專利名稱：：乳酸桿菌改善玩賞動(dòng)物食物中賴氨酸的吸收的用途的制作方法乳酸桿菌改善玩賞動(dòng)物食物中賴氨酸的吸收的用途發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及非致病性、刺激賴氨酸吸收的乳酸桿菌菌株的選擇和用途，和使用這種菌株用于改善玩賞動(dòng)物的皮毛和爪的質(zhì)量的產(chǎn)品和方法。
背景技術(shù)：
：l卯8年，俄國(guó)生物學(xué)家EIiMetchnikoff確信某些保加利亞和俄國(guó)公民長(zhǎng)壽在于消費(fèi)大量發(fā)酵乳產(chǎn)品(1)。這些食物中的關(guān)鍵生物隨后被鑒定為嗜酸乳桿菌(tocto^c///wsacWop/z//^)-—種乳酸生產(chǎn)細(xì)菌(2)。該乳酸生產(chǎn)細(xì)菌由此因它們生產(chǎn)乳酸的能力而被命名。然而，生產(chǎn)乳酸僅僅是由這個(gè)細(xì)菌集合得到的諸多益處之一?；贛etchnikoff和其他人的工作，科學(xué)家們發(fā)展了益生微生物的想法，直接將活的乳酸生產(chǎn)細(xì)菌和酵母飼喂動(dòng)物以改善它們的健康和特性。所觀察到的益處可能由以下原因引起的1)競(jìng)爭(zhēng)消化道中的附著部位，2)競(jìng)爭(zhēng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，3)產(chǎn)生抗微生物的物質(zhì)，4)增加有益細(xì)菌的生長(zhǎng)和5)刺激免疫系統(tǒng)(3)。一些致病菌通過(guò)破壞小腸內(nèi)壁而降低動(dòng)物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力(4)。研究表明乳酸生產(chǎn)細(xì)菌附著于小腸并產(chǎn)生防止致病生物結(jié)合腸壁的物質(zhì)(5)。此外，有益細(xì)菌的附著可以增加小腸的吸收表面積并提高酶活性，使動(dòng)物吸收更多營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(8,6)。促進(jìn)健康和致病的細(xì)菌的生長(zhǎng)都需要某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。乳酸生產(chǎn)細(xì)菌可以利用維生素、氨基酸或也另外支持有害細(xì)菌的生長(zhǎng)的其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(7)。相當(dāng)多的研究集中于直接飼喂微生物培養(yǎng)物產(chǎn)生抑制致病生物的物質(zhì)的能力。乳酸、乙酸和甲酸降低腸內(nèi)pH以產(chǎn)生不適合有害生物的環(huán)境(4)。乳酸生產(chǎn)細(xì)菌還分泌過(guò)氧化氫，產(chǎn)生不利于需氧微生物的條件(8)。已經(jīng)鑒定了兩組抗微生物物質(zhì)，低分子量的抗微生物物質(zhì)，例如路氏乳酸桿菌產(chǎn)生的無(wú)蛋白菌質(zhì)(reuterin);和細(xì)菌素。細(xì)菌素是微生物產(chǎn)生的物質(zhì)，抑制通常遺傳上相關(guān)的細(xì)菌的生長(zhǎng)(4)。細(xì)菌素是多肽且蛋白酶破壞他們的抑制特性，而無(wú)蛋白菌質(zhì)是一種廣譜抗微生物物質(zhì)，不是多肽且它的抗微生物活性不受蛋白酶影響。研究已證明了乳酸生產(chǎn)細(xì)菌抑制大腸桿菌(￡."/z')、鼠傷寒沙門(mén)氏桿菌(S^/,we〃a妙/'附鵬'畫(huà))、金黃色葡萄球菌(S啤/z;y/ococctw和產(chǎn)氣莢膜梭菌(C7w的'(i/ww/^/w取ra)的能力。減少引起腹瀉的生物在新生和幼年動(dòng)物中尤為重要。然而對(duì)伴生動(dòng)物中的益生菌研究很少。最近的一項(xiàng)研究(9)調(diào)查了嗜酸乳桿菌DSM13241在犬中的應(yīng)用。根據(jù)它的生長(zhǎng)特征、對(duì)病原體的抗微生物活性和在腸模型中的存活率選擇這個(gè)菌株。詞喂健康狗導(dǎo)致糞便中可回收乳酸桿菌數(shù)量顯著增加，梭菌屬數(shù)量伴隨減少。研究人員做出結(jié)論飼喂益生菌劑引起腸微生物學(xué)和全身效應(yīng)方面的積極改變，提示免疫系統(tǒng)刺激，如在人類消耗乳酸桿菌種屬后在他們中觀察到的(IO)。