或羥基、優(yōu)選在間位 取代的苯基、呋喃-2-基、噻吩-2-基、苯基。
L2為任選地具有被N、0、S、S0或S02替代的一個或多個碳原子并且任選地被羥基、 鹵素、氧代或硫代取代的二價烴；或烴的三個碳原子被氨基酸殘基代替。l2的長度優(yōu)選小于 10個原子，更優(yōu)選5個或更少，最優(yōu)選5或3個原子。在特別的實施方案中，L2為-CH = C h-c (o) -nr10-ch2-,-ch2-nr10-c (o) -、-c (0) -NR1ci-CH2-、-CH (oh) - (ch2) 2-、- (ch2) 2-ch (oh) -、- (c H2) 3-、-c (0) -NR10"CH (R7) -c (0) -NR10-、-NR10-C (0) -CH (R16) -NR10-C (0) -、-CH (OH) -CH2_0-或 _C H(OH) -CF2-CH2-，其中各獨立地為H或烷基，且R16為氨基酸側(cè)鏈。優(yōu)選的氨基酸側(cè)鏈包 括非天然存在的側(cè)鏈，例如苯基，或天然存在的側(cè)鏈。優(yōu)選的側(cè)鏈為Phe、Tyr、Ala、Gin和 Asn的側(cè)鏈。在優(yōu)選的實施方案中，L2為-CH = CH-C(0)-NR1(l-CH2-，其中其-CH = CH-部分 鄰近(即共價結(jié)合)K。在其他優(yōu)選實施方案中，L2為-CH2-NR1(l-C(0)-，其中其亞甲基部分 (-CH2-)鄰近 K。R5為H、0H、氨基、0-碳環(huán)或任選地被氨基、碳環(huán)、雜環(huán)取代的烷氧基，或藥學(xué)上可接 受的鹽或酯。在優(yōu)選的實施方案中，R5為H、苯基或任選地被碳環(huán)(例如苯基)取代的(V4 烷氧基。在特定的實施方案中，R5為H。在另一特定的實施方案中，R5為甲氧基、乙氧基、丙 氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、苯氧基或芐氧基。在又另一特定的實施方案 中，R5為NH2。在特別優(yōu)選的實施方案中，R5為乙氧基。在另一特別優(yōu)選的實施方案中，R5 為異丁氧基。在另一特別優(yōu)選的實施方案中，R5為被氨基取代的烷氧基，例如2-氨基乙氧 基、N-嗎啉代乙氧基、N, N- 二烷基氨基乙氧基、季銨羥基烷氧基(例如三甲基銨羥基乙氧 基)。R6—9獨立地為H、羥基、巰基、鹵素、氰基、氨基、脒、胍、硝基或烷氧基；或R7和R8 — 起形成任選地被羥基、商素、氧代、硫代、氨基、脒、胍或烷氧基取代的稠合的碳環(huán)或雜環(huán)。在 特別的實施方案中，R6和R7獨立地為H、F、Cl、Br或I。在另一特別的實施方案中，R8和R9 均為H。在另一特別的實施方案中，R6和R7中的一個是鹵素，而另一個是氫或鹵素。在特別 優(yōu)選的實施方案中，R7是C1而R6、R8和R9各為H。在另一特別優(yōu)選的實施方案中，R6和R7 均為C1而R8和R9均為H。R10為H或任選地被碳環(huán)或雜環(huán)取代的烴鏈。在優(yōu)選的實施方案中，R"1為H或烷 基，如甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。在特別的實施方案中，R10為H。美國專利No. 6667318、No. 6872735和No. 6803384公開了式III類型的化合物。iii.本發(fā)明方法的進一步優(yōu)選的實施方案是式IV的化合物 式IV其中R11為下式的基團 其中A為氫、羥基、氨基或鹵素，且B為氨基、羧基、氫、羥基、氰基、三氟甲基、鹵素、 低級烷基或低級烷氧基；R12為下式的基團 其中R13為氫、羧基或低級烷基；η為O或1 ;U2、V2和W2獨立地為氫、鹵素或低級烷 基，條件是隊和^不均為氫；x3為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺 ?；?；γ2為低級亞烷基，其可被一個或多個氨基、取代的氨基、低級烷基或環(huán)狀低級烷基取 代，或Y2為低級亞烯基或低級亞烷基硫基；k為O或1;當(dāng)k為1時，Z2為氫、低級烷硫基、-C00H、-CONH2、氨基；當(dāng)k為O或1 時，&為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5_氯吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基、羥 基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羥基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，6_ 二氯苯基) 甲氧基]苯基；此外，當(dāng)k為O或1時，Z2可以為含O至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或 芳基，或為含2個或3個環(huán)的稠環(huán)系統(tǒng)，這些環(huán)獨立地為含O至3個相同或不同雜原子的環(huán) 烷基或芳基，任何環(huán)均可以是未取代的，或被商素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺?；?、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、商素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的 低級烷基、低級烷氧基、低級烷基磺?；⒌图壨榱蚧?、乙?；被驶?、胼基、羧基、烷氧 羰基、乙酰氧基中的至少一個取代，或還被氨基低級烷基取代；且R2°為氫、藥學(xué)上可接受的 鹽或酯。式IV的化合物的一個實施方案具有式IV’中所示的立體化學(xué)
iv.本發(fā)明方法的化合物的另一組優(yōu)選實施方案為式V的化合物
其中R14為下式的基團 其中R15為氫、羧基或低級烷基；U3、V3和W3獨立地為氫、鹵素；或者U3、V3和W3為 低級烷基，條件是U3和v3不均為氫；x4為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞 氨基(包括氰基)或磺酰基；Y3為低級亞烯基、低級亞烷基硫基，或為低級亞烷基，其可被氨 基、乙酰氨基或環(huán)狀低級烷基取代；k2為0或1 ；當(dāng)k2為1時，Z氫、低級烷硫基、-C00H、-C0NH2-或氨基；當(dāng)k2為0或1時，Z3為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[ [ (5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基；當(dāng) k2為0或1時，Z可以為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，或為含2個或3個 環(huán)的稠環(huán)系統(tǒng)，這些環(huán)獨立地為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，任何環(huán)均可 以是未取代的，或被鹵素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺?；?、硝基、氧代、羥基、芳基、芳 氧基、未取代的低級烷基、商素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、 羧基、烷氧羰基或乙酰氧基中的至少一個取代；且R21為氫、其藥學(xué)上可接受的鹽或酯。式V的化合物的一個優(yōu)選實施方案具有式V’所示的立體化學(xué) 式V，美國專利No. 7217728、No. 6331640、No. 6515124 禾口 No. 6803384 中公開了式 IV 禾口 V類型的其他化合物。v.本發(fā)明方法的另一類優(yōu)選化合物由式VI表示 式VI其中D4為單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)飽和、不飽和或芳香族環(huán)，各環(huán)在環(huán)中具有5、6或7個 原子，其中環(huán)中的原子為碳或選自氮、氧和硫的1至4個雜原子，其中任何碳或硫環(huán)原子任 選地可被氧化，各環(huán)被0-3個R31取代；L3為具有下面結(jié)構(gòu)之一的二價連接基團-L'-L'-L1-,-L'-L'-L'-L1-禾口-dd-L1-，其中L1 為氧(-0-)、5(0)5、<( = 0)、0 32、1 32、0 321^^、殿30或隊L2 為氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、C ( = N—O—R33)、CR34R34 ‘、CR34、het NR30 或 N，L3 為氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、C ( = N—O—R33)、CR35R35'、CR35、het NR30 或 N，L4 不存在或為氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、C ( = N-O-R33)、CR36R36/、CR36、NR3?；?N，L5 不存在或為氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、CR37R37'、CR37、NR30 或 N，條件是 L^L3 中 僅有一個可為het，且當(dāng)U-L3中的一個為het時，其他的U-L5可以不存在，
°4—L3——日3——N
其中R32、R32'、R34、R34'、R35、R35'、R36、R36'、R37 和 R37'各獨立地為 R38、R39 或 U-Q-V-W，任選地，R24和R34'分別或一起與B3通過B上的取代基RP可形成飽和、不飽和或 芳香族稠環(huán)，該稠環(huán)的環(huán)中含5、6或7個原子且任選地含有選自0、S和N的1-3個雜原子， 其中任何S或N任選地可被氧化；任選地，R35和R35分別或一起以及R36和R36'分別或一起與D3通過D3上的取代基 R31可形成飽和、不飽和或芳香族稠環(huán)，該稠環(huán)的環(huán)中含有5、6或7個原子且任選地含有選 自0、S和N的1-3個雜原子，其中任何S或N任選地可被氧化；還任選地，L^L5中的各R32-R37、NR3°或N與U-L5中的其他任何R32-R37、NR3°或N — 起可形成5、6或7元碳環(huán)或雜環(huán)，其為飽和、不飽和或芳香族的，任選地含有選自N、0和S 的1-3個另外的雜原子，其中任何碳或硫環(huán)原子任選地可被氧化，各環(huán)被0-3個R31取代；且 其中s為0-2 ；B選自以下基團 其中
為含有5、6或7個原子的稠合雜環(huán)或碳環(huán)，該環(huán)為不飽和的、部分飽和的
或芳香族的，雜原子選自1-3個0、S和N，Y3 為 CH 和 NR3CI;n 為 0、1、3 或 3:G3為氫或Q-C；烷基，任選地G與T 一起可形成任選地被-V-W取代的C3_C6環(huán)烷 基；T3以下基團之一天然存在的a -氨基酸側(cè)鏈，和U4-Q4-V4-W4 ；U4為任選地被取代的具有以下結(jié)構(gòu)之一的二價基團CrC6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6烯基-Q和C2_C6炔基-Q，其中任何烷基、烯基或炔 基上的取代基為1-3個R38;Q4不存在或為-0-、-S(0)s-、-S02-N(R3CI)-、-N(R3CI)-、-N(R3°)-C( = 0)-、_N(R3°)-C( = 0)-N(R30)-、-N(R30) -C( = 0)-0_、-N(R30)-S02-、_C( = 0)_、_C( = 0) _0_、_het_、_C (= 0)-N(R30)-、-0-C ( = 0) -N (R30) -、_P0 (0R30) 0_ 或 _P (0) 0_ ；其中s 為 0-2 且het為單環(huán)或雙環(huán)的5、6、7、9或10元雜環(huán)，各環(huán)含有選自N、0和S的1-4個雜原 子，其中雜環(huán)可以是飽和的、部分飽和或芳香族的，且任何N或S任選地可被氧化，雜環(huán)被 0-3個R41取代；
V4不存在或為任選地被取代的具有以下結(jié)構(gòu)之一的二價基團烷基、C3_C8環(huán) 燒基、c0-c6燒基-C6-C10芳基禾口 c0-c6燒基-het ；其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1_3個 R31；ff4 為氧、OR33、SR42、NR30R30、NH-C( = 0)-0_R43、NH-C ( = 0) _NRnRn、NH-C (= 0)-R43, NH-S02-R37, NH-S02-NR30R30, NH-S02-NH-C( = 0)-R43, NH-C( = 0) -NH-S02-R37, C( = 0)-NH-C( = 0)-0-R43、C( = 0)-NH-C( = 0)-R43、C( = 0)-NH-C( = 0)-NR30R30 '、 C( = O)-NH-SO2-R37、C( = 0)-NH-SO2-NR30R30 '、C( = S)-NR30R30 '、SO2-R37、so2-O-R37、 SO2-NR37R37 '、SO2-NH-c ( = 0) -o-R43、SO2-NH-C ( = o) -NR30R30 '、SO2NH-C ( = 0) -R43、 -c (=
0)-NR30R30'、 -C ( = 0) -R43、0-C ( = 0) -NH-C ( = 0) -R43、0_C ( = 0) -NH_S02R46 或 0_S02-R37、R44 為 C ( = 0) -R45、C ( = 0) -H、CH2 (OH)或 CH20_C ( = 0) _C「C6 烷基；R38為R38'或被1-3個R38'取代的R38"；其中R38'為氫、鹵素(F、Cl、Br、I)、氰基、異氰酸基、羧基、羧基-Q-C^烷基、氨基、氨 基烷基、氨基羰基、甲酰氨基、氨基甲?；?、氨基甲酰氧基、甲?；⒓柞Ｑ趸?、疊氮 基、硝基、咪唑基、脲基、硫脲基、氰硫基、羥基、&_(；烷氧基、巰基、磺酰氨基、het、苯氧基、苯 基、芐酰氨基、甲苯磺酰基、嗎啉代、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯啉基、咪唑基或吲哚基；R38 “為 C0_C10 燒基 _Q_C0_C6 燒基、C0_C10 烯基 _Q_C0_C6 燒基、C0_C10 炔基 _Q_C0_C6 燒基、C3_Cn 環(huán)焼基-q-c0-c6焼基、c3-c10環(huán)烯基-q-c0-c6焼基、c「c6焼基-c6-c12芳 基 _Q_C0_C6 焼基、C6_C10 方基 _C「C6 焼基 _Q_C0_C6 焼基、C0_C6 焼基 _het_Q_C0_C6 焼基、C0_C6 烷基-Q-het-QrQ 烷基、het-QrQ 烷基-Q-QrQ 烷基、(VQ 烷基-Q_C6-C12 芳基或-Q-CfQ 燒基；R43為氫和取代或未取代的Q-Ci。烷基、C2_C1Q烯基、C2_C1Q炔基、C3_Cn環(huán)烷基、C3_C1(1 環(huán)烯基、Ci-Q烷基-c6-c12芳基、c6- "C10 方基—C^C—6 焼基、C「C6 焼基 _het、het_C「C6 焼基、 C6-C12 芳基或 het，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代 基為1-3個R31 ；R31 為 R40 或 R41 ；R41 為 OH、0CF3、OR43、SR42、鹵素(F、CI、Br、I)、CN、異氰酸基、N02、CF3、C。_C6 烷 基-nr30r30/、c0-c6 烷基-c ( = o) -nr30r30/、c0-c6 烷基-c ( = o) -r38、c「c8 烷基、CfC8 烷氧 基、C2-C8烯基、C2-C8塊基、C3~C6環(huán)燒基、C3-C6環(huán)烯基、C「C6燒基-苯基、苯基-Ci-Cg燒基、 CrC6 烷基氧羰基、苯基-QrQ 烷氧基、CrC6 烷基-het、het-crc6 烷基、S02_het、-0_C6-C12 芳基、-S02-C6-C12 芳基、-S02-CrC6 烷基或 het，其中任何烷基、烯基或炔基任選地可被選自0H、鹵素(F、CI、Br、I)、硝基、氨基和 氨基羰基的1-3個基團取代，且任何芳基或het上的取代基為1-2個羥基、鹵素(F、Cl、Br、
1)、CF3、CrC6烷基、CfQ烷氧基、硝基和氨基；R42 為 S-C「C6 烷基、C ( = 0) _C「C6 烷基、C ( = 0) _NR3°R3° ‘、C「C6 烷基、鹵素(F、 CUBr.D-CrQ烷基、芐基或苯基；R30 為 R43、NH-C( = 0) -0-R43, NH_C( = 0)-R43、NH_C( = 0)_NHR43、NH_S02-R46、
NH-SO2NH-C ( = O)-R43、NH-C( = O)-NH-SO2-R37、c( = O)-O-R43、C( = O)-R43、C(=
710) -NHR43、C ( = 0) -NH-C ( = 0) -0_R43、C ( = 0) -NH-C ( = 0) -R43、C ( = 0) -NH_S02-R46、C (= o)-NH-SO2NHR37、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-N(R43)2、SO2NH-C ( = 0)-0-R43、S02NH-C ( = 0) -0-R43 或 S02NH-C ( = 0) -R43 ；R30'為氫、羥基和取代或未取代的C「Cn烷基、C「Cn烷氧基、C2-C1(1烯基、C2_C1Q炔 ■、C3_Cn C3_C10 ！^^布―、C^Cg ^^ -C6-C12 方■、C6-C10 方—-C^Cg ^^^ C6-C10 方 基—C0—C6 焼氧基、C「C6 焼基 _het、het-C^C6 焼基、C6—C12 方基、het、C「C6 焼基幾基、C「C8 烷氧羰基、c3-c8環(huán)烷基羰基、c3-c8環(huán)烷氧羰基、c6-cn芳氧基羰基、c7-cn芳基烷氧羰基、雜 芳基烷氧羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基磺酰基、雜芳基磺酰基、(^-(；烷基 磺?；騝6-ci(l芳基磺?；?，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳 基、het或雜芳基上的取代基為1-3個R31 ；R30和R3°'與它們所連接的共同的氮一起可形成任選地被取代的具有以下結(jié)構(gòu)之 一的雜環(huán)嗎啉基、哌嗪基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、 1，2，3，4-四氫-喹啉基，1，2，3，4-四氫-異喹啉基、噻唑烷基或氮雜二環(huán)壬基，其中取代基 為 1-3 個 R38 ；R33為氫和取代或未取代的Q-C；烷基、CfQ烷基羰基、C2_C6烯基、C2_C6炔基、C3_C8 環(huán)烷基或苯甲酰基，其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基上的取代基為1-3個 R40；R4° 為 0H、鹵素爾丄1、81~、1)丄1異氰酸基、(《43、51 42、5( 43、而2丄&、1 43、殿3°1 3°'、 NR30C ( = 0) -0-R43、NRC ( = 0) -R43、C。_C6 烷基-S02-R43、C。_C6 烷基-S02NR3CIR3CI ‘、C ( = 0) -R43、 o-c( = O)-R43、C( = 0)-0-R43或c( = O)-NR30R30'，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基 為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31 ；R46為取代或未取代的Q-C；烷基、C2_C8烯基、C2_C8炔基、C3_C8環(huán)烷基、C3_C6環(huán)烯 基、C0-C6燒基-苯基、苯基-C0-C6燒基、C0-C6燒基-het或het-C0-C6燒基，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代 基為1-3個R31 ；R45為取代或未取代的羥基、Ci-Cn烷氧基、C3_C12環(huán)烷氧基、C8_C12芳烷氧基、C8_C12 芳環(huán)烷氧基、C6-C10芳氧基、c3-c10烷基羰氧基烷氧基、c3-c10烷氧羰氧基烷氧基、c3-c10烷 氧羰基烷氧基、C5-C10環(huán)烷基羰氧基烷氧基、C5-C10環(huán)烷氧羰氧基烷氧基、C5-C10環(huán)烷氧羰基 烷氧基、c8-c12芳氧基羰基烷氧基、c8-c12芳氧基羰氧基烷氧基、c8-c12芳基羰氧基烷氧基、 C5-C1(l烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R30)(儼川沁-;烷氧基)-，
"l3——B,式VI，美國專利申請公布No. 20050203135中公開了式VI類型的化合物。本文描述的一些化合物可以包含一個或多個不對稱中心，因此可包含各立體異構(gòu) 體、各非對映異構(gòu)體及其任意混合物。此外，本發(fā)明的化合物可以包含雙鍵的幾何異構(gòu)體， 包括Z和E異構(gòu)體，且可以以純的幾何異構(gòu)體或其混合物存在。在一些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法是使用以下化合物進行的 其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代 基為1-3個R31和其藥學(xué)上可接受的鹽。式I-VI的化合物還包括藥學(xué)上可接受的鹽和酯，包括式I-VI的前藥化合物，其中 R3A、R5、R1q、R17、R18、R19、R2°、R21、R29 和在 R44 上的羧酸酯可為低級烷基或-CH2CH2-R22，其中 R22 為以下之一 其中R23為氫或甲基，且R24為低級烷基或低級環(huán)烷基。式VI的化合物的優(yōu)選實施方案具有式VI’所示的立體化學(xué). 及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯.本發(fā)明的化合物包括以下化合物
及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。b.作為LFA-1的變構(gòu)拮抗劑的示例性化合物i.新型對芳硫基肉桂酰胺家族可作為LFA-1的變構(gòu)拮抗劑。參見Liu，G. ；Link, J. T. ；Pei, Z. ；Reilly, E. B. ；Nguyen, B. ；Marsh, K. C. ；Okasinski, G. F. ；von Geldern, T. ff. ；Ormes, M. ；Fowler, K. ；Gallatin, M.2000 "Discovery of novel p-arylthio cinnamides as antagonists ofleukocyte function-associated antigen-1/ intracellular adhesionmolecule-1 interaction. 1. Identification of an additional binding pocketbased on an anilino diaryl sulfide lead. "J.Med. Chem. 43, 4015-4030。本發(fā)明提供了在本發(fā)明方法中有用的式VII的化合物，其在美國專利公布 No. 20080234271 中公開，其中 式VII及其藥學(xué)上可接受的鹽和前藥，其中禮、R2、R3、R4和R5各獨立地為氫、烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、烷?；?、烷氧 基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、環(huán)烷基、醚、酯、鹵素、雜環(huán)基、羥基、酮、硝基、氧 代、全氟烷基、磺?；?、磺酸酯(sulfonate)、硫代或其他含羰基的基團，R6為未取代的烷基、 未取代的飽和環(huán)烷基、未取代的羧基烷基或未取代的雜環(huán)基烷基，其中未取代的飽和環(huán)烷 基、未取代的羧基烷基和未取代的雜環(huán)基烷基通過烷基鍵合到式VII的NH上，其中未取代 的羧基烷基包括支鏈烷基鏈，條件是隊和R3中的至少一個選自A.選自如下定義的順_肉桂酰胺或反_肉桂酰胺的肉桂酰胺 “順-肉桂酰胺” “反_肉桂酰胺”其中&和1 9各獨立地為氫、醛、烷基、烯基、炔基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、羧 基、氰基、環(huán)烷基、酯、醚、鹵素、羥基、酮、硝基、磺酸酯、磺?；?、硫代或其他含羰基的基團；B.式Vll-a的取代基 式VII-a其中D、B、Y 和 Z 各獨立地為-CR31 =、_CR32R33-、_C(0)_、_0_、_S02_、_S_、_N =、 或-NR34-；n為0-3的整數(shù)；且R31、R32、R33和R34各獨立地為氫、烷基、羧基、羥基烷基、單烷基
氨基羰基烷基、二烷基氨基羰基烷基或羧基烷基；C.選自如下定義的順_環(huán)丙酸、反_環(huán)丙酸、順_環(huán)丙酰胺和反_環(huán)丙酰胺的環(huán)丙 基衍生物 “順-環(huán)丙酰胺” “反_環(huán)丙酰胺”其中R35和R36各獨立地為氫、烷基、羧基、羥基烷基或羧基烷基，且其中R37和R38各獨立地為氫、烷基、羧基烷基、單烷基氨基羰基烷基或二烷基氨基 羰基烷基；D.式VII-b的取代基 “順-環(huán)丙酸” “反-環(huán)丙酸 式VII-b其中&和1 9如上定義；E.式VII-c的肉桂酸 “順-肉桂酸” “反_肉桂酸”式VII-c 其中&和1 9如上定義；其中R10和Rn各獨立地為氫、烷?；?、烷基、烯基、炔基、烷氧基、酰氨基、芳基、芳烷基、 羧基、氰基、環(huán)烷基、酯、醚、雜環(huán)基、羥基、酮、硝基、磺?；⒘虼蚱渌驶幕鶊F，或R10和Rn與N —起形成雜環(huán)基，其包含獨立地為氫、烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、 烷?；?、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、環(huán)烷基、醚、酯、鹵素、雜環(huán)基、羥 基、酮、硝基、氧代、全氟烷基、磺?；?、磺酸酯、硫代或其他含羰基的基團的至少一個取代 基，或當(dāng)R3為肉桂酰胺、式Vll-a的取代基、式VII_b的取代基或如上定義的環(huán)丙基衍 生物時，禮和R2和/或R4和R5連接在一起形成5-7元環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基環(huán)；或當(dāng)隊選 自肉桂酰胺、式Vll-a的取代基、式VII-b的取代基或如上定義的環(huán)丙基衍生物時，R2和R3 和/或R3和R4和/或R4和R5連接在一起形成5-7元環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基環(huán)；且其中Ar為取代的芳基或取代的雜芳基，其包含至少一個獨立地為氫、烷基、烯基、 烯氧基、炔基、醛、烷?；?、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、環(huán)烷基、醚、酯、 鹵素、雜環(huán)基、羥基、酮、硝基、氧代、全氟烷基、磺?；⒒撬狨ァ⒘虼蚱渌驶幕鶊F的 取代基。在式VII的化合物的一些實施方案中，R6不是以下結(jié)構(gòu)的未取代的雜環(huán)基烷基 式VII的一些示例性化合物包括
