專利名稱：：甘薯離體培養(yǎng)不定根生芽方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于植物學(xué)領(lǐng)域；更具體的，本發(fā)明涉及甘薯離體培養(yǎng)不定根生芽方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：甘薯屬旋花科，甘薯屬，甘薯種，為蔓生性草本植物。甘薯植株可分為根、莖、葉、花、果實、種子等部分。甘薯是一種重要的糧食作物，也是食品加工業(yè)的重要原料，營養(yǎng)價值豐富。因此，甘薯品種優(yōu)化以及培植、再生技術(shù)的研究具有重要的意義。目前，甘薯離體植株再生主要通過體細(xì)胞胚胎發(fā)生的途徑實現(xiàn)，這個過程對基因型依賴性很強(qiáng)，并且非常復(fù)雜、耗時。因此，需要探索利用其它途徑快速有效地迸行甘薯植株再生。另一方面，由于遺傳改良進(jìn)展緩慢，甘薯的轉(zhuǎn)基因技術(shù)逐漸成為研究的熱點。甘薯的遺傳背景較為復(fù)雜，是異源六倍體作物，由常規(guī)育種技術(shù)引入一些質(zhì)量性狀基因的可能性很小，效果也欠佳。盡管目前基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的甘薯遺傳轉(zhuǎn)化已取得了一定的進(jìn)展，但還有許多亟待解決的問題。如缺乏一個有效的遺傳轉(zhuǎn)化體系，轉(zhuǎn)化效率低，獲得的轉(zhuǎn)基因植株數(shù)量有限，還不能應(yīng)用于生產(chǎn)；對基因型有比較強(qiáng)的依賴性，到目前，只有栗子香，新大紫，高系14，Jewel,Jonathan等少數(shù)幾個生產(chǎn)上非主栽品種獲得了轉(zhuǎn)基因植株，這些品種均不是主載品種，且它們還不能應(yīng)用于生產(chǎn)。此外，很多研究者在轉(zhuǎn)基因后經(jīng)常得到甘薯的再生根系而得不到轉(zhuǎn)基因植株。因此，本領(lǐng)域迫切需要找到一種方便快捷的甘薯植株再生培養(yǎng)方法，以用于甘薯優(yōu)良品種的研發(fā)或轉(zhuǎn)基因植株的制備。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供甘薯離體培養(yǎng)不定根生芽方法及其應(yīng)用。所述培養(yǎng)方法適合于大多數(shù)的甘薯品種。在本發(fā)明的第一方面，提供一種產(chǎn)生甘薯芽方法，所述的方法包括步驟(1)在甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上培養(yǎng)甘薯外植體，產(chǎn)生甘薯不定根；(2)將步驟(1)獲得的甘薯不定根置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上，從而從根系上生成甘薯芽。(1)中，離體條件下在甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上培養(yǎng)甘薯外植體。所述方法還包括步驟從根系上分離甘薯芽。在步驟(1)中，所述的甘薯外植體選自甘薯的莖段、所述的莖段獲自甘薯的苗尖。在步驟(2)中，將甘薯不定根倒置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上。在步驟(1)中，在扦插前，還包括步驟將甘薯外植體優(yōu)選的，在步驟在另一優(yōu)選例中在另一優(yōu)選例中葉、葉柄或根。在另一優(yōu)選例中在另一優(yōu)選例中在另一優(yōu)選例中消毒滅菌。在另一優(yōu)選例中，在步驟(1)中，培養(yǎng)甘薯外植體io-ioo天(優(yōu)選的為20-80天，進(jìn)一步優(yōu)選的為40-70天)，從而產(chǎn)生甘薯不定根。在另一優(yōu)選例中，在步驟(2)中，培養(yǎng)甘薯不定根10-100天(優(yōu)選的為20-80天，進(jìn)一步優(yōu)選的為40-70天)，從而從根系上生成甘薯芽。在另一優(yōu)選例中，在步驟(3)之后，還包括步驟(4):將步驟(3)獲得的甘薯芽無性繁殖擴(kuò)繁后移栽到大田中。在另一優(yōu)選例中，所述的培養(yǎng)基質(zhì)是甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基。