像狗、貓、貂(il^We/"v&o")和藍(lán)狐04/c^ex/"gO/WS)屬于食肉目哺乳動(dòng)物。食肉動(dòng)物適合于相對(duì)濃縮和很易消化的飲食，其特點(diǎn)是胃和相對(duì)短且簡(jiǎn)單的腸道。貂缺少盲腸且消化道短，結(jié)腸中細(xì)菌活性非常有限。狗和狐具有一個(gè)小容量的盲腸和一個(gè)非囊狀的結(jié)腸，但是一些細(xì)菌發(fā)酵在盲腸和結(jié)腸進(jìn)行(l1)。蛋白對(duì)于身體組織的生長(zhǎng)、修復(fù)和維持是至關(guān)重要的。它形成酶和抗體的基礎(chǔ)。對(duì)于動(dòng)物和鳥(niǎo)類，很多蛋白被用作制造皮毛、羽毛和爪的能量，主要是a-角蛋白。a-角蛋白由長(zhǎng)的a螺旋多肽組成，這些多肽彼此旋繞形成三股螺旋。通常對(duì)于毛皮動(dòng)物，含硫氨基酸通常被認(rèn)為是最有限制作用的氨基酸(12)。制造毛皮、羽毛和爪的蛋白只能來(lái)自飲食。飲食必須供給充足的氨基酸以滿足必需氨基酸的需要，足夠過(guò)量的氨基酸供給制造非必需氨基酸的氮。飲食中額外的蛋白不能儲(chǔ)存并將轉(zhuǎn)變成脂肪或被腎臟排泄出去。賴氨酸是必需氨基酸，因此不能通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用合成。它有助于通過(guò)產(chǎn)生肉毒堿使脂肪變得對(duì)身體有用，從身體去除毒素，制造皮毛、羽毛和骨頭。高水平增加對(duì)精氨酸的需要。賴氨酸在完整蛋白中高度不穩(wěn)定。它與葡萄糖反應(yīng)，并且在溫暖和潮濕環(huán)境下反應(yīng)加快。對(duì)幼年豬和家禽的研究發(fā)現(xiàn)賴氨酸是對(duì)生長(zhǎng)最有限制作用的氨基酸(例如Boisenetal.,2000;(13,14)。甲硫氨酸和半胱氨酸是營(yíng)養(yǎng)氨基酸，并且是基本氨基酸中最具活性的氨基酸。它們用于制造這種重要的分子，如肉毒堿(用于運(yùn)輸脂肪酸)、肌酸、煙酸、聚胺和嘌呤(用于產(chǎn)生尿酸)。它們還用于制造皮毛和羽毛。半胱氨酸可以從甲硫氨酸合成，因此它被分類為非必需氨基酸。然而，半胱氨酸及其氧化產(chǎn)物胱氨酸可以滿足總含硫氨基酸的大約百分之五十的需要，這樣可以降低對(duì)甲硫氨酸的需要。甲硫氨酸不能從半胱氨酸合成，因此它是必需氨基酸。在缺乏胱氨酸的情況下，甲硫氨酸可以滿足對(duì)含硫氨基酸的全部需要。一些研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)甲硫氨酸是對(duì)貂的毛發(fā)生長(zhǎng)和皮毛質(zhì)量最具限制作用的氨基酸(15,16,17，18，19,20,21)。在大多數(shù)家庭寵物中，健康的皮和毛通常表明動(dòng)物身體健康。因?yàn)槠ず兔珕?wèn)題在家庭寵物中是普遍的，己經(jīng)進(jìn)行很多研究提供修復(fù)皮和毛狀況變質(zhì)的飲食，由此提供基本水平的健康皮和毛，如下文所述。研究表明補(bǔ)充鋅及亞油酸的全面且均衡的商業(yè)狗糧可以使狗的皮和毛狀況顯著和實(shí)質(zhì)性提高。與接受標(biāo)準(zhǔn)飲食的對(duì)照組相比時(shí)，狗在皮毛光澤度和皮毛大小方面表現(xiàn)出顯著的改善。專利EP0987961Bl中也描述了這個(gè)方法。營(yíng)養(yǎng)可能影響皮膚屏障功能。國(guó)際專利申請(qǐng)WO0207531A1公開(kāi)了含抗微生物的脂肪酸的飲食脂類在制備用于改善或維持皮膚健康和/或皮毛質(zhì)量的食品組合物中的用途。在Kerminen-Hakkio的研究(21)中，貂中蛋白質(zhì)量粗劣使毛皮長(zhǎng)度平均降低4cm。在優(yōu)質(zhì)、高水平蛋白組觀察到最好的總體皮毛質(zhì)量。作者做出結(jié)論增加飲食中蛋白水平不能完全彌補(bǔ)必需氨基酸供給的缺乏。有些情況下，仍應(yīng)添加非必需氨基酸以確保最佳的可利用量。我們發(fā)現(xiàn)可利用的甲硫氨酸應(yīng)該與貓和狗的食物中也存在的賴氨酸保持平衡，以改善皮毛和爪的生長(zhǎng)和質(zhì)量。一個(gè)更好地利用來(lái)自食物的賴氨酸的值得稱贊的方法不是僅僅詞喂更多，而是尋找改善它吸收的方法。