專利名稱:一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種北美杜鵑花的快速繁殖技術(shù),特別是一種北美杜鵑花的 組織培養(yǎng)方法,它適用于對(duì)杜鵑花進(jìn)行快速繁殖。
背景技術(shù):
杜驟花為世界著名木本觀賞花卉,屬杜鵲花科(Ericaceae)、杜驟花屬 (Rhododendron)。其中常綠大葉杜鵑約占世界杜鵑自然資源的三分之一,主 要分布于北半球溫帶區(qū),即亞洲、歐洲、北美洲等地。本發(fā)明培養(yǎng)的這種北 美杜鵑花屬耐寒型常綠大葉類杜鵑,以其葉大而有光澤、 一蕾多花、鮮艷多 姿、觀賞性強(qiáng)而受到人們的青睞,在世界觀賞植物市場(chǎng)上占有重要地位。而 我國(guó)的此類常綠大葉杜鵑,主要分布在云南、四川、貴州等西南高山地區(qū), 目前我國(guó)中北部地區(qū)非常缺乏耐寒的常綠大葉杜鵑種類,對(duì)它的研究,如引 種馴化、新品種選育、繁殖和推廣等方面也相對(duì)滯后,不能提供生產(chǎn)應(yīng)用及 市場(chǎng)供應(yīng)的科技支撐。因此,對(duì)耐寒常綠杜鵑花的快速繁殖技術(shù)的研究尤為 重要。
國(guó)家林業(yè)局泡桐研究開(kāi)發(fā)中心通過(guò)948項(xiàng)目引進(jìn)了此類北美耐寒常綠大 葉杜鵑花的優(yōu)良新品種,并研究出它的快速繁殖方法,可短期內(nèi)工廠化生產(chǎn) 大量生長(zhǎng)整齊一致的苗木,對(duì)增加園林綠化植物的多樣性、豐富杜鵑花市場(chǎng)、 推動(dòng)我國(guó)觀賞植物產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)杜鵑花的快速繁殖,而研究出一種北美杜鵑花的組 織培養(yǎng)方法。該方法是采取杜鵑外植體材料,通過(guò)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)出大量(數(shù)百倍于原材料的)叢生芽,然后通過(guò)生根培養(yǎng)基將這些叢生 芽培養(yǎng)成完整植株。從而在約半年內(nèi)生產(chǎn)出數(shù)百倍于原材料數(shù)量、生長(zhǎng)一致、 完全保持原植株優(yōu)良性狀的杜鵑花苗木,以滿足市場(chǎng)需求,大大推動(dòng)觀賞植 物產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法原料是杜鵑花 外植體材料,第一步、采北美杜鵑花外植體材料,用清水洗凈,放在超凈工作 臺(tái)上,先用75%的酒精消毒6 8秒,無(wú)菌水沖洗3次,再用0.1%升汞消 毒6 8分鐘,無(wú)菌水沖洗3次;第二步、無(wú)菌操作將處理后的材料,適當(dāng)剪 切后植入無(wú)菌芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng),培養(yǎng)條件為室溫25 28°C, 光照強(qiáng)度2000 50001ux ,光照時(shí)間每天12小時(shí),30天后植入無(wú)菌增殖培養(yǎng) 基中,進(jìn)行增殖培養(yǎng),培養(yǎng)條件同上,培養(yǎng)時(shí)間為60天;第三步、生根培養(yǎng), 切取約2 3cm高的杜鵑花健壯苗,植入無(wú)菌生根培養(yǎng)基,進(jìn)行生根培養(yǎng),培 養(yǎng)條件同上,生根時(shí)間為45天;第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)約0.5cm時(shí),洗 凈根部附著的培養(yǎng)基,移至無(wú)菌粗沙中,保持75% 85%空氣濕度, 一周后, 移至混合基質(zhì)中,45天后移至大田,遮蔭一周即可。
本發(fā)明可以是這樣實(shí)現(xiàn)的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read+(1.5 3.0mg)ZT+(0.25 ~0.45 mg)IAA,再加入瓊脂6.5g/L ,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后高壓 滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的增殖培養(yǎng)基為Read+ (3.5~5.5mg) ZT+ C0.45~0.80mg) IAA,再加入瓊脂6.5g/L ,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后 高壓滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的生根培養(yǎng)基為Read十C0.l~0.5mg) NAA, 再加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的所述的北美杜鵑花外植體材料為冬芽、春季幼嫩莖段、春季幼嫩葉片。
本發(fā)明還可以是這樣實(shí)現(xiàn)的所述的煉苗的混合基質(zhì)為草炭土和珍珠巖, 其比例為(草炭土) 2: 1 (珍珠巖)。 本發(fā)明的積極效果是
1、 通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施,可以100%保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性。
2、 本發(fā)明可在短時(shí)間內(nèi)(6 — 7個(gè)月)實(shí)現(xiàn)工廠化育苗,大批量生產(chǎn)整 齊一致的杜鵑花苗木,大幅度提高繁殖系數(shù)。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。 實(shí)施例1
