專(zhuān)利名稱：：Wz♀-zz♂型奧利亞羅非魚(yú)zz合子的雌性化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種wz早-zzs型羅非魚(yú)育種技術(shù)，更具體地說(shuō)，它涉及一種wz早-zzi型奧利亞羅非魚(yú)zz合子的雌性化方法。
背景技術(shù)：
：羅非魚(yú)以其肉質(zhì)鮮美、食性廣、繁殖快、適應(yīng)性和抗病力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，在世界上很多國(guó)家都有飼養(yǎng)；我國(guó)大陸地區(qū)從20世紀(jì)60年代引入羅非魚(yú)品種后，在20世紀(jì)80年代后期羅非魚(yú)的養(yǎng)殖才得到較大的發(fā)展，目前全國(guó)的總體年產(chǎn)量己超過(guò)120萬(wàn)噸，已成為主要的淡水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)之一。在羅非魚(yú)的養(yǎng)殖技術(shù)中，正是羅非魚(yú)繁殖快的特點(diǎn)，也成為困擾羅非魚(yú)養(yǎng)殖發(fā)展的重要缺點(diǎn)，原因是羅非魚(yú)的性成熟早，按傳統(tǒng)的雌雄混養(yǎng)方法，容易造成羅非魚(yú)的過(guò)度繁殖，使養(yǎng)殖群體的大小難以控制，造成產(chǎn)品規(guī)格不齊、價(jià)格低、經(jīng)濟(jì)效益差。為此，業(yè)內(nèi)人員提出了羅非魚(yú)的全雄魚(yú)養(yǎng)殖技術(shù)，而全雄羅非魚(yú)苗的來(lái)源目前是通過(guò)奧利亞羅非魚(yú)與尼羅羅非魚(yú)雜交獲得，但其雄性率為80%95%，遠(yuǎn)不符合養(yǎng)殖業(yè)需要。鑒于上述情況，1979年美國(guó)學(xué)者jensen和Shelton提出使奧利亞雄魚(yú)性反轉(zhuǎn)為雌魚(yú)，再與原雄魚(yú)配種獲得遺傳上的全雄魚(yú)的設(shè)想。但他們始終未能獲得成功。同年本申請(qǐng)的發(fā)明人也提出類(lèi)似的想法，并從2002年起，利用從臺(tái)灣省和美國(guó)引進(jìn)的奧利亞羅非魚(yú)進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)近8年的努力，終于在該
技術(shù)領(lǐng)域：
取得了實(shí)質(zhì)性突破，發(fā)明了此項(xiàng)技術(shù)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可將wz罕-zz$型奧利亞羅非魚(yú)ZZ合子轉(zhuǎn)變?yōu)樯泶启~(yú)(ZZ厶早)，從而實(shí)現(xiàn)由生理雌魚(yú)與原雄魚(yú)配種(ZZA早XZZ古)獲得遺傳上的全雄魚(yú)(zz$)。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的一種wz早-zz$型奧利亞羅非魚(yú)zz合子的雌性化方法，是將性腺未分化的奧利亞羅非魚(yú)苗用含雌性激素(FH)的藥餌投喂15天以上，然后進(jìn)行正常的飼養(yǎng)管理，即可獲得ZZ型生理雌魚(yú)；藥餌中雌性激素的劑量為每克飼料含雌性激素100~200微克；藥餌投喂時(shí)的水溫為2530°C。上述的WZ早-ZZS型奧利亞羅非魚(yú)ZZ合子的雌性化方法中，所述的雌性激素(FH)為雌二醇。上述的wz早-zz$型奧利亞羅非魚(yú)zz合子的雌性化方法中，所述的性腺未分化的奧利亞羅非魚(yú)苗以后期胚胎或剛孵出的魚(yú)苗為佳，方法是放在孵化桶里，以每克飼料含雌性激素(FH)100200微克的藥館投喂510天，轉(zhuǎn)入水泥池后，再以每克飼料含雌性激素50100微克的藥餌繼續(xù)投喂2025天，共投喂30天后停藥，停藥后進(jìn)入正常的飼養(yǎng)管理工作。