眾所周知含乳酸桿菌(LAB)的飼料能促進(jìn)生長(zhǎng)，這是因?yàn)槠渫ǔＤ芨纳茽I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。在今天的現(xiàn)代動(dòng)物育種中，很多國(guó)家已經(jīng)使用含益生微生物的飼料添加劑以催肥動(dòng)物。動(dòng)物消耗LAB時(shí)，它們移植于消化道并開(kāi)始產(chǎn)生消化淀粉(淀粉酶)、蛋白(蛋白酶)、脂肪(脂肪酶)的酶。這些酶有助于將飼料中復(fù)合有機(jī)化合物分解為低分子化合物。這些動(dòng)物可以更好利用這些低分子化合物。它們的食欲改善，飼料轉(zhuǎn)化率更好和生產(chǎn)性能改善。LAB在動(dòng)物飼養(yǎng)中的應(yīng)用還有助于免疫防御病原體。LAB將碳水化合物分解為乳酸，乳酸降低消化道內(nèi)容物的pH，形成極其不利于病原體微生物的環(huán)境。我們驚訝地發(fā)現(xiàn)食物或胃腸道中存在的不同LAB菌株可以不同地輔助氨基酸的吸收，尤其是賴氨酸。而且這種差異可以測(cè)定，從而使得選擇會(huì)最大量改善賴氨酸吸收的特定乳酸桿菌菌株是可能的。已經(jīng)證明Caco-2細(xì)胞系統(tǒng)是對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[肽和氨基酸(23,24，25,26)]和藥物產(chǎn)品(27，24)的腸上皮滲透性研究都合適的模型系統(tǒng)。Twaites1996年進(jìn)行的研究描述了腸內(nèi)Caco-2細(xì)胞運(yùn)輸二堿氨基酸賴氨酸的能力(28)。然而對(duì)乳酸桿菌促進(jìn)或增加玩賞動(dòng)物中來(lái)自飲食的氨基酸吸收很少研究。使用限定的四種不同細(xì)菌(莢膜甲基球菌(M^/^/ococa^ca拜/a加)、食酸產(chǎn)堿菌(襲"/Zg潔s"c油曹扁)、短芽孢桿菌(^cz7/z^Z^v&)和堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(&"7/船/，船))的混合物，和天然氣作為碳源和能源，經(jīng)由連續(xù)細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)生的細(xì)菌蛋白膳食(BPM)是一種新的高蛋白飼料成分。使用藍(lán)狐作為模型動(dòng)物進(jìn)行研究，擴(kuò)展對(duì)BPM作為狗糧成分的認(rèn)識(shí)。動(dòng)物通常顯示出很好的生長(zhǎng)，但是沒(méi)有數(shù)據(jù)顯示皮毛質(zhì)量改善(7)。專利WO01/17365A1描述了改善和保養(yǎng)寵物皮毛系統(tǒng)的方法，其中營(yíng)養(yǎng)劑可以是前生物或任何益生微生物。該申請(qǐng)人提及益生菌類的十七種不同細(xì)菌，和將近三十種益生微生物的具體實(shí)例。凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)Lacris-S菌株(SANKYOLIFETECHCO"LTD,Hongo,Bunkyo-ku，Tokyo,Japan)是唯一描述的特定菌株，沒(méi)有提及優(yōu)選菌株的選擇，也沒(méi)有任何基于LAB菌株刺激賴氨酸吸收的能力。盡管為了動(dòng)物皮毛和羽毛更好而使用益生菌是本領(lǐng)域己知的，但是以前沒(méi)有認(rèn)識(shí)到不同的益生菌株改善動(dòng)物，例如狗或貓的皮毛和爪的質(zhì)量的能力差異，和這種能力與益生菌株對(duì)動(dòng)物腸道吸收賴氨酸的影響有關(guān)。因此本發(fā)明的一個(gè)目的是通過(guò)分析它們直接促進(jìn)或改善動(dòng)物吸收賴氨酸的能力來(lái)選擇這種更合適的菌株，和將該選擇出的菌株用于動(dòng)物飼料或添加劑中，例如以改善狗或貓的皮毛和爪質(zhì)量的應(yīng)用。路氏乳酸桿菌的一個(gè)新菌株ATCCPTA-6127顯示出刺激皮毛動(dòng)物中的賴氨酸吸收和這個(gè)特性引起皮毛和爪質(zhì)量改善。由下列公開(kāi)內(nèi)容和所附權(quán)利要求，其他目的和優(yōu)點(diǎn)將更加明顯。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及非致病性、刺激賴氨酸吸收的乳酸桿菌菌株的選擇和用途，和使用這種菌株用于治療和預(yù)防玩賞動(dòng)物的皮毛和爪的質(zhì)量的產(chǎn)品和方法。