包括它的立體異構(gòu)體，例如 美國專利申請公布No. 20040116518、20050014746、20020156314、20020132807、 20080249157和20070066585中公開了該類型的其他化合物。ii.美國專利申請公布No 20080108677中公開了 LFA-1的小分子變構(gòu)拮抗劑的另 一家族。本發(fā)明提供了式VIII的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其在本文描述的本發(fā)明方
法中是有用的。 式VIII式VIII的化合物，其中m為0、1或2 ;X為H、環(huán)烷基或苯基，其為未取代的或被一 個或多個低級烷基、羥基或鹵素取代基取代；n為0或1 ;Y為苯基、呋喃基、吲哚或吡咯，其 全部可被一個或多個獨立地為低級烷基、低級烷氧基、鹵素、(3，5-二甲基苯氧基)丙氧基 或苯基的取代基取代，其中苯基可進一步被一個或多個鹵素原子、硝基、氨基或羧基取代。式VIII的一個示例性化合物為 iii.美國專利申請公布No 2008/0242710中公開了 LFA-1的小分子變構(gòu)拮抗劑的 另一家族。另一方面，本發(fā)明提供了 3a，4，5，6-四氫-吡咯并1，2-b]-異噻唑及其藥學(xué)上 可接受的鹽，其中硫是二氧化物的形式，其為式IX的化合物，在本發(fā)明的方法中是有用的。 式IX例如式IX-a的化合物 式IX-a其中虛線是鍵或不是鍵，R1為氫、任選地取代的烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、烷氧基、 芳基、雜環(huán)基、羥基、SH、SR5、氰基、鹵素或氨基；或虛線不是鍵，且R1通過雙鍵連接到環(huán)系統(tǒng)上，且為氧代；R2為氫，或任選地取代的環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基；R3為氫、COOR6或氨基羰基，或任選地取代的烷基、烯基、炔基、芳烷基、烷氧基、環(huán) 烷氧基、芳氧基或雜環(huán)氧基；R4為氫、鹵素、羥基、SH、任選地取代的烷基、烯基、炔基、烷氧基或烷硫基，或R4為 甲硅烷基例如三烷基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基，例如三(C1J烷基甲硅烷基(氧基)、 N3或氨基，或R4為雜環(huán)基，其包含至少一個作為雜原子的氮原子并通過該氮原子結(jié)合到式IX的 化合物上，或R4通過雙鍵連接到環(huán)系統(tǒng)上并且為氧代；且R5和R6獨立地為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基。在一些實施方案中，式IX的化合物為 iv.變構(gòu)小分子拮抗劑包括可與LFA-I的⑶Ila結(jié)構(gòu)域結(jié)合的抑制素(statins)。 參見 Kallen, J. , Welzenbach, K. , Ramage, P. Geyl, D. Kriwacki, R. , Legge, G. , Cottens, S., ffeitz-Schmidt,G. ,and Hommel,U. 1999. "Structural basis for LFA-I inhibition upon lovastatin binding tothe CDlla I-domain",J.Mol. Biol.,292 1-9 ；禾口Weitz—Schmidt,G.,Welzenbach,K. ,Brinkmann,V. ,Kamata,T. ,Kallen,J. ,Bruns,C. ,Cottens, S. ,Takada, Y.,禾口 Hommel,U. 2001. Statins selectiveIyinhibit leukocyte function antigen-1 by binding to a novel regulatoryintegrin site, Nature Med. ,7 :687_692 ；禾口 Frenette, P. S. 2001. "Locking a leukocyte integrin with statins", N. Engl. J. Med. , 345 1419-1421。來自莫維諾林(mevinolin)/康帕定(compactin)基序的分子也顯示具有 抗 LFA-I 的活性。參見 Welzenbach，K.，Hommel, U.，和 Weitz-Schmidt，G. 2002. "Small molecule inhibitors induceconformational changes in the I domain and the I-like domain ofLymphocyte Function-Associated Antigen-1", J.Biol. Chem. ,277 10590-10598，和美國專利 No. 6，630，492。公開了在本發(fā)明方法中有用的式X的變構(gòu)LFA-I拮抗劑家族。參見美國專利 6818638。提供了可用于本發(fā)明的方法中的式X的化合物，其中 式X各a-—b和α --- β獨立地為單鍵或雙鍵；禮為.,_""丨丨H, ""C μ烷基或一ORflRa為H、任選地被OH或Ch烷氧基取代的C^6烷基、C2_6烯基或芳基-(^4烷基；R2 為 OH ；-O-CO-R5 ；R4為H或OR19，其中R19為C1^烷基、羥基-(^6烷基、C1^烷氧基-(^6烷基、芳基-(^4 烷基或Ch烷氧羰基-Cy烷基；R5為C"烷基、C3_7環(huán)烷基、C3_7環(huán)烷基-C^4烷基、芳基或芳基-C^4烷基；或R5 為-O-R6，其中R6為通過其羰基連接到0上的α -氨基酸殘基；或R5為-CHR7-COR. 8，其中 R7 為 H、 烷基、雜 Ci-4焼基、C3—7環(huán)焼基、C3—7環(huán)焼基"C^4 烷基、芳基或芳基-C 1-4焼基，且 R8為OH、CV4烷氧基或NR9R10 ；各R9和Rltl獨立地為H或Cy烷基，或R9和Rltl與它們所連接的氮一起形成雜芳 基；R3為式Χ-a的內(nèi)酰胺； 其中R3tl為C^8烷基、C3_7環(huán)烷基、芳基、C3_7環(huán)烷基-Ch烷基、芳基烷基、雜芳 基或雜芳基-Ch ；且R31為OH、C1^4烷氧基、C1^4烷基、C1^4烷氧基-羰基-(^4烷基、羥基-(^5烷氧基、 CV4烷氧基-Cu烷氧基、烷氧基-羰基-Ch烷基、氨基-CH烷氧基、HOOC-CH烷氧基、 HOOC--CV4烷基、R9aR1oaN-C^5烷氧基，其中R9a和Rltla獨立地為R9或Rltl。在一些實施方案中，無論“芳基”或“芳基-Cy烷基”出現(xiàn)在上述定義中的何處，均 為任選地被鹵素、0H、NRnR12、C00H、CFyC^4烷氧基、CV4烷基、羥基烷基、羥基-C1烷氧 基、C1^4烷氧基-羰基、氰基或CONR11R12取代的“苯基”或“萘基”，各R11和R12獨立地為H、 CV4烷基、苯基、萘基、苯基-Ch烷基或萘基-CV4烷基，或R11和R12與它們連接的N —起形 成雜芳基；并且無論“雜芳基”出現(xiàn)在何處，均為任選地與苯環(huán)稠合的5或6元雜芳基；其為 游離形式或鹽的形式。在一些實施方案中，式X的化合物為以下化合物之一
或 v.基于乙內(nèi)酰脲的抑制劑家族也可以用作拮抗劑。參見Kelly，T.A. , Jeanfavre, D. D. ， McNeil, D. W. ， ffoska, J. R. Jr. ， Reilly, P. L. ， Mainolfi, Ε. A. ， Kishimoto, K. M.， Nabozny,G. H. ,Zinter,R. ,Bormann,B.-J.,禾口 Rothlein,R. 1999. “Cutting edge -.a small molecule antagonistof LFA-l-mediated cell adhesion，，，J. Immunol. , 163 :5173_5177。 這些化合物被認為是LFA-I的變構(gòu)抑制劑。式XI的基于乙內(nèi)酰脲的抑制劑家族在美國專利申請公布No. 2006/0148836中公 開，并且在本發(fā)明的方法中是有用的。提供了可用于本發(fā)明的方法中的式XI的化合物， 式XI及其對映體、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，其中 各R17 獨立地為-0R18、-NR18R19, -C ( = 0) R18, -CO2R18,-C( = 0) NR18R19、-NR18C ( = 0) R19、-NR18C ( = 0)0R19, -S(O)pR19, -NR18SO2R19 或-SO2NR18R19 ；R18和R19獨立地為氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；q為1、2或3 ;p 為1或2。在一個實施方案中，式XI的化合物為 可用作本發(fā)明方法的LFA-I的變構(gòu)拮抗劑的螺_乙內(nèi)酰脲化合物的普通類型的 其他化合物為美國申請公布 No. 20060142319、20060074099、20060052434、20050119279、 20050004153,20040259897,20040248920,20040009998 和 20020143035。c.其他的小分子拮抗劑其他家族的小分子抑制劑公開在出版物(參見Gadek, T. R.，Burdick, D. J.， McDowell, R. S. , Stanley, Μ. S. , Marsters, J. C. Jr. , Paris, K. J. , Oare, D. A. , Reynolds, Μ. Ε. , Ladner, C. , Zioncheck, K. A. , Lee, W. P. , Gribling, P. , Dennis, M. S. , Skelton, N. J. , Tumas, D. B. , Clark, K. R. , Keating, S. Μ. , Beresini, Μ. H. , Tilley, J. W. , Presta, L. G.,禾口 Bodary, S.C. 2002. "Generation of an LFA-I antagonist by the transferof the ICAM-I immunoregulatory epitope to a small molecule，，Science,295 :1086-1089 以及在線補充材料)和專禾U (包括美國專利No. 6，872，735、美國專利No. 6，667，318、美 國專禾Ij No. 6803384、美國專利No. 6，515，124、美國專利No. 6331640)和專利申請(包 括 U. S. 20020119994、U. S. 20040058968、U. S. 20050080119、W099/49856、W000/21920、 W001/58853、W002/59114、W005/044817)等中。所有引用文獻的內(nèi)容通過引用完整并入本 文。本發(fā)明的化合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法或本文引用的參考文獻中公 開的方法進行制備，并可通過多種方法進行純化，包括在不同的條件下通過結(jié)晶或沉淀產(chǎn) 生一種或多種多晶型物。因此，本發(fā)明包括上述本發(fā)明化合物、它們的多晶型物、它們的藥 學(xué)上可接受的鹽、它們的藥學(xué)上可接受的溶劑化物和包含它們的藥學(xué)上可接受的組合物。優(yōu)選的實施方案的以上例子意在說明一些可能的治療劑，而絕非限制本發(fā)明。本 發(fā)明的方法可使用抗體、抗體片段、肽或其他合成分子(它們是LFA-I與ICAM-I之間相互 作用的選擇性、有效的和直接的競爭性抑制劑)實施，以治療糖尿病性視網(wǎng)膜病的癥狀。
II.治療方法如本文所用的術(shù)語“受試者”包括動物，特別是人類和其他哺乳動物。如本文所用的術(shù)語“治療”和其語法等同物包括獲得治療性有益效果和/或預(yù)防 性有益效果。治療性有益效果是指所治療的根本病癥的根除或改善。而且，通過根除或改 善一種或多種與根本病癥有關(guān)的生理癥狀來實現(xiàn)治療性有益效果，從而在受試者身上觀察 到改善，盡管受試者可能仍舊經(jīng)受該根本病癥的折磨。對于預(yù)防性有益效果而言，即使可能 還未作出該疾病的診斷，也可以將組合物施用于具有發(fā)生特定疾病的危險的受試者，或者 施用于據(jù)稱具有該疾病的一種或多種生理癥狀的受試者。可以將組合物施用于受試者，以 預(yù)防生理癥狀或根本病癥的發(fā)展。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了給受試者施用治療劑以治療糖尿病性視網(wǎng)膜 病的方法。在本發(fā)明的一些實施方案中，治療劑為LFA-I拮抗劑。在一些實施方案中，LFA-I 拮抗劑為LFA-I的直接競爭性拮抗劑。在一些實施方案中，LFA-I拮抗劑為LFA-I的競爭性 拮抗劑。在一些實施方案中，LFA-I拮抗劑為LFA-I的變構(gòu)拮抗劑。在本發(fā)明的一些實施方 案中，LFA-I拮抗劑可以調(diào)控白細胞介導(dǎo)的炎癥。本發(fā)明的另一實施方案通過施用治療有效 量的LFA-I拮抗劑以調(diào)節(jié)與眼部炎癥相關(guān)的炎癥來治療受試者。本發(fā)明的一個實施方案通 過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑來治療具有糖尿病性視網(wǎng)膜病癥狀的受試者。在本發(fā)明 的一些實施方案中，提供了通過施用施用治療有效量的LFA-I拮抗劑來治療具有II型糖尿 病癥狀的受試者的方法。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I 拮抗劑來治療具有I型糖尿病癥狀的受試者的方法。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了 通過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑以降低受試者眼中的視網(wǎng)膜水腫來治療受試者的方 法。在本發(fā)明的其他實施方案中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑以減少黃斑 水腫來治療受試者的方法。在其他實施方案中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗 劑以降低受試者眼中的基底膜增厚來治療受試者的方法。在本發(fā)明的其他實施方案中，提 供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑以降低受試者眼中的視網(wǎng)膜新生血管形成來治 療受試者的方法。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗 劑以延緩由于糖尿病性視網(wǎng)膜病導(dǎo)致的視力喪失來治療受試者的方法。在一些實施方案 中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑以降低受試者眼中的視網(wǎng)膜缺血來治療受 試者的方法。在其他實施方案中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑以降低糖尿 病性視網(wǎng)膜病患者眼中視網(wǎng)膜上纖維血管生長的方法。在一些實施方案中，提供了通過施 用治療有效量的LFA-I拮抗劑以降低患有糖尿病性視網(wǎng)膜病的受試者眼中由于糖尿病性 視網(wǎng)膜病導(dǎo)致的視網(wǎng)膜損傷或退化的方法。在其他實施方案中，提供了通過施用治療有效 量的LFA-I拮抗劑限制患有糖尿病性視網(wǎng)膜病的受試者眼中視網(wǎng)膜的非增生性損傷的方 法。在其他實施方案中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑來減緩患有糖尿病性 視網(wǎng)膜病的受試者眼中視網(wǎng)膜的增生性損傷的方法。在其他實施方案中，提供了通過施用 治療有效量的LFA-I拮抗劑以降低或預(yù)防需要的受試者眼中白細胞與毛細管上皮細胞的 粘附的方法。在其他一些實施方案中，提供了通過施用治療有效量的LFA-I拮抗劑以降低 或防止需要的受試者眼中由缺血再灌注引起的損傷的方法。在本發(fā)明的一些實施方案中， 提供了一種方法，其中向患有糖尿病性視網(wǎng)膜病的受試者施用的LFA-I拮抗劑在與ICAM-I 結(jié)合位點重疊的LFA-I α L亞單元的高親和力結(jié)合位點上結(jié)合。本發(fā)明的一些實施方案利用了作為LFA-1/ICAM-1之間相互作用的直接競爭性抑制劑的化合物。本發(fā)明的一些實施 方案利用了直接競爭LFA-I上的共同ICAM-I高親和力結(jié)合位點的化合物。在一些實施方 案中，提供了向需要治療的受試者施用治療有效量的LFA-I拮抗劑的方法，該LFA-I拮抗劑 為式I、II、II’、III、III’、IV、IV’、V或VI的化合物。在一些實施方案中，提供了向需要 治療的受試者施用治療有效量的LFA-I拮抗劑的方法，該LFA-I拮抗劑為式VII、VIII、IX、 X或XI的化合物。在與眼中糖尿病并發(fā)癥相關(guān)的其他治療干預(yù)中，可以使用玻璃體切割術(shù)。已經(jīng)證 明地塞米松(一種糖皮質(zhì)激素類固醇)能夠降低術(shù)后的炎癥，該炎癥在糖尿病患者中比非 糖尿病患者中嚴重。因此，可能理想的是使用本發(fā)明的LFA-I拮抗劑來減輕炎癥。在本發(fā) 明的一些實施方案中，提供了通過向需要的受試者施用LFA-I拮抗劑來減輕經(jīng)歷玻璃體切 割術(shù)的糖尿病受試者中的術(shù)后炎癥的方法。此外，在一些實施方案中，本發(fā)明的LFA-I拮抗 劑可以在玻璃體切割術(shù)之前施用給受試者，以預(yù)防性地減輕術(shù)后炎癥。在與眼中糖尿病并發(fā)癥相關(guān)的其他預(yù)防干預(yù)中，光動力療法可以用于糾正閉塞或 泄露，并可能導(dǎo)致糖尿病受試者中過度的炎癥。因此，可能理想的是使用本發(fā)明的LFA-I拮 抗劑來減輕炎癥。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了通過向需要的受試者施用LFA-I拮 抗劑來減輕正在經(jīng)歷光力學(xué)治療(PDT)過程的糖尿病受試者中的術(shù)后炎癥的方法。此外， 在一些實施方案中，本發(fā)明的LFA-I拮抗劑可在PDT過程之前施用給受試者，以預(yù)防性地減 輕術(shù)后炎癥。在與眼中糖尿病并發(fā)癥相關(guān)的其他治療干預(yù)中，激光凝固術(shù)可以用于糾正閉塞或 滲漏，并可能導(dǎo)致糖尿病受試者中過度的炎癥。因此，可能理想的是使用本發(fā)明的LFA-I拮 抗劑來減輕炎癥。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了通過向需要的受試者施用LFA-I拮 抗劑來減輕正在經(jīng)歷激光凝固術(shù)治療過程的糖尿病受試者中的術(shù)后炎癥的方法。此外，在 一些實施方案中，本發(fā)明的LFA-I拮抗劑可在激光凝固術(shù)治療過程之前施用給受試者，以 預(yù)防性地減輕術(shù)后炎癥。在視力缺損的LASIK治療中，糖尿病患者比非糖尿病患者具有更高的角膜上皮炎 癥和缺陷引起術(shù)后并發(fā)癥的風(fēng)險，因此可能需要抗炎癥治療。在本發(fā)明的一些實施方案中， 提供了通過施用LFA-I拮抗劑來減輕受試者眼中由于LASIK治療的糖尿病并發(fā)癥導(dǎo)致的炎 癥、從而減輕該炎癥的方法。施用是在術(shù)后或術(shù)前進行的，以預(yù)防性地預(yù)防或減輕該炎癥?；加蠨ME的個體具有更高的發(fā)展為白內(nèi)障的風(fēng)險，白內(nèi)障是視力喪失的一個常見 的原因。糖尿病患者在白內(nèi)障手術(shù)后具有較高的前段和后段并發(fā)癥的風(fēng)險。最嚴重的一種 并發(fā)癥是當(dāng)其進展為新生血管性青光眼時虹膜的新生血管形成。其他的前房并發(fā)癥包括在 新植入的眼內(nèi)透鏡(IOL)表面上具有沉淀物的色素分散、纖維素性滲出物或前房中的膜形 成(由炎癥引起)。在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了通過向需要的受試者施用LFA-I拮 抗劑來減輕患有DME的受試者眼中白內(nèi)障術(shù)后前段或后段并發(fā)癥的方法。在一些實施方案 中，提供了向患有DME的受試者預(yù)防性地施用LFA-I拮抗劑以減輕或預(yù)防形成白內(nèi)障的方 法，患有DME的受試者比健康的受試者具有更高的發(fā)展為白內(nèi)障的風(fēng)險。該方法通常包括施用一種或多種用于治療糖尿病性視網(wǎng)膜病的藥物，其中該藥物 被遞送到眼部的視網(wǎng)膜或眼內(nèi)區(qū)域或在遞送之后進行分布。藥物的組合可用于治療糖尿病 性視網(wǎng)膜病或調(diào)控組合中一種或多種藥物的副作用。由于該疾病狀態(tài)中的病理事件的特點
90是減弱的自動調(diào)節(jié)、凋亡、局部缺血、再灌注組織、新生血管形成和炎癥刺激的組合，可能理 想的是與其他治療劑聯(lián)合施用本發(fā)明的LFA-I拮抗劑，以加成地或協(xié)同地進行干預(yù)。在一 些實施方案中，第二治療劑為抗氧化劑、抗炎劑、抗微生物劑、抗血管生成劑和/或抗細胞 凋亡劑。在本發(fā)明的一些實施方案中，除了施用直接競爭結(jié)合LFA-I的化合物以外，還可以 施用其他治療劑，該治療劑是如上所述的LFA-I的變構(gòu)拮抗劑，但是不是直接競爭性拮抗 劑，可能導(dǎo)致協(xié)同效果。該變構(gòu)拮抗劑的例子為LFA-I的乙內(nèi)酰脲抑制劑類型。變構(gòu)拮抗 劑的其他例子包括式VII、VIII、IX、X或XI的化合物?？捎糜谂c本發(fā)明的LFA-I拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用的另一類治療劑為 抗粘附治療抗體或抗體片段。可用于與本發(fā)明的LFA-I拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用的另一類治療劑為 抑制血管內(nèi)皮生長因子，并因此可以針對新生血管形成的另一開始途徑的一組藥物。任何 VEGF抑制劑可用于本發(fā)明的組合物中，其包括但不限于1)VEGF或其受體的中和性單克隆 抗體、2) VEGF受體的小分子酪氨酸激酶抑制劑、3)作為VEGF的誘餌受體的可溶性VEGF受 體、4)特異性地靶向VEGF的核酶，和5)特異性地靶向VEGF信號傳導(dǎo)蛋白質(zhì)的siRNA。具 有抗VEGF活性的抗體的一些例子為，例如，Lucentis (蘭尼單抗)和Avastin (貝伐單抗)。 寡核苷酸藥物的例子為，例如，Macugen (哌加他尼鈉注射液)。小分子酪氨酸激酶抑制劑包 括，例如，帕唑帕尼、索拉非尼、舒尼替尼等。炎癥是由DR和白細胞粘附和新生血管形成過程導(dǎo)致的血管滲透性誘發(fā)的。因此， 其他的抗炎劑可與本發(fā)明的LFA-I拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用?？寡讋┛蛇x自皮質(zhì) 類固醇相關(guān)的藥物，包括但不限于地塞米松、氟米龍、甲羥松、倍他米松、去炎松、去炎松縮 酮、強的松、強的松龍、氫化可的松、利美索龍及其藥學(xué)上可接受的鹽、潑尼卡酯、地夫可特、 鹵米松、巰氫可的松、潑尼立定、強的松龍戊酸酯、帕拉米松、甲基氫化潑尼松、甲潑尼松、馬 潑尼酮、異氟潑尼龍、醋酸商潑尼松、氯氟舒松、氟甲酰龍、氟氫縮松、氟潑尼龍、醋酸氟甲 叉龍、醋酸甲氟龍、氟可龍、氟考丁酯、氟輕松、氟輕松醋酸酯、氟尼縮松、氟米松、氟氫可的 松、氟氯奈德、甘草次酸、醋丁二氟龍、二氟可龍、雙醋二氟拉松、去羥米松(去氧米松)、地 奈德、地西龍、可的伐唑、皮質(zhì)酮、可的松、氯潑尼醇、氯可托龍、氯倍他松、氯倍他索、氯潑尼 松、咖啡醇、布地奈德、倍氯米松、安西奈德、丙酮別孕烷、阿氯米松、21-乙酰氧基孕烯醇酮、 曲奈德、醋酸二氟拉松、脫?？傻陌l(fā)唑、RU-26988、布地奈德、脫?？傻陌l(fā)唑、脫?？傻陌l(fā)唑 等?；蛘?，抗炎劑可選自NSAID組，包括但不限于撲熱息痛、醋炎痛、醋氯芬酸、阿明洛芬、 氨芬酸、芐達賴氨酸、苯噁洛芬、溴芬酸、氯環(huán)己苯酰丙酸、布替布芬、卡布洛芬、塞來考昔、 桂美辛、氯苯吡咯酸、雙氯芬酸、依托度酸、艾托考昔、聯(lián)苯乙酸、芬克洛酸、非諾洛芬、芬替 酸、氟諾洛芬、氟吡洛芬、異丁芬酸、布洛芬、消炎痛、三苯唑酸、伊索昔康、氧卓乙酸、噴哚布 洛芬、酮洛芬、氯那唑酸、氯索洛芬、甲芬那酸、甲氯滅酸、美洛昔康、甲噻吩嗪乙酸、莫苯唑 酸、咪洛芬、萘普生、尼氟滅酸、噁丙嗪、吡拉唑酸(pirozolac)、吡洛芬、普拉洛芬、吩噻嗪丙 酸、羅非考昔、水楊酸及其衍生物(即例如阿司匹林)、舒林酸、舒洛芬、琥丁唑酮、苯噻丙酸 (triaprofenicacid)、托美汀、伐地考昔、聯(lián)苯丁酸、肟環(huán)苯丙酸、扎托洛芬、苯酰吡酸鈉、阿 司匹林、醋炎痛、丁丙二苯胼、carprofenac、環(huán)氯茚酸、二氟尼柳、苯乙氨茴酸、苯吲柳酸、氟 芬那酸、氟胺煙酸、龍膽酸、酮咯酸、5-氨基水楊酸及其前藥等?？捎糜谂c本發(fā)明的LFA-I拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用的另一類治療劑為
