專利名稱：利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種農(nóng)用生物殺菌劑，特別是利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，屬農(nóng)用微生物殺菌劑技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在一個(gè)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國內(nèi)，每年收獲農(nóng)作物后的秸桿可高達(dá)上億噸，這是一項(xiàng)可回收利用的珍貴資源。中國專利200510012912.1公開過一種以玉米秸稈為原料生產(chǎn)木霉生物殺菌劑的制備方法，該方法改變制備木霉殺菌劑需要使用玉米粉、糖蜜、麥麩等價(jià)格較貴的原料的狀況，利用秸桿等廉價(jià)原料制備木霉殺菌劑，既可以變廢為寶解決秸桿利用問題，又可以使用低價(jià)環(huán)保的木霉殺菌劑防治病害，收到了較好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。但是這種方法存有下列不足之處1.在固體發(fā)酵階段木霉分生孢子的產(chǎn)孢量較低，2.固體發(fā)酵物木霉分生孢子收集的工序繁復(fù)，上述問題制約了木霉素高效生產(chǎn)，也影響到該方法的廣泛推廣，故有待于進(jìn)一步改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明用于解決上述已有技術(shù)之缺陷而提供一種利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，該方法可以大幅度增加固體發(fā)酵時(shí)木霉分生孢子生成量，該方法還省去了木霉分生孢子收集的繁復(fù)工序。
本發(fā)明所稱問題是通過以下技術(shù)方案解決的一種利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，其特別之處是，它以玉米秸桿粉為原料按照如下步驟制備a.原料加工選擇無霉變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分麩皮0.5-0.8克，(NH4)2SO40.2-0.4克，KH2PO40.1-0.3克，CaCO30.1-0.3克，葡萄糖1-3克，以上述物質(zhì)配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基100毫升，調(diào)整液體的PH值為5.5-6，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻后接入篩選好的拮抗性木霉菌種，于26-28℃振蕩培養(yǎng)36-48小時(shí)，停止培養(yǎng)備用；
c.固體發(fā)酵取粉碎好的玉米秸稈粉8-10克，(NH4)2SO40.12-0.14克，MgSO40.002-0.004克，KH2PO40.004-0.006克，柿葉提取物0.004-0.005克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質(zhì)加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻后接入步驟b的1-2毫升液體培養(yǎng)液，攪拌均勻，放于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中，保持濕度65～85％進(jìn)行固體培養(yǎng)96小時(shí)，培養(yǎng)好的固體發(fā)酵物料在不高于40℃環(huán)境中干燥后備用；d.可濕性粉劑的制備把風(fēng)干好的固體發(fā)酵物40-50克，WLNPK2-3克，D5001-2克，潤濕劑3-4克，填料(硅藻土)40-50克用氣流粉碎機(jī)粉碎至325目，再用混合設(shè)備充分混合均勻，即制備木霉菌可濕性粉劑。
上述利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，所述柿葉提取物的提取工藝如下把干燥無霉變的柿子葉15-20克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計(jì)，加入30％的酒精液700-800毫升，使液面超過物料，然后加熱到70-80℃提取2-3小時(shí)，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然后用蒸發(fā)器蒸發(fā)，回收酒精，再把蒸發(fā)剩余物料放入干燥箱，在100-110℃烘成干粉備用。