在另一優(yōu)選例中，所述的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基是MS基本培養(yǎng)基；并且，所述的MS基本培養(yǎng)基中，維生素Bl的含量是O.1-0.9mg/l(優(yōu)選0.2-0,6mg/1，如0.4mg/1);蔗糖的含量是10-90g/l(優(yōu)選20-40g/l，如30g/l)。在另一優(yōu)選例中，在步驟(1)之前，還包括步驟將外源基因轉(zhuǎn)入甘薯外植體。在本發(fā)明的第二方面，提供一種制備轉(zhuǎn)基因甘薯植株的方法，所述的方法包括(1)將外源基因轉(zhuǎn)入甘薯組織或細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)化入外源基因的甘薯組織或細(xì)胞；(2)培養(yǎng)步驟(1)獲得的轉(zhuǎn)入了外源基因的甘薯組織或細(xì)胞，產(chǎn)生甘薯不定根；(3)將步驟(2)獲得的甘薯不定根置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上，從而從根系上生成甘薯芽；和(4)從根系上分離甘薯芽，培養(yǎng)該甘薯芽，獲得甘薯轉(zhuǎn)基因植株。在另一優(yōu)選例中，所述的外源基因選自(但不限于)性狀改良基因、結(jié)構(gòu)基因、抗蟲基因、抗病毒基因或抗病基因等。在另一優(yōu)選例中，在步驟(3)中，將甘薯不定根倒置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上。在另一優(yōu)選例中，在步驟(l)中，將外源基因經(jīng)根癌農(nóng)桿菌或基因槍介導(dǎo)轉(zhuǎn)入甘薯外植體。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。圖1顯示了甘薯的莖段扦插到培養(yǎng)基中約2個月時根系的生長情況(從培養(yǎng)瓶中取出)。圖2顯示了在扦插2個月后培養(yǎng)瓶中取出的植株的根系(去除培養(yǎng)基后)。圖3顯示了將根系倒置于新的培養(yǎng)基后，生長出甘薯芽。圖4顯示了將從根系上分離出的甘薯芽。圖5顯示了被農(nóng)桿菌侵染而部分表達(dá)GUS基因的外植體，其中箭頭所示部位為藍(lán)色(即表達(dá)GUS基因)。具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，首次找到一種使甘薯不定根再生出芽的方法，使用該方法可方便地獲得甘薯芽，該甘薯芽通過無性繁殖可以得到大量甘薯植株。由于甘薯在生產(chǎn)上是以塊根保存種質(zhì)的，只有在塊根上才能出芽，因此本發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)對甘薯的離體植株再生培養(yǎng)有著非常重要的意義；并且，本發(fā)明的方法為甘薯脫毒及遺傳轉(zhuǎn)化避免復(fù)雜的組織培養(yǎng)程序開辟了新方法。在此基礎(chǔ)上完成本發(fā)明。產(chǎn)生甘薯芽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生甘薯芽方法，所述的方法包括步驟(1)將甘薯外植體扦插到甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上，培養(yǎng)該甘薯外植體，產(chǎn)生甘薯不定根；(2)將步驟(1)獲得的甘薯不定根置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上，從而從根系上生成甘薯芽；和(3)從根系上分離甘薯芽。本發(fā)明對于步驟(1)中選擇的外植體沒有特別的限制，只要其在被扦插到甘薯培養(yǎng)基上后能夠生長出根系，其也可以是一些經(jīng)過遺傳操作的再生組織(如經(jīng)過誘導(dǎo)分化和/或轉(zhuǎn)基因處理的細(xì)胞團(tuán))。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的外植體選自甘薯的莖段、葉或塊根(薯塊)。甘薯的莖段可以是從甘薯試管苗的莖蔓上切取的片段，通常莖段的直徑是0.2-0.5cm，長度是1-2cm。當(dāng)利用甘薯的葉進(jìn)行扦插時，可以是整體的葉，也可以是部分葉，如葉柄或葉片。作為本發(fā)明更優(yōu)選的方式，采用甘薯的苗尖(屬于甘薯的莖段)進(jìn)行扦插。采用甘薯苗尖的優(yōu)點是苗尖病毒含量較少或沒有。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，在扦插前，還包括步驟將甘薯外植體進(jìn)行消毒滅菌。經(jīng)消毒滅菌處理后的甘薯外植體可大大降低發(fā)生污染的可能，從而提高出芽率。