91已知通過抑制NFK0來抑制視網(wǎng)膜病的一組藥物。這些類型的一些治療劑包括PARP抑制 劑、苯磷硫胺或干預(yù)AGE的阻斷的其他藥物(晚期糖化終產(chǎn)物)、醛糖還原酶抑制劑、iNOS 抑制劑、FasL抑制劑或血管生成素-1?？梢允褂肈R誘發(fā)的減弱的自身調(diào)節(jié)和局部缺血過程在細胞中誘發(fā)氧化應(yīng)激。因 此，抗氧化劑可以用于與本發(fā)明的LFA-1拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用。本發(fā)明方法 中有用的合適的抗氧化劑的例子包括但不限于抗壞血酸、維生素E、生育三烯酚、類胡蘿卜 素、谷胱甘肽、a-硫辛酸、泛醇、生物黃酮素、卡尼汀和超氧化物歧化酶模擬物，例如2，2， 6,6-四甲基-1-哌啶氧(TEMPO)、DOXYL、PR0XYL硝基氧化合物；4-羥基-2，2，6，6-四甲 基-1-哌啶氧(Tempol)、M-40401、M-40403、M-40407、M-40419、M-40484、M-40587、M-40588寸。在糖尿病性視網(wǎng)膜病的一定階段中，視網(wǎng)膜缺血是進一步引起細胞死亡的結(jié)果。 在本發(fā)明的一些實施方案中，提供了一種方法，其中抗細胞凋亡治療劑可與本發(fā)明的LFA-1 拮抗劑聯(lián)合、之前，之后或同時施用。合適的抗細胞凋亡劑的例子包括，例如，胱天蛋白酶、 組織蛋白酶和TNF- a的抑制劑?？捎糜谂c本發(fā)明的LFA-1拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用的另一類治療劑為 補體抑制劑。LFA-1/ICAM結(jié)合事件是組織中和血管/毛細血管上皮細胞上ICAM上調(diào)的補 體激活的下游事件。施用補體抑制劑和LFA-1拮抗劑可以更完全地調(diào)節(jié)表達LFA-1的白細 胞。補體抑制劑的一個例子是艾庫組單抗(eculizumab)。其他的補體抑制劑包括但不限于 美國專利 No. 7166568、6319897、5843884、5135916 和 5624837 中所述?？捎糜谂c本發(fā)明的LFA-1拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用的另一類治療劑為 用于在患背景DM的患者中控制青光眼的藥物，該背景DM包括原發(fā)性、開角型、閉角型和新 生血管性青光眼。用于青光眼的一些治療劑包括但不限于前列腺素類似物，例如拉坦前列 素、比馬前列素和曲伏前列素；局部腎上腺素受體拮抗劑，例如噻嗎洛爾、左布諾洛爾 和倍他洛爾；a 2-腎上腺素能激動劑，例如溴莫尼定；擬交感神經(jīng)藥，例如腎上腺素或腎上 腺異戊酯；縮瞳劑，例如匹魯卡品；碳酸酐酶抑制劑，例如多佐胺、布林唑胺和乙酰醋氨；或 毒扁丑堿?？捎糜谂c本發(fā)明的LFA-1拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用的另一類治療劑為 抗微生物劑。合適的抗微生物劑化合物包括但不限于青霉素類，例如阿莫西林、氨芐青霉 素、氧咪芐青霉素、羧芐青霉素、鄰氯青霉素、雙氯青霉素、氟氯青霉素、磺唑氨芐青霉素、乙 氧萘胺青霉素、青霉素、哌拉西林、替卡西林等內(nèi)酰胺酶抑制劑；碳青霉烯類，例如厄 他培南、亞胺培南、倍能等；頭孢菌素類，例如頭孢克洛、頭孢羥唑、頭孢西丁、頭孢羅齊、頭 孢呋辛、頭孢克肟、頭孢地尼、頭孢托侖、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢羥氨芐、頭孢 他定、頭孢布坦、頭孢唑肟、頭孢曲松(ceffiriaxone)、頭孢唑啉、頭孢克肟、頭孢氨芐、頭孢 吡肟等；喹諾酮類，例如環(huán)丙沙星、依諾沙星、加替沙星、左氧氟沙星、乙嗎噻嗪、諾氟沙星、 氧氟沙星、曲伐沙星等；大環(huán)內(nèi)酯類，例如阿奇霉素、克拉霉素、地紅霉素、乙琥紅霉素、米 爾倍霉素、醋竹桃霉素等；單環(huán)內(nèi)酰胺類，例如氨曲南等；四環(huán)素類，例如地美環(huán)素、多西環(huán) 素、米諾環(huán)素、地霉素、四環(huán)素等；氨基糖苷類，例如阿米卡星、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、 奈替米星、巴龍霉素、鏈霉素、妥布霉素等；碳頭孢烯，例如氯拉卡比等；鏈陽性菌素；磺胺 類，例如甲磺滅膿、偶氮磺胺、磺胺醋酰、磺胺甲噻唑、氨苯磺胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺乙酰異噁唑、三甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶一磺胺甲基異惡唑等；和組合藥物，例如磺胺甲噁 唑和三甲氧芐氨嘧啶等；多肽，例如桿菌肽、粘菌素、多粘菌素B等?？捎糜谂c本發(fā)明的LFA-1拮抗劑聯(lián)合、之前、之后或同時施用的另一類治療劑的 例子包括但不限于(a)抗糖尿病劑，例如胰島素和胰島素模擬物，磺酰脲類(例如格列本 脲、meglinatide)，雙胍類，例如二甲雙胍(Glucophage )，a -葡糖苷酶抑制劑(阿卡波 糖)，胰島素增敏劑，例如噻唑酮化合物、羅西格列酮(Avandia )、曲格列酮(Rezulin )、環(huán) 格列酮、匹格列酮(Actos )和恩格列酮；(b)降低膽固醇藥物，例如HMG-CoA還原酶抑制 劑(例如洛伐他汀、辛伐他汀、帕伐他汀、氟伐地汀、阿伐他汀和其他他汀類藥物)、膽汁酸 螯合劑(例如消膽胺和考來替泊)、維生素B3(也被稱為煙酸或尼克酸)、維生素B6(吡哆 醇)、維生素B12 (氰鈷胺)、纖維酸衍生物(例如吉非貝齊、氯貝特、非諾貝特和苯扎貝特)、 普羅布考、硝酸甘油和膽固醇吸收抑制劑(例如谷甾醇和乙酰CoA-膽固醇乙酰轉(zhuǎn)移酶 (ACAT)抑制劑，例如甲亞油酰胺)、HMG-CoA合酶抑制劑、鯊烯環(huán)氧酶抑制劑和鯊烯合成酶 抑制劑；和(c)抗血栓形成劑，如溶栓劑(例如鏈激酶、阿替普酶、阿尼普酶和瑞替普酶)、 肝素、水蛭素和華法林衍生物、0 -阻斷劑(例如阿替洛爾)、0 _腎上腺素能拮抗劑(例如 異丙腎上腺素)、ACE抑制劑和血管擴張劑(例如硝普鈉、鹽酸尼卡地平、硝化甘油和依那普 利拉(enaloprilat))。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以發(fā)揮治療效果以使糖尿病性視網(wǎng)膜病 的癥狀平均降低至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90%或基本上消除糖尿病性 視網(wǎng)膜病的癥狀。在其他實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以使受試者的視網(wǎng)膜退化平均降低至少 約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90%或基本上消除視網(wǎng)膜退化。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以使治療的受試者眼中的視網(wǎng)膜水腫平 均降低至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90%或基本上消除視網(wǎng)膜水腫。在另外其他的實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以使治療的受試者眼中的基底膜 增厚平均降低至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90%或基本上消除基
底膜增厚。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以使治療的受試者眼中的視網(wǎng)膜新生血 管形成平均降低至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90%或基本上消除
視網(wǎng)膜新生血管形成。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以使治療的受試者眼中的視網(wǎng)膜上的纖 維血管生長平均降低至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90%或基本上
消除視網(wǎng)膜上的纖維血管生長。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以使治療的受試者眼的視力喪失平均延 緩至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90 %或基本上消除視力的進一步喪失。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以限制受試者視網(wǎng)膜的非增生性損傷平 均至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90%或基本上消除視網(wǎng)膜的非增
生性損傷。
在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的量足以使受試者視網(wǎng)膜的增生性損傷平均延 緩至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、多于90%或基本上消除視網(wǎng)膜的進一
步增生性損傷。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的有效量為約lX10_n、lX10_1(l、lX10_9、lX10_8、 lxl(T7、lxl(T6、lxl(T5、lxl(T4、lxl(T3、lxl0_2、lxlO—1、1、lxlO1、lxlO2 克的日劑量。可以以任何適當(dāng)?shù)姆绞绞┯弥委焺?。在一些實施方案中，通過口服給藥方式施用 治療劑。在一些實施方案中，通過透皮施用方式施用治療劑。在一些實施方案中，通過滴注 方式施用治療劑。在一些實施方案中，通過注射方式施用治療劑。在一些實施方案中，通過 玻璃體內(nèi)緩釋注射施用治療劑。在一些實施方案中，通過眼內(nèi)緩釋植入施用治療劑。在一 些實施方案中，通過眼周植入施用治療劑。在一些實施方案中，局部施用治療劑。在一些實 施方案中，通過滴眼劑局部施用治療劑。如果將藥物組合作為獨立的組合物施用，則它們可 以以相同途徑或不同途徑施用。如果藥物組合在一種組合物中施用，則它們可以以任何適 當(dāng)?shù)耐緩绞┯谩Ｔ谝恍嵤┓桨钢?，將藥物組合作為單一組合物經(jīng)口服給藥方式施用。在 一些實施方案中，將藥物組合作為單一組合物以透皮給藥方式施用。在一些實施方案中，將 藥物組合作為單一組合物經(jīng)注射方式施用。在一些實施方案中，將藥物組合作為單一組合 物局部施用。在本發(fā)明的一些實施方案中，使用診斷方法來確定需要用本發(fā)明的方法治療的受 試者?？捎糜谠\斷糖尿病性視網(wǎng)膜病癥狀的方法的示例性列表包括，例如，全面的眼科檢查 (其可包括阿姆斯勒方格表檢查和裂隙燈檢查)、眼底照相術(shù)、熒光素血管造影術(shù)、光學(xué)相 干斷層攝影術(shù)、非近視性照相術(shù)和0掃描超聲法，單獨的常規(guī)眼部檢查、光學(xué)相干斷層攝 影術(shù)、0掃描超聲，全面的眼科檢查及眼底照相術(shù)和熒光素血管造影術(shù)。本發(fā)明方法的拮抗劑可以是抗體、抗體片段、肽或小分子。在一些實施方案中，使 用的LFA-1拮抗劑為不是抗體的肽。在其他實施方案中，使用的LFA-1拮抗劑為小分子。在本發(fā)明的一些實施方案中，通過使用LFA-1拮抗劑來治療或預(yù)防糖尿病性視網(wǎng) 膜病的癥狀需要慢性療法；因此，可以使用LFA-1/ICAM-1之間相互作用的小分子抑制劑， 因為它們具有作為低成本的滴眼劑局部使用的潛力。類似地，口服施用提供了低成本產(chǎn)品 的優(yōu)勢。可植入裝置可以是植入或注射到眼中或靠近眼部的眼周組織中的生物可降解的或 生物可吸收的或生物可降解的緩釋或持續(xù)釋放制劑，其可用于慢性療法。另一實施方案為使用適于作為眼用治療劑配制和施用的治療劑來治療糖尿病性 視網(wǎng)膜病的癥狀的方法。本發(fā)明化合物的乳膏制劑可用于將LFA-1拮抗劑局部遞送到皮膚上。在這方面 有用的化合物包括LFA-1拮抗劑和它們的前藥，該前藥一旦位于皮膚內(nèi)部就轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚运?物。應(yīng)用到眼瞼外表面的皮膚乳膏因此將LFA-1拮抗劑透過眼瞼遞送至眼瞼的內(nèi)襯和中間 的結(jié)膜組織和附屬淚腺，并且出現(xiàn)在眼淚中，并因此被眼睛吸收。該種遞送形式對于治療 LFA-1介導(dǎo)的眼睛炎癥、特別是治療糖尿病性視網(wǎng)膜病是理想的。III.施用本發(fā)明的方法可采取多種合適的施用方式來遞送本文方法的LFA-1拮抗 劑。向身體患處的這種遞送可以通過局部或系統(tǒng)施用實現(xiàn)。合適的制劑和另外的載 體 在 Remington “The Science and Practiceof Pharmacy，，(20th Ed.，Lippincottffilliams&ffilkins, Baltimore MD)中描述，其全部在此引入作為參考。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了用于向受試者施用的藥物組合物，其包含(i) 有效量的治療劑；和(ii)適于口服施用的藥物賦形劑。在一些實施方案中，該組合物進一 步包含(iii)有效量的第二治療劑。本發(fā)明的藥物組合物可以包含本文公開的任何分子。為了減輕眼部病癥的炎癥，本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選地被遞送到視網(wǎng)膜、眼內(nèi)區(qū) 域、眼睛表面、相互連接的神經(jīng)分布、結(jié)膜、淚腺或瞼板腺?？梢韵氲剑行У闹委煱ń?jīng)口 服、局部施用、注射、鼻內(nèi)、直腸、透皮、通過浸漬或涂覆的裝置(例如眼內(nèi)插入物或植入物) 或離子透入來施用本發(fā)明的治療劑。對于注射施用而言，藥物組合物可以眼內(nèi)、眼周、肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)注 射。可以使用泵機構(gòu)在預(yù)先選擇的時間內(nèi)施用藥物組合物。對于本發(fā)明的一些實施方案而 言，理想的是局部遞送藥物，因此可進行眼周、眼內(nèi)、玻璃體內(nèi)、結(jié)膜下、眼球后、鞏膜內(nèi)或眼 房間注射。對于本發(fā)明的一些實施方案而言，系統(tǒng)遞送是優(yōu)選的。對于系統(tǒng)施用而言，本發(fā)明的化合物可以為了 口服而配制并且口服施用。對于可 造成治療劑的區(qū)域或系統(tǒng)分布的施用，本發(fā)明的組合物可以鼻內(nèi)、透皮或通過一些口服形 式(例如使用摻入了胃腸道吸收較差的本發(fā)明化合物的漱口水或錠劑)來施用。對于可造 成本發(fā)明組合物的區(qū)域或局部遞送的施用，可以使用離子透入或局部施用。而且，本發(fā)明的藥物組合物可以經(jīng)過泵_導(dǎo)管系統(tǒng)施用到眼部表面或從連續(xù)或選 擇性釋放裝置內(nèi)釋放，該裝置例如是膜，例如但不限于OcusertTM系統(tǒng)(Alza Corp, Palo Alto, CA)中使用的那些。藥物組合物可以摻入、攜帶或連接到隱形眼鏡上，受試者然后佩 戴該隱形眼鏡。藥物組合物可被噴灑到眼睛表面?；蛘撸景l(fā)明的藥物組合物可以經(jīng)過泵-導(dǎo)管系統(tǒng)眼內(nèi)或眼周施用或從連續(xù)或選 擇性釋放裝置內(nèi)釋放。藥物組合物也可以包含生物可降解的持續(xù)釋放的、緩釋的和/或延 長釋放的制劑，例如PLGA微球、微?；蚣{米顆粒，它們可以通過如上所述的裝置遞送或者 眼內(nèi)或眼周注射。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑以單一劑量施用。當(dāng)與用于治療急性病癥的其 它物質(zhì)(例如止痛劑)共施用時，也可以使用單一劑量的LFA-1拮抗劑。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑(其自身或與其它藥物聯(lián)合施用)以多劑量施 用。給藥可以是每日約1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次或多于10次。 給藥可以是大約每年1次、每年2次、每隔6個月、每隔4個月、每隔3個月、每隔60天、每 月1次、每兩周1次、每周1次或每隔一天1次。在一個實施方案中，藥物為止痛劑。在另 一實施方案中，LFA-1拮抗劑和其它治療物質(zhì)同時施用每日約1次至每日約10次。在另一 實施方案中，LFA-1拮抗劑和其它治療物質(zhì)的施用持續(xù)短于約7天。在另一實施方案中，共 同施用持續(xù)多于約6天、10天、14天、28天、2個月、6個月或1年。在一些情況中，只要需要 就維持共同施用，例如對于慢性炎癥的給藥。只要需要就可以持續(xù)本發(fā)明組合物的施用。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物 被施用多于1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天或28天。在一些實施方案中，本發(fā)明 的組合物被施用短于28天、14天、7天、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些實施方案 中，本發(fā)明的組合物持續(xù)地長期施用，例如用于治療慢性疼痛。本發(fā)明的方法中LFA-1拮抗劑的劑量可以通過常規(guī)試驗確定。日劑量可以為約lX10_8g-5000mg。如上所述，日劑量范圍可以取決于使用的LFA-1拮抗劑的形式，例如酯或 鹽，和/或施用途經(jīng)。例如，對于系統(tǒng)施用而言，典型的日劑量范圍為例如約l-5000mg、或 約 l-3000mg、或約 l-2000mg、或約 l-1000mg、或約 l_500mg、或約 l-100mg、或約 10_5000mg、 或約 10-3000mg、或約 10-2000mg、或約 10-1000mg、或約 10_500mg、或約 10_200mg、或 約 10-100mg、或約 20-2000mg、或約 20_1500mg、或約 20_1000mg、或約 20_500mg、或 約 20-100mg、或約 50-5000mg、或約 50_4000mg、或約 50_3000mg、或約 50_2000mg、或 約 50-1000mg、或約 50-500mg、或約 50_100mg、或約 100_5000mg、或約 100_4000mg、或約 100-3000mg、或約 100-2000mg、或約 100-1000mg、或約 100_500mg。在一些實施方案中， LFA-1 拮抗劑的日劑量為約 100、200、300、400、500、600、700、800、900 或 lOOOmg。在一些實 施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為10mg。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為 lOOmg。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為500mg。在一些實施方案中，LFA-1拮 抗劑的日劑量為lOOOmg。 對于眼部表面的局部遞送而言，典型的日劑量范圍為例如約lxl0_8g-5. 0g、 或約 lxl(T8g-2. 5g、或約 lxlO^g-1- 00g、或約 lxl(T8g-0. 5g、或約 lxl(T8g-0. 25g、或 約 lxl(T8g-0. lg、或約 lxl(T8g-0. 05g、或約 lxl(T8g-0. 025g、或約 Ixl0_8g_lxl0_2g、或約 lxl(T8g-5xl(T3g、或約 lxl(T8g-2. 5xl(T3g、或約 lxl(T8g-lxl(T3g、或約 lxl(T8g-5xl(T4g、 或約 lxl0_7g-5. 0g、或約 lxl0_7g-2. 5g、或約 Ixl0_7g-1. 00g、或約 lxl0_7g_0. 5g、或 約 lxl(T7g-0. 25g、或約 lxl(T7g-0. lg、或約 lxl(T7g-0. 05g、或約 lxl(T7g-0. 025g、或約 lxl(T7g-lxl(T2g、或約 lxl(T7g-5xl(T3g、或約 lxl(T7g_2. 5xl(T3g、或約 lxl(T7g-lxl(T3g、 或約 lxl(T7g-5xl(T4g、或約 lxl(T6g-5. 0g、或約 lxl(T6g-2. 5g、或約 lxl(T6g_lg、或 約 lxl(T6g-0. 5g、或約 lxl(T6g-0. 25g、或約 lxl(T6g-0. lg、或約 lxl(T6g-5xl(T2g、或約 lxl(T6g-5xl(T2g、或約 lxl(T6g-2. 5xl(T2g、或約 lxl(T6g-lxl(T2g、或約 lxl(T6g-5xl(T3g、或 約 lxl(T6g-2. 5xl(T3g、或約 lxl(T6g-lxl(T3g、或約 lxl(T6g-5xl(T4g、或約 lxl(T5g_5g、或約 lxl(T5g-2. 5g、或約 lxl(T5g-lg、或約 lxl(T5g-0. 5g、或約 lxl(T5g-0. 25g、或約 lxl(T5g-0. lg、 或約 lxl(T5g-0. 05g、或約 lxl(T5g-2. 5xl(T2g、或約 lxl(T5g-lxl(T2g、或約 lxl(T5g-5xl(T3g、 或約 lxl(T5g-2. 5xl(T3g、或約 lxlO-5g-lxl(T3g、或約 lxl0"5g-5xl0"4go 在一些實施方案中， LFA-1 拮抗劑的日劑量為約 lxl(T7、lxlO-6、lxlO-5、lxl(T4、lxl0-3g、lxl(r2g、1x10、或 lg。在 一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為lX10_7g。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的 日劑量為lxl0_5g。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為lxl0_3g。在一些實施方案 中，LFA-1拮抗劑的日劑量為lxl0_2g。在一些實施方案中，受試者的劑量為約lxl0_8g-5. 0g、 或約 lxl(T8g-2. 5g、或約 lxlO^g-1- 00g、或約 lxl(T8g-0. 5g、或約 lxl(T8g-0. 25g、或 約 lxl(T8g-0. lg、或約 lxl(T8g-0. 05g、或約 lxl(T8g-0. 025g、或約 Ixl0_8g_lxl0_2g、或約 lxl(T8g-5xl(T3g、或約 lxl(T8g-2. 5xl(T3g、或約 lxl(T8g-lxl(T3g、或約 lxl(T8g-5xl(T4g、 或約 lxl0_7g-5. 0g、或約 lxl0_7g-2. 5g、或約 Ixl0_7g-1. 00g、或約 lxl0_7g_0. 5g、或 約 lxl(T7g-0. 25g、或約 lxl(T7g-0. lg、或約 lxl(T7g-0. 05g、或約 lxl(T7g-0. 025g、或約 lxl(T7g-lxl(T2g、或約 lxl(T7g-5xl(T3g、或約 lxl(T7g_2. 5xl(T3g、或約 lxl(T7g-lxl(T3g、 或約 lxl(T7g-5xl(T4g、或約 lxl(T6g-5. 0g、或約 lxl(T6g-2. 5g、或約 lxl(T6g_lg、或 約 lxl(T6g-0. 5g、或約 lxl(T6g-0. 25g、或約 lxl(T6g-0. lg、或約 lxl(T6g-5xl(T2g、或約 lxl(T6g-5xl(T2g、或約 lxl(T6g-2. 5xl(T2g、或約 lxl(T6g-lxl(T2g、或約 lxl(T6g-5xl(T3g、或約 lxl(T6g-2. 5xl(T3g、或約 lxl(T6g-lxl(T3g、或約 lxl(T6g-5xl(T4g、或約 lxl(T5g_5g、或約 lxl(T5g-2. 5g、或約 lxl(T5g-lg、或約 lxl(T5g-0. 5g、或約 lxl(T5g-0. 25g、或約 lxl(T5g-0. lg、 或約 lxl(T5g-0. 05g、或約 lxl(T5g-2. 5xl(T2g、或約 lxl(T5g-lxl(T2g、或約 lxl(T5g-5xl(T3g、或 約 lxl(T5g-2. 5xl(T3g、或約 lxlO-5g-lxl(T3g、或約 lxlO-5g-5xl(T4g。在一些實施方案中，如上 所述的個體的劑量每日重復(fù)1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。在本發(fā)明的一些實施方案中，本發(fā)明的滴眼劑、乳膏、洗液或其它局部制劑向眼內(nèi) 或眼周釋放的治療劑足以使LFA-1拮抗劑的水平維持在至少約lOnM、約50nM、約lOOnM、 約 150nM、約 200nM、約 250nM、約 300nM、約 350nM、約 500nM、約 600nM、約 700nM、約 800nM、 約 900nM、約 ImM、約 2mM、約 3mM、約 5mM、約 6mM、約 7mM、約 8mM、約 9mM、約 10mM、約 15mM、約 20mM或約25mM，從劑量至劑量。在本發(fā)明的一些實施方案中，本發(fā)明的滴眼劑制劑向眼內(nèi)或眼周釋放的治療劑 足以使視網(wǎng)膜中的LFA-1拮抗劑的水平達到至少約10nM、約50nM、約lOOnM、約150nM、約 200nM、約 250nM、約 300nM、約 350nM、約 500nM、約 600nM、約 700nM、約 800nM、約 900nM、約 ImM、約 2mM、約 3mM、約 5mM、約 6mM、約 7mM、約 8mM、約 9mM、約 10mM、約 15mM、約 20mM 或約 25mM，從劑量至劑量。對于其他形式的施用而言，日劑量可以在上述的系統(tǒng)施用的范圍附近，或可以在 上述的局部施用的范圍附近。對于緩釋或持續(xù)釋放的眼內(nèi)或眼周裝置和制劑而言，在一些實施方案中，典型的 劑量范圍為在給藥期內(nèi)釋放約0. lmg-約100mg的LFA-1拮抗劑。在其他實施方案中，在給 藥期內(nèi)釋放約lmg-約50mg、約1-約25mg、約5mg-約100mg、約5-約50mg、約5-約25mg、 約10mg-約100mg、約10mg-約50mg、約10mg-約25mg或約15mg-約50mg。緩釋眼內(nèi)或眼 周裝置和制劑的給藥期通常為約10天-約1年、約30天-約1年、約60天-約1年、約3 個月-約1年、約4個月-約1年、約5個月-約1年、或約6個月-約1年。在一些實施 方案中，緩釋眼內(nèi)或眼周裝置和制劑在約1個月-約9個月、約1個月-約8個月、約1個 月-約7個月、約1個月-約6個月、約1個月-約5個月、約1個月-約4個月、或約1個 月-約3個月的期限內(nèi)釋放治療劑。在其他實施方案中，緩釋制劑和裝置釋放治療劑長達 1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、18個 月、2年、30個月或3年。在本發(fā)明的一些實施方案中，緩釋制劑和/或植入物在眼內(nèi)或眼周釋放的治療 劑足以使LFA-1拮抗劑的水平在1年內(nèi)維持在至少約10nM、約50nM、約100nM、約150nM、 約 200nM、約 250nM、約 300nM、約 350nM、約 500nM、約 600nM、約 700nM、約 800nM、約 900nM、 約 ImM、約 2mM、約 3mM、約 5mM、約 6mM、約 7mM、約 8mM、約 9mM、約 10mM、約 15mM、約 20mM 或 約25mM。在本發(fā)明的一些實施方案中，緩釋制劑和/或植入物在眼內(nèi)或眼周釋放的治療劑 足以使LFA-1拮抗劑的水平在6個月內(nèi)維持在至少約10nM、約50nM、約100nM、約150nM、 約 200nM、約 250nM、約 300nM、約 350nM、約 500nM、約 600nM、約 700nM、約 800nM、約 900nM、 約 ImM、約 2mM、約 3mM、約 5mM、約 6mM、約 7mM、約 8mM、約 9mM、約 10mM、約 15mM、約 20mM 或約 25mM。IV.制劑本發(fā)明的組合物可在本領(lǐng)域已知的合適的載體中被配制為無菌溶液或懸浮液。Remington "The Science and Practice of Pharmacy，，(20thEd. , Lippincott ffilliams&ffilkins,Baltimore MD)描述了合適的制劑和另外的載體，其全部內(nèi)容在此通過 引用并入本文。對于可注射制劑而言，載體可選自本領(lǐng)域已知的合適的載體，包括水溶液或油狀 懸浮液或乳劑，和芝麻油、玉米油、棉籽油或花生油、和酏劑、甘露醇、葡萄糖，或無菌水溶液 和類似的藥物載體。制劑還可以包含生物兼容的、生物可降解的聚合物組合物，例如聚乳 酸_乙醇酸共聚物。這些材料可被制成微?；蚣{米顆粒，它們攜帶藥物，并且進一步涂覆或 衍生化以提供較好的持續(xù)釋放性能。適于眼周或眼內(nèi)注射的載體包括例如治療劑在注射級 水、脂質(zhì)體和適于親脂性物質(zhì)的載體中的懸浮液。用于眼周或眼內(nèi)注射的其他載體是本領(lǐng) 域已知的。如本領(lǐng)域已知的，可以調(diào)節(jié)藥物的濃度、緩沖溶液的pH和等滲性，以使其與靜脈