上述利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，所述拮抗性木霉菌種為綠色木霉，并經(jīng)紫外光照射誘變選育。
本發(fā)明使用廉價(jià)的玉米秸稈粉為原料，替代目前使用的淀粉等類原料，采用液-固兩相發(fā)酵工藝，制備生物殺菌劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下創(chuàng)新之處1.添加少量的柿葉提取物，可促使木霉菌生物量大幅提高，使固體發(fā)酵物的木霉分生孢子產(chǎn)量提高5倍；2.省去了固體發(fā)酵物木霉分生孢子收集的繁復(fù)工序，該方法把固體發(fā)酵物直接粉碎，把沒有利用的纖維素粉碎后作為可濕性粉劑的填料，既降低成本，又可以作為噴施藥液中的木霉孢子萌發(fā)和生長的營養(yǎng)物質(zhì)，提高藥劑的防治效果，提高了制備木霉菌的生產(chǎn)效率。本發(fā)明對人畜和生態(tài)環(huán)境無害，無殘留，不產(chǎn)生抗藥性。采用玉米秸稈粉為主要原料，生產(chǎn)成本低于化學(xué)農(nóng)藥多菌靈，速克靈等。本發(fā)明還可以消耗大量玉米秸稈，不僅避免因焚燒玉米秸稈造成的大氣污染，還可以變廢為寶，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，是發(fā)展高效，綠色，生態(tài)農(nóng)業(yè)理想的生物農(nóng)藥。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明在木霉菌固體發(fā)酵時(shí)，添加少量柿葉提取物，該物質(zhì)為類磺酮物質(zhì)，可促使木霉菌生物量大幅提高，試驗(yàn)表明，添加柿葉提取物后，固體發(fā)酵的木霉分生孢子產(chǎn)量提高近5倍，因而大幅提高了物料利用率和生產(chǎn)效益。此外，現(xiàn)有技術(shù)中固體發(fā)酵物木霉分生孢子收集的工序繁復(fù)，不便于操作，本發(fā)明把固體發(fā)酵物直接粉碎，將沒有利用的纖維素粉碎后既可作為可濕性粉劑的填料，降低惰性填料的使用量，降低成本；又可以作為噴施藥液中的木霉孢子萌發(fā)和生長的營養(yǎng)物質(zhì)，提高藥劑的防治效果。但由于固體發(fā)酵物中除了木霉分生孢子外，大部分是沒有被利用的纖維素粉，需用分散劑使其在配制藥液時(shí)均勻分散在水中。本發(fā)明采用南京某科技有限公司生產(chǎn)的WLNPK和D500兩種產(chǎn)品作為復(fù)合分散劑，分散效果較好。
以下提供幾個(gè)具體實(shí)施例實(shí)施例1.
a.原料加工選擇無霉變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分麩皮0.5克，(NH4)2SO40.2克，KH2PO40.2克，CaCO30.1克，葡萄糖2克，以上述物質(zhì)配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基100毫升，調(diào)整液體的PH值為5.5，高壓滅菌35分鐘，待物料冷卻后接入篩選好的拮抗性木霉菌種，于28℃振蕩培養(yǎng)36小時(shí)，停止培養(yǎng)備用；c.固體發(fā)酵取粉碎好的玉米秸稈粉8克，(NH4)2SO40.12克，MgSO40.002克，KH2PO40.004克，柿葉提取物0.004克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質(zhì)加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌35分鐘，待物料冷卻后接入步驟b的1.5毫升液體培養(yǎng)液，攪拌均勻，放于30℃的恒溫培養(yǎng)箱中，保持濕度65％進(jìn)行固體培養(yǎng)96小時(shí)。培養(yǎng)好的固體發(fā)酵物料在不高于40℃環(huán)境中干燥后備用；d.可濕性粉劑的制備把風(fēng)干好的固體發(fā)酵物40克，WLNPK 2克，D500 1克，潤濕劑3克，填料(硅藻土)40克用氣流粉碎機(jī)粉碎至325目，再用混合設(shè)備充分混合均勻，即制備木霉菌可濕性粉劑。
柿葉提取物的提取工藝如下把干燥無霉變的柿子葉15克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計(jì)，加入30％的酒精液700毫升，使液面超過物料，然后加熱到70℃提取3小時(shí)，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然后用蒸發(fā)器蒸發(fā)，回收酒精。再把蒸發(fā)剩余物料放入干燥箱，在105℃左右烘成干粉備用。
實(shí)施例2.