圖1條線圖顯示了7.0X107cfo/ml不同的LAB菌株對(duì)Caco-2腸細(xì)胞吸收賴氨酸的影響。所用菌株是路氏乳酸桿菌ATCCPTA-6127、路氏乳酸桿菌1068、路氏乳酸桿菌SD2112和凝結(jié)芽孢桿菌Lacris-S菌株。具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及非致病性、剌激賴氨酸吸收的乳酸桿菌菌株的選擇和用途，和使用這種菌株用于治療和預(yù)防玩賞動(dòng)物的皮毛和爪的量的產(chǎn)品和方法。本發(fā)明的一個(gè)目的是通過(guò)分析它們直接促進(jìn)或改善動(dòng)物吸收賴氨酸的能力來(lái)選擇最好的合適菌株，和將該選擇出的菌株用于動(dòng)物飼料或添加劑中，例如以改善狗或貓的皮毛和爪質(zhì)量的應(yīng)用。路氏乳酸桿菌的一個(gè)新菌株(ATCCPTA-6127)顯示出刺激皮毛動(dòng)物中的賴氨酸吸收和這個(gè)特性引起皮毛和爪質(zhì)量改善。這個(gè)菌株根據(jù)布達(dá)佩斯條約于2004年7月22日保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassas，VA)。對(duì)公眾可獲得該菌株的全部限制將在本專利授權(quán)時(shí)不可改變地消除。本發(fā)明的產(chǎn)品可以是飼料或片劑或膠囊或其他制劑等劑型，和制備本領(lǐng)域已知的下述產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)方法，包括所選擇的LAB培養(yǎng)物。盡管這里陳述了某些代表性的實(shí)施方案，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)很容易地認(rèn)識(shí)到可以進(jìn)行改動(dòng)而不背離本發(fā)明的精神或范圍。實(shí)施例l.細(xì)胞培養(yǎng)物的制備Caco-2細(xì)胞(ATCC號(hào)HTB-37,Manassas,VA，USA)如(Thwaitesetal.，1993a;1993b)所述進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞單層制備如下高密度(4.4-5.0°—105細(xì)胞/cm勺接種在12或24.5mm直徑組織培養(yǎng)插片上[Transwell聚碳酸酯濾膜(Costar)]。細(xì)胞單層維持在37°C，含5%C02的濕潤(rùn)空氣下。顯微術(shù)估測(cè)細(xì)胞融合并測(cè)定跨上皮電阻。接種后18-25天和飼喂后18-24小時(shí)進(jìn)行放射性同位素標(biāo)記的賴氨酸流通量測(cè)定。實(shí)施例2.選擇刺激腸吸收賴氨酸的路氏乳酸桿菌菌株的方法Caco-2細(xì)胞單層用500ml改良的Krebs緩沖液(其組分(全部為mmo1/1)，NaCl140，KC15.4,CaCl22.8，MgS041.2,NaH2P040.3,KH2P040.3，HEPES10,葡萄糖10(用Tris堿調(diào)pH至7.4，37°C))洗滌4次，或適當(dāng)時(shí)，用不含Na+的Krebs緩沖液(如上，除了用膽堿Cl替換NaCl和NaH2P04，并放置于含2ml預(yù)熱(37°C)的不含Na+的Krebs緩沖液的6孔板(LifeTechnologies)。等分的新鮮Krebs緩沖液或不含Na+的Krebs緩沖液置于容器中。使用追蹤濃度(0.2microCi/ml)的放射性同位素標(biāo)記的賴氨酸((3H)Amersham)。然后上皮層與各種待測(cè)試的LAB孵育；路氏乳酸桿菌ATCCPTA-6127、路氏乳酸桿菌1068、路氏乳酸桿菌SD2112和凝結(jié)芽孢桿菌Lacris-S菌株以7.0x107cfWml的濃度在37。C孵育6小時(shí)。每60分鐘從基礎(chǔ)溶液中取200微升樣品測(cè)定跨上皮運(yùn)輸。用閃爍計(jì)數(shù)法測(cè)定放射性同位素標(biāo)記。結(jié)果參見(jiàn)圖1。實(shí)施例3.含所選擇菌株的飼料產(chǎn)品的制備在這個(gè)實(shí)施例中，為了將菌株添加到商品中，通常基于良好的生長(zhǎng)特性和實(shí)施例2中在先提及的選擇中的有利結(jié)果來(lái)選擇路氏乳酸桿菌"Shiny"(ATCCPTA-6127)。