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有下述優(yōu)點(diǎn)(1)解決了長(zhǎng)期困擾WZ早-ZZ$型羅非魚(yú)全雄魚(yú)養(yǎng)殖中的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，從而建立目前全球尚無(wú)的ZZ型全雄羅非魚(yú)苗繁育系，為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)提供二系配套產(chǎn)生全雄性技術(shù)路線。(2)采用本發(fā)明的方法對(duì)ZZ型合子進(jìn)行雌性化，其轉(zhuǎn)化率高，最高可100%轉(zhuǎn)化為生理雌魚(yú)，并且經(jīng)雌性化后的羅非魚(yú)(ZZA孚)不會(huì)性逆轉(zhuǎn)。(3)本發(fā)明的方法極i:地豐富了現(xiàn)代生理遺傳學(xué)的內(nèi)容，并為控制脊椎動(dòng)物的性別和品種改進(jìn)，特別是WZ早-ZZ$型魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。實(shí)施例1雌性激素用量對(duì)雌性化效果的影響1.材料與方法1.l材料本實(shí)驗(yàn)的奧利亞羅非魚(yú)(o.aurus)源自以色列，是從臺(tái)灣引進(jìn)經(jīng)過(guò)多年選育的品種，其性別決定為WZ早-ZZ$類(lèi)型。在本公司國(guó)家級(jí)水產(chǎn)良種場(chǎng)的保種場(chǎng)進(jìn)行。1.2方法1.2.1轉(zhuǎn)化藥物與方法采用雌性激素(FH)進(jìn)行奧利亞羅非魚(yú)性別轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。雌性激素使用的劑量為每克詞料含雌二醇80200微克，以FH8oFH2oo表示。實(shí)驗(yàn)魚(yú)苗在剛孵出的階段進(jìn)行口服處理，每天喂藥餌36次。FH處理時(shí)間分為30天、60天、100天三組，每到一個(gè)處理時(shí)段,進(jìn)行性別檢査、計(jì)算轉(zhuǎn)化率。同時(shí)設(shè)有(不喂藥餌)對(duì)照組。1.2.2性別鑒定對(duì)實(shí)驗(yàn)魚(yú)的性別主要取性腺以組織學(xué)方法確定。為區(qū)別原系和轉(zhuǎn)化系，我們?cè)诒疚囊M(jìn)性別基因生理型的概念和轉(zhuǎn)化魚(yú)的符號(hào)厶。例如，奧利亞羅非魚(yú)原雄魚(yú)的性別基因型為ZZ$，其轉(zhuǎn)化雌魚(yú)的基因生理型以ZZA早表達(dá)。2.結(jié)果2.1第一階段2001年2003年，采用每克飼料含雌性激素80微克(以FHso表示)的藥餌，處理性腺末分化的奧利亞羅非魚(yú)苗(全長(zhǎng)811咖)，處理時(shí)間分為30天、60天、100天三組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ZZ型合子轉(zhuǎn)變?yōu)榇启~(yú)的效果不明顯?，F(xiàn)僅列出2002年處理時(shí)間為100天抽樣檢査結(jié)果作為代表，列入表l。表12002年奧利亞羅非魚(yú)雌性化實(shí)驗(yàn)撿查結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表1中被隨機(jī)抽查的15尾經(jīng)FH80處理實(shí)驗(yàn)魚(yú)中，7尾為雌魚(yú)，雌性率為46.7%，與對(duì)照組(47.3%)無(wú)顯著性差異性。