注射兼容。任何形式的LFA-1也可被碾碎以提供更合適的配制性質(zhì)。碾碎可提供較小的顆粒 大小和較大的表面積接觸，這可在體內(nèi)或配制過程中提供更快速的穩(wěn)定化。或者，碾碎到較 小的顆粒大小可提供不需最初的穩(wěn)定化，直接透過生物屏障(例如皮膚或腸壁)的能力，因 而可以作為制劑中的固體使用，這可以提供溫度穩(wěn)定性、儲存期、易于運輸和受試者易于使 用的另外益處?？诜苿┛梢詾槠瑒?、膠囊、藥片、藥丸、干膠片、口膠、錠劑、水溶液或懸浮液、油 狀懸浮液、糖漿、酏劑或可分散的粉末或顆粒等，而且可以按照本領(lǐng)域已知的任何方式制 備?？诜苿┻€可以含有甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑。用于片劑形式的藥學(xué)上可接 受的賦形劑可以包含無毒成分，例如惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉寸。在用于口服使用的片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉，而且通常加 入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對于膠囊形式的口服施用而言，有用的載體包括乳糖和玉米淀 粉。載體和賦形劑的其他非限制性例子包括牛乳、糖、某些類型的粘土、明膠、硬脂酸或其 鹽、硬脂酸鈣、滑石、植物脂肪或油、樹膠和二元醇。可用于形成本發(fā)明的藥物組合物和劑型的表面活性劑包括但不限于親水性表面 活性劑、親脂性表面活性劑及其混合物。也就是說，可以使用親水性表面活性劑的混合物， 可以使用親脂性表面活性劑的混合物，或者可以使用至少一種親水性表面活性劑和至少一 種親脂性表面活性劑的混合物。適當(dāng)?shù)挠H水性表面活性劑通常具有至少為10的HLB值，而適當(dāng)?shù)挠H脂性表面活性 劑通常具有等于或小于約10的HLB值。用于表征非離子型兩性化合物的相對親水性和疏 水性的經(jīng)驗參數(shù)是親水_親脂平衡(“HLB”值)。具有較低HLB值的表面活性劑更加親脂 或疏水，并且在油中的溶解性更大，而具有較高的HLB值的表面活性劑更加親水，并且在水 溶液中的溶解性更大。通常認為親水性表面活性劑為HLB值大于約10的那些化合物，以及 HLB量度通常不適用的陰離子、陽離子或兩性離子化合物。類似地，親脂性(即，疏水性)表 面活性劑為HLB值等于或小于約10的化合物。但是，表面活性劑的HLB值僅是常用于能夠 配制工業(yè)、藥物和化妝品乳液的粗略的指導(dǎo)。親水性表面活性劑可以為離子型或非離子型。適當(dāng)?shù)碾x子型表面活性劑包括但不
98限于烷基銨鹽；梭鏈孢酸鹽；氨基酸、寡肽和多肽的脂肪酸衍生物；氨基酸、寡肽和多肽的 甘油酯衍生物；卵磷脂和氫化卵磷脂；溶血卵磷脂和氫化溶血卵磷脂；磷脂及其衍生物；溶 血磷脂及其衍生物；肉堿脂肪酸酯鹽；烷基硫酸酯的鹽；脂肪酸鹽；多庫酯鈉；?；樗狨ィ?單甘油酯和二甘油酯的單乙?；投阴；剖狨ィ荤牾；膯胃视王ズ投视王?； 單甘油酯和二甘油酯的檸檬酸酯；及其混合物。在前面提及的組中，優(yōu)選的離子型表面活性劑包括例如卵磷脂、溶血卵磷脂、磷 脂、溶血磷脂及其衍生物；肉堿脂肪酸酯鹽；烷基硫酸酯的鹽；脂肪酸鹽；多庫酯鈉；?；?酸酯；單甘油酯和二甘油酯的單乙?；投阴；剖狨ィ荤牾；膯胃视王ズ投?油酯；單甘油酯和二甘油酯的檸檬酸酯；及其混合物。離子型表面活性劑可以為離子化形式的卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰 乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷 脂酰甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂酰絲氨酸、PEG-磷脂酰乙醇胺、PVP-磷脂酰乙醇胺、脂肪 酸的乳酸酯、硬脂酰-2-乳酸酯、硬脂酰乳酸酯、琥珀酸單甘油酯、單/ 二甘油酯的單/ 二乙 酰化酒石酸酯、單/ 二甘油酯的檸檬酸酯、膽酰肌氨酸、己酸酯、辛酸酯、癸酸酯、月桂酸酯、 十四烷酸酯、棕櫚酸酯、油酸酯、蓖麻酸酯、亞油酸酯、亞麻酸酯、硬脂酸酯、月桂基硫酸酯、 四乙?；蛩狨?、多庫酯、月桂酰肉堿、棕櫚酰肉堿、十四酰肉堿，及其鹽和混合物。親水性非離子型表面活性劑可以包括但不限于烷基糖苷；烷基麥芽糖苷；烷基硫 葡糖苷；月桂基聚乙二醇甘油酯；聚氧化烯烷基醚，例如聚乙二醇烷基醚；聚氧化烯烷基 酚，例如聚乙二醇烷基酚；聚氧化烯烷基酚脂肪酸酯，例如聚乙二醇脂肪酸單酯和聚乙二醇 脂肪酸二酯；聚乙二醇脂肪酸甘油酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧化烯失水山梨醇脂肪酸酯，例 如聚乙二醇失水山梨醇脂肪酸酯；多元醇與至少一個下組物質(zhì)的親水性酯交換產(chǎn)物甘油 酯、植物油、氫化植物油、脂肪酸和留醇；聚氧乙烯留醇，其衍生物和類似物；聚氧乙烯化維 生素及其衍生物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；及其混合物；聚乙二醇失水山梨醇脂 肪酸酯，和多元醇與至少一個下組物質(zhì)的親水性酯交換產(chǎn)物甘油三酯、植物油和氫化植物 油。多元醇可以為甘油、乙二醇、聚乙二醇、山梨醇、丙二醇、季戊四醇或糖類。其它親水性非離子型表面活性劑包括但不限于PEG-10月桂酸酯、PEG-12月桂酸 酯、PEG-20月桂酸酯、PEG-32月桂酸酯、PEG-32 二月桂酸酯、PEG-12油酸酯、PEG-15油酸 酯、PEG-20油酸酯、PEG-20 二油酸酯、PEG-32油酸酯、PEG-200油酸酯、PEG-400油酸酯、 PEG-15硬脂酸酯、PEG-32 二硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20 二月桂 酸酯、PEG-25甘油基三油酸酯、PEG-32 二油酸酯、PEG-20甘油基月桂酸酯、PEG-30甘油基月 桂酸酯、PEG-20甘油基硬脂酸酯、PEG-20甘油基油酸酯、PEG-30甘油基油酸酯、PEG-30甘 油基月桂酸酯、PEG-40甘油基月桂酸酯、PEG-40棕櫚仁油、PEG-50氫化蓖麻油、PEG-40蓖 麻油、PEG-35蓖麻油、PEG-60蓖麻油、PEG-40氫化蓖麻油、PEG-60氫化蓖麻油、PEG-60玉米 油、PEG-6癸酸酯/辛酸酯甘油酯、PEG-8癸酸酯/辛酸酯甘油酯、聚甘油基-10月桂酸酯、 PEG-30膽留醇、PEG-25植物留醇、PEG-30大豆留醇、PEG-20三油酸酯、PEG-40失水山梨醇油 酸酯、PEG-80失水山梨醇月桂酸酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、P0E-9月桂基醚、P0E-23 月桂基醚、P0E-10油烯基醚、P0E-20油烯基醚、P0E-20硬脂?；?、兒茶酚基PEG-100琥珀 酸酯、PEG-24膽留醇、聚甘油基-10油酸酯、Tween40、Tween 60、蔗糖單硬脂酸酯、蔗糖單月 桂酸酯、蔗糖單棕櫚酸酯、PEG 10-100壬基酚系列、PEG 15-100辛基酚系列，和泊洛沙姆。
僅作為舉例，適當(dāng)?shù)挠H脂性表面活性劑包括脂肪醇；甘油脂肪酸酯；乙?；视?脂肪酸酯；低級醇脂肪酸酯；丙二醇脂肪酸酯；失水山梨醇脂肪酸酯；聚乙二醇失水山梨醇 脂肪酸酯；留醇和留醇衍生物；聚氧乙烯化留醇和留醇衍生物；聚乙二醇烷基醚；糖酯；糖 醚；單和二甘油酯的乳酸衍生物；多元醇與至少一個下組物質(zhì)的疏水性酯交換產(chǎn)物甘油 酯、植物油、氫化植物油、脂肪酸和留醇；油溶性維生素/維生素衍生物；及其混合物。在該 組中，優(yōu)選的親脂性表面活性劑包括甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯及其混合物，或者為多 元醇與至少一個下組物質(zhì)的疏水性酯交換產(chǎn)物植物油、氫化植物油和甘油三酯。表面活性劑可以在本發(fā)明的任何制劑中使用，只要其使用不會產(chǎn)生矛盾。在本發(fā) 明的一些實施方案中，優(yōu)選不使用或使用有限種類的表面活性劑。其他合適的水性載體包括但不限于Ringer溶液和等滲氯化鈉。水性懸浮液可以 包含懸浮劑，例如纖維素衍生物、藻酸鈉、聚乙烯_吡咯烷酮和黃蓍膠，以及潤濕劑，例如卵 磷脂。用于水性懸浮液的合適的防腐劑包括對羥基苯甲酸甲酯和正丙酯?？捎糜谛纬杀景l(fā)明的藥物組合物和劑型的螯合劑包括但不限于乙二胺四乙酸 (EDTA)、EDTA 二鈉、依地酸鈣鈉、EDTA三鈉、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、去鐵敏、去鐵靈、甲磺酸去鐵 敏、EDTA四鈉和EDTA 二鉀、偏硅酸鈉或上述這些的任意組合?？捎糜谛纬杀景l(fā)明的藥物組合物和劑型的防腐劑包括但不限于黃鐵礦(purite)、 過氧化物、過硼酸鹽、咪唑烷基脲、雙咪唑烷基脲、苯氧基乙醇、包括苯扎氯銨的銨 (alkonium)氯化物、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯和尼泊金丙酯?？捎糜谛纬杀景l(fā)明的藥物組合物和劑型的增稠劑包括但不限于肉豆蔻酸異丙酯、 棕櫚酸異丙酯、新戊酸異癸酯、鯊烯、礦物油、C12_C15苯甲酸酯和氫化聚異丁烯。特別優(yōu)選的 是不會破壞終產(chǎn)物的其他化合物的那些試劑，例如非離子型增稠劑。其他增稠劑的選擇是 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的。可用于形成本發(fā)明的藥物組合物和劑型的抗氧化劑包括但不限于沒食子酸的丙 酯、辛酯和十二烷基酯、丁羥茴醚(BHA，通?？勺鳛榕R位和間位異構(gòu)體的混合物購得)、綠 茶提取物、尿酸、半胱氨酸、丙酮酸鹽、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、抗壞血酸、抗壞血酸的鹽(例如 抗壞血酸棕櫚酸鹽和抗壞血酸鈉、抗壞血酸葡糖胺)、維生素E(即生育酚如a-生育酚)、 維生素E的衍生物(例如醋酸生育酚)、類維生素A類(例如視黃酸、視黃醇、反-視黃醇、 順_視黃醇、反_視黃醇和順_視黃醇的混合物，3-去氫視黃醇和維生素A的衍生物(例 如視黃醇乙酸酯、視網(wǎng)膜和視黃醇棕櫚酸酯，也被稱為棕櫚酸維生素A))、檸檬酸鈉、亞硫酸 鈉、番茄紅素、花色素、生物類黃酮(例如橙皮苷、柚皮苷、蘆丁和槲皮苷)、超氧化物歧化 酶、谷胱甘肽過氧化物酶、丁羥甲苯(BHT)、吲哚-3-甲醇、碧蘿芷、褪黑激素、萊菔硫烷、孕 烯醇酮、硫辛酸和4-羥基-5-甲基_3[2H]_呋喃酮。當(dāng)配制用于口服施用的本發(fā)明的化合物時，理想的是利用胃滯留制劑來提高胃腸 (GI)道的吸收。在胃中滯留幾個小時的制劑可以緩慢地釋放本發(fā)明的化合物，并提供在 本發(fā)明的一些實施方案中可能是優(yōu)選的持續(xù)釋放。該胃滯留制劑公開在Klausner，E. A.； Lavy,E. ；Barta，M. ；Cserepes，E. ；Friedman,M. ；Hoffman,A. 2003 "Novelgastroretentive dosage forms :evaluation of gastroretentivity and itseffect on levodopa in humans.，，Pharm. Res. 20，1466-73，Hoffman，A. ；Stepensky，D. ；Lavy, E. ；Eyal， S. Klausner，E. ；Friedman，M. 2004 “Pharmacokinetic and pharmacodynamic aspectsof gastroretentivedosage forms" Int. J. Pharm. 11,141-53, Streubel, A. ；Siepmann, J. ；Bodmeier, R. ；2006 "Gastroretentive drug delivery systems，，Expert Op in. Drug Deliver.3,217-3, 禾口 Chavanpatil, M. D. ；Jain, P. ；Chaudhari, S. ；Shear, R. ；Vavia, P.R. “Novel sustained release, swellable andbioadhesive gastroretentive drug delivery system for olfoxacin” Int. J. Pharm. 2006 epub 3 月 24 日?？梢允褂每蓴U展 的、漂浮的和生物粘附技術(shù)來最大化本發(fā)明化合物的吸收。鼻內(nèi)施用可以采用包含本發(fā)明化合物的可吸入顆粒的氣溶膠懸浮液，其被受試者 吸入。本發(fā)明的化合物以藥學(xué)上有效的量通過肺部吸收被吸收到血流中或通過鼻淚管接觸 淚腺組織，然后再被輸送到視網(wǎng)膜組織中?？珊粑念w?？梢允蔷哂羞m當(dāng)粒度的固體或液 體，如本領(lǐng)域已知對于吸收有效的。吸入或吹入的組合物包括在藥學(xué)上可接受的水性或有 機溶劑中的溶液和懸浮液、或其混合，和粉末。液體或固體組合物可以包含上文描述的合適 的藥學(xué)上可接受的賦形劑。組合物優(yōu)選地通過口服或鼻內(nèi)呼吸途徑施用，以達到局部或全 身效果。可以使用惰性氣體對溶于優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的溶劑中的組合物進行噴霧?？梢?從噴霧裝置直接吸入噴霧溶液，或者可以將噴霧裝置連接在面罩或間歇式正壓呼吸機上。 可以從以適當(dāng)形式遞送制劑的裝置中施用溶液、懸浮液或粉末組合物，優(yōu)選地通過口或鼻 施用。對于經(jīng)皮給藥而言，可以采用本領(lǐng)域已知的任何適當(dāng)?shù)闹苿?，如溶液、滴液、懸?液、凝膠、粉末、乳膏、油、固體、基于二甲基亞砜(DMS0)的溶液或用于貼劑的脂質(zhì)體制劑或 本領(lǐng)域已知的其它遞送體系。藥物組合物還可以包含適當(dāng)?shù)墓腆w或凝膠相載體或賦形劑， 它們是具有下述作用的化合物能夠提高治療分子透過皮膚角質(zhì)層滲透障礙的透過或者有 助于治療分子的遞送。對于局部制劑領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員而言，存在許多已知的增強滲透 性的分子。這些載體和賦形劑的例子包括但不限于濕潤劑(例如尿素)、二醇類(例如丙 二醇)、醇類(例如乙醇)、脂肪酸(例如油酸)、表面活性劑(例如肉豆蔻酸異丙酯和月桂 基硫酸鈉)，吡咯烷酮、單月桂酸甘油酯、亞砜，萜烯(例如薄荷醇)、胺類、酰胺類、烷烴、烷 醇、水、碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖類、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物，例如聚乙二醇。用于 遞送藥劑的透皮貼劑的構(gòu)造和應(yīng)用是本領(lǐng)域已知的。參見，例如，美國專利No. 5，023，252、 4，992，445和5，001, 139。這種貼劑可以制成連續(xù)、脈動或按需遞送藥劑的形式。對于局部施用而言，如本領(lǐng)域中已知的，可以使用眼科領(lǐng)域使用的用于眼局部給 藥的所有制劑(例如，滴眼劑、插入物、眼罩(ey印ack)、浸漬的隱形眼鏡、泵送體系、基于二 甲基亞砜(DMS0)的溶液懸浮液、脂質(zhì)體和眼膏)和皮膚科和耳鼻喉科領(lǐng)域使用的用于外 部使用的所有制劑(例如，軟膏、乳膏、凝膠、粉末、油膏、洗液、晶體形式、泡沫和噴霧)。在 一些實施方案中，本發(fā)明的一些LFA-1拮抗劑的極好的溶解性使得可以制成濃縮的溶液制 劑，這樣的制劑可向眼部遞送治療上相關(guān)的劑量。此外，可以使用用于局部給藥于皮膚和鼻 道的粘膜的所有適當(dāng)制劑來遞送本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的藥物組合物可以為用于局部或 口服給藥的脂質(zhì)體制劑，其中任何一種都是本領(lǐng)域已知適合于本發(fā)明目的的。可以用于形成本發(fā)明的藥物組合物和劑型的潤滑劑包括但不限于硬脂酸鈣、硬脂 酸鎂、礦物油、輕礦物油、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇、其它二醇、硬脂酸、月桂基硫 酸鈉、滑石、氫化植物油(例如，花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆 油)、硬脂酸鋅、油酸乙酯、月桂酸乙酯、瓊脂，或其混合物。其他潤滑劑包括，例如硅酸鹽硅膠、合成二氧化硅的凝聚型氣溶膠，或其混合物。可以任選地以小于藥物組合物的約1重 量％的量加入潤滑劑。皮膚保護劑為保護皮膚免于化學(xué)刺激和/或物理刺激(例如UV光)的試劑，包 括防曬劑、抗痤瘡添加劑、抗皺劑和抗皮膚萎縮劑。作為皮膚保護劑的合適的防曬劑包括 對_甲氧基肉桂酸2-乙基己基酯、N，N- 二甲基-對-氨基苯甲酸2-乙基己基酯、對-氨 基苯甲酸、2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、奧克立林、羥苯甲酮、水楊酸三甲環(huán)己酯、水楊酸辛 酯、4，4 ‘-甲氧基-叔-丁基二苯甲酰基甲烷、4-異丙基二苯甲?；淄?、3-亞芐基樟 腦、3-(4_甲基亞芐基)樟腦、氨基苯甲酸酯、超精細二氧化鈦、氧化鋅、氧化鐵、二氧化硅、 2，4-二羥基二苯甲酮的4-N，N-(2-乙基己基)甲基氨基苯甲酸酯、4-羥基二苯甲?；?烷的4-N，N-(2-乙基己基)_甲基氨基苯甲酸酯、2-羥基-4-(2-羥基乙氧基)二苯甲酮 的4-N，N- (2-乙基己基)-甲基氨基苯甲酸酯、和4- (2-羥基乙氧基)二苯甲?；淄榈?4-N，N(2-乙基己基)_甲基氨基苯甲酸酯。合適的抗痤瘡藥物包括水楊酸；5-辛酰水楊 酸；間苯二酚；類維生素A類，例如視黃酸及其衍生物；半胱氨酸以外的含硫的D和L氨基 酸；硫辛酸；抗生素和抗微生物劑，例如過氧化苯甲酰、羥甲辛吡酮、四環(huán)素、2，4，4'-三 氯-2'-羥基二苯基醚、3，4，4'-三氯甲氧苯、壬二酸、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯氧基異 丙醇、乙酸乙酯、克林霉素和melclocycline)；黃酮類化合物；和膽汁鹽，例如鯊膽甾醇硫 酸鹽、脫氧膽酸鹽和膽酸鹽。抗皺劑和抗皮膚萎縮劑的例子為視黃酸及其衍生物、視黃醇、 視黃酯、水楊酸及其衍生物、半胱氨酸以外的合硫的D和L氨基酸、a -羥基酸(例如羥基 乙酸和乳酸)、肌醇六磷酸、硫辛酸和溶血磷脂酸。該制劑還可以包含減輕刺激的添加劑，以減輕或消除由組合物的其他組分導(dǎo)致的 皮膚刺激或皮膚損害的可能性。合適的減輕刺激的添加劑包括，例如生育酚；單胺氧化酶 抑制劑，特別是苯基醇，如2-苯基-1-乙醇；甘油；水楊酸和水楊酸酯；抗壞血酸和抗壞血 酸酯；離子載體，例如莫能菌素；兩性胺；氯化銨；N-乙酰半胱氨酸；順-尿刊酸；辣椒辣素； 和氯喹。如果存在的話，可向本發(fā)明的制劑中引入減輕刺激的添加劑，其濃度可有效地減輕 刺激或皮膚損害，通常不多于組合物的約20重量％，更通常不多于組合物的約5重量％。干燥感調(diào)節(jié)劑是當(dāng)被添加到乳劑后在乳劑干燥時會使得皮膚有“干燥感”的試 劑。干燥感調(diào)節(jié)劑可以包括滑石、高嶺土、白堊、氧化鋅、硅酮液、無機鹽如硫酸鋇、表面 處理的二氧化硅、沉淀二氧化硅、煅制二氧化硅，如可從美國紐約的Degussa Inc.購得的 Aerosil。另一干燥感調(diào)節(jié)劑為美國專利No. 6，488，916中公開的表氯醇交聯(lián)的甘油基淀粉 類型。還可以添加其他的試劑，例如抗微生物劑，以防止儲存過程中變質(zhì)，即抑制例如酵 母和霉菌的微生物的生長。合適的抗微生物劑通常選自對羥基苯甲酸的甲酯和丙酯(即尼 泊金甲酯和丙酯)、苯甲酸鈉、山梨酸、咪唑烷脲、黃鐵礦、過氧化物、過硼酸鹽及其組合。制劑還可以含有美學(xué)試劑。美學(xué)試劑的例子包括芳香劑、染料、著色劑、精油、皮膚 感覺劑和收斂劑。合適的美學(xué)試劑包括丁香油、薄荷醇、樟腦、桉樹油、丁子香酚、乳酸甲酯、 沒藥醇、金縷梅蒸餾物(優(yōu)選的)和綠茶提取物(優(yōu)選的)。芳香劑為可以給防曬組合物提供美學(xué)愉悅的香氣的芳香族物質(zhì)。典型的芳香劑包 括從植物來源(即玫瑰花瓣、桅子花、茉莉花等)提取的芳香材料，其可以單獨使用或任意 組合使用，以產(chǎn)生精油。或者，可以制備酒精提取物用于混合芳香劑。但是，由于從天然物質(zhì)中獲得芳香劑的成本相對較高，所以目前的趨勢是使用合成制備的芳香劑，特別是大規(guī) 模的產(chǎn)品。防曬組合物中任選地可包含一種或多種芳香劑，其量為約0. 001-約5重量百分 比，優(yōu)選約0.01-0. 5重量百分比。如果需要的話，還可以使用另外的防腐劑，該防腐劑包括 公知的防腐劑組合物，例如芐醇、苯基乙基醇和苯甲酸、二咪唑烷基尿素、氯苯甘醚、碘丙炔 和氨基甲酸丁酯，等等。此外，預(yù)計可以將本發(fā)明的化合物可釋放地連接在用于持續(xù)釋放制劑的生物相容 聚合物上，其中所述聚合物位于用于局部、眼內(nèi)、眼周或系統(tǒng)施用的插入物之上、內(nèi)部或與 其連接?？梢圆捎盟苄跃酆衔飶纳锵嗳莸木酆衔锷鲜芸蒯尫?，以形成可滴注的制劑。在 用于持續(xù)釋放型施用的適于眼內(nèi)植入或注射的制劑中可以采用從生物相容的聚合物(例 如，PLGA微球、微?；蚣{米顆粒)上受控釋放。可以使用任何合適的生物可降解的和生物 相容的聚合物或基質(zhì)。滴眼劑可以如下制備將活性成分溶解在無菌水溶液，例如生理鹽水、緩沖溶液等 中，或者混合粉末組合物并在使用之前溶解。如本領(lǐng)域中已知的，還可以選擇其它載體，包 括但不限于平衡鹽溶液、鹽水、水溶性聚醚(例如聚乙二醇)、聚乙烯(例如聚乙烯醇和 聚乙烯基吡咯烷酮)、纖維素衍生物(例如甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素)、石油衍生物 (例如礦物油和白凡士林)、動物脂肪(例如羊毛脂)，丙烯酸聚合物(例如羧基聚亞甲基 凝膠)、植物脂肪(例如花生油)和多糖(例如葡聚糖)和糖胺聚糖(例如透明質(zhì)酸鈉)。 如果希望，還可以加入常用于滴眼劑中的添加劑。該添加劑包括等滲劑(例如氯化鈉等)、 緩沖劑(例如硼酸、磷酸一氫鈉、磷酸二氫鈉等)、防腐劑(例如苯扎氯銨、芐索氯銨、三氯 叔丁醇等)、增稠劑(例如糖，如乳糖、甘露糖醇、麥芽糖等；例如透明質(zhì)酸或其鹽，如透明質(zhì) 酸鈉、透明質(zhì)酸鉀等；例如粘多糖，如硫酸軟骨素等；例如聚丙烯酸鈉、羧基乙烯基聚合物、 交聯(lián)聚丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維 素、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素，或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其他試劑)。通過在組合物中使用表面活性劑或其他適當(dāng)?shù)墓踩軇┛梢蕴岣弑景l(fā)明組合物的 組分的溶解性。該共溶劑包括聚山梨醇酯20,60和80、Pluronic F68、F-84和P-103、環(huán) 糊精或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其他試劑。該共溶劑的用量可以為約0.01%-2% (重 量)O可以將本發(fā)明的組合物制成不含防腐劑的無菌單元劑型?？梢詫⒈景l(fā)明的組合物包裝為多劑量形式。優(yōu)選地采用防腐劑來防止使用過 程中的微生物污染。合適的防腐劑包括苯扎氯銨、硫柳汞、三氯叔丁醇、尼泊金甲酯、尼 泊金丙酯、苯乙醇、依地酸二鈉、山梨酸、過硼酸鈉、Onamer M，或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已 知的其它試劑。在現(xiàn)有技術(shù)的眼科產(chǎn)品中，這種防腐劑的用量可以為0.004% -0.02%。 在本申請的組合物中，防腐劑，優(yōu)選苯扎氯銨的用量可以為0. 001 % -小于0. 01 %，例如 0.001%-0.008%，優(yōu)選約0.005% (重量)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，0.005%的苯扎氯銨濃度足以使本 發(fā)明的化合物防止微生物的侵襲。用于本發(fā)明中的活性成分的施用量和施用次數(shù)根據(jù)受試者的性別、年齡和體重、 治療的癥狀、希望的治療效果、給藥途徑和治療周期而變化。對于成人用滴眼劑而言， 含有本發(fā)明化合物的制劑的濃度可以為約0. 0001-10. 0W/V %、約0. 005-10. 0W/V %、約 0. 01-10. 0W/V%、約 0. 05-10. 0W/V%、約 0. 1-10. 0W/V%、約 0. 5-10. 0W/V%、約 1. 0-10. Off/、約 20-10. 0W/V%、約 3. 0-10. 0W/V%、約 4. 0-10. 0W/V%，或約 5. 0-10. 0W/V%。本發(fā)明 一個實施方案的制劑具有約1.0-10.0W/V%的本發(fā)明化合物。本發(fā)明一個實施方案的制劑 具有約0. 01-10. 0W/V%的本發(fā)明化合物。本發(fā)明一個實施方案的制劑具有約5. 0-10. Off/ 的本發(fā)明化合物。給藥可以為每日每只眼施用若干次，優(yōu)選1-10次，更優(yōu)選1-4次，最優(yōu) 選每日1次。施用的液滴大小可以為約10-100iil、約10-90iil、約10-80iil、約10-70iil、 約 10-60 ii 1、約 10-50 ii 1、約 10-40 ii 1、約 10-30 ii 1、約 20-100 y 1、約 20-90 y 1、約 20-80 ii 1、約 20-70 ii 1、約 20-60 ii 1、約 20-50 ii 1、約 20-40 u 1 或約 20-30 u 1。本發(fā)明的 一個實施方案施用約10-約30iU的滴眼劑。本發(fā)明的一個實施方案施用約10-約100 ill 的滴眼劑。本發(fā)明的一個實施方案施用約20-約50 yl的滴眼劑。本發(fā)明的一個實施方案 施用約10-約60iU的滴眼劑。本發(fā)明的制劑可以每次施用幾滴、1-4滴、優(yōu)選1-3滴、更優(yōu)選1-2滴，最優(yōu)選每日 施用1滴。在一個實施方案中，本發(fā)明的制劑每次大約施用1滴且每日大約施用1次。在軟膏、乳膏、洗液或噴霧制劑中，制劑中的本發(fā)明化合物的濃度可以為約 0. 0001-10. 0W/V %、約 0. 005-10. 0W/V %、約 0. 01-10. 0W/V %、約 0. 05-10. 0W/V 約
0.1-10. 0W/V %、約 0. 5-10. 0W/V %、約 1. 0-10. 0W/V %、約 20-10. 0W/V %、約 3. 0-10. Off/ V %、約4. 0-10. 0W/V %，或約5. 0-10. 0W/V %。本發(fā)明一個實施方案的制劑具有約
1.0-10. 0W/V%的本發(fā)明化合物。本發(fā)明一個實施方案的制劑中含有約0. 01-10.