使用工業(yè)上培養(yǎng)乳桿菌的標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)培養(yǎng)路氏乳酸桿菌Shiny菌株并將其凍干。飼料混合物由玉米、玉米麩質(zhì)、雞和魚(yú)粉、鹽、維生素和礦物質(zhì)組成。將飼料混合物裝入預(yù)調(diào)節(jié)器并潤(rùn)濕。離開(kāi)預(yù)調(diào)節(jié)器的潤(rùn)濕詞料接著被裝入擠壓機(jī)-蒸煮器并膠質(zhì)化。離開(kāi)擠壓機(jī)的膠質(zhì)化基質(zhì)通過(guò)模具沖壓并壓出。離開(kāi)模具壓頭的壓出物切成適于飼喂給狗的塊，在大約140'C干燥大約20分鐘并冷卻形成球丸。球丸的水活度大約為0.6。球丸用包含動(dòng)物脂肪的包被基質(zhì)噴霧。在動(dòng)物脂肪凝結(jié)之前，通過(guò)干燥噴霧以107CFU/克產(chǎn)品的水平應(yīng)用益生菌路氏乳酸桿菌"Shiny"(ATCCPTA-6127),以便其附著于或部分滲入脂肪層中。37。C保存8周的結(jié)果表明微生物顯示出極好的穩(wěn)定性且在正常條件下保存一年后可能仍是穩(wěn)定的。實(shí)施例4.狗試驗(yàn)使用45只比格犬進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)開(kāi)始之前，給狗飼喂與實(shí)施例3中飲食相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)干燥飲食一周。在試驗(yàn)開(kāi)始之前，立即通過(guò)實(shí)施例5描述的評(píng)價(jià)小組評(píng)價(jià)參與的狗的皮毛狀況。將狗分為三組，每組15只狗。一組狗飼喂覆蓋有路氏乳酸桿菌"Shiny"(ATCCPTA-6127)的干燥球丸，另一組狗飼喂覆蓋有路氏乳酸桿菌菌株1068的干燥球丸和第三組繼續(xù)飼喂標(biāo)準(zhǔn)飲食，由此提供對(duì)照飲食。所有的組自由攝取食物和水。12周后，再次評(píng)價(jià)每只狗的皮毛狀況。飼喂覆蓋有路氏乳酸桿菌"Shiny"的球丸的狗比飼喂覆蓋有路氏乳酸桿菌1068菌株的球丸的狗和對(duì)照組的狗具有明顯更光亮的外觀并且沒(méi)有顯示出明顯的皮屑。實(shí)施例5.爪和皮毛的生長(zhǎng)特性技術(shù)熟練的趾甲美容師對(duì)實(shí)施例4中的狗爪進(jìn)行打分，兩位有經(jīng)驗(yàn)的專門(mén)研究比格犬品種的狗形象裁判對(duì)皮毛進(jìn)行打分。試驗(yàn)之前，根據(jù)皮毛和爪的質(zhì)量將狗平均分布在各組之中。12周后，評(píng)價(jià)趾甲被切割生長(zhǎng)時(shí)對(duì)抗裂開(kāi)的質(zhì)量并以五個(gè)水平的等級(jí)進(jìn)行打分，1是低劣和5是極好。評(píng)價(jià)皮毛的總體質(zhì)量、皮屑、皮毛長(zhǎng)度和光澤度，等級(jí)范圍從l(最差)至5(最好)。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>參考文獻(xiàn)(1)Metchnikoff,E.1908.ProlongationofLife.GP.Putnam'sSons.NewYork.(2)Shahani,K.M.andA.D.Ayebo.1980.RoleofdietarylactobaciUiingastrointestinalmicroecology.Am.J.Clin.Nutr.33:2448.(3)Skrede,A.，Ahlstrom，O.2002.BacterialProteinProducedonNaturalGas:ANewPotentialFeedIngredientforDogsEvaluatedUsingtheBlueFoxasaModel.TheAmericanSocietyforNutritionalsciencesJ.Nutr.132:1668S-1669.(4)Savage，D.C.1991.GastrointestinalMicrobialEcology;possibleModesofActionofDirect-fedMicrobialsinAnimalProduction.In:Direct-fedMicrobialsinAnimalProduction;rhl;NationalFeedIngredientsAssoc;DesMoines，IA;pp.11-81.