專利名稱：一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種北美杜鵑花的快速繁殖技術(shù)，特別是一種北美杜鵑花的 組織培養(yǎng)方法，它適用于對(duì)杜鵑花進(jìn)行快速繁殖。
背景技術(shù)：
杜驟花為世界著名木本觀賞花卉，屬杜鵲花科(Ericaceae)、杜驟花屬 (Rhododendron)。其中常綠大葉杜鵑約占世界杜鵑自然資源的三分之一，主 要分布于北半球溫帶區(qū)，即亞洲、歐洲、北美洲等地。本發(fā)明培養(yǎng)的這種北 美杜鵑花屬耐寒型常綠大葉類杜鵑，以其葉大而有光澤、 一蕾多花、鮮艷多 姿、觀賞性強(qiáng)而受到人們的青睞，在世界觀賞植物市場(chǎng)上占有重要地位。而 我國(guó)的此類常綠大葉杜鵑，主要分布在云南、四川、貴州等西南高山地區(qū)， 目前我國(guó)中北部地區(qū)非常缺乏耐寒的常綠大葉杜鵑種類，對(duì)它的研究，如引 種馴化、新品種選育、繁殖和推廣等方面也相對(duì)滯后，不能提供生產(chǎn)應(yīng)用及 市場(chǎng)供應(yīng)的科技支撐。因此，對(duì)耐寒常綠杜鵑花的快速繁殖技術(shù)的研究尤為 重要。
國(guó)家林業(yè)局泡桐研究開(kāi)發(fā)中心通過(guò)948項(xiàng)目引進(jìn)了此類北美耐寒常綠大 葉杜鵑花的優(yōu)良新品種，并研究出它的快速繁殖方法，可短期內(nèi)工廠化生產(chǎn) 大量生長(zhǎng)整齊一致的苗木，對(duì)增加園林綠化植物的多樣性、豐富杜鵑花市場(chǎng)、 推動(dòng)我國(guó)觀賞植物產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)杜鵑花的快速繁殖，而研究出一種北美杜鵑花的組 織培養(yǎng)方法。該方法是采取杜鵑外植體材料，通過(guò)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)出大量(數(shù)百倍于原材料的)叢生芽，然后通過(guò)生根培養(yǎng)基將這些叢生 芽培養(yǎng)成完整植株。從而在約半年內(nèi)生產(chǎn)出數(shù)百倍于原材料數(shù)量、生長(zhǎng)一致、 完全保持原植株優(yōu)良性狀的杜鵑花苗木，以滿足市場(chǎng)需求，大大推動(dòng)觀賞植 物產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法原料是杜鵑花 外植體材料，第一步、采北美杜鵑花外植體材料，用清水洗凈，放在超凈工作 臺(tái)上，先用75%的酒精消毒6 8秒，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.1%升汞消 毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗3次；第二步、無(wú)菌操作將處理后的材料，適當(dāng)剪 切后植入無(wú)菌芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為室溫25 28°C, 光照強(qiáng)度2000 50001ux ，光照時(shí)間每天12小時(shí)，30天后植入無(wú)菌增殖培養(yǎng) 基中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上，培養(yǎng)時(shí)間為60天；第三步、生根培養(yǎng)， 切取約2 3cm高的杜鵑花健壯苗，植入無(wú)菌生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，培 養(yǎng)條件同上，生根時(shí)間為45天；第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)約0.5cm時(shí)，洗 凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)菌粗沙中，保持75% 85%空氣濕度， 一周后， 移至混合基質(zhì)中，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
本發(fā)明可以是這樣實(shí)現(xiàn)的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read+(1.5 3.0mg)ZT+(0.25 ~0.45 mg)IAA，再加入瓊脂6.5g/L ,蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后高壓 滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的增殖培養(yǎng)基為Read+ (3.5~5.5mg) ZT+ C0.45~0.80mg) IAA，再加入瓊脂6.5g/L ,蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后 高壓滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的生根培養(yǎng)基為Read十C0.l~0.5mg) NAA， 再加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的所述的北美杜鵑花外植體材料為冬芽、春季幼嫩莖段、春季幼嫩葉片。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的所述的煉苗的混合基質(zhì)為草炭土和珍珠巖， 其比例為(草炭土) 2: 1 (珍珠巖)。 本發(fā)明的積極效果是
1、 通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施，可以100%保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性。
2、 本發(fā)明可在短時(shí)間內(nèi)(6 — 7個(gè)月)實(shí)現(xiàn)工廠化育苗，大批量生產(chǎn)整 齊一致的杜鵑花苗木，大幅度提高繁殖系數(shù)。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。 實(shí)施例1