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,原料是杜鵑花外植體材料,第一步、 采北美杜鵑花的冬芽,用清水洗凈,放在超凈工作臺(tái)上,先用75%的酒精消 毒3 4秒,無(wú)菌水沖洗3次,再用0.1%升汞消毒6 8分鐘,無(wú)菌水沖洗3 次;第二步、將處理后的冬芽,剝?nèi)パ亏[后植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,芽誘導(dǎo)培 養(yǎng)基為Read+2.0mg ZT+0.3mg IAA,再加入瓊脂6.5g/L ,蔗糖20g/L, PH 值為5.4,裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘,置于室溫為25-C 28°C,光照強(qiáng) 度2000 50001ux,光照時(shí)間每天12小時(shí)的培養(yǎng)條件下,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng),30 天后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)基為Read+3.8mgZT+0.50mglAA,再 加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘, 培養(yǎng)條件同上,進(jìn)行增殖培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為60天;第三步、生根培養(yǎng),切取 約3cm高的杜鵑花健壯苗,在無(wú)菌條件下植入生根培養(yǎng)基中,生根培養(yǎng)基為 Read+0.15mgNAA,再加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后高 壓滅菌15 20分鐘,培養(yǎng)條件同上,進(jìn)行生根培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為45天;第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)至0.5cm時(shí),洗凈根部瓊脂,移至粗沙中, 一周后, 移至草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中,煉苗的混合基質(zhì)中的草炭土和珍珠巖的 比例為2: 1, 45天后移至大田,遮蔭一周即可。 實(shí)施例2
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,原料是杜鵑花外植體材料,第一步、 采北美杜鵑花的春季幼嫩莖段,用清水洗凈,放在超凈工作臺(tái)上,先用75% 的酒精消毒3 4秒,無(wú)菌水沖洗3次后,再用0.1%升汞消毒6 8分鐘,無(wú) 菌水沖洗3次;第二步、將處理后的幼嫩莖段,切成約lcm長(zhǎng),植入芽誘導(dǎo) 培養(yǎng)基中,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read+2.5mg ZT+0.35mg IAA,再加入瓊脂6.5g/L , 蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘,置于室溫為25'C 28°C,光照強(qiáng)度2000 50001ux,光照時(shí)間每天12小時(shí)的培養(yǎng)條件下,進(jìn)行芽 誘導(dǎo)培養(yǎng),30天后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)基為Read+4.5mgZT+0.60 mg IAA,再加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后經(jīng)高壓滅菌 15 20分鐘,培養(yǎng)條件同上,進(jìn)行增殖培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為60天;第三步、生 根培養(yǎng),切取約3cm高的杜鵑花健壯苗,在無(wú)菌條件下植入生根培養(yǎng)基中, 生根培養(yǎng)基為Read+0.35mg NAA,再加入瓊脂6.5g/L ,蔗糖20g/L, PH值 為5.4,裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘,培養(yǎng)條件同上,進(jìn)行生根培養(yǎng),培養(yǎng) 時(shí)間為45天;第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)至0.5cm時(shí),洗凈根部瓊脂,移至 粗沙中, 一周后,移至草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中,煉苗的混合基質(zhì)中的 草炭土和珍珠巖的比例為2: 1, 45天后移至大田,遮蔭一周即可。
實(shí)施例3
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,原料是杜鵑花外植體材料,第一步、 采北美杜鵑花的春季幼嫩葉片,用清水洗凈,放在超凈工作臺(tái)上,先用75% 的酒精消毒3 4秒,無(wú)菌水沖洗3次后,再用0.1%升汞消毒6 8分鐘,無(wú)菌水沖洗3次;第二步、將處理后的春季幼嫩葉片,切成約lci^大小方塊, 植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read+3.0mgZT+0.45mglAA,再加 入瓊脂6.5g/L ,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘, 置于室溫為25T: 28°C,光照強(qiáng)度2000 50001ux ,光照時(shí)間每天12小時(shí)的 