(5)Savage，D.C.1985.EffectsonHostAnimalsofBacteriaAdheringtoEpithelialSurfaces.In:BacterialAdhesion,D.C.SavageandM.Fletcher(eds');Plenum,NY;pp,437-463.(6)Whitt，D，D.andD.C.Savage.1981.Influenceofindigenousmicrobiotaonamountofproteinandactivitiesofalkalinephosphataseanddisaccharidasesinextractsofintestinalmucosainmice.Appl.Environ.Micro.42:513.(7)Montes,A.J.andD.G.Pugh.1993.Theuseofprobioticsinfood-animalpractice.Vet.Med.March1993:282.(8)Klaenhammer,T.R.1982.MicrobiologicalconsiderationsinselectionandpreparationofLactobacillusstrainsforuseasdietaryadjuncts.J.DairySci.65:1339.(9).Baillon，M.L.A"Marshall-Jones,Z.V.&Butterwick,R.F.(2004)EffectsofprobioticLactobacillusacidophilusstrainDSM13241inhealthyadultdogs.Am.J.Vet.Res.65:338-343.(10).Tannock,G.W.(2002)ProbioticsandPrebiotics:WhereAreWeGoingCaisterAcademicPress，Wymondham，UK.(11)Ahlstrom，o.，Skrede，A.1998.ComparativeNutrientDigestibilityinDogs,BlueFoxes，MinkandRats.TheJournalofNutritionVol.128No.12Dec1998,pp2676S-2677S.(12)Hansen，N.E.，F(xiàn)inne,L.,Skrede,A.&Tauson，A.-H.1991.Energiforsyningenhosminkograav.NJF-utredning:rapportno.63，DSRforlag,DenKgl.Veterinasr-ogLandboh0jskole,Copenhagen,59pp.(InDanish.)(13)Roth，F(xiàn).X.，Gruber，K.andKirchgessner,M.2001.Theidealdietaryaminoacidpatternforbroilerchicksofage7to28days.Arch,Gefll)gelk.65:199-206.(14)Boisen,S.，Hvelplund,T.andWeisbjerg,M.R.2000.Idealaminoacidprofilesasabasisforfeedproteinevaluation.Livest.Prod.Sci.64:239-251.(15)B0rsting,C.F.andClausen，T.N.1996.Requirementsofessentialaminoacidsforminkinthegrowing-furringperiod.Proc.VlthInt.Sci,Congr.FurAnim.Prod.AppliedScienceReports28:15-24,PolishSocietyofAnimalProduction,Warsaw.(16)Skrede,A.1978.Utilizationoffishandanimalbyproductsinminknutrition.I.Effectofsourceandlevelofproteinonnitrogenbalance,postweaninggrowthandcharacteristicsofwinterfurquality.ActaAgric.Scand.28:105-129.