在扦插到培養(yǎng)基中后，對于甘薯外植體的培養(yǎng)時間沒有特別的限制，這主要取決于甘薯外植體上不定根的生長速度。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，培養(yǎng)甘薯外植體10-IOO天，從而產(chǎn)生甘薯不定根。更優(yōu)選的培養(yǎng)時間為20-80天，進(jìn)一步優(yōu)選的培養(yǎng)時間為40-70天。在上述培養(yǎng)時間內(nèi)，甘薯外植體上可生長出足夠的不定根，用于后續(xù)步驟。在獲得不定根后，培養(yǎng)甘薯不定根10-100天，從而從根系上生成甘薯芽。優(yōu)選的培養(yǎng)時間為20-80天，進(jìn)一步優(yōu)選的培養(yǎng)時間為40-70天。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，在步驟(2)中，將甘薯不定根倒置于培養(yǎng)基質(zhì)上，倒置的優(yōu)點是可以使本來位于下面的根系充分地與空氣接觸，從而有利于長芽。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，當(dāng)將甘薯不定根從原來的培養(yǎng)容器中取出后，不去除其上殘留的培養(yǎng)基質(zhì)，直接倒置于新鮮培養(yǎng)基質(zhì)上，這樣，使得根系上還殘留有營養(yǎng)物質(zhì)，從而更有利于根系的長芽，最大程度地不對根系造成傷害，操作也更簡化。在根系上產(chǎn)生甘薯芽后，可繼續(xù)在培養(yǎng)基質(zhì)上培養(yǎng)甘薯芽，使之?dāng)U繁得到大量甘薯植株，或者可將獲得的甘薯芽移栽到大田中進(jìn)行培植。培養(yǎng)基質(zhì)本發(fā)明對于用于生成不定根的甘薯培養(yǎng)基質(zhì)沒有特別的限制，只要其可用于培養(yǎng)甘薯外植體并使之生成不定根即可。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的培養(yǎng)基質(zhì)是甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基。更優(yōu)選的，所述的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基是提高了維生素B1(VB1)和蔗糖含量的MS基本培養(yǎng)基。所述的MS基本培養(yǎng)基的配方可以是大量元素440mg/LCaCl22H20、170mg/LKH2P04、1900mg/LKN03、370mg/LMgSO,7H20、1650mg/L,O:"微量元素0.025mg/LCoCl26H20、0.025mg/LCuS045H20、0.25mg/LNa2Mo042H20、6.2mg/LH3B03、0.83mg/LKI、16.9mg/LMnS04H20、8.6mg/LZnS(X7H20;鐵鹽37.25mg/LNa2EDTA、27.85mg/LFeS047H20;有機(jī)元素2mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.5mg/L煙酸、0.5rag/L維生素B6(VB6)、0.lmg/L維生素Bl(VBl)。在甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基中，維生素B1的含量是0.1-0.9mg/L;優(yōu)選的含量是0.2-0.6mg/L，如0.4rag/L。在甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基中，蔗糖的含量是10-90g/L;優(yōu)選的含量是20-40g/L，如30g/L。制備轉(zhuǎn)基因植株由于遺傳背景較為復(fù)雜，大多數(shù)品系的甘薯的轉(zhuǎn)基因植株難以獲得，并且在轉(zhuǎn)基因過程中普遍存在生根容易出芽難的問題。通過本發(fā)明的方法可改善本領(lǐng)域的上述現(xiàn)狀，利用轉(zhuǎn)基因過程中產(chǎn)生的根進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得甘薯芽，進(jìn)一步獲得轉(zhuǎn)基因甘薯植株。