專利名稱：一種白色念珠菌感染模型及其構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別是用于細(xì)菌的致病機(jī)理、治療藥物篩選、觀察藥物的療效以及疫苗的保護(hù)效果評(píng)價(jià)的細(xì)菌感染疾病的動(dòng)物模型。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著廣譜抗生素、激素與免疫抑制劑的普遍應(yīng)用，以及腫瘤病人的放療、化療和其它獲得性免疫功能低下的患者(如艾滋病等)逐漸增多，而使內(nèi)臟、皮膚、粘膜被真菌感染者日益增多。白色念珠菌是一種常見的條件致病菌，其深層(系統(tǒng))感染危及病人生命，在使用抗真菌藥物進(jìn)行治療的情況下死亡率仍然很高。近數(shù)十年來(lái)白色念珠菌(Candida albicans)感染一直處于臨床真菌感染的第一位。被認(rèn)為是免疫系統(tǒng)薄弱病人的一個(gè)共同致死原因之一。因而對(duì)白色念珠菌感染的研究也逐漸增多。
為了研究白色念珠菌的感染機(jī)制和預(yù)防、治療方法，人們探討各種建立白色念珠菌感染動(dòng)物模型的方法，主要有小鼠、大鼠、家兔等動(dòng)物模型，使用的方法有腹腔注射、尾靜脈注射、口服、陰道內(nèi)注入、向角膜層間注入白色念珠菌、經(jīng)皮氣管穿刺法接種白念菌菌液、家兔耳緣靜脈注射法等。如1王志東.白念珠菌和新生隱球菌系統(tǒng)感染裸小鼠模型的建立[J].上海醫(yī)學(xué)2006.1期。介紹采用對(duì)裸小鼠腹部注射白念珠菌懸液的方法，建立了白念珠菌系統(tǒng)感染裸小鼠模型。
2.常山，等.IgY與雙歧桿菌防治小鼠白色念珠菌感染的研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)2003年2月第25卷第4期294-297頁(yè)。介紹了建立無(wú)特殊病原菌(Specific pathogen free，SPF)小鼠燒傷后口服白色念珠菌感染模型。
3.童向東，等.二聯(lián)活菌潔陰制劑治療念珠菌性陰道炎動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志2005年第15卷第10期1110-1112頁(yè)。將白色念珠菌懸液注入家兔陰道內(nèi)制造了陰道炎動(dòng)物模型。
4.劉敬，等.建立兔淺層白色念珠菌性角膜炎模型[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2004年8月，35(4)315-316頁(yè)。應(yīng)用角膜表層鏡片術(shù)，向角膜層間注入白色念珠菌性，建立角膜炎模型模型。
5.李軍，等.經(jīng)皮氣管穿刺法建立家兔白色念珠菌肺炎動(dòng)物模型[J].山東醫(yī)藥2005年第45