本發(fā)明化合物。本發(fā)明一個實施方案的制劑中含有約5. 0-10. 0W/V%的本發(fā)明化合物。這 些制劑可以每日施用或噴霧若干次，優(yōu)選每日1-6次，更優(yōu)選每日1-4次，最優(yōu)選每日1次。 可以根據(jù)炎癥或感染的程度適當(dāng)提高或降低各成分的混合比例。本發(fā)明的制劑可以進一步包含其它藥物活性成分，只要其不與本發(fā)明的目的相矛 盾。在多種活性成分組合的情況下，考慮到其效果和安全性可以適當(dāng)提高或降低其各自的含量。V.試劑盒本發(fā)明還提供了試劑盒。該試劑盒包括適當(dāng)包裝的本發(fā)明的化合物，和可能包括 使用說明、臨床研究討論、副作用列表等的書面材料。試劑盒還可以進一步含有與本發(fā)明的 LFA-1共施用的另一種治療劑。在一些實施方案中，將該治療劑和本發(fā)明的LFA-1拮抗劑在 試劑盒的分隔容器內(nèi)作為分開的組合物來提供。在一些實施方案中，將該治療劑和本發(fā)明 的LFA-1拮抗劑在試劑盒容器內(nèi)作為單一組合物來提供。適當(dāng)?shù)陌b和其他使用物件(例 如用于液體制劑的量杯、使空氣暴露最小化的鋁箔包裝、分配器等)是本領(lǐng)域已知的，也可 以包括在試劑盒中。VI.實施例實施例1 親和力測定如以前所述，使用小分子拮抗劑化合物1(圖2)，通過競爭性形式，利用熒光偏振 (FP)來測定小分子對LFA-1的親和力。所有的測定都是在含50mM Hepes, pH 7. 2，150mM NaCl，0. 05%正辛基葡糖苷和0. 05%牛丙種球蛋白(BGG)以及ImM MnCl2或ImM CaCl2和 ImM MgCl2的緩沖液中進行的。測定化合物1對LFA-1的親和力的方法首先是向LFA-1的系 列稀釋液中添加2mM的化合物1，該系列稀釋液開始于1 P M，在含MnCl2或CaCl2和MgCl2的 緩沖液中。通過向2mM化合物1 (使用3nM LFA-1 (MnCl2中)或40mM LFA-1 (CaCl2和MgCl2
104中))添加拮抗劑的系列稀釋液來進行競爭性試驗。在ICAM-1-Ig競爭性試驗中，在兩種二 價陽離子緩沖液的條件下，LFA-1的濃度降至2和20mM的LFA-1，以最大化ICAM_l_Ig的抑 制。在親和力計算(見下文)中考慮試驗中使用的不同的LFA-1的濃度。37°C下在96孔 黑色 HE96 板(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)中溫育溶液 2 小時。在 Analyst 讀板器 (Molecular Devices, Sunnyvale，CA)上使用 485nm激發(fā)、530nm發(fā)射和 505nm二色性濾光片 進行熒光偏振(FP)測量。通過減去用不含化合物1的適當(dāng)樣品測量的強度來針對背景發(fā)射 校正所有原始強度數(shù)據(jù)。通過使用KaleidaGrap軟件(Synergy Software,Reading,PA)進 行4參數(shù)方程的非線性最小二乘方擬合，分析LFA-1結(jié)合和拮抗劑競爭數(shù)據(jù)，以獲得LFA-1 滴定的EC5(I值和拮抗劑的IC5(I值。用于擬合數(shù)據(jù)的方程是Y= ((A-D)/(1+(X/C)"B))+D, 其中Y為測定響應(yīng)，A是上漸進線的Y值，B是斜率，C是IC5(I或EC5(I，D是下漸進線的Y值。 通常，在如下文所述的均相FP和非均相ELISA模式中測量的數(shù)據(jù)包含相對較大的信號背 景比，并且擬合中的誤差估計值通常小于擬合參數(shù)最終值的10%。使用Klotz和Hill分析 來計算在含有和不含A-286982時，LFA-1對化合物1的平衡解離常數(shù)(Kd)。使用IC5(1值、 化合物1/LFA-1的Kd和競爭性試驗中化合物1和LFA-1的濃度來計算拮抗劑對LFA-1的 親和力(I)。實施例2 :LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)(A)拮抗劑競爭在競爭模式中測定小分子和sICAM-1對ICAM_I_Ig或熒光素-標(biāo) 記的小分子拮抗劑化合物2B與LFA-1的結(jié)合的破壞能力?；衔?B與化合物1類似，但 是其在小分子和熒光素之間具有更長的連接體，用以使抗_熒光檢測抗體的結(jié)合最大化。 4°C下，在96-孔板上包被5iig/ml(33.3nM)溶于磷酸鹽緩沖液(PBS)中的小鼠抗-人類 B2整聯(lián)蛋白(非功能阻斷抗體)過夜。室溫下用測定緩沖液(20mM Hepes, pH 7. 2，140mM NaCl, ImM MnCl2，0. 5%牛血清白蛋白(BSA)和0. 05% Tween-20)封閉該板1小時。在緩沖 液(50mMTris-HCl，pH 7. 5，100mM NaCl, ImM MnCl2 和 0. 05% Tween-20)中洗滌之后，加入 8nM LFA-1 (LFA-l/ICAM-1 ELISA)或 2nM LFA-1 (LFA-1/小分子ELISA)，之后在 37°C下溫育 1小時。洗滌該板，且對于LFA-l/ICAM-1 ELISA而言，將小分子拮抗劑或sICAM_l的系列稀 釋液加入到板中并保持30分鐘，之后加入0. 89nM的ICAM_I_Ig (終濃度)并在37°C下保持 2小時。再次洗滌之后，加入山羊抗-huIgG(Fc特定的)_HRP并在37°C下溫育1小時。在 LFA-1/小分子ELISA中，將稀釋的拮抗劑和25nM化合物2B同時加入到板中，之后在37°C 下溫育2小時。洗滌之后加入綿羊抗熒光素-HRP，并在37°C下再溫育1小時。對于兩次測 定而言，在洗滌之后通過下述方式檢測結(jié)合的HRP-偶聯(lián)抗體加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，之 后在加入1M H3P04終止反應(yīng)后測量產(chǎn)物在450nm處的吸光度。使用KaleidaGraph軟件擬 合上述的4參數(shù)方程，從而確定每條曲線的IC5(I值。(B)配體結(jié)合按照上述方式進行LFA-l/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISA，不同之 處是在存在或不存在拮抗劑的情況下將ICAM-1-Ig或化合物2B的系列稀釋液加入到板中。 在所有情況下配體都與拮抗劑同時加入。在加入拮抗劑和配體之后，進行洗滌和加入檢測 抗體之前，在37°C下將板溫育6小時以達到平衡狀態(tài)。通過擬合如上所述的4參數(shù)模型來 確定每條曲線的EC5(i值。通過Schild回歸來分析存在和不存在拮抗劑的情況下所產(chǎn)生的 EC5(I值。按照下式計算Log(濃度比-1)對拮抗劑濃度的Schild圖(濃度比-1)=((存 在拮抗劑時配體的EC5(i) / (不存在拮抗劑時配體的EC5(i) )-1。通過將線擬合到線性方程Y =A+BX來計算Log(濃度比-1)對拮抗劑濃度的圖的斜率。實施例3 放射性標(biāo)記的、化合物3的光活化類似物與LFA-1的交聯(lián)在存在或不存在290 u M化合物3的情況下，4. 1 u M化合物5 (氚標(biāo)記的化合物3 的光活化類似物)與全長人膜結(jié)合LFA-1或BSA(0. 35mg/mL[分別為1. 4和5. 3 y M]，溶于 pH 7.2的20福 H印es、150mMNaCl、5mM CaCl2、5mM MgCl2、lmM MnCljP 正辛基葡糖苷中) 在37°C下溫育過夜。化合物5與LFA-1的摩爾比為3 1。使用1 % BSA預(yù)包被的96孔 板進行溫育。恰在交聯(lián)之前，采用以相同緩沖液平衡的96孔形式的G-25微旋柱，通過凝膠 過濾迅速除去過量的化合物5。通過暴露在高壓汞蒸汽燈下(450瓦，一級玻璃，Vineland， NJ)使LFA-1/化合物5復(fù)合物發(fā)生交聯(lián)。在照射過程中，在冰上冷卻樣品并用5mm厚的硼 硅玻璃板進行保護，以使蛋白質(zhì)的降解最小化。按照上述方式用凝膠過濾法(G-25)除去剩 余的未連接的化合物5。然后在8M鹽酸胍(GuHCl)中使交聯(lián)復(fù)合物變性并還原和烷基化。 使處理后的蛋白質(zhì)進行SDS-PAGE，之后進行考馬斯藍染色。通過放射自顯影顯示放射性標(biāo) 記的蛋白質(zhì)。為了確定化合物5的結(jié)合位點，在6M GuHCl,20mM Hepes, 10mM EDTA，pH 6. 8存在 下，用大小排除色譜法分離處理后的aL和B2亞單元，然后在75°C下用溶于含7M GuHCl的 10%醋酸中的2. 6M羥胺進行化學(xué)裂解。用SDS-PAGE分離放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì)的片段，并 且用放射自顯影法顯示，或?qū)⑵滢D(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜上，用考馬斯藍染色，之后通過N末 端蛋白質(zhì)測序進行確定。實施例4 缺少結(jié)構(gòu)域I的a L構(gòu)建體的產(chǎn)生所用的構(gòu)建體，pLFA. huID. Ap，含有從結(jié)構(gòu)域I的5'的Narl限制性位點至結(jié)構(gòu) 域I的3'的第二個PflMl限制性位點的a L基因序列，其中刪除了結(jié)構(gòu)域I的3'的第一 個PflMl限制性位點(Edwards等，1995)。為了產(chǎn)生缺少結(jié)構(gòu)域I的突變體，制備了下列 引物正向引物 CACTGTGGCGCCCTGGTTTTCAGGAAGGTAGTGGATCAGGCACAAGCAAACAGGACCTGACTT C(SEQ ID NO 3)，含有從Narl位點至結(jié)構(gòu)域I的起點的序列、編碼GSGSG的DNA序列(SEQ ID N03)和在結(jié)構(gòu)域I末端之后的23bp的a L序列，以及反向引物TCTGAGCCATGTGCTGGTA TCGAGGGGC(SEQ ID NO 5)，其在結(jié)構(gòu)域I之后的第二個PfIM1限制性位點處引發(fā)。使用這 些引物和經(jīng)Bgl II線性化、在結(jié)構(gòu)域I內(nèi)的位點處切割的pLFA.huID. Ap進行PCR。擴增 DNA片段，所述片段含有從Nar 1位點至第二個PflMl位點的序列，而且其中整個結(jié)構(gòu)域I 從C125至G311均被編碼GSGSG的DNA序列代替。純化該段DNA，用Narl和PflMl對其進 行消化并將其插入到人a L質(zhì)粒(pRKLFA a m)內(nèi)相應(yīng)的Narl和PflMl位點上。通過序列 分析確認編碼GSGSG的DNA序列的正確插入。實施例5 缺少結(jié)構(gòu)域I的LFA-1與ICAM-I或化合物2B的結(jié)合用單獨的0 2構(gòu)建體(假)或用野生型a L構(gòu)建體(wt)或缺少結(jié)構(gòu)域I (I較少 的)的a L構(gòu)建體轉(zhuǎn)染293細胞，并使其恢復(fù)3天。分離細胞并將其重新懸浮在粘附緩沖 液(0.02M HEPES，pH 7. 2,0. 14MNaCl，0. 2%葡萄糖)中。按照所述方式(Edwards 等，1998) 與結(jié)合在板上的ICAM-1-Ig進行結(jié)合。為了結(jié)合化合物2B，將處于含有0.5% BGG，0. ImM MnCl2,1 u g/ml抗0 2活化抗體MEM-48和1 y M化合物2B的粘附緩沖液中的2 X 105個細 胞加入到圓底96孔板的每個孔中。在37°C下將細胞培養(yǎng)1小時，用冷PBS洗滌并用的 甲醛/PBS固定。然后在室溫下細胞與綿羊抗熒光素-HRP的1 500稀釋液溫育1小時，用PBS洗滌，并與TMB溫育15分鐘。用1M H3P04終止反應(yīng)并在450nm下讀數(shù)。平行地，使 用一組具有已知的結(jié)合表位的抗體，通過FACS分析法檢測轉(zhuǎn)染子中表面表達的aL/0 2復(fù) 合物的結(jié)構(gòu)完整性和是否存在結(jié)構(gòu)域I。實施例6 鏈脲霉素誘導(dǎo)的大鼠糖尿病性視網(wǎng)膜病模型在第一天對15只成年實驗室大鼠(Sprague-Dawley)經(jīng)腹膜內(nèi)注射65mg/kg的鏈 脲霉素(SZT)，使其血糖增高并誘發(fā)糖尿病。另外的5只大鼠使用類似體積的鹽水進行處 理，來建立非糖尿病對照組。之后的總計6天內(nèi)，8只糖尿病大鼠的每只眼內(nèi)每天接受溶于 適當(dāng)?shù)倪\載體的LFA-1拮抗劑的滴注。根據(jù)相同的給藥日程，7只糖尿病動物接受相同體積 的僅有運載體的類似滴注。非糖尿病對照組的動物接受僅有運載體的滴注，并維持血糖正
堂
巾o在第14天，使用熒光素血管造影術(shù)來檢查所有動物的眼睛。然后殺死所有 三組動物，通過手術(shù)取出它們的眼睛，并從中分離出視網(wǎng)膜組織。使用顯微照相術(shù) (micropictograph)檢查視網(wǎng)膜組織。通過顯微照相術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化形態(tài)分析來量化糖尿病對 照的角膜組織中發(fā)生微血管系統(tǒng)異常的程度、糖尿病治療組中施用LFA-1拮抗劑對它們的 抑制以及與血糖正常對照組的對比。實施例7 人T細胞粘附測定使用人T淋巴細胞系HuT 78 (ATCC TIB-161)進行T-細胞粘附測定。在PBS中將 山羊抗-HuIgG(Fc)稀釋至211^/1111，并在371下以50111/孔包被96孔板1小時。用PBS 洗板，并在室溫下用溶于PBS的1 % BSA封閉1小時。在PBS中將結(jié)構(gòu)域5的ICAM-Ig稀釋 至lOOng/ml，并在4°C下以50 yl/孔的量將其加入到板中過夜。HuT 78細胞以100g進行 離心，并在37°C下于5% C02培養(yǎng)箱中用5mM EDTA處理細胞沉淀5分鐘。在0. 14M NaCl, 0.02M H印es，0. 2%葡萄糖和0. ImM MnCl2 (測定緩沖液)中洗滌細胞并離心。將細胞重新 懸浮在測定緩沖液中，達到3.0X106個細胞/ml。在測定緩沖液中將抑制劑稀釋至2X終 濃度，并在室溫下與HuT78細胞預(yù)溫育30分鐘。將100 u 1/孔的細胞和抑制劑加入到板 中并在室溫下溫育1小時。加入100 u 1/孔的PBS并將板密封，在100g下倒置離心5分 鐘。將未貼附的細胞從板中輕輕彈出，并用紙巾吸收過量的PBS。將60 yl/孔的對硝基苯 基N-乙?；?0 -D-氨基葡糖苷(0. 257g，加至100ml檸檬酸鹽緩沖液)加入到板中，并在 37°C下溫育1. 5小時。用90 y 1/孔的50mM甘氨酸/5mM EDTA終止酶反應(yīng)，并在讀板器上 讀取 405nM 處的讀數(shù)。使用 Langegren，U. (1984). J. Immunol. Methods 57，379-388 的對硝 基苯基正乙?；?-D-氨基葡糖苷法測定HUT 78細胞與5dICAM-Ig的粘附。其結(jié)果示于 表1中。表1.選擇的本發(fā)明的直接競爭性LFA-1拮抗劑的粘附測定結(jié)果和溶解度結(jié)果 表中的符號代表如下的EC5Q值*代表3 u M或更低，**代表300nM或更低，***代 表100nM或更低，代表50nM或更低。
表中的符號代表如下的溶解度值+代表大于10mg/mL，++代表大于50mg/mL，+++ 代表大于100mg/mL。實施例8 抗原刺激的從人外周血單核細胞(PBMC)釋放細胞因子的體外抑制在用葡萄球菌腸毒素B(SEB)刺激的人單核細胞(PBMC)中，評價本發(fā)明的直接競 爭性LFA-1拮抗劑抑制炎性細胞因子釋放的能力。在培養(yǎng)基中制備拮抗劑瑞巴派特(一種 粘膜保護劑)和環(huán)孢菌素A(CsA)的母液，并通過加入培養(yǎng)基達到理想的濃度來制備稀釋 液。不使用SEB刺激制備了陰性對照。SEB刺激和載體(0.25%DMS0/培養(yǎng)基)用作陽性 對照。使凍存在低溫貯存培養(yǎng)基中的人PBMC融化，使用含有溶于生長培養(yǎng)基中的10% FBS的RPMI培養(yǎng)基洗滌，并接種在96孔板上，含180 u 1培養(yǎng)基的每孔包含20，000個細胞。 用SEB刺激之前，在拮抗劑瑞巴派特或CsA的存在下在37°C培養(yǎng)細胞1小時。以lng/ml的 量添加SEB，在第6、16和48小時收集細胞上清液。用Luminex多重測定來確定測定上清液 中的細胞因子水平。隨著劑量的增加，拮抗劑顯示出對炎性細胞因子釋放的強烈抑制，特別是T細胞 調(diào)控細胞因子IL-2和IL-4。該結(jié)果示于表2、3和4中，且繪制在圖11中。直接競爭性 LFA-1拮抗劑抑制細胞因子釋放大于50%，該抑制模式與在CsA的對比中觀察到的類似。這 種相似性的例外是，并未表明IL-3、IL-6和IL-12p40對T細胞介導(dǎo)的炎癥是重要的。表2. IL-2、IFN a、MIP—1 a 和 TNF- a 抑制的 EC50 濃度 表 3. IL-4、IL-10、IP-10、GM-CSF 和 MCP-1 抑制的 EC5(I 濃度 表 4. IL-1 a、IL—1 3、IL-3、IL-5、IL-6, IL_12p40 和 IL—13 抑制的 EC50 濃度
實施例9 :LFA-1拮抗劑的制劑本發(fā)明的直接競爭性LFA-1拮抗劑被配制在作為凝膠、洗液、油膏和溶液施用的 幾種組合物中，通過不同的途經(jīng)進行施用，包括但不限于局部、滴注、氣溶膠、透皮貼劑、經(jīng) 插入物或口服施用。 表5. LFA-1拮抗劑的凝膠制劑1和2 表6. LFA-1拮抗劑的洗液制劑3和4
表7. LFA-1拮抗劑的油膏制劑5和6 表8. LFA-1拮抗劑的溶液制劑7、8和9 表9.LFA-1拮抗劑的溶液制劑10、11、12、13和14 表10. LFA-1拮抗劑的溶液制劑15 實施例10.局部應(yīng)用后本發(fā)明的LFA-1直接競爭性拮抗劑的體外透皮吸收使用根據(jù)Skelly 等人，Pharmaceutical Research 19874(3) 265-276, "FDA and MPS Report of the Workshop on Principles and Practices ofln-Vitro Percutaneous Penetration Studies :Relevance to Bioavailabilityand Bioequivalence"i3j(|iiStJ7j 使用體外透皮吸收試驗方法來評價局部應(yīng)用以后的體內(nèi)生物利用率。將制劑1-9以5mg/cm2的單一臨床相關(guān)劑量(相當(dāng)于30-35 y g的劑量)應(yīng)用 到用植皮刀從單個供體身上切下的人體皮膚組織上。組織的厚度為0. 023-0. 039英寸 (0. 584-0. 991mm)，厚度的平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)差為 0. 030+/-0. 004 英寸(0. 773+/-0. 111mm)，變 異系數(shù)為14.4%。將組織樣品固定在Bronaugh流通擴散池中。用再循環(huán)水浴將細胞維持 在32°C的恒定溫度下。該池具有0.64cm2的標(biāo)稱擴散面積。使用含有0. 1 %疊氮鈉和4% 牛血清白蛋白的PH 7. 4的PBS作為固定的組織下的受體相。在組織之下，以標(biāo)稱l.Oml/hr 的流速持續(xù)泵送新鮮的受體相，并每隔6小時進行收集。收集受體相用于分析。將組織樣品接觸制劑1-9持續(xù)24小時。通過用CuDermD-Squame剝離片進行膠帶 剝離(tape-stripping)，除去該時間點在角質(zhì)層上殘留的過量制劑。然后棄取膠帶條。采 用鈍性分離來分離表皮和真皮。分析表皮、真皮和受體相的LFA-1拮抗劑的含量。結(jié)果示 于表11中。除了制劑9 (其含有99% DMS0)以外，所有制劑的LFA-1拮抗劑的組織透過水平 (受體相)均低于定量限度，0.54ng/ml(相當(dāng)于所應(yīng)用劑量的0.013% )。相反，制劑9提 供了所應(yīng)用劑量的1. 4%，在24小時的接觸時間內(nèi)透過了皮膚組織的所有層。
在24小時的接觸時間內(nèi)，LFA-1拮抗劑在表皮的沉積非常多，這與所應(yīng)用的劑量 中的很大比例留在表皮上層中相一致。表10中報告的水平來自小體積的樣品，不能夠再次 測定，因此被認為是低估了表皮中存在的藥物的量。真皮的分析數(shù)據(jù)處于為LFA-1拮抗劑建立的線性范圍內(nèi)，并且是定量的。接觸24 小時后LFA-1拮抗劑的真皮沉積為所應(yīng)用劑量的0.66% (制劑6，0.258i!g/Cm2)至4.4% (制劑7，34. 3 y g/cm2)。對于真皮中的制劑1_9而言，真皮中LFA-1拮抗劑的濃度經(jīng)計算為 6. 7 y M (制劑6)或更大(即制劑7提供了 54. 1 y M的真皮濃度)。這些濃度均遠遠高于體 外EC5(i濃度，該濃度是實施例7和相應(yīng)的表1所示的LFA-1拮抗劑類型抑制炎性細胞因子 釋放的半數(shù)最大效應(yīng)的濃度。因此這些結(jié)果可預(yù)測已摻入1%W/W LFA-1拮抗劑的多種制 劑提供治療有效水平的細胞因子釋放體內(nèi)抑制的能力。表11.局部接觸24小時后LFA-1拮抗劑的累積受體相和組織水平 1.標(biāo)準(zhǔn)差。2.變異系數(shù)百分比。實施例11 :T細胞增殖測定該測定是由激活作用引起的淋巴細胞增殖的體外模型，該激活作用由在與抗 原遞呈細胞相互作用后T細胞受體與LFA-1嚙合而誘發(fā)的(Springer，Nature 346 425(1990))。在4 °C下用溶于無菌PBS中的50 ill的2 i g/ml山羊抗人Fc(目錄H10700)和 50iU的0. 07 u g/ml CD3單克隆抗體(Immunotech 0178)預(yù)包被微量滴定板(Nunc 96孔 ELISA認證)過夜。第二天吸出包被溶液。然后用PBS洗板2次，加入lOOiil的17ng/ ml 5d-ICAM-l-Ig并在37°C下保持4小時。在加入⑶4+T細胞之前用PBS洗板2次。從 取自健康供體的肝素化全血中分離外周血淋巴細胞。一種可選的方法是通過白細胞分離 法(leukophoresis)從健康供體獲得全血。用鹽水將血液1 1稀釋、分層并在LSM上以 2500Xg離心分離30分鐘(每100ml中使用6. 2g Ficoll和9. 4g泛影葡胺鈉)(Organon Technica, NJ)。使用骨髓樣細胞消耗試劑法消耗單核細胞(Myeloclear，Labs, Hornby, Ontario，Canada)。將PBL重新懸浮在90 %的熱滅活的胎牛血清和10 %的DMS0中，等 分試樣并貯存在液氮中。融化后，將細胞重新懸浮在RPMI 1640培養(yǎng)基中(Gibco，Grand Island, NY)，所述培養(yǎng)基中補充了 10%的熱滅活的胎牛血清(Intergen，Purchase, NY)、 ImM丙酮酸鈉、3mM L-谷氨酰胺、ImM非必需氨基酸、500 u g/ml青霉素、50 u g/ml鏈霉素、 50 u g/ml 慶大霉素(Gibco)。通過負選擇法對⑶4+T細胞進行純化(人⑶4細胞回收柱試劑盒#CL1 10_5 Accurate)。微量滴定板每孔100，000個純化的CD4+T細胞(90%純度)，在37°C和5% C02 下，在 100ml 培養(yǎng)基(RPMI1640 (Gibco)，補充了 10 % 的熱滅活的 FBS (Intergen)、0. ImM 非 必需氨基酸、InM丙酮酸鈉、100單位/ml青霉素、100 y g/ml鏈霉素、50 y g/ml慶大霉素、 10mM Hepes和2mM谷氨酰胺)中培養(yǎng)72小時。在培養(yǎng)開始時將抑制劑加入到板中。在收 集細胞之前的最后6小時內(nèi)加入1 y Ci/孔的氚化胸腺嘧啶，用以測定這些培養(yǎng)物的增殖響
119應(yīng)。通過液體閃爍計數(shù)來測定放射性標(biāo)記的摻入(Packard 96孔收集器和計數(shù)器)。結(jié)果 用計數(shù)/分鐘(cpm)表示。實施例12 體外混合淋巴細胞培養(yǎng)模型混合淋巴細胞培養(yǎng)模型為體外移植模型(A.J.Cunningham，“ Understanding Immunology,Transplantation Immunology" 157-159 頁(1978))，用于檢測各種 LFA-1 拮 抗劑在人類混合淋巴細胞反應(yīng)的增殖和效應(yīng)組中的作用。細胞的分離從取自健康供體的肝素化全血中分離出外周血(PBMC)單核細胞。 用鹽水將血液1 1稀釋、分層并在LSM上以2500Xg離心30分鐘(每100ml使用6. 2g Ficoll和9. 4g泛影葡胺鈉)(OrganonTechnica，NJ)。一種可選的方法是通過白細胞分離 法從健康供體獲得全血。如上所述分離PBMC，將其重新懸浮在90%的熱滅活的胎牛血清和 10%的DMS0中，等分試樣并貯存在液氮中。融化后，將細胞重新懸浮在RPMI 1640培養(yǎng)基 中(Gibco，Grand Island，NY)，所述培養(yǎng)基中補充了 10%的熱滅活的胎牛血清(Intergen， Purchase, NY)、lmM的丙酮酸鈉、3mM的L-谷氨酰胺、ImM的非必需氨基酸、500 u g/ml青霉 素、50 ii g/ml 鏈霉素、50 u g/ml 慶大霉素(Gibco)?；旌狭馨图毎磻?yīng)(MLR)在96孔平底微量滴定板內(nèi)建立單向人混合淋巴細胞培 養(yǎng)。在200 ill的完全培養(yǎng)基中，1.5 X105個響應(yīng)PBMC與等量的輻射(3000拉德，3分52 秒)的同種異體刺激PBMS共培養(yǎng)。在培養(yǎng)開始時加入LFA-1拮抗劑。在37°C下，在5%的 C02中將培養(yǎng)物培養(yǎng)6天，然后用1 u Ci/孔的3H-胸苷(6. 7Ci/mmol,NEN,Boston,MA)脈沖 6小時。在Packard細胞收集器(Packard，Canberra，加拿大)中收集培養(yǎng)物。用液體閃爍 計數(shù)法測定[3H]TdR的摻入。結(jié)果表示為每分鐘的計數(shù)(cpm)。實施例13 使用Jurkat細胞的T細胞粘附測定本研究的目的在于評價在體外接觸后LFA-1拮抗劑對Jurkat細胞粘附ICAM-1的 抗粘附性質(zhì)。在DMS0/水(1 1)中制備LFA-1拮抗劑的母液和陽性對照，并用測定培養(yǎng)基稀 釋，并通過添加測定培養(yǎng)基以達到理想的濃度來制備后續(xù)的稀釋液。報告的LFA-1拮抗劑 被用作陽性對照。在室溫下用溶于生長培養(yǎng)基的8iiM BCECF_AM(2’，7’ -雙_(2_羧基乙 基)-5-(和-6)-羧基熒光素)溶液標(biāo)記Jurkat細胞15分鐘。在37°C下，標(biāo)記的細胞在96 孔板的各孔中的70 y L測定培養(yǎng)基中，以每孔500，000個細胞的量，與70 y L溶于測定培養(yǎng) 基的LFA-1拮抗劑或陽性對照溫育30分鐘。在LFA-1拮抗劑或陽性對照的存在下，在37°C 下，使100 y L等份的這種熒光標(biāo)記的Jurkat細胞懸浮液靜止于96孔板中的孔中1小時， 該96孔板包被有表達為Fc嵌合體的重組人ICAM-1。經(jīng)洗滌和在100g下離心1分鐘來除 去未粘附的細胞。在熒光板讀數(shù)器上確定粘附細胞的粘附熒光單位。實施例14.本發(fā)明的直接競爭性LFA-1拮抗劑經(jīng)局部應(yīng)用向血流的經(jīng)皮遞送進行本研究是為了確定通過在皮膚上局部應(yīng)用，本發(fā)明的直接競爭性LFA-1拮抗 劑向血流的遞送。在雄性Sprague大鼠中評價了凝膠(如制劑1中配制的，表5)、洗液(如 制劑3中配制的，表6)、油膏(如制劑5中配制的，表6)和1%DMS0溶液(對照)制劑，如 表12所示。劑量施用.用于該研究的動物未禁食。所有的單劑量和多劑量均固定地給予