因此，本發(fā)明提供一種制備轉(zhuǎn)基因甘薯植株的方法，所述的方法包括(1)將外源基因轉(zhuǎn)入甘薯組織或細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)化入外源基因的甘薯組織或細(xì)胞；(2)培養(yǎng)步驟(1)獲得的轉(zhuǎn)入了外源基因的甘薯組織或細(xì)胞，產(chǎn)生甘薯不定根；(3)將步驟(2)獲得的甘薯不定根置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上，從而從根系上生成甘薯芽；和'(4)從根系上分離甘薯芽，培養(yǎng)該甘薯芽，獲得甘薯轉(zhuǎn)基因植株。所述的外源基因通常是一些對于改善甘薯的品質(zhì)有益的基因，或者是一些對于甘薯抗病、抗蟲、抗病毒等有用的基因?？筛鶕?jù)所培育的甘薯的特性及所需改良的性狀來選擇外源基因。所述的外源基因可以是獲自甘薯的，也可以是獲自其它生物的，如微生物、植物、動物等?？刹捎贸Ｒ?guī)的轉(zhuǎn)基因方法將外源基因轉(zhuǎn)入甘薯組織或細(xì)胞中，例如農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化、基因槍轉(zhuǎn)化法、電擊法等方法。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是本領(lǐng)域人員所熟知的，本發(fā)明對此沒有特別限制。本發(fā)明的主要優(yōu)點如下(1)首次揭示一種可方便地使甘薯不定根再生出芽的方法，對甘薯的再生培養(yǎng)有著非常重要的意義；并且，本發(fā)明的方法為甘薯脫毒及遺傳轉(zhuǎn)化避免復(fù)雜的組織培養(yǎng)程序開辟了新方法。(2)本發(fā)明的方法可被用于甘薯轉(zhuǎn)基因植株的制備，直接利用甘薯的根系來發(fā)展甘薯芽，從而可改變以往甘薯轉(zhuǎn)基因植株培養(yǎng)困難、甘薯組織轉(zhuǎn)化體只長根不長芽的技術(shù)難題。(3)本發(fā)明的方法適用性廣，對于絕大多數(shù)品種的甘薯都是適用的。下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實驗室指南(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例1甘薯不定根生芽方法1.甘薯品系的選擇本發(fā)明人選擇了32個甘薯品系用于不定根生芽試驗，所選擇的品系如表1所列，這些品系均是本領(lǐng)域常規(guī)使用的。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.培養(yǎng)基的配制所用培養(yǎng)基為甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基，成分為MS基本培養(yǎng)基附加0.3mg/LVB1，蔗糖濃度提高到30g/L。其中，MS基本培養(yǎng)基的配方是大量元素440mg/LCaCl22H20、170mg/LKH2PO4、1900mg/L跳、370mg/LMgS047H20、1650rag/LNH4N03;微量元素0.025mg/LCoCl26H20、0.025mg/LCuS045H20、0.25rag/LNa2Mo042H20、6.2mg/LH3B03、0.83mg/LKI、16.9mg/LMnS04H20、8.6rag/L200710044453.4ZnS047H20;鐵鹽37.25mg/LNa2EDTA、27.85mg/LFeS047H20;有機(jī)元素2mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.5mg/L煙酸、0.5mg/L維生素B6(VB6)、0.lrag/L維生素B1(VB1)。將培養(yǎng)基平鋪于甘薯離體培養(yǎng)瓶(直徑40.5cra，高49cm)中，培養(yǎng)基的厚度是1.5-2.5cm。3.不定根生芽培植試驗①一次試驗分別取前述表l所列各甘薯品系的莖段(長約卜2cm，直徑0.2-0.5cra)，扦插至前述配制的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上，莖段位于培養(yǎng)基內(nèi)的部分為0.5-lcm，位于培養(yǎng)基表面上的部分為0.5-lcm。每培養(yǎng)瓶扦插的莖段數(shù)量為6-13個。培養(yǎng)幾天后，莖段下部會自然生根，并且根系逐漸發(fā)達(dá)，扦插到培養(yǎng)基中約2個月時根系的生長情況見圖l所示。在培養(yǎng)2個月后，培養(yǎng)基中根系生長密集。然后，除去培養(yǎng)瓶中除根以外的其它組織，將所得根系連帶培養(yǎng)基從培養(yǎng)瓶中取出，獲得根系(可在根系上保留或去除之前培養(yǎng)所殘留的培養(yǎng)基，優(yōu)選的是保留之前培養(yǎng)所殘留的培養(yǎng)基)，去除培養(yǎng)基后的根系如圖2所示。