(17)Glem-Hansen,N.1980.Theproteinrequirementsofminkduringthegrowthperiod.ActaAgric.Scand.30，336-344,(18)Glem-Hansen,N.1982.UtilizationofL-cystineandL-andD-methioninebyminkduringtheperiodofintensivehairgrowth.ActaAgric.Scand.32,167-170.(19)Dahlman,T.,Niemela,P.,Kiiskinen,T.,Makda，丄andKorhonen,H.1996.Influenceofproteinquantityandqualityonmink.Proc.VlthInt.Sci.Congr.FurAnim.Prod.AppliedScienceReports28:9-14.PolishSocietyofAnimalProduction,Warsaw.(20Damgaard,B.1997.Dietaryproteinsupplytomink(Mustelavison)-Effectsonphysiologicalparameters,growthperformanceandhealth.Ph.D.Thesis.DepartmentofAnimalScienceandAnimalHealth，theRoyalVeterinaryandAgriculturalUniversity,FrederiksbergC，Denmark.31pp.(21)Kerminen-Hakkio，M.，Dahlman,T.,Niemela,P.，Jalava,T.,Rekila,T.andSyrjala-Qvist，L.2000.Effectofdietaryproteinlevelandqualityongrowthrateandfurparametersinmink,Proc.VllthInt.Sci.Congr.FurAnim.Prod.Scientifur24:7-12,Kastoria，Greece.(22)Hidalgo,I.J.,Raub,T.J.,Borchardt,RT.1989.Characterisationofthehumancoloniccarcinomacellline(Caco-2)asamodelsystemforintestinalepithelialpermeability.Gastroenterology96:736-749(23)Thwaites,D.T.,Brown，C,D.A.，Hirst,B.H.Simmons，N丄.1993a.TransepithelialglycylsarcosinetransportinintestinalCaco-2cellsmediatedbyexpressionofH十-coupledcarriersatbothapicalandbasalmembranes.J.Biol.Chem.268:7640-7642(24)Thwaites，D.T.,Hirst,B.H.,Simmons,N丄.1994a.Substratespecificityofthedi/tripeptidetransporterinhumanintestinalepithelia(Caco-2):identificationofsubstratesthatundergoH+畫(huà)coupledabsorption.Br.J,Pharmacol.113:1050-1056(25)Thwaites,D.T.，McEwan,G.T.A.，Brown,C.D.A.,Hirst，B.H.，Simmons，N丄.1993b.Na+-independent，H十-coupledtransepithelialb-alanineabsorptionbyhumanintestinalCaco-2cellmonolayers.J.Biol.Chem.268:18438-18441(26)Thwaites,D，T.,McEwan,G.T.A.,Brown,C.D.A.,Hirst，B.H.,Simmons,N丄.1994b.L-Alanineabsorptioninhumanintestinalcellsdrivenbytheprotonelectrochemicalgradient.J.MembraneBiol.140:143-151(27)Thwaites,D.T.,Cavet,M.,Hirst,B,H.