120(200 u L制劑/動物/劑量)。記錄了載藥和空劑量裝置的重量，以確定施用的制劑的實際重量。皮膚.對于第1-4組(第1組(凝膠)；第2組(油膏)；第3組(洗液)；第4組 (DMS0))的經(jīng)皮施用，每只動物均在第一天接受一次背部皮膚的局部應(yīng)用。對于第6-9組 (第6組(凝膠)；第7組(油膏)；第8組(洗液)；第9組(DMS0))的經(jīng)皮施用，每只動 物接受每天3次背部皮膚的局部應(yīng)用(大致間隔4小時)，連續(xù)7天。皮內(nèi).對于第5組(DMS0，皮內(nèi))中的每只動物，在第一天施用200-iiL的單一皮內(nèi) 劑量，該劑量是在剃毛的肩胛下區(qū)域使用注射器和針頭連續(xù)注射兩個100-yL而完成的。樣品采集血液(所有組).對于基于研究組的可行的最終劑量施用，在給藥前和 給藥后0. 25、0. 5、1、2和4小時從每只動物采血。樣品采集應(yīng)用部位(僅皮膚組).在為了采集最終血液樣品而殺死動物后，切下 接觸測試物質(zhì)制劑的皮膚部分。通過膠帶剝離來去除皮膚表面上剩余的角質(zhì)層和任何未吸 收的測試物質(zhì)制劑。該條帶合并至每個動物的一個樣品小瓶中，將剩余的皮膚部分置于第 二個樣品小瓶中。記錄樣品重量。表12.向雄性Sprague Dawley大鼠施用的劑量給出了不同制劑中本發(fā)明的直接 競爭性LFA-1拮抗劑的皮膚或皮內(nèi)劑量(第5-9組) a施用的制劑重量。結(jié)果表13的數(shù)據(jù)表明測試制劑中有可測到的藥物透過皮膚，并且在從真皮和表 皮中的毛細血管吸收后可檢測到其在血漿中循環(huán)。表13.7天(皮膚)或1天(皮內(nèi))后，經(jīng)各種制劑遞送，血液中的直接競爭性 LFA-1拮抗劑的濃度 < 0. 500 =低于定量限度(BLQ),)
< 2. 00 =低于定量限度(BLQ)，由于4. 00倍的稀釋
NR=低內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)。樣品體積不足以再分析
實施例15.大鼠眼部藥物動力學(xué)
使用大鼠模型來檢測直接競爭性LFA-1拮;抗劑在眼中組織、特別是視網(wǎng)膜中的分布。(參見S.I\ Ayalasomayajula, ancI U. B. Kompella, European Journal of
122Pharmacology, (2003)，，Celecoxib, a selectivecyclooxgenase-2 inhibitor, inhibits retinal vascular endothelial growthfactor expression and vascular leakage in a streptozotocin-induceddiabetic rat model”，458 :283_289。)向大鼠眼睛施用一滴本 發(fā)明的14C放射性標(biāo)記的LFA-1拮抗劑的1 %溶液制劑(制劑12，表9，或制劑5，表10)，然 后隨時間觀察其放射性。t = 30分鐘和t = 4小時的數(shù)據(jù)繪制在圖12中。在圖12中，每 個解剖區(qū)域內(nèi)檢測到的放射性標(biāo)記的拮抗劑的濃度由對應(yīng)于標(biāo)記的解剖區(qū)域的方框的增 加的灰度來表示。該數(shù)據(jù)的數(shù)值示于表14中，以納克當(dāng)量放射性標(biāo)記的LFA-1拮抗劑/克 組織表示。表14. LFA-1拮抗劑濃度，ng當(dāng)量[14C]-LFA-1拮抗劑/克組織. 結(jié)果顯示在視網(wǎng)膜中達到了 LFA-1拮抗劑的治療水平，持續(xù)到施用之后4小時，此 時在視網(wǎng)膜中觀察到50ng/g濃度的藥物。該濃度遠遠高于抑制白細胞粘附和糖尿病黃斑 水腫/糖尿病性視網(wǎng)膜病中起作用所需的預(yù)期的閾值lOnM，該閾值對應(yīng)于在HuT78細胞粘 附測定中具有約2-6nM的IC5(I的拮抗劑。實施例16 1期人體研究健康受試者加入該研究。進行了單次和多次施用LFA-1拮抗劑的隨機、受控、逐步 提高劑量的試驗。用制成無菌、中性、等滲、緩沖水溶液的6-8個LFA-1拮抗劑劑量水平分 別對每組7名受試者(5名治療，2名對照)進行治療。受試者在第一天接受一次滴注。在 隨后的一周內(nèi)獲得樣品進行藥物代謝動力學(xué)和藥效學(xué)評價。從第8天開始，患者每天接受 相同劑量的LFA-1拮抗劑，總共持續(xù)14天。評價了 PK/PD、安全性試驗室研究、眼科研究、角 膜染色和熒光素血管造影術(shù)。實施例17 :11期人體研究兩組患有糖尿病性視網(wǎng)膜病的成年受試者加入研究，這兩組被分為根據(jù)主要納入/排除標(biāo)準(zhǔn)定義的患糖尿病黃斑水腫組和未患糖尿病黃斑水腫組。對LFA-1拮抗劑進行隨 機、受控的劑量測定試驗。三組受試者接受單獨的運載體或者兩個LFA-1拮抗劑劑量水平 之一的滴注，所述拮抗劑被制成中性、緩沖、等滲的水溶液，每日給藥，持續(xù)12周。在三個月 的隨訪期內(nèi)，通過熒光素血管造影術(shù)、眼底照相術(shù)和全面視敏度檢查觀察病人的安全性和 改善的證據(jù)。 雖然本文中描述和顯示了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但是對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而 言很明顯這種實施方案只是作為實例提供的。在不偏離本發(fā)明的情況下，本領(lǐng)域普通技術(shù) 人員可以進行各種變型、改變和替換。應(yīng)該理解，在本發(fā)明的實施中可以采用本文中描述的 本發(fā)明實施方案的各種替換形式。下列權(quán)利要求旨在定義本發(fā)明的范圍，因此包括這些權(quán) 利要求的范圍內(nèi)的方法和結(jié)構(gòu)及其等同方案。
權(quán)利要求
一種治療患糖尿病性視網(wǎng)膜病的受試者的方法，其包括向需要的所述受試者施用治療有效量的能夠抑制LFA-1和ICAM之間相互作用的治療劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中糖尿病性視網(wǎng)膜病引起的損傷為黃斑水腫、視網(wǎng) 膜新生血管形成、視網(wǎng)膜上的纖維血管生長、失明、基底膜增厚、視網(wǎng)膜水腫或視網(wǎng)膜缺血。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述ICAM為ICAM-1、ICAM-2或ICAM-3。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述ICAM為ICAM-1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述治療劑為LFA-1拮抗劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑結(jié)合與ICAM-1結(jié)合位點重疊的 LFA-1 a L亞單元中的高親和力結(jié)合位點。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑直接與LFA-1a L亞單元上的 ICAM-1的結(jié)合相競爭。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為LFA-laL亞單元上的ICAM-1 的結(jié)合的變構(gòu)拮抗劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為抗體。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式I的化合物或其藥學(xué)上可 接受的鹽或酯，其中 R1和R2各獨立地為氫、氨基酸側(cè)鏈、-(CH2)m0H、-(CH2)m芳基、-(CH2)m雜芳基-其中m 為0-6、-ch(r1a) (0r1b)、-ch(r1a) (nhr1b)、u-t-q或任選地被u-t-q取代的脂肪族、脂環(huán)族、雜 脂肪族或雜脂環(huán)族部分；其中 U 為不存在、-0-、-s(o)0_2-、-S02N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1a)C( = 0)-、-N(R1A)C(= o)-o-、-n(r1a)c( = o)-n(r1b)-、-n(r1a)-so2-、-c( = o)-、-c( = o)-o-、-o-c( = o)-、芳基、 雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、-C( = o)-N(R1A)-、-oc( = o)N(R1A)-、-c( = N-R1E)-、-C(= n-r1e)-o-、-c( = n-r1e)-n(r1a)-、-0-c( = n-r1e)-n(1a)-、-n(r1a)c( = n-r1e)-、-n(r1a)c(= n-r1e) -o-、-N (r1a) c ( = n-r1e) -n (r1b) -、-p ( = 0) (0r1a) -o-或-p ( = 0) (r1a) -o-； T為不存在、脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；且 q 為氫、鹵素、氰基、異氰酸基、-0r1b、-sr1b、-n(r1b)2、-nhc( = o)or1b、-nhc( = 0) n(r1b)2、-nhc( = o)r1b、-nhso2r1b、nhso2n(r1b)2、-nhso2nhc( = o)or1b、-nhc( = 0)nhs02r1b、-c( = 0) nhc ( = 0)0r1b、c( = 0) nhc ( = 0)r1b、_c( = 0) nhc ( = 0)n(r1b)2、_c(= 0)nhs02r1b、-c( = 0)nhs02n(r1b)2、c( = s)n(r1b)2、-so2r1b、-so2or1b、-so2n(r1b)2、-so2-nhc( = 0)0r1b、-0c( = 0)-n(r1b)2、-0c( = 0)r1b、_0c( = 0) nhc ( = 0)r1b、_0c( = 0) nhs02r1b、-0s02r1b，或脂肪族、雜脂肪族、芳基或雜芳基部分，或其中r1和r2 —起為脂環(huán)族或 雜環(huán)部分，或一起為 其中每次出現(xiàn)的R1A和R1b獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳基、雜芳基、 烷基芳基或烷基雜芳基部分、-C ( = 0) R1G、或-C ( = 0) NR1CR1D ；其中每次出現(xiàn)的R1G和R1D獨立 地為氫、羥基或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；R1E為氫、脂 肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-CN、-0Rie、-NR1C R1D 或-S02R1C ；R3 為 _c( = o)or3A、-c( = o)h、-ch2or3A、-ch2oc( = o)-烷基、-c( = o)nh(r3A)、-ch2x0 ； 其中每次出現(xiàn)的R3A獨立地為氫、保護基、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳 基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基、雜烷基雜芳基部分或藥學(xué)上可接受的鹽或酯，或r3A 與R1和R2 —起形成雜環(huán)部分；其中X°為選自F、Br或I的鹵素；每次出現(xiàn)的R4獨立地為氫、鹵素、-CN、-N02、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂 環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為GR、其中G為-0-、-S-、 nrG2-、-co-、-so-、-so2-、c( = o)o-、-c( = o)nrG2-、c( = o)-、-nrG2c( = o)-或-so2nrG2-， 且鏟1和妒2獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷 基雜芳基部分；n為0-4的整數(shù)；AR1為單環(huán)或多環(huán)芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、脂環(huán)族或雜環(huán)部分； A、B、D和E當(dāng)化合價允許時經(jīng)單鍵或雙鍵連接；其中每次出現(xiàn)的A、B、D和E獨立地為 C = 0、0^1^、NR\ CR\ N、0、S、_S( = 0)或S02 ；其中每次出現(xiàn)的圮和R"獨立地為氫、鹵 素、-CN、_N02、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基 部分，或為-GRei 其中 G 為-0-、-S-、-NRe2、-CO-、-SO-、_C ( = 0) 0-、_C ( = 0) NRe2-、-0C (= 0)-,-NRG2C ( = 0)-或-SC^Nf-，且儼和儼獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán) 族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；或任何兩個相鄰的出現(xiàn)一起代表脂環(huán)族、雜 脂環(huán)族、芳基或雜芳基部分； P為0-4的整數(shù)；且L不存在或為V-W-X-Y-Z，其中每次出現(xiàn)的V、W、X、Y和Z獨立地為不存在、C = 0、 NRL1、-0-、-c (rl1) =、= c (rl1) -、-c (rl1) (rL2)、c ( = n-orl1)、c ( = nrl1)、-N =、S (0) 0_2 ；取 代或未取代的Cm亞烯基或C2_6 alkenylidine鏈，其中最多達兩個非相鄰的亞甲基單元獨 立地任選地被-C ( = 0) -、-C02-、-C ( = 0) C ( = 0) -、-C (C = 0) NRL3-、-0C ( = 0) -、-0C (= 0) NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C ( = o) -、-nrL3c ( = o) -、nrL3co2-、nrL3c ( = o) nrl4-、-s ( = 0 )-、-S02-、-NRL3S02-、-S02NRL3、-NRL3S02NRL4、-o-、-s-或-nrL3-代替；其中每次出現(xiàn)的 rL3 和 rl4 獨立地為氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基或酰基；或脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳 基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；且每次出現(xiàn)的Ru和RL2獨立地為氫、羥基、保護的 羥基、氨基、保護的氨基、硫代、保護的硫代、商素、氰基、異氰酸基、羧基、羧基烷基、甲?；?甲酰氧基、疊氮基、硝基、脲基、硫脲基、氰硫基、烷氧基、芳氧基、巰基、磺酰氨基、芐酰氨基、 甲苯磺?；蛑咀?、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基 部分，或其中一次或多次出現(xiàn)的Ru和RL2 —起或者還與V、W、X、Y或Z中的一個一起形成脂環(huán)族或雜環(huán)部分或形成芳基或雜芳基部分。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述式I的化合物為式II的化合物 式II其中R27為 R28為或且R29為氫，藥學(xué)上可接受的鹽或酯。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述式II的化合物進一步包括式II’中的立體
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述式I的化合物為式IA、IIA或IIB的化合物 其中R17為氧，藥學(xué)上可接受的鹽或酯，且R27為
14.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-I拮抗劑包括式III的化合物 其中Cy為任選地被羥基、巰基、烷硫基、商素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒、胍、硝 基、烷基、烷氧基或?；〈姆枷阕逄辑h(huán)、芳香族雜環(huán)或非芳香族雜環(huán)；X2為-CH2-NRltl-[ 二價烴鏈]-其中所述二價烴鏈任選地被羥基、巰基、鹵素、氨基、氨基 烷基、硝基、氧代或硫代取代；K為任選地被羥基、巰基、商素、氧代、硫代、烷硫基、氨基、氨基烷基、碳環(huán)或雜環(huán)、烴、鹵 素取代的烴、氨基、脒、胍、氰基、硝基、烷氧基或?；〈碾s環(huán)；L2為_[ 二價烴鏈]-NRltl-CH2-其中所述二價烴鏈任選地被羥基、鹵素、氧代或硫代取 代，且Rltl為H或烷基；R5為H、0H、氨基、O-碳環(huán)或任選地被氨基、碳環(huán)、雜環(huán)取代的烷氧基，或為藥學(xué)上可接受的鹽或酯；R6_9獨立地為H、羥基、巰基、商素、氰基、氨基、脒、胍、硝基或烷氧基； R10為H或任選地被碳環(huán)或雜環(huán)取代的烴鏈；及其鹽、溶劑化物和水合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式IV的化合物 其中R11為下式基團 其中A為氫、羥基、氨基或鹵素，B為氨基、羧基、氫、羥基、氰基、三氟甲基、鹵素、低級烷 基或低級烷氧基； R12為下式基團 其中R13為氫、羧基或低級烷基； n為 或1 ；U2、V2和W2獨立地為氫、鹵素或低級烷基，條件是U2和V2不均為氫； X3為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺?；?； Y2為低級亞烷基，其可被一個或多個氨基、取代的氨基、低級烷基或環(huán)狀低級烷基取 代，或Y2為低級亞烯基或低級亞烷基硫基； k為 或1 ；當(dāng)k為1時，Z2為氫、低級烷硫基、-C00H、-C0NH2、氨基；當(dāng)k為0或1時，Z2為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[ [ (5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基] 吡嗪-2-基、羥基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羥基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2， 6-二氯苯基)甲氧基]苯基；當(dāng)k為0或1時，Z2為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，或為含2個或3 個環(huán)的稠環(huán)系統(tǒng)，這些環(huán)獨立地為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，任何環(huán)均 可以是未取代的或被鹵素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺?；?、硝基、氧代、羥基、芳基、芳 氧基、未取代的低級烷基、商素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、 低級烷基磺?；?、低級烷硫基、乙?；被驶?、胼基、羧基、烷氧羰基、乙酰氧基中的至少 一個取代，或另外還被氨基低級烷基取代；且 R20為氫、藥學(xué)上可接受的鹽或酯。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述式III的化合物進一步包括式III’中的立 體化學(xué)。式 III，。
17.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式V的化合物，其中式V R14為下式基團r15為氫、羧基或低級烷基； u3、v3和w3獨立地為氫、鹵素； u3、v3和w3為低級烷基，條件是u3和v3不均為氫； x4為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺?；?； y3為低級亞烯基、低級亞烷基硫基，或為低級亞烷基，其可被氨基、乙酰氨基或環(huán)狀低 級烷基取代； k2為0或1 ；當(dāng)k2為1時，Z氫、低級烷硫基、- -或氨基；當(dāng)1^2為0或1時，&為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5_氯吡啶-2-基)氨基]羰 基]吡嗪-2-基；當(dāng)k2為0或1時，Z為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，或為含2個或3 個環(huán)的稠環(huán)系統(tǒng)，這些環(huán)獨立地為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，任何環(huán)均 可以是未取代的或被鹵素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺酰基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳 氧基、未取代的低級烷基、商素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、 羧基、烷氧羰基或乙酰氧基中的至少一個取代；且 r21為氫、藥學(xué)上可接受的鹽或酯。
18.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式VI的化合物式VI 其中D4為單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)飽和、不飽和或芳香族環(huán)，各環(huán)在環(huán)中具有5、6或7個原子，其 中環(huán)中的原子為碳或選自氮、氧和硫的1至4個雜原子，其中任何碳或硫環(huán)原子任選地被氧 化，各環(huán)被0-3個R31取代；L3為選自下面的二價連接基團 -lY-L1-， L1 選自氧(-0-)、S(0)s、C( = 0)、CR32、R32、CR32het、NR30 禾口 N， L2 選自氧(-0-)、S (O) s、C ( = 0)、C ( = N-O-R33)、CR34R34 ‘、CR34、het NR30 和 N， L3 選自氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、C ( = N-O-R33)、CR35R35 ‘、CR35、het NR30 和 N, L4 不存在或選自氧(-0-)、S (0) s、C( = 0)、C( = N-O-R33)、CR36R36'、CR36、NR3tl 和 N， L5 不存在或選自氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、CR37R37 ‘、CR37、NR30 和 N，條件是 L1-L3 中僅 有一個可為het，且當(dāng)L1至L3中的一個為het時，其他的L1-L5可以不存在， 其中 R32、R32'、R34、R34'、R35、R35'、R36、R36'、R37 和 R37'各獨立地選自 R38、R3IPU-Q-V-W, 任選地，R24和R34'分別或一起與B3通過B上的取代基RP可形成飽和、不飽和或芳香 族稠環(huán)，該稠環(huán)的環(huán)中含有5、6或7個原子且任選地含有1-3個選自0、S和N的雜原子，其 中任何S或N可任選地被氧化；任選地，R35和R35分別或一起以及R36和R36'分別或一起與D3通過D3上的取代基R31 可形成飽和、不飽和或芳香族稠環(huán)，該稠環(huán)的環(huán)中含有5、6或7個原子且任選地含有1-3個 選自0、S和N的雜原子，其中任何S或N任選地可被氧化；還任選地，L1-L5中的各R32-R37、NR3°或N與L1-L5中的其他任何R32-R37、NR3°或N —起可 形成5、6或7元碳環(huán)或雜環(huán)，其可為飽和、不飽和或芳香族的，任選地含有選自N、0和S的 1-3個另外的雜原子，其中任何碳或硫環(huán)原子任選地可被氧化，各環(huán)被0-3個R31取代；并且 其中s為0-2 ；B選自以下基團 其中 為含5、6或7個原子的稠合的雜環(huán)或碳環(huán)，該環(huán)為不飽和的、部分飽和或芳香族的，雜原子選自1-3個0、S和N， Y3 選自 CH 禾口 NR3° ；η 為 0-3 G3選自氫和C1-C6烷基，任選地G與T 一起可形成任選地被-V-W取代的C3-C6環(huán)烷基； T3選自以下基團 天然存在的α-氨基酸側(cè)鏈， 禾口 U4-Q4-V4-W4 ；U4為任選地被取代的選自C1-C6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6烯基-Q，和C2-C6炔基-Q的 二價基團其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38 ； Q4不存在或選自基團-0-、-S(O) s-、-S02-N(R30)-、-N(R30)-、-N(R30)-C( = 0)-、-N (R30)-C (= 0)-N(R30)-、-N(R30) -C( = 0)-0-、-N(R30)-S02-、_C( = 0)-、_C( = 0)_0_、-het-、_C(= 0) -N (R30) -、-O-C ( = 0) -N (R30) -、-PO (OR30) 0-和-P (0) 0-； 其中s為0-2且het為單環(huán)或雙環(huán)的5、6、7、9或10元雜環(huán)，各環(huán)含有選自N、0和S的1_4個雜原子，其 中雜環(huán)可以是飽和的、部分飽和或芳香族的，且任何N或S任選地可被氧化，雜環(huán)被0-3個 R41取代；v4不存在或為任選地被取代的選自Ci-Ce烷基、c3-c8環(huán)烷基、cQ-c6烷基-c6-c1Q芳基和 C0-C6烷基-het的二價基團；其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31 ； W4選自以下基團fi、OR33、SR42、NR3CIR30、NH-C( = 0)-0_R43、NH—C ( = 0) _NRnRn 、NH_C( = 0)-R43、nh-so2-r37、nh-so2-nr30r30、nh-so2-nh-c( = o)-r43、nh-c( = o)-nh-so2-r37、C(=0)-NH-C( = 0)-0-R43、C( = 0)-NH-C( = 0)-R43、C( = 0)_NH_C( = 0)-NR30R30 '、C(= 0)-NH-S02—R37、C( = 0) -NH-SO2-NR30R30 '、C( = S)-NR30R30 '、SO2-R37、SO2-O-R37、 SO2-NR37R37 '、SO2-NH-C ( = 0) -o-R43、SO2-NH-C (= o) -NR30R30 '、SO2-NH-C ( = 0) -R43、 -c (=0) -NR30R30'、 -C( = 0) -R43、0-C( = 0) -NH-C( = 0) -R43、0_C( = 0) -NH_S02R46 和 0_S02-R37 ； R44 選自 C ( = 0) -R45、C ( = 0) -H、CH2 (OH)禾口 CH20-C ( = 0) _C「C6 烷基； R38為R38'或被1-3個R38'取代的R38"；其中 R38'選自以下基團氫、鹵素(F、CI、Br、I)、氰基、異氰酸基、羧基、羧基-Q-Cn烷基、氨基、氨基烷 基、氨基羰基、甲酰胺基、氨基甲?