接著，將根系顛倒平鋪(即在原培養(yǎng)瓶中接近瓶底的根系位于上方，在原培養(yǎng)瓶中遠(yuǎn)離瓶底的根系位于下方)至新鮮的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上，再于2月后觀察是否出現(xiàn)芽體，并統(tǒng)計根系上芽體產(chǎn)生數(shù)目。圖3顯示了根系上產(chǎn)生芽體的情況；圖4顯示了從根系上分離出的甘薯芽，可將之移栽到另一培養(yǎng)基質(zhì)，使之繼續(xù)生長。葉源根系采用類似方法將單個葉片扦插至培養(yǎng)基生根就可以獲得。結(jié)果，各品系的根生芽的生長結(jié)果如表2所示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>當(dāng)根系上的芽長到長度約為lcm時，可將之移到培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，經(jīng)擴(kuò)繁后可以移栽到大田中。②二次試驗二次試驗選取一次試驗及其它試驗中未出芽品種加上一次試驗中未測試品種，甘薯芽的培植方法同一次試驗。結(jié)果，各品系的根生芽的生長結(jié)果如表3所示。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>上述實驗證實，在所研究的32個品系中，有21個品系可以從根組織上形成芽體。另外，本發(fā)明人以未出芽的編號為BOl、B02、B29和B32的甘薯品系重復(fù)進(jìn)行試驗。結(jié)果顯示，采用前述方法培植，這些品種也是可以出芽的。至目前為止，經(jīng)過兩次大批量的根生芽實驗和一些零散實驗，在所試32個甘薯品種中，本發(fā)明人已經(jīng)得到25個品種的由根系形成的株系，出芽率為78%(25/32)。只有B04(魯薯7號)、B07(寧27-17)、B18(徐薯18)、B20(魯薯8號)、B21(17—4)、B25(豫薯10號)、B27(ZT06-06)這7個品種還未觀察到芽的形成，其中B20(魯薯8號)和B25(79-26)是由于在培植過程中發(fā)生污染，還有幾個品種受材料數(shù)量限制，所以實際的出芽率應(yīng)大于計算值78%。以下幾個數(shù)據(jù)值得參考單次實驗出芽率按品種計算為50%(10/20)和61%(11/18)，按實驗瓶數(shù)計算為45%(14/31)和26%(18/68)，從理論上講，經(jīng)過多次實驗，有望拿到更多品系，甚至所有品系的根生苗株系。由上述結(jié)果可見，本發(fā)明的方法適用性廣，對于絕大多數(shù)品種的甘薯都是適用的。實施例2不同培養(yǎng)條件下生芽比較選擇長芽情況良好的蘇薯2號(B11)和泰薯6號(B22)作為試驗對象，驗證不同培養(yǎng)條件下生芽情況。培養(yǎng)條件h培養(yǎng)方法同實施例l，在獲得根系后，將根系顛倒地平鋪至新鮮的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件2:其它培養(yǎng)方法同實施例l,除了在獲得根系后，將根系非顛倒地平鋪(艮卩按照在原培養(yǎng)瓶中根系所處方向)至新鮮的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上。在根系被平鋪至新鮮培養(yǎng)基后的2個月后觀察是否出現(xiàn)芽體，并統(tǒng)計根系上芽體產(chǎn)生數(shù)目。蘇薯2號的測試結(jié)果如表4所示，泰薯6號的測試結(jié)果如表5所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由上述結(jié)果可見，將根系非顛倒平鋪培養(yǎng)，根系長芽較為困難，只是偶爾從根系上長出個別芽體；而將根系顛倒地進(jìn)行平鋪培養(yǎng)，根系長芽的幾率大大提咼°實施例3制備轉(zhuǎn)基因甘薯植株采用常規(guī)的方法，將pCAMBIA1301(購自CAMBIA公司，自帶GUS基因)表達(dá)載體導(dǎo)入到感受態(tài)的農(nóng)桿菌中，篩選陽性克隆，獲得導(dǎo)入了所述載體的農(nóng)桿菌。通過浸染法，利用導(dǎo)入了所述載體的農(nóng)桿菌浸染甘薯外植體，部分組織被侵染而表達(dá)GUS基因(顯示藍(lán)色)的外植體如圖5所示。