但經(jīng)過(guò)綜合分辯發(fā)現(xiàn)，其中02號(hào)實(shí)驗(yàn)雌魚(yú)似是轉(zhuǎn)化雌魚(yú)(ZZA早)，嗣后，以它與ZZ雄魚(yú)配種進(jìn)行測(cè)實(shí)驗(yàn)，對(duì)它們375尾子Fi的性別撿查結(jié)果，全為雄性魚(yú)，即雄性率為100%。這一結(jié)果表明雖然雌性化率很低，但提示了一個(gè)重要信息，即奧利亞羅非魚(yú)雌性化是可行的。2.2第二階段2005年將02號(hào)轉(zhuǎn)化雌魚(yú)(ZZA早)與雄魚(yú)(ZZ$)交配，對(duì)其繁殖的子代苗(811mra)繼續(xù)進(jìn)行雌性化實(shí)驗(yàn)。其中，實(shí)驗(yàn)一組為采用每克詞料含雌性激素140微克(以FHmo表示)處理組，實(shí)驗(yàn)二組為采用每克飼料含雌性激素200微克(以FH2oo表示)處理組，對(duì)照組為未作FH處理組。現(xiàn)將雌性化實(shí)驗(yàn)結(jié)果列入表2和表3。表2ZZ合子轉(zhuǎn)化為雌性生殖器的撿査結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表3實(shí)驗(yàn)二組ZZ型合子轉(zhuǎn)化為雌性生殖腺發(fā)育狀況<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從表2和表3可看出:(1)實(shí)驗(yàn)一組的實(shí)驗(yàn)魚(yú)，生殖器為雌性征(2孔)達(dá)93.7%，較之對(duì)照組的0.00%,差異性極顯著(P<0.001)，但仍保持精巢不變。這說(shuō)明rauo對(duì)zz合子性征雌性化效果顯著，但對(duì)性腺轉(zhuǎn)化無(wú)效。(2)實(shí)驗(yàn)二組的實(shí)驗(yàn)魚(yú)，80%的生殖器和生殖腺表現(xiàn)為雌性，說(shuō)明FH2oo可以將原雄性ZZ型合子轉(zhuǎn)變?yōu)樯泶启~(yú)(ZZA早)。進(jìn)一步觀察(表3)表明，這種轉(zhuǎn)化雌魚(yú)大部分卵巢發(fā)育正常，多處于IIIV期，且有繁殖功能。由此共獲得500尾生理雌魚(yú)。(3)實(shí)驗(yàn)二組取得實(shí)驗(yàn)成功與我們調(diào)整的激素劑量和選擇魚(yú)苗的發(fā)育階段有密切關(guān)系。實(shí)施例2雌性激素的處理時(shí)機(jī)對(duì)雌性化效果的影響1.材料與方法1.1材料1.1.l實(shí)驗(yàn)魚(yú)親魚(yú)系從臺(tái)灣引進(jìn)的奧利亞(o.aureus)原種雄魚(yú)(ZZ3)和以上研究獲得的轉(zhuǎn)化生理雌魚(yú)(ZZA早)。采用二系配套法即ZZA早XZZ6獲得剛孵化出的ZZ型魚(yú)苗做材魚(yú)，這種實(shí)驗(yàn)材料，在正常情況下會(huì)表現(xiàn)為全雄魚(yú)。實(shí)驗(yàn)在廈門(mén)鷺業(yè)和海南鷺業(yè)兩公司的各自試驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行。廈門(mén)試驗(yàn)場(chǎng)以后期胚胎為實(shí)驗(yàn)材料；海南試驗(yàn)場(chǎng)以撈捕(雌親魚(yú)口孵階段結(jié)束時(shí))魚(yú)苗為實(shí)驗(yàn)材料。1.1.2性別轉(zhuǎn)化設(shè)施1.1.2.1性別轉(zhuǎn)化器是我們?cè)诳偨Y(jié)以往孵化桶型轉(zhuǎn)化器經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上重新設(shè)計(jì)，用塑料大盆(直經(jīng)67cra,高16cm，容量0.12m3)制作而成。其深度較淺，大小適中。在盆的上方開(kāi)12處矩形窗口，然后以4550目的金屬篩絹片封口，并配備進(jìn)排水和增氣系統(tǒng)。這種性別轉(zhuǎn)化器突出優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜，功能多樣。它既可作魚(yú)卵胚胎的孵化器，又可進(jìn)行雌雄性別轉(zhuǎn)化的幼魚(yú)的培育設(shè)備。就性反轉(zhuǎn)而言，它可起到藥鉺和浸泡的雙效作用。1.1.2.2附屬設(shè)備在廈門(mén)鷺業(yè)和海南性別轉(zhuǎn)化區(qū)，除性別轉(zhuǎn)化器外還配備有20余口(200cmX200cmX120cm)為A、B、C、D…的小水泥池，用于雌化實(shí)驗(yàn)魚(yú)的培育。水泥池配備有水塔、水泵、抽水機(jī)、增氧等設(shè)施。水塔均由河水和地下水二股水源供水，為羅非魚(yú)的雌性化實(shí)驗(yàn)提供了良好的生態(tài)條件。1.2方法1.2.1雌性化誘導(dǎo)采用雌性激素(FH)對(duì)奧利亞魚(yú)苗進(jìn)行雌性化誘導(dǎo)，使用劑量為每克飼料含200微克，以FH2oo表示。劑量減半以冊(cè)K)o表示。1.2.2實(shí)驗(yàn)組為了查找雌性激素(FH)持續(xù)作用的有效天數(shù)，本實(shí)驗(yàn)以同批孵化的魚(yú)苗為材料，分別進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)；1.2.2.1廈門(mén)實(shí)驗(yàn)組將后期胚胎或剛孵出的魚(yú)苗放在孵化桶里，以FH2oo藥餌處理10天，轉(zhuǎn)入水泥池后，再以FHnx)繼續(xù)處理20天。停藥后進(jìn)入正常的飼養(yǎng)管理工作。1.2.2.2海南實(shí)驗(yàn)組以4朝篩選用魚(yú)苗(10mm左右)作材料，以FH2oo處理510天，之后藥餌劑量減半，再雌性化20天。共處理30天停藥，進(jìn)入正常的飼養(yǎng)管理。魚(yú)苗孵出時(shí)，即以FH2oo處理魚(yú)苗。持續(xù)天數(shù)按5、10、15、20、25、30、60天分組。到時(shí)停藥，而后進(jìn)行正常的飼養(yǎng)管理。1.2.2.3對(duì)照組奧利亞羅非魚(yú)ZZ厶早XZZ6繁殖的魚(yú)苗，不做雌化誘導(dǎo)處理，正常情況下發(fā)育為全雄魚(yú)。以處理O天表示。1.2.2.4雌化效果檢査待實(shí)驗(yàn)魚(yú)發(fā)育到710cm左右時(shí)，隨機(jī)抽樣解剖檢查，以性腺和泄殖孔的特征進(jìn)行性別確認(rèn)。FH雌性化的效果，以雌魚(yú)百分率表達(dá)。由于對(duì)照組的雄性率為100%。所以，這里雌性率就是ZZ型合子轉(zhuǎn)變?yōu)樯泶启~(yú)百分?jǐn)?shù)。最后對(duì)觀察的結(jié)果進(jìn)行綜合分析。2.結(jié)果2.1以后期胚胎為起始材料的廈門(mén)實(shí)驗(yàn)組雌性化實(shí)驗(yàn)(1)雌性化結(jié)果2007年9月6日取D池44尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)(全長(zhǎng)8.9cm9.7cm)進(jìn)行解剖觀察全為卵巢。11月12日又取78尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)，解剖觀察也全為卵巢。二次檢査結(jié)果均為100%的雌魚(yú)。(2)E池雌性化結(jié)果9月6日，取實(shí)驗(yàn)魚(yú)(全長(zhǎng)7cm8cm)102尾進(jìn)行解剖觀察，全為卵巢，雌性率為100%。以上實(shí)驗(yàn)表明，釆用近孵化的胚胎或剛孵出的魚(yú)苗(帶卵黃囊)作實(shí)驗(yàn)材料，以FH20QFHux)雌性激素分段進(jìn)行誘導(dǎo)，可獲得100%的ZZ型生理雌魚(yú)。2.2以撈捕魚(yú)苗為起始材料的雌性化實(shí)驗(yàn)該埸雌性化的魚(yú)苗達(dá)幾十批，合計(jì)魚(yú)苗達(dá)30余萬(wàn)尾。它們分配在IO余口魚(yú)池進(jìn)行培育?，F(xiàn)將二口魚(yú)池抽査的雌性化情況，報(bào)告如下(1)A池的雌性化結(jié)果取60尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)(79cra)進(jìn)行解剖觀察，其中雌魚(yú)52尾，雄魚(yú)8尾，雌性率為86.7%。(2)B池的雌性化結(jié)果取62尾實(shí)驗(yàn)魚(yú)(1014cm)進(jìn)行檢查，其中雌魚(yú)30尾，雄魚(yú)32尾。雌性率為48.4%。如果將二口池合計(jì)，其總數(shù)為122尾，雌魚(yú)數(shù)82尾，其平均雌性轉(zhuǎn)化率為67.2%。2.3雌性化不同持續(xù)天數(shù)的效果觀察將FH2oo處理魚(yú)苗不同持續(xù)天數(shù)及其觀察結(jié)果，列入表4內(nèi)，由表4可以看出，在冊(cè)200處理10天內(nèi)的實(shí)驗(yàn)組，其出現(xiàn)的雌性率為0%，這與對(duì)照組相同。FH2oo處理15天組，出現(xiàn)雌魚(yú)(25.6.%)。而后雌性率迅速提高，到FH2(w處理30天，已接近100%的雌性率。分析結(jié)果表明，釆用劑量為FH200的雌性激素處理剛孵化出膜的魚(yú)苗30天，即可使ZZ型合子轉(zhuǎn)化為生理雌魚(yú)(ZZA早)。表4FH處理不同持續(xù)天數(shù)ZZ型合子雌性化效果的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1.一種WZ♀-ZZ♂型奧利亞羅非魚(yú)ZZ合子的雌性化方法，其特征在于，將性腺未分化的奧利亞羅非魚(yú)苗用含雌性激素的藥餌投喂15天以上，然后進(jìn)行正常的飼養(yǎng)管理，即可獲得zz型生理雌魚(yú)，藥餌中雌性激素的劑量為每克飼料含雌性激素100～200微克；投喂藥餌的水溫為25～30℃。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的WZ罕-ZZ4型奧利亞羅非魚(yú)ZZ合子的雌性化方法，其特征在于，所述的雌性激素為雌二醇。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的WZ早-ZZ$型奧利亞羅非魚(yú)ZZ合子的雌性化方法，其特征在于，所述的性腺未分化的奧利亞羅非魚(yú)苗為后期胚胎或剛孵出的魚(yú)苗，方法是放在孵化桶里，以每克飼料含雌性激素100200微克的藥餌投喂510天，轉(zhuǎn)入水泥池后，再以每克飼料含雌性激素50100微克的藥餌繼續(xù)投喂2025天，共投喂30天后停藥，停藥后進(jìn)入正常的飼養(yǎng)管理工作。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種WZ♀-ZZ♂型奧利亞羅非魚(yú)ZZ合子的雌性化方法，屬羅非魚(yú)養(yǎng)殖
技術(shù)領(lǐng)域：
，其技術(shù)方案的要點(diǎn)是將性腺未分化前的奧利亞羅非魚(yú)苗用含雌性激素的藥餌處理投喂15天以上，然后進(jìn)行正常的飼養(yǎng)管理，即可獲得ZZ型生理雌魚(yú)，藥餌中雌性激素的劑量為每克飼料含雌性激素100～200微克；投喂藥餌處理時(shí)的水溫為25～30℃。本發(fā)明的方法可將遺傳雄魚(yú)轉(zhuǎn)變?yōu)樯泶启~(yú)，從而建立目前全球尚無(wú)的ZZ型全雄羅非魚(yú)苗繁育系，對(duì)全雄羅非魚(yú)的推廣養(yǎng)殖具有重大意義。文檔編號(hào)A01K61/00GK101416613SQ20081021939公開(kāi)日2009年4月29日申請(qǐng)日期2008年11月25日優(yōu)先權(quán)日2008年11月25日發(fā)明者張海明,楊永銓,陳遠(yuǎn)生申請(qǐng)人:廣州鷺業(yè)水產(chǎn)有限公司