a.原料加工選擇無霉變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分麩皮0.8克，(NH4)2SO40.2克，KH2PO40.3克，CaCO30.3克，葡萄糖3克，以上述物質(zhì)配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基100毫升，調(diào)整液體的PH值為6，高壓滅菌40分鐘，待物料冷卻后接入篩選好的拮抗性木霉菌種，于26℃振蕩培養(yǎng)45小時(shí)，停止培養(yǎng)備用；
c.固體發(fā)酵取粉碎好的玉米秸稈粉9克，(NH4)2SO40.13克，MgSO40.003克，KH2PO40.006克，柿葉提取物0.005克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質(zhì)加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌40分鐘，待物料冷卻后接入步驟b的2毫升液體培養(yǎng)液，攪拌均勻，放于30℃的恒溫培養(yǎng)箱中，保持濕度75％進(jìn)行固體培養(yǎng)96小時(shí)。培養(yǎng)好的固體發(fā)酵物料在不高于40℃環(huán)境中干燥后備用；d.可濕性粉劑的制備把風(fēng)干好的固體發(fā)酵物50克，WLNPK 3克，D500 2克，潤濕劑3.5克，填料(硅藻土)50克用氣流粉碎機(jī)粉碎至325目，再用混合設(shè)備充分混合均勻，即制備木霉菌可濕性粉劑。
柿葉提取物的提取工藝如下把干燥無霉變的柿子葉18克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計(jì)，加入30％的酒精液750毫升，使液面超過物料，然后加熱到80℃提取2小時(shí)，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然后用蒸發(fā)器蒸發(fā)，回收酒精。再把蒸發(fā)剩余物料放入干燥箱，在100℃左右烘成干粉備用。
實(shí)施例3.
a.原料加工選擇無霉變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀備用；b.液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分麩皮0.7克，(NH4)2SO40.3克，KH2PO40.1克，CaCO30.2克，葡萄糖1克，以上述物質(zhì)配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基100毫升，調(diào)整液體的PH值為6，高壓滅菌30分鐘，待物料冷卻后接入篩選好的拮抗性木霉菌種，于27℃振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，停止培養(yǎng)備用；c.固體發(fā)酵取粉碎好的玉米秸稈粉10克，(NH4)2SO40.14克，MgSO40.004克，KH2PO40.0045克，柿葉提取物0.0045克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質(zhì)加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，蓋好瓶塞，高壓滅菌30分鐘，待物料冷卻后接入步驟b的1毫升液體培養(yǎng)液，攪拌均勻，放于30℃的恒溫培養(yǎng)箱中，保持濕度80％進(jìn)行固體培養(yǎng)96小時(shí)。培養(yǎng)好的固體發(fā)酵物料在不高于40℃環(huán)境中干燥后備用；d.可濕性粉劑的制備把風(fēng)干好的固體發(fā)酵物45克，WLNPK 2.5克，D500 1.5克，潤濕劑4克，填料(硅藻土)45克用氣流粉碎機(jī)粉碎至325目，再用混合設(shè)備充分混合均勻，即制備木霉菌可濕性粉劑。
柿葉提取物的提取工藝如下把干燥無霉變的柿子葉20克放入1000毫升兩口瓶中，一口連接冷凝器回收酒精，一口接溫度計(jì)，加入30％的酒精液800毫升，使液面超過物料，然后加熱到75℃提取2.5小時(shí)，倒出提取過的柿葉，把提取液過濾，然后用蒸發(fā)器蒸發(fā)，回收酒精。再把蒸發(fā)剩余物料放入干燥箱，在110℃左右烘成干粉備用。
本發(fā)明中所用拮抗性木霉菌種為綠色木霉，并經(jīng)紫外光照射誘變選育。所謂紫外光照射誘變選育，是指按如下工藝進(jìn)行的選育先制備PDA(土豆200克，葡萄糖20克，瓊脂18克，水1000ml)培養(yǎng)基平板，把拮抗性木霉菌種接種在平板上，在25℃恒溫培養(yǎng)5天產(chǎn)生綠色木霉分生孢子。加滅菌水10毫升洗脫孢子，制成濃度為106/ml個(gè)孢子的懸浮液。取PDA平板，每板吸取0.1毫升懸浮液，均勻涂在平板表面，放在恒溫培養(yǎng)箱中在25℃恒溫培養(yǎng)一天，然后在蔽光條件下，30瓦紫外燈，距離燈管30cm處照射80分鐘。然后用黑紙包好，放在4℃培養(yǎng)箱中低溫培養(yǎng)12小時(shí)。再放入25℃恒溫培養(yǎng)黑暗。3天后選取生長快速的菌株，接入PDA培養(yǎng)基純化培養(yǎng)，作為下次紫外誘變的菌種。直到選出拮抗性好，能很好分解纖維素的木霉菌株。