通過抗性選擇篩選被農(nóng)桿菌浸染的細(xì)胞，其中一部分為胚性細(xì)胞(可分化)，將胚性細(xì)胞置于附加了lmg/LABA的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)約l個月后，將它們轉(zhuǎn)移到不含ABA的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上，這些胚性細(xì)胞可逐漸生長出根系。在根系生長到較為發(fā)達(dá)的時候，分離出這些根，倒置于甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上，使它們長出芽體，這些芽體可進(jìn)一步發(fā)展為轉(zhuǎn)基因植株。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù)實體或方法，若是與本申請的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。權(quán)利要求1.一種產(chǎn)生甘薯芽方法，其特征在于，所述的方法包括步驟(1)在甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上培養(yǎng)甘薯外植體，產(chǎn)生甘薯不定根；(2)將步驟(1)獲得的甘薯不定根置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上，從而從根系上生成甘薯芽。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述的甘薯外植體選自甘薯的莖段、葉、葉柄或塊根。3.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，將甘薯不定根倒置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上。4.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，在培養(yǎng)前，還包括步驟將甘薯外植體消毒滅菌。5.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，培養(yǎng)甘薯外植體10-100天，從而產(chǎn)生甘薯不定根。6.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，培養(yǎng)甘薯不定根10-100天，從而從根系上生成甘薯芽。7.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)基質(zhì)是甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的甘薯組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基是MS基本培養(yǎng)基；并且，所述的MS基本培養(yǎng)基中，維生素B1的含量是O.1-0.9mg/l;蔗糖的含量是10-90g/l。9.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在步驟(1)之前，還包括步驟將外源基因轉(zhuǎn)入甘薯外植體。10.—種制備轉(zhuǎn)基因甘薯植株的方法，其特征在于，所述的方法包括(1)將外源基因轉(zhuǎn)入甘薯組織或細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)化入外源基因的甘薯組織或細(xì)胞；(2)培養(yǎng)步驟(1)獲得的轉(zhuǎn)入了外源基因的甘薯組織或細(xì)胞，產(chǎn)生甘薯不定根；(3)將步驟(2)獲得的甘薯不定根置于甘薯培養(yǎng)基質(zhì)上，從而從根系上生成甘薯芽；和(4)從根系上分離甘薯芽，培養(yǎng)該甘薯芽，獲得甘薯轉(zhuǎn)基因植株。全文摘要本發(fā)明公開了一種利用甘薯離體培養(yǎng)不定根產(chǎn)生甘薯芽的方法。使用本發(fā)明的方法可方便地獲得甘薯芽，該甘薯芽通過無性繁殖可以得到大量甘薯植株。本發(fā)明的方法對甘薯的再生培養(yǎng)有著非常重要的意義，并且為甘薯脫毒及遺傳轉(zhuǎn)化避免復(fù)雜的組織培養(yǎng)程序開辟了新方法。并且，本發(fā)明的方法適用性廣，對于絕大多數(shù)甘薯品種都是適用的。文檔編號A01H4/00GK101356895SQ20071004445公開日2009年2月4日申請日期2007年8月1日優(yōu)先權(quán)日2007年8月1日發(fā)明者鵬張,李海霞,俊楊申請人:中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院