；被柞Ｑ趸?、甲酰基、甲酰氧基、疊氮基、硝基、咪唑 基、脲基、硫脲基、氰硫基、羥基、&-(；烷氧基、巰基、磺酰胺基、het、苯氧基、苯基、芐酰氨基、 甲苯磺酰基、嗎啉代、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯啉基、咪唑基和吲哚基； R38"選自以下基團炔基-q-c0-c6 燒基、c3-cn環(huán)烷基-Q-QrCe烷基、c3- "C10環(huán)火布基_Q_C0_C6焼基、C「C6焼基_C6_C12方基_Q_C0_C6焼基、 C6~C10 方基 _C「C6 焼基 _Q_C0_C6 焼基、C0_C6 焼基 _het_Q_C0_C6 焼基、C0_C6 焼基 _Q_het_C0_C6 焼基、het_C0_C6 焼基 _Q_C0_C6 焼基、C0~C6 焼基 _Q_C6_C12芳基，和-Q-CrQ烷基； R43選自氫和取代或未取代的Ci-Ci。烷基、c2-c1Q烯基、c2-c1Q炔基、c3-cn環(huán)烷基、c3-c1Q 環(huán)烯基、&-(；烷基-C6-C12芳基、C6-C1(1芳基-CfC-6烷基、CfQ烷基-het^et-CfC；烷基、 C6-C12 芳基和 het，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為 1-3 個 R31 ；R31 選自 R40 和 R41 ； R41選自以下基團OH、0CF3、OR43、SR42、鹵素(F、CI、Br、I)、CN、異氰酸基、N02、CF3、C。_C6 烷基-NR30R30'、 C。_C6 烷基-C( = 0) -NR30R30'、Cq-C6 烷基-C( = C^-R^CfQ 烷基、CfC8 烷氧基、C2-C8 烯基、 C2-C8炔基、C3-C6環(huán)燒基、C3-C6環(huán)烯基、C「C6燒基-苯基、苯基-C^Cg燒基、C「C6燒氧基羰 基、苯基 _C0_C6 燒氧基、C「C6 燒基-het^het-Cj-Cg 燒基、S02-het、-0_C6-C12 芳基、-S02_C6-C12 芳基、-S02-CrC6烷基和het，其中任何烷基、烯基或炔基任選地可被選自0H、鹵素(F、CI、Br、I)、硝基、氨基和氨基 羰基的1-3個基團取代，且任何芳基或het上的取代基為1-2個羥基、鹵素(F、Cl.Br, I)、CF3、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基和氨基；R42 選自 S-C1-C6 烷基、C( = 0)-C1-C6 烷基、C( = 0)-NR30R30'、C1-C6 烷基、鹵素(F、Cl、 Br、I) -C1-C6烷基、芐基和苯基；R30 選自 R43, NH-C ( = 0)-O-R43、NH-C ( = 0)-R43、NH_C( = 0)-NHR43、NH-SO2-R46、 NH-SO2-NH-C ( = 0)-R43、NH-C( = 0)-NH-SO2-R37, C( = 0)-O-R43, C( = 0)-R43、C(= 0)-NHR43, C( = 0)-NH-C ( = 0)-O-R43, C( = 0) -NH-C ( = 0)-R43、C( = 0)-NH-SO2-R46、 C ( = 0) -NH-SO2-NHR37、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-N (R43)2, SO2-NH-C ( = 0) -O-R43、SO2-NH-C (= 0) -O-R43 和 SO2-NH-C ( = 0) -R43 ；R30'選自氫、羥基和取代或未取代的C1-C11烷基、C1-C11烷氧基、C2-Cltl烯基、C2-Cltl炔 ■、C3_Cn ^^^λ C3_C10 ^ φ^Λ C1-C6 ^^ -C6-C12 方·、Cg-C10 方· -C1-C6 ^^Λ Cg-C10 基—Cq-C6 焼氧基、C「C6 焼基—hetλ het-C1-C6 焼基、C6-C12 方基、het、C「C6 焼基幾基、C「C8 烷氧羰基、C3-C8環(huán)烷基羰基、C3-C8環(huán)烷氧羰基、C6-C11芳氧基羰基、C7-C11芳基烷氧羰基、雜 芳基烷氧羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基磺?；㈦s芳基磺?；?、(^-(；烷基 磺?；虲6-Cltl芳基磺酰基，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳 基、het或雜芳基上的取代基為1-3個R31 ；R3tl和R3tl'與它們所連接的共同的氮一起可形成任選地被取代的選自嗎啉基、哌嗪基、 硫代嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、1，2，3，4-四氫-喹啉基，1， 2，3，4-四氫-異喹啉基、噻唑烷基和氮雜二環(huán)壬基的雜環(huán)，其中取代基為1-3個R38 ；R33選自氫和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基和苯甲?；?，其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基上的取代基為1-3個 R40；R40 選自 0H、鹵素(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸基、OR43、SR42、SOR43, NO2, CF3> R43、NR30R30'、 NR30C ( = 0) -O-R43、NRC ( = 0) -R43、C0-C6 烷基-SO2-R43、C0-C6 烷基-SO2-NR3ciR3ci ‘、C ( = 0) -R43、0-C(= 0)-R43X( = 0)-O-R43和C( = 0)-NR30R30'，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基 為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31 ；R46為取代或未取代的選自以下的基團C1-C8燒基、C2-C8烯基、C2-C8塊基、C3-C8環(huán)燒基、C3-C6環(huán)烯基、C0-C6燒基-苯基、苯 基-Ctl-C6 烷基、C0-C6 烷基-het 和 het-CQ-C6 烷基，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1-3個 R31 ；R45為取代或未取代的選自以下的基團輕基、C1-C11烷氧基、C3-C12環(huán)烷氧基、C8-C12芳 烷氧基、C8-C12芳環(huán)烷氧基、C6-C10芳氧基、C3-C10烷基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧羰氧基烷 氧基、C3-C10烷氧羰基烷氧基、C5-C10環(huán)烷基羰氧基烷氧基、C5-C10環(huán)烷氧基羰氧基烷氧基、 C5-C10環(huán)烷氧羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳 基羰氧基烷氧基、C5-Cltl烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R30) (R3tl)N (C1-Cltl烷氧基)-、 其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為 1-3 個 R31及其藥學(xué)上可接受的鹽。
19.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-I拮抗劑為以下化合物之一 Wn 丫 nO“11ο"ζ 0 及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。
20.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-I拮抗劑為以下化合物之一 或其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。
21.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式VII的化合物 及其藥學(xué)上可接受的鹽和前藥其中&、R2、R3、R4和R5各獨立地為氫、烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、烷?；⑼檠趸?、酰 氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、環(huán)烷基、醚、酯、鹵素、雜環(huán)基、羥基、酮、硝基、氧代、全 氟烷基、磺酰基、磺酸酯、硫代或其他含羰基的基團，R6為未取代的烷基、未取代的飽和的環(huán) 烷基、未取代的羧基烷基或未取代的雜環(huán)基烷基，其中未取代的飽和環(huán)烷基、未取代的羧基 烷基和未取代的雜環(huán)基烷基通過烷基與式VII的NH鍵合，其中未取代的羧基烷基包括分支的烷基鏈，條件是禮和R3中的至少一個選自A.選自如下定義的順-肉桂酰胺或反_肉桂酰胺的肉桂酰胺 “順-肉桂酰胺” “反-肉桂酰胺”其中r8和R9各獨立地為氫、醛、烷基、烯基、炔基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、羧基、氰 基、環(huán)烷基、酯、醚、鹵素、羥基、酮、硝基、磺酸酯、磺?；虼蚱渌驶幕鶊F； B.式Vll-a的取代基 其中 D、B、Y 和 Z 各獨立地為 n為0-3的整數(shù)；且R31、R32、R33和R34各獨立地為氫、烷基、羧基、羥基烷基、單烷基氨基 羰基烷基、二烷基氨基羰基烷基或羧基烷基；C.選自如下定義的順-環(huán)丙酸、反-環(huán)丙酸、順-環(huán)丙酰胺和反_環(huán)丙酰胺的環(huán)丙基衍生物 “順_環(huán)丙酰胺” “反_環(huán)丙酰胺”其中r35和R36各獨立地為氫、烷基、羧基、羥基烷基或羧基烷基，且 其中r37和R38各獨立地為氫、烷基、羧基烷基、單烷基氨基羰基烷基或二烷基氨基羰基 燒基； 式 VII-b其中R8和R9如上定義；E.式VII-C的肉桂酸 其中R8和R9如上定義；其中Rltl和R11各獨立地為氫、烷酰基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、酰氨基、芳基、芳烷基、羧基、 氰基、環(huán)烷基、酯、醚、雜環(huán)基、羥基、酮、硝基、磺?；虼蚱渌驶幕鶊F，或R10和R11與N —起形成雜環(huán)基，其包含獨立地為氫、烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、烷酰 基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、環(huán)烷基、醚、酯、鹵素、雜環(huán)基、羥基、酮、 硝基、氧代、全氟烷基、磺酰基、磺酸酯、硫代或其他含羰基的基團的至少一個取代基，或當(dāng)R3為肉桂酰胺、式Vll-a的取代基、式VII-b的取代基或如上定義的環(huán)丙基衍生物 時，R1和R2,和/或R4和R5連接在一起形成5至7元環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基環(huán)；或當(dāng)R1選自 肉桂酰胺、式Vll-a的取代基、式VII-b的取代基和如上定義的環(huán)丙基衍生物時，R2和R3和 /或R3和R4和/或R4和R5連接在一起形成5至7元環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基環(huán)；且其中Ar為具有至少一個取代基的取代的芳基或取代的雜芳基，該取代基獨立地為氫、 烷基、烯基、烯氧基、炔基、醛、烷酰基、烷氧基、酰氨基、氨基、芳基、芳氧基、羧基、氰基、環(huán)烷 基、醚、酯、商素、雜環(huán)基、羥基、酮、硝基、氧代、全氟烷基、磺?；?、磺酸酯、硫代或其他含羰 基的基團。
22.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-I拮抗劑為式VIII的化合物 式 VIII其中m為0、1或2 ;X為H、環(huán)烷基或苯基，其為未取代的或被一個或多個低級烷基、羥 基或鹵素取代基取代；η為O或1 ;Y為苯基、呋喃基、吲哚或吡咯，其全部可被一個或多個獨 立地為低級烷基、低級烷氧基、鹵素、(3，5-二甲基苯氧基)丙氧基或苯基的取代基取代，其 中苯基可進一步被一個或多個鹵素原子、硝基、氨基或羧基取代。
23.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-I拮抗劑為式IX的化合物 式IX其中虛線是鍵或不是鍵，R為氫、任選地取代的烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、烷氧基、芳 基、雜環(huán)基、羥基、SH、SR5、氰基、商素或氨基；或虛線不是鍵，且禮通過雙鍵連接到環(huán)系統(tǒng)上并且為氧代； R2為氫，或R2為任選地取代的環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基；R3為氫、C00R6或氨基羰基，或R3為任選地取代的烷基、烯基、炔基、芳烷基、烷氧基、環(huán) 烷氧基、芳氧基或雜環(huán)氧基；R4為氫、商素、羥基、SH、任選地取代的烷基、烯基、炔基、烷氧基或烷硫基，或R4為三烷 基甲硅烷基或三烷基甲硅烷氧基、N3或氨基，或R4為雜環(huán)基，其包含至少一個作為雜原子的氮原子并通過該氮原子結(jié)合到式IX的化合 物上，或禮為氧代；且R5和R6獨立地為烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基。
24.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式X的化合物式 Ra為H、任選地被OH或Ci_4烷氧基取代的Cm烷基、C2_6烯基或芳基_(V4烷基； R2 為 0H ；-0-C0-R5 ；R4為H或0R19，其中R19為(V6烷基、羥基烷基、Ci_4烷氧基-cv6烷基、芳基烷 基或烷氧羰基-Cy烷基；R5為Ci_8烷基、C3_7環(huán)烷基、C3_7環(huán)烷基烷基、芳基或芳基-CV4烷基；或R5為-O-R6， 其中R6為通過其羰基連接到0上的a -氨基酸的殘基；或R5為-CHR7--C0R8，其中R7為H、 (V4烷基、雜Ci_4烷基、C3_7環(huán)烷基、C3_7環(huán)烷基-Ch烷基、芳基或芳基-CV4烷基，且R8為0H、 (V4烷氧基或NR9R1q ；R9和R1(1各獨立地為H或Ci_4烷基，或R9和R1(1與它們連接的氮一起形成雜芳基； R3為式X-a的內(nèi)酰胺； 其中R3tl為CV8烷基、C3_7環(huán)烷基、芳基、C3_7環(huán)烷基-Cy烷基、芳基-Cy烷基、雜芳基或 雜芳基-C^4 ；且R31為ΟΗ、(^_4烷氧基、Ch烷基、烷氧基-羰基-CV4烷基、羥基-CV5烷氧基、Ci_4烷氧 基-Ch5烷氧基、C1^4烷氧基-羰基-C^4烷基、氨基-C^4烷氧基、HOOC--Ch4烷氧基、HOOC--CV4 烷基、R9a Rioa N-C1^5烷氧基，其中R9a和Rltla獨立地為R9或Rltl。
25.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述LFA-I拮抗劑為式XI的化合物 式XI及其對映異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，其中 各 R17 獨立地為-OR18, -NR18R19, -c ( = 0) R18, -CO2R18,-C( = 0) NR18R19, -NR18C ( = 0)R19、-NR18C ( = 0) 0R19、-S (0) PR19，、-NR18SO2R19 或-SO2NR18R19 ；R18和R19獨立地為氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；q為1、2或3 ；且ρ為1或2。
26.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述治療劑經(jīng)局部、口服、眼周、眼內(nèi)、注射、鼻、 氣溶膠、插入物、植入裝置或點滴施用。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述治療劑在運載體中施用，該運載體為液滴、 液體洗液、噴霧液、凝膠、軟膏、氣溶膠、噴霧、聚合物微粒和納米顆粒、溶液、懸浮液、固體、 生物可降解基質(zhì)、粉末、晶體、泡沫或脂質(zhì)體。
28.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述治療劑經(jīng)局部施用，并且所述局部施用包 括使用裝置將所述化合物輸注到所述眼中，該裝置選自泵-導(dǎo)管系統(tǒng)、插入物、連續(xù)或選擇 性釋放裝置、生物可吸收植入物、連續(xù)或緩釋制劑和隱形眼鏡。
29.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中治療有效量的所述治療劑經(jīng)局部或系統(tǒng)施用遞送到所述受試者的眼中。
30.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述治療劑經(jīng)注射施用，并且所述注射是經(jīng)眼 內(nèi)、玻璃體內(nèi)、眼周、皮下、結(jié)膜下、眼球后或眼房內(nèi)進行的。
31.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述施用是通過施用所述化合物的凝膠、乳膏、 粉末、泡沫、晶體、脂質(zhì)體、噴霧、聚合物微?；蚣{米顆粒或液體懸浮液形式的眼內(nèi)滴注實現(xiàn) 的。
32.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中以足以達到約1X 10_8至約1 X 10-1摩爾/升的 眼內(nèi)或視網(wǎng)膜濃度的量向所述受試者施用所述化合物。
33.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物每年至少施用一次。
34.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物每天至少施用一次。
35.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物每周至少施用一次。
36.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物每月至少施用一次。
37.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括確定所述受試者需要治療糖尿病性視 網(wǎng)膜病的步驟。
38.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括在施用所述LFA-1拮抗劑之前、一起、同 時或之后施用第二治療劑。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述第二治療劑選自抗氧化劑、抗炎劑、抗微生 物劑、類固醇、蛋白激酶C抑制劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、抗血管生成劑、補體抑制劑和 抗細胞凋亡劑。
40.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述第二治療劑為具有LFA-1上的變構(gòu)競爭性 結(jié)合位點的抗粘附治療劑。
41.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述第二治療劑為抗粘附治療抗體或抗體片段。
42.一種治療患黃斑水腫的受試者的方法，包括向需要的受試者施用治療有效量的抑 制LFA-1和ICAM之間相互作用的治療劑，從而降低和/或預(yù)防所述受試者眼睛的黃斑水 腫。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述ICAM為ICAM-1、ICAM-2或ICAM-3。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中所述ICAM為ICAM-1。
45.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述治療劑為LFA-1拮抗劑。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑能結(jié)合與ICAM-1結(jié)合位點重 疊的LFA-1 a L亞單元中的高親和力結(jié)合位點。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑直接與LFA-1a L亞單元上的 ICAM-1的結(jié)合相競爭。
48.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為抗體。
49.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括具有以下結(jié)構(gòu)的式I、 III、IV或VI的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或酯 R1和R2各獨立地為氫、氨基酸側(cè)鏈、-(CH2)ffl0H, -(CH2)m芳基、-(CH2)m雜芳基-其中m 為 0-6、-CH(R1A) (0R1b)、-CH(R1A) (NHR1b)、U-T-Q，或任選地被 U-T-Q 取代的脂肪族、脂環(huán)族、 雜脂肪族或雜脂環(huán)族部分；其中 U 為不存在、-0-、-s(o)0_2-、-S02N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1a)C( = 0)-、-N(R1A)C(= o)-o-、-n(r1a)c( = o)-n(r1b)-、-n(r1a)-so2-、-c( = o)-、-c( = o)-o-、-o-c( = o)-、芳基、 雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、-C( = o)-N(R1A)-、-oc( = o)N(R1A)-、-c( = N-R1E)-、-C(= N-R1E) -o-、-C ( = N-R1E) -N (R1a) -、-o-c ( = N-R1E) -N (R1a) -、-N (R1A) C ( = N-R1E) -、-N (R1A) C (= n-r1e) -o-、-N (R1A) c ( = n-r1e) -n (r1b) -、-p ( = 0) (0R1A) -o-或-p ( = 0) (R1A) -o-； T為不存在、脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；且 Q 為氫、鹵素、氰基、異氰酸基、-0R1B、-SR1b、-N(R1b)2、-nhc( = O)OR1b、-NHC( = 0) N(R1B)2、-NHC( = O)R1b、-nhso2R1b、NHSO2N(R1b)2、-NHSO2NHC( = O)or1b、-NHC( = 0)NHS02R1B、-C( = 0) NHC ( = 0) 0R1B、C( = 0) NHC ( = 0) R1B、-C( = 0) NHC ( = 0)N(R1B)2、-C( = 0) NHS02R1B、_C( = 0)NHS02N(R1B)2、C( = S)N(R1B)2、-S02R1B、-S020R1B、-S02N(R1B)2、-S02-NHC(= 0) 0R1B、-0C ( = 0) -N (R1B) 2、-oc ( = 0) R1B、-oc ( = 0) NHC ( = 0) R1B、-0C ( = 0) NHS02R1B、-0S02R1B或脂肪族、雜脂肪族、芳基或雜芳基部分，或其中R1和R2 為-起為脂環(huán)族或雜環(huán)部分，或一起 其中每次出現(xiàn)的R1a和R1B獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳基、雜芳 基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-C( = 0)儼或-c( = 0)NR1CR1D ；其中每次出現(xiàn)的Rie 和R"1獨立地為氫、羥基或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部 分；且R1E為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜環(huán)、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部 分、-CN、-0R1C、-NR1C R1D 或-S02R1C ；R3 為 _C( = 0)0R3A、-C( = 0)H、-CH20R3A、-CH20C( = 0)-烷基、-C( = 0)NH(R3A). -CH2X° ； 其中每次出現(xiàn)的R3A獨立地為氫、保護基、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳 基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基、雜烷基雜芳基部分，或藥學(xué)上可接受的鹽或酯，或 者R3A與R1和R2 —起形成雜環(huán)部分；其中X°為鹵素，選自F、Br或I ；每次出現(xiàn)的R4獨立地為氫、鹵素、-CN、-N02、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂 環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為Gf其中G為-0-、-S-、 nrG2-、-co-、-so-、-so2-、c( = o)o-、-c( = o)nrG2-、c( = o)-、-nrG2c( = o)-或-so2nrG2-， 且鏟1和妒2獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷 基雜芳基部分；η為0-4的整數(shù)；AR1為單環(huán)或多環(huán)芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、脂環(huán)族或雜環(huán)部分； A、B、D和E當(dāng)化合價允許時經(jīng)單鍵或雙鍵連接；其中每次出現(xiàn)的A、B、D和E獨立地為 C = O、CRiRii, NRi, CRi, N、O、S、_S( = 0)或SO2 ；其中每次出現(xiàn)的Ri和Rii獨立地為氫、鹵 素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基 部分，或為-GRei 其中 G 為-0-、-S-、-NRe2、-CO-、-SO-、-C ( = 0) 0_、-C ( = 0) NRg2-, -OC (= 0)-,-NRg2C ( = 0)-或-SO2NRe2-,且Rei和Re2獨立地為氫、脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán) 族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或任何兩個相鄰的出現(xiàn)一起代表脂環(huán)族、雜 脂環(huán)族、芳基或雜芳基部分； P為0-4的整數(shù)；且L不存在或為V-W-X-Y-Z，其中每次出現(xiàn)的V、W、X、Y和Z獨立地為不存在、C = 0、 NRli、-0-、-C (Ru) =、= C (Ru) -、-C (Ru) (Rl2)、C ( = N-ORli)、C ( = NRli)、-N =、S (0) 0_2 ；取 代或未取代的Cp6亞烯基或C2_6alkenylidine鏈，其中最多達兩個非相鄰的亞甲基單元獨 立地任選地被-C ( = 0) -、-CO2-, -C ( = 0) C ( = 0) -、-C (C = 0) NRl3-, -OC ( = 0) -、-OC (= 0) NRl3-, -NRl3NRl4-、-NRl3NRl4C ( = 0) -、-NRl3C ( = 0) -、NRl3CO2-、NRl3C ( = 0) NRl4-, -S ( = 0 )-、-SO2-、-NRl3SO2-、-SO2NRl3、-NRl3SO2NRl4、-0-、-S-或-NRl3-代替；其中每次出現(xiàn)的 Rl3 和 Rl4 獨立地為氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基或?