，Simmons,N丄.1995.Angiotension-convertingenzyme(ACE)inhibitortransportinhumanintestinalepithelial(Caco-2)cells.Br.J.Pharmacol114:981-986(28)ThwaitesD.T"MarkovichD,MurerH.SimmonsN丄.1996,Na十-independentLysineTransportinHumanIntestinalCaco-2Cells.JournalofMembraneBiology.151:215-224.權(quán)利要求1、一種改善伴生動(dòng)物的皮毛和爪質(zhì)量的方法，所述方法包括選擇非致病性、刺激賴氨酸吸收的路氏乳酸桿菌菌株(Lactobacillusreuteri)，和給動(dòng)物提供含有所選擇菌株的生物學(xué)上純培養(yǎng)物的產(chǎn)品。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述選擇包括分析乳酸桿菌菌株直接促進(jìn)或改善動(dòng)物吸收賴氨酸的能力。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述選擇包括使用Caco-2細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行腸上皮滲透研究。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述選擇包括使用放射性同位素標(biāo)記賴氨酸流通量。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述菌株是路氏乳酸桿菌菌株ATCCPTA-6127的生物學(xué)上純培養(yǎng)物。6、一種由權(quán)利要求1所述的方法所選擇的乳酸桿菌菌株的生物學(xué)上純培養(yǎng)物。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的菌株，其中所述菌株是路氏乳酸桿菌菌株ATCCPTA-6127的生物學(xué)上純培養(yǎng)物。8、一種用于改善玩賞動(dòng)物的皮毛和爪質(zhì)量的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括a)—種根據(jù)權(quán)利要求1所選擇的路氏乳酸桿菌菌株的生物學(xué)上純培養(yǎng)物；和b)—種飼料混合物，其中所述飼料混合物覆蓋有包被基質(zhì)，隨后被所選擇菌株的生物學(xué)上純培養(yǎng)物的干燥噴霧覆蓋。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中所述詞料混合物被制成球丸。10、根據(jù)權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中路氏乳酸桿菌菌株是ATCCPTA-6127。11、根據(jù)權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中所述飼料混合物包含玉米、玉米麩質(zhì)、雞和魚(yú)粉、鹽、維生素和礦物質(zhì)。12、根據(jù)權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中所述包被基質(zhì)包含動(dòng)物脂肪。13、根據(jù)權(quán)利要求12所述的產(chǎn)品，其中在動(dòng)物脂肪凝結(jié)之前，通過(guò)干燥噴霧以1(^CFU/克產(chǎn)品的水平應(yīng)用生物學(xué)上純培養(yǎng)物，以便其附著于或部分滲入脂肪層中。14、根據(jù)權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品的劑型選自由詞料、片劑和膠囊組成的組。全文摘要本發(fā)明涉及非致病性、刺激賴氨酸吸收的乳酸桿菌菌株的選擇和用途；優(yōu)選路氏乳酸桿菌菌株，例如路氏乳酸桿菌菌株ATCCPTA-6127。本發(fā)明還包括使用這種菌株例如用于改善玩賞動(dòng)物的皮毛和爪的質(zhì)量的產(chǎn)品和方法。文檔編號(hào)A23K1/16GK101641020SQ200880008772公開(kāi)日2010年2月3日申請(qǐng)日期2008年2月29日優(yōu)先權(quán)日2007年3月2日發(fā)明者埃蒙·康諾利,布·莫爾斯泰姆申請(qǐng)人:生命大地女神有限公司