培養(yǎng)條件下,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng),30天后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)基為-Read+5.5mgZT+0.80mglAA,再加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L, PH值為5.4, 裝瓶后經(jīng)高壓滅菌15 20分鐘,培養(yǎng)條件同上,進(jìn)行增殖培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為 60天;第三步、生根培養(yǎng),切取約3cm高的杜鵑花健壯苗,在無(wú)菌條件下植 入生根培養(yǎng)基中,生根培養(yǎng)基為Read+0.5mgNAA,再加入瓊脂6.5g/L ,蔗 糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘,培養(yǎng)條件同上,進(jìn)行 生根培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為45天;第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)至0.5cm時(shí),洗凈 根部瓊脂,移至粗沙中, 一周后,移至草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中,煉苗 的混合基質(zhì)中的草炭土和珍珠巖的比例為2: 1。
45天后移至大田,遮蔭一
周即可。
權(quán)利要求
1、一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法原料是杜鵑花外植體材料,其特征在于第一步、采北美杜鵑花外植體材料,用清水洗凈,放在超凈工作臺(tái)上,先用75%的酒精消毒6~8秒,無(wú)菌水沖洗3次,再用0.1%升汞消毒6~8分鐘,無(wú)菌水沖洗3次;第二步、無(wú)菌操作將處理后的材料,適當(dāng)剪切后植入無(wú)菌芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng),培養(yǎng)條件為室溫25~28℃,光照強(qiáng)度2000~5000lux,光照時(shí)間每天12小時(shí),30天后植入無(wú)菌增殖培養(yǎng)基中,進(jìn)行增殖培養(yǎng),培養(yǎng)條件同上,培養(yǎng)時(shí)間為60天;第三步、生根培養(yǎng),切取約2~3cm高的杜鵑健壯苗,植入無(wú)菌生根培養(yǎng)基,進(jìn)行生根培養(yǎng),培養(yǎng)條件同上,生根時(shí)間為45天;第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)約0.5cm時(shí),洗凈根部附著的培養(yǎng)基,移至無(wú)菌粗沙中,保持75%~85%空氣濕度,一周后,移至混合基質(zhì)中,45天后移至大田,遮蔭一周即可。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,其特征在于 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為Read十(1.5 ~3.0mg) ZT+(0.25 -0.45 mg)IAA,再加入瓊脂 6.5g/L ,蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,其特征在于-增殖培養(yǎng)基為Read+ (3.5~5.5 mg)ZT+(0.45 0.80mg)IAA,再加入瓊脂6.5g/L , 蔗糖20g/L, PH值為5.4,裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,其特征在于-生根培養(yǎng)基為Read+((U 0.5mg) NAA,再加入瓊脂6.5g/L,蔗糖20g/L, PH 值為5.4,裝瓶后高壓滅菌15 20分鐘。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,其特征在于 煉苗的混合基質(zhì)為草炭土和珍珠巖,其比例為(草炭土) 2: 1 (珍珠巖)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法,其特征在于-北美杜驟花外植體材料為冬芽、春季幼嫩莖段、春季幼嫩葉片。
全文摘要
一種北美杜鵑花的組織培養(yǎng)方法第一步、采北美杜鵑花外植體材料,處理后放在超凈工作臺(tái)上,先用75%的酒精消毒6~8秒,無(wú)菌水沖洗3次,再用0.1%升汞消毒6~8分鐘,無(wú)菌水沖洗3次;第二步、將無(wú)菌操作剪切后的材料,植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng),30天后植入增殖培養(yǎng)基中,進(jìn)行增殖培養(yǎng)60天;第三步、切取約2~3cm高的杜鵑健壯苗,植入生根培養(yǎng)基45天,第四步、待杜鵑花苗生根長(zhǎng)約0.5cm時(shí),洗凈根部附著的培養(yǎng)基,移至無(wú)菌粗沙中,保持75%~85%空氣濕度,一周后,移入草炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中,45天后移至大田,遮蔭一周。本發(fā)明可在6-7個(gè)月內(nèi)實(shí)現(xiàn)工廠化育苗,并大批量生產(chǎn)整齊一致的杜鵑花苗木。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101292628SQ200810049998
公開(kāi)日2008年10月29日 申請(qǐng)日期2008年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月11日
發(fā)明者傅建敏, 夏士文, 孫志強(qiáng), 李樹戰(zhàn), 李福海, 李芳東, 杜蘭英, 楊紹彬, 金世海 申請(qǐng)人:國(guó)家林業(yè)局泡桐研究開(kāi)發(fā)中心