；换蛑咀濉⒅h(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳 基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；且每次出現(xiàn)的Ru和R12獨立地為氫、羥基、保護的 羥基、氨基、保護的氨基、硫代、保護的硫代、商素、氰基、異氰酸基、羧基、羧基烷基、甲?；?、 甲酰氧基、疊氮基、硝基、脲基、硫脲基、氰硫基、烷氧基、芳氧基、巰基、磺酰氨基、芐酰氨基、 甲苯磺?；?、或脂肪族、脂環(huán)族、雜脂肪族、雜脂環(huán)族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基 部分，或其中一次或多次出現(xiàn)的Ru和儼一起或者與V、W、X、Y或Z中的一個一起形成脂環(huán) 族或雜環(huán)部分或形成芳基或雜芳基部分； 或 其中Cy為任選地被羥基、巰基、烷硫基、商素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒、胍、硝 基、烷基、烷氧基或?；〈姆枷阕逄辑h(huán)、芳香族雜環(huán)或非芳香族雜環(huán)；X2為-CH2-NRltl-[ 二價烴鏈]-其中所述二價烴鏈任選地被羥基、巰基、鹵素、氨基、氨基 烷基、硝基、氧代或硫代取代；K為任選地被羥基、巰基、商素、氧代、硫代、烷硫基、氨基、氨基烷基、碳環(huán)或雜環(huán)、烴、鹵 素取代的烴、氨基、脒、胍、氰基、硝基、烷氧基或?；〈碾s環(huán)；L2為_[ 二價烴鏈]-NRltl-CH2-其中所述二價烴鏈任選地被羥基、鹵素、氧代或硫代取 代，且Rltl為H或烷基；R5為H、0H、氨基、0-碳環(huán)或任選地被氨基、碳環(huán)、雜環(huán)取代的烷氧基，或為藥學(xué)上可接受的鹽或酯；R6_9獨立地為H、羥基、巰基、商素、氰基、氨基、脒、胍、硝基或烷氧基； R10為H或任選地被碳環(huán)或雜環(huán)取代的烴鏈；及其鹽、溶劑化物和水合物 或 式IV其中R11為下式的基團 其中A為氫、羥基、氨基或商素，且B為氨基、羧基、氫、羥基、氰基、 烷基或低級烷氧基；氟甲基、鹵素、低級R12為下式的基團 其中R13為氫、羧基或低級烷基； n為 或1 ；U2、V2和W2獨立地為氫、鹵素或低級烷基，條件是U2和V2不均為氫； X3為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺酰基； Y2為低級亞烷基，其可被氨基、取代的氨基、低級烷基或環(huán)狀低級烷基中的一個或多個 取代，或\為低級亞烯基或低級亞烷基硫基；k為 或1 ；當(dāng)k為1時，Z2為氫、低級烷硫基、-C00H、-C0NH2、氨基；當(dāng)k為0或1時，Z2為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[ [ (5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基] 吡嗪-2-基、羥基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羥基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2， 6-二氯苯基)甲氧基]苯基；當(dāng)k為0或1時，Z2為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，或為含2個或3 個環(huán)的稠環(huán)系統(tǒng)，這些環(huán)獨立地為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，任何環(huán)均 可以是未取代的，或被鹵素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺?；?、硝基、氧代、羥基、芳基、 芳氧基、未取代的低級烷基、商素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧 基、低級烷基磺?；?、低級烷硫基、乙?；?、氨基羰基、胼基、羧基、烷氧羰基、乙酰氧基中的 至少一個取代，或另外還被氨基低級烷基取代；且 R20為氫、藥學(xué)上可接受的鹽或酯； 或 式V U3、V3和W3獨立地為氫、鹵素； u3、v3和w3為低級烷基，條件是u3和v3不均為氫； x4為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺?；?； Y3為低級亞烯基、低級亞烷基硫基，或為低級亞烷基，其可被氨基、乙酰氨基或環(huán)狀低 級烷基取代； k2為0或1 ；當(dāng)k2為1時，Z氫、低級烷硫基、-C00H、-C0NH2-或氨基；當(dāng)1^2為0或1時，&為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5_氯吡啶-2-基)氨基]羰 基]吡嗪-2-基；當(dāng)k2為0或1時，Z為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，或為含2個或3 個環(huán)的稠環(huán)系統(tǒng)，這些環(huán)獨立地為含0至3個相同或不同雜原子的環(huán)烷基或芳基，任何環(huán)可為未取代的，或被鹵素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺?；⑾趸?、氧代、羥基、芳基、芳氧 基、未取代的低級烷基、商素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、羧 基、烷氧羰基或乙酰氧基中的至少一個取代；且 R21為氫、藥學(xué)上可接受的鹽或酯 或 式VI 其中D4為單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)飽和、不飽和或芳香族環(huán)，各環(huán)在環(huán)中具有5、6或7個原子，其中 環(huán)中的原子為碳或選自氮、氧和硫的1至4個雜原子，其中任何碳或硫環(huán)原子任選地可被氧 化，各環(huán)由0-3個R31取代；L3為選自下面的二價連接基團-L3-L2-L1-,-L4-L3-L2-L1-和-L5-L4-L3-L2-L1-,其中L1 選自氧(-0-)、S(0)s、C( = 0)、CR32、R32、CR32het、NR30 禾口 N， L2 選自氧(-0-)、S (O) s、C ( = 0)、C ( = N-O-R33)、CR34R34 ‘、CR34、het NR30 和 N， L3 選自氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、C ( = N-O-R33)、CR35R35 ‘、CR35、het NR30 和 N, L4 不存在或選自氧(-0-)、S (0) s、C( = 0)、C( = N-O-R33)、CR36R36'、CR36、NR3tl 和 N， L5 不存在或選自氧(-0-)、S (0) s、C ( = 0)、CR37R37 ‘、CR37、NR30 和 N，條件是 L1 至 L3 中 僅有一個可為het，且當(dāng)L1-L3中的一個為het時，其他的L1-L5可以不存在， 其中R32、R32'、R34、R34'、R35、R35'、R36、R36'、R37 和 R37'各獨立地選自 R38、R3i^PU-Q-V-W, 任選地，R24和R34'分別或一起與B3通過B上的取代基RP可形成飽和、不飽和或芳香 族稠環(huán)，該稠環(huán)的環(huán)中含有5、6或7個原子且任選地含有選自0、S和N的1-3個雜原子，其 中任何S或N任選地可被氧化；任選地，R35和R35分別或一起以及R36和R36'分別或一起與D3通過D3上的取代基R31 可形成飽和、不飽和或芳香族稠環(huán)，該稠環(huán)的環(huán)中含有5、6或7個原子且任選地含有選自0、 S和N的1-3個雜原子，其中任何S或N任選地可被氧化；另外任選地，L1-L5中的各R32-R37、NR3°或N與L1-L5中的其他任何R32-R37、NR3°或N —起 可形成飽和、不飽和或芳香族的5、6或7元碳環(huán)或雜環(huán)，其任選地含有選自N、0和S的1-3 個另外的雜原子，其中任何碳或硫環(huán)原子任選地可被氧化，各環(huán)由0-3個R31取代；且其中s 為0-2 ;B選自 其中 為含5、6或7個原子的稠合的雜環(huán)或碳環(huán)，該環(huán)為不飽和的、部分飽和或芳香族的，雜原子選自1-3個0、S和N， Y3 選自 CH 禾口 NR3° ；n 為 0-3 G3選自氫和Q-C；烷基，任選地G與T 一起可形成任選地被-V-W取代的C3-C6環(huán)烷基； 丁3選自基團天然存在的a-氨基酸側(cè)鏈， 禾口 U4-Q4-V4-W4 ；U4為任選地取代的選自Ci-Ce烷基、c0-c6烷基-Q、c2-c6烯基-Q和c2-c6炔基-Q的二 價基團；其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38 ； Q4不存在或選自-0-、-s(0)s-、-S02-N(R30)-、-N(R30)-、-N(R30)-C( = 0)-、-N (R30)-C (= 0)-N(R30)-、-N(R30) -C( = 0)-0-、-N(R30)-S02-、_C( = 0)-、_C( = 0)_0_、_het_、_C(= 0) -N (R30) -、-0-C ( = 0) -N (R30) -、-P0 (OR30) 0-和 _P (0) 0-； 其中s為0-2且het為單環(huán)或雙環(huán)的5、6、7、9或10元雜環(huán)，各環(huán)含有選自N、0和S的1_4個雜原子，其 中雜環(huán)可以是飽和的、部分飽和或芳香族的，且任何N或S任選地可被氧化，雜環(huán)被0-3個 R41取代；v4不存在或為任選地取代的選自Q-C；烷基、c3-c8環(huán)烷基、c0-c6烷基-c6-c1(1芳基和 C0-C6烷基-het的二價基團；其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31 ； W4選自以下基團fi、OR33、SR42、NR3CIR30、NH-C( = 0)-0_R43、NH—C ( = 0) _NRnRn 、NH_C( = 0)-R43、nh-so2-r37、nh-so2-nr30r30、nh-so2-nh-c( = o)-r43、nh-c( = o)-nh-so2-r37、C(=0)-NH-C( = 0)-0-R43、C( = 0)-NH-C( = 0)-R43、C( = 0)_NH_C( = 0)-NR30R30 '、C(= 0)-NH-S02—R37、C( = 0) -NH-SO2-NR30R30 '、C( = S)-NR30R30 '、SO2-R37、so2-O-R37、 SO2-NR37R37 '、SO2-NH-C ( = 0) -o-R43、SO2-NH-C (= o) -NR30R30 '、SO2-NH-C ( = 0) -R43、 -c (=0) -NR30R30'、 -C( = 0) -R43、0-C( = 0) -NH-C( = 0) -R43、0_C( = 0) -NH_S02R46 和 0_S02-R37 ； R44 選自 C ( = 0) -R45、C ( = 0) -H、CH2 (OH)禾口 CH20-C ( = 0) _C「C6 烷基； R38為R38'或被1-3個R38'取代的R38"；其中 R38'選自以下基團氫、鹵素(F、CI、Br、I)、氰基、異氰酸基、羧基、羧基-Q-Cn烷基、氨基、氨基烷 基、氨基羰基、甲酰氨基、氨基甲酰基、氨基甲酰氧基、甲酰基、甲酰氧基、疊氮基、硝基、咪唑基、脲基、硫脲基、氰硫基、羥基、&_(；烷氧基、巰基、磺酰氨基、het、苯氧基、苯基、芐酰氨基、 甲苯磺酰基、嗎啉代、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯啉基、咪唑基和吲哚基； r38"選自以下基團炔基-q-c0-c6 燒基、c3-cn環(huán)烷基-Q-QrCe烷基、c3- "C10環(huán)火布基_Q_C0_C6焼基、C「C6焼基_C6_C12方基_Q_C0_C6焼基、 C6~C10 方基 _C「C6 焼基 _Q_C0_C6 焼基、C0_C6 焼基 _het_Q_C0_C6 焼基、C0_C6 焼基 _Q_het_C0_C6 焼基、het_C0_C6 焼基 _Q_C0_C6 焼基、C0~C6 焼基 _Q_C6_C12芳基和-Q-CrQ烷基； R43選自氫和取代或未取代的Q-Ci。烷基、C2-C1Q烯基、C2-C1Q炔基、C3-Cn環(huán)烷基、C3-C1Q 環(huán)烯基、CfQ烷基-c6-c12芳基、C6-"C10 方基 _C「C6 焼基、C「C6 焼基 _het、het_C「C6 焼基、C6-C12 芳基和 het，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38且任何芳基或het上的取代基為 1-3 個 R31 ；R31 選自 R40 和 R41 ； r41選自以下基團OH、0CF3、OR43、SR42、鹵素(F、CI、Br、I)、CN、異氰酸基、N02、CF3、C。_C6 烷基 _NR30R30'、 c0-c6 烷基-c( = 0) -NR30R30'、c0-c6 烷基-c( = 0) -R^.Q-Cg 燒基、CfC8 烷氧基、c2-c8 烯基、C2-C8炔基、C3-C6環(huán)燒基、C3-C6環(huán)烯基、C「C6燒基-苯基、苯基-Ci-Cg燒基、C「C6燒氧羰 基、苯基 _C0_C6 燒氧基、C「C6 燒基-het^het-Cj-Cg 燒基、S02-het、-0_C6-C12 芳基、-S02_C6-C12 芳基、-S02-CrC6烷基和het，其中任何烷基、烯基或炔基任選地被選自0H、鹵素(F、CI、Br、I)、硝基、氨基和氨基羰 基的1-3個基團取代，且任何芳基或het上的取代基為1-2個羥基、鹵素(F、Cl、Br、I)、CF3、 CrC6烷基、crc6烷氧基、硝基和氨基；Rm 選自 S-Ci-Q 烷基、C ( = 0) -crc6 烷基、C ( = 0) -NR30R30 ‘、CrC6 烷基、鹵素(F、C1、 Br、I) -CrC6烷基、芐基和苯基；R30 選自以下基團R43、NH-C( = 0)-0-R43、NH-C( = 0)-R43、NH_C( = 0)_NHR43、 NH-S02-R46、NH-S02NH-C( = 0)-R43、NH-C( = 0)-NH_S02-R37、C( = 0)-0_R43、C( = 0)-R43、 C( = 0)-NHR43、C ( = 0) -NH-C ( = 0) -0-R43、C ( = 0) -NH-C ( = 0) -R43、C ( = 0) -NH_S02-R46、 C( = O)-NH-SO2-NHR37、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-N(R43)2、S02-NH-C( = 0) -0-R43, S02-NH-C ( = 0) -0-R43 和 S02-NH-C ( = 0) -R43 ；R30'選自氫、羥基和取代或未取代的CfCn烷基、CfCn烷氧基、C2-C1(1烯基、C2-C1(1炔 ■、C3_CnC3_C10 ！^^布―、C^Cg ^^ -C6-C12 方■、C6-C10 方—"C^C-g ^^^ C6-C10 方基 _C0_C6 焼氧基、C「C6 焼基 _het、het-C^C6 焼基、C6—C12 方基、het、C「C6 焼基幾基、C「C8 烷氧羰基、c3-c8環(huán)烷基羰基、c3-c8環(huán)烷氧羰基、c6-cn芳氧基羰基、c7-cn芳基烷氧羰基、雜 芳基烷氧羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基磺?；?、雜芳基磺酰基、(^-(；烷基 磺酰基和c6-ci(l芳基磺?；?，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳 基、het或雜芳基上的取代基為1-3個R31 ；R3°和R3°'與它們所連接的共同的氮一起可形成任選地被取代的選自嗎啉基、哌嗪基、 硫代嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、1，2，3，4_四氫-喹啉基，1，；2，3，4-四氫-異喹啉基、噻唑烷基和氮雜二環(huán)壬基的雜環(huán)，其中取代基為1-3個R38;R33選自氫和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8 環(huán)烷基和苯甲?；?，其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基上的取代基為1-3個 R40；R40 選自 0H、鹵素(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸基、OR43、SR42、SOR43, NO2, CF3> R43、NR30R30'、 NR30C ( = 0) -O-R43、NRC ( = 0) -R43、C0-C6 烷基-SO2-R43、C0-C6 烷基-SO2-NR3ciR3ci ‘、C ( = 0) -R43、0-C(= 0)-R43X( = 0)-O-R43和C( = 0)-NR30R30'，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基 為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31 ；R46為取代或未取代的選自以下的基團C1-C8燒基、C2-C8烯基、C2-C8塊基、C3-C8環(huán)燒基、C3-C6環(huán)烯基、C0-C6燒基-苯基、苯 基-Ctl-C6 烷基、C0-C6 烷基-het 和 het-CQ-C6 烷基，其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為1-3個 R31 ；R45為取代或未取代的選自以下的基團輕基、C1-C11烷氧基、C3-C12環(huán)烷氧基、C8-C12芳 烷氧基、C8-C12芳環(huán)烷氧基、C6-Cltl芳氧基、C3-Cltl烷基羰氧基烷氧基、C3-Cltl烷氧羰氧基烷氧 基、C3-C10烷氧羰基烷氧基、C5-C10環(huán)烷基羰氧基烷氧基、C5-C10環(huán)烷氧羰氧基烷氧基、C5-C10 環(huán)烷氧羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳基羰氧 基烷氧基、C5-Cltl烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R30) (R3tl)N (C1-Cltl烷氧基)-、 其中任何烷基、烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，且任何芳基或het上的取代基為 1-3 個 R31及其藥學(xué)上可接受的鹽。
50.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述LFA-I拮抗劑在治療上可接受的制劑中經(jīng) 滴注、眼內(nèi)植入、眼周植入、注射、口服、鼻內(nèi)、局部或離子透入施用。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中所述注射施用是經(jīng)眼內(nèi)、玻璃體內(nèi)、眼周、皮下、 結(jié)膜下、眼球后或眼房內(nèi)進行的。
52.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述藥學(xué)上可接受的制劑包括凝膠、乳膏、粉 末、泡沫、晶體、脂質(zhì)體、噴霧、聚合物微?；蚣{米顆粒、生物可降解基質(zhì)、液體懸浮液、溶液、 懸浮液、軟膏、包、生物可吸收植入物或眼插入物。
53.一種治療受試者的糖尿病性視網(wǎng)膜病的方法，包括對所述受試者進行糖尿病性視 網(wǎng)膜病的診斷測試；基于所述診斷測試的結(jié)果來確定所述受試者是否患有糖尿病性視網(wǎng)膜 病；以及在診斷為所述糖尿病性視網(wǎng)膜病之后，向所述受試者施用在藥學(xué)上可接受的制劑 中的有效量的淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1 (LFA-1)拮抗劑。
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述診斷測試是通過使所述受試者的眼睛成像 或分析所述受試者的眼睛的生物樣品進行的。
55.一種降低和/或預(yù)防患糖尿病的受試者的術(shù)后眼部炎癥的方法，包括向需要的所 述受試者施用治療有效量的LFA-1拮抗劑，從而降低和/或預(yù)防所述受試者眼睛的術(shù)后炎 癥。
56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述術(shù)后炎癥是由于玻璃體切割術(shù)、激光凝固 療法、光動力療法或LASIK導(dǎo)致的。
57.根據(jù)權(quán)利要求42、53或55所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑選自 及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。
58.根據(jù)權(quán)利要求42、53或55所述的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為以下化合物之- 或其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。
59.一種配制為用于眼部遞送的藥物組合物，包含權(quán)利要求1所述的化合物和藥學(xué)上 可接受的載體。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的藥物組合物，其中所述權(quán)利要求1的化合物為式I、II、 III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X 或 XI 的化合物。
61.根據(jù)權(quán)利要求59所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物適于局部施用。
62.根據(jù)權(quán)利要求59所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物適于經(jīng)注射施用。
63.根據(jù)權(quán)利要求59所述的藥物組合物，其中藥物組合物適于作為植入物施用。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療糖尿病性視網(wǎng)膜病的化合物和方法。具體地，在此描述了用來治療糖尿病性視網(wǎng)膜病的LFA-I拮抗劑。本發(fā)明的一方面提供了糖尿病性視網(wǎng)膜病的診斷和患者在被診斷為糖尿病性視網(wǎng)膜病之后LFA-I拮抗劑的施用。
文檔編號A01N33/02GK101873797SQ200880117716
公開日2010年10月27日 申請日期2008年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月19日
發(fā)明者C·塞姆巴, J·伯涅爾, T·加德克 申請人:薩可德公司