本發(fā)明對農(nóng)作物及經(jīng)濟(jì)作物的真菌性土傳病害如灰霉病、白粉病、枯萎病、霜霉病等有很好的防治效果(60-80％)?？梢栽诓『Πl(fā)生初期稀釋800倍液噴施，也可以灌根使用。每畝地用量300克。除了可以有效地防治農(nóng)作物葉面病害外，還可以明顯促進(jìn)植物生長，增加農(nóng)作物產(chǎn)量10％。
權(quán)利要求
1.一種利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，其特征在于它以玉米秸桿粉為原料并按照如下步驟制備a.原料加工選擇無霉變玉米秸稈，粉碎成20目粉狀；b.液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分麩皮0.5-0.8克，(NH4)2SO40.2-0.4克，KH2PO40.1-0.3克，CaCO30.1-0.3克，葡萄糖1-3克，以上述物質(zhì)配制液體發(fā)酵培養(yǎng)基100毫升，調(diào)整液體的PH值為5.5-6，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻后接入篩選好的拮抗性木霉菌種，于26-28℃振蕩培養(yǎng)36-48小時(shí)，停止培養(yǎng)備用；c.固體發(fā)酵取粉碎好的玉米秸稈粉8-10克，(NH4)2SO40.12-0.14克，MgSO40.002-0.004克，KH2PO40.004-0.006克，柿葉提取物0.004-0.005克，其中，柿葉提取物先用5毫升酒精溶解，把上述物質(zhì)加200毫升水溶解，再放入玉米秸稈粉，攪拌均勻，高壓滅菌30-40分鐘，待物料冷卻后接入步驟b的1-2毫升液體培養(yǎng)液，攪拌均勻，放于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中，保持濕度65～80％進(jìn)行固體培養(yǎng)96小時(shí)，培養(yǎng)好的固體發(fā)酵物料在不高于40℃環(huán)境中干燥后備用；d.可濕性粉劑的制備把風(fēng)干好的固體發(fā)酵物40-50克，WLNPK2-3克，D500 1-2克，潤濕劑3-4克，填料硅藻土40-50克用氣流粉碎機(jī)粉碎至325目，再用混合設(shè)備充分混合均勻，即制備木霉菌可濕性粉劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，其特征在于所述柿葉物按如下工藝提取把干燥無霉變的柿子葉15-20克放入1000毫升兩口瓶中，加入30％的酒精液700-800毫升，使液面超過物料，然后加熱到70-80℃提取2-3小時(shí)，把提取液過濾，然后用蒸發(fā)器蒸發(fā)，回收酒精，再把蒸發(fā)剩余物料放入干燥箱，在100-110℃烘成干粉備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，其特征在于所述拮抗性木霉菌種為綠色木霉，并經(jīng)紫外光照射誘變選育。
全文摘要
一種利用玉米秸稈制備木霉菌可濕性粉劑的方法，屬農(nóng)用微生物殺菌劑技術(shù)領(lǐng)域，用于解決提高制備效率和產(chǎn)品性能的問題。其技術(shù)方案是，它以玉米秸桿粉為原料經(jīng)原料加工、液體發(fā)酵、固體發(fā)酵、可濕性粉劑的制備等步驟制成，其中，在固體發(fā)酵時(shí)添加柿葉提取物促使木霉菌生物量大幅提高，并將固體發(fā)酵物添加WLNPK、D500、潤濕劑、填料等直接粉碎，省去了了固體發(fā)酵物木霉分生孢子收集的繁復(fù)工序。本發(fā)明提高了利用玉米秸稈制備木霉菌的生產(chǎn)效率，使該項(xiàng)技術(shù)更便于推廣應(yīng)用。本發(fā)明對人畜和生態(tài)環(huán)境無害，無殘留，不產(chǎn)生抗藥性，生產(chǎn)成本低于化學(xué)農(nóng)藥多菌靈，速克靈等，還可以變廢為寶，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)A01N25/14GK101044864SQ200710061668
公開日2007年10月3日 申請日期2007年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月6日
發(fā)明者田連生, 陳菲, 高海霞, 單旭輝 申請人:田連生