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，原料是杜鵑花外植體材料，第一步、 采北美杜鵑花的冬芽，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精消 毒3 4秒，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗3 次；第二步、將處理后的冬芽，剝?nèi)パ亏[后植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，芽誘導(dǎo)培 養(yǎng)基為Read+2.0mg ZT+0.3mg IAA，再加入瓊脂6.5g/L ，蔗糖20g/L， PH 值為5.4，裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘，置于室溫為25-C 28°C，光照強(qiáng) 度2000 50001ux,光照時(shí)間每天12小時(shí)的培養(yǎng)條件下，進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，30 天后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基為Read+3.8mgZT+0.50mglAA，再 加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘， 培養(yǎng)條件同上，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為60天；第三步、生根培養(yǎng)，切取 約3cm高的杜鵑花健壯苗，在無(wú)菌條件下植入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基為 Read+0.15mgNAA，再加入瓊脂6.5g/L，蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后高 壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件同上，進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為45天；第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)至0.5cm時(shí)，洗凈根部瓊脂，移至粗沙中， 一周后， 移至草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中，煉苗的混合基質(zhì)中的草炭土和珍珠巖的 比例為2: 1， 45天后移至大田，遮蔭一周即可。 實(shí)施例2
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，原料是杜鵑花外植體材料，第一步、 采北美杜鵑花的春季幼嫩莖段，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75% 的酒精消毒3 4秒，無(wú)菌水沖洗3次后，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú) 菌水沖洗3次；第二步、將處理后的幼嫩莖段，切成約lcm長(zhǎng)，植入芽誘導(dǎo) 培養(yǎng)基中，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read+2.5mg ZT+0.35mg IAA，再加入瓊脂6.5g/L ， 蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘，置于室溫為25'C 28°C，光照強(qiáng)度2000 50001ux，光照時(shí)間每天12小時(shí)的培養(yǎng)條件下，進(jìn)行芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)，30天后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基為Read+4.5mgZT+0.60 mg IAA，再加入瓊脂6.5g/L，蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后經(jīng)高壓滅菌 15 20分鐘，培養(yǎng)條件同上，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為60天；第三步、生 根培養(yǎng)，切取約3cm高的杜鵑花健壯苗，在無(wú)菌條件下植入生根培養(yǎng)基中， 生根培養(yǎng)基為Read+0.35mg NAA，再加入瓊脂6.5g/L ，蔗糖20g/L， PH值 為5.4，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件同上，進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng) 時(shí)間為45天；第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)至0.5cm時(shí)，洗凈根部瓊脂，移至 粗沙中， 一周后，移至草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中，煉苗的混合基質(zhì)中的 草炭土和珍珠巖的比例為2: 1， 45天后移至大田，遮蔭一周即可。
實(shí)施例3
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，原料是杜鵑花外植體材料，第一步、 采北美杜鵑花的春季幼嫩葉片，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75% 的酒精消毒3 4秒，無(wú)菌水沖洗3次后，再用0.1%升汞消毒6 8分鐘，無(wú)菌水沖洗3次；第二步、將處理后的春季幼嫩葉片，切成約lci^大小方塊， 植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read+3.0mgZT+0.45mglAA，再加 入瓊脂6.5g/L ，蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘， 置于室溫為25T: 28°C,光照強(qiáng)度2000 50001ux ,光照時(shí)間每天12小時(shí)的 培養(yǎng)條件下，進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，30天后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基為-Read+5.5mgZT+0.80mglAA，再加入瓊脂6.5g/L，蔗糖20g/L， PH值為5.4， 裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件同上，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為 60天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約3cm高的杜鵑花健壯苗，在無(wú)菌條件下植 入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基為Read+0.5mgNAA，再加入瓊脂6.5g/L ，蔗 糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘，培養(yǎng)條件同上，進(jìn)行 生根培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為45天；第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)至0.5cm時(shí)，洗凈 根部瓊脂，移至粗沙中， 一周后，移至草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中，煉苗 的混合基質(zhì)中的草炭土和珍珠巖的比例為2: 1。
45天后移至大田，遮蔭一
周即可。
權(quán)利要求
1、一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法原料是杜鵑花外植體材料，其特征在于第一步、采北美杜鵑花外植體材料，用清水洗凈，放在超凈工作臺(tái)上，先用75％的酒精消毒6～8秒，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.1％升汞消毒6～8分鐘，無(wú)菌水沖洗3次；第二步、無(wú)菌操作將處理后的材料，適當(dāng)剪切后植入無(wú)菌芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為室溫25～28℃，光照強(qiáng)度2000～5000lux，光照時(shí)間每天12小時(shí)，30天后植入無(wú)菌增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上，培養(yǎng)時(shí)間為60天；第三步、生根培養(yǎng)，切取約2～3cm高的杜鵑健壯苗，植入無(wú)菌生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上，生根時(shí)間為45天；第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)約0.5cm時(shí)，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)菌粗沙中，保持75％～85％空氣濕度，一周后，移至混合基質(zhì)中，45天后移至大田，遮蔭一周即可。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read十(1.5 ~3.0mg) ZT+(0.25 -0.45 mg)IAA，再加入瓊脂 6.5g/L ，蔗糖20g/L, PH值為5.4，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于-增殖培養(yǎng)基為Read+ (3.5~5.5 mg)ZT+(0.45 0.80mg)IAA，再加入瓊脂6.5g/L , 蔗糖20g/L， PH值為5.4，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于-生根培養(yǎng)基為Read+((U 0.5mg) NAA，再加入瓊脂6.5g/L，蔗糖20g/L， PH 值為5.4，裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于 煉苗的混合基質(zhì)為草炭土和珍珠巖，其比例為(草炭土) 2: 1 (珍珠巖)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于-北美杜驟花外植體材料為冬芽、春季幼嫩莖段、春季幼嫩葉片。
全文摘要
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法第一步、采北美杜鵑花外植體材料，處理后放在超凈工作臺(tái)上，先用75％的酒精消毒6～8秒，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.1％升汞消毒6～8分鐘，無(wú)菌水沖洗3次；第二步、將無(wú)菌操作剪切后的材料，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，30天后植入增殖培養(yǎng)基中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)60天；第三步、切取約2～3cm高的杜鵑健壯苗，植入生根培養(yǎng)基45天，第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)約0.5cm時(shí)，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移至無(wú)菌粗沙中，保持75％～85％空氣濕度，一周后，移入草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中，45天后移至大田，遮蔭一周。本發(fā)明可在6-7個(gè)月內(nèi)實(shí)現(xiàn)工廠化育苗，并大批量生產(chǎn)整齊一致的杜鵑花苗木。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101292628SQ200810049998
公開(kāi)日2008年10月29日 申請(qǐng)日期2008年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月11日
發(fā)明者傅建敏, 夏士文, 孫志強(qiáng), 李樹戰(zhàn), 李福海, 李芳東, 杜蘭英, 楊紹彬, 金世海 申請(qǐng)人:國(guó)家林業(yè)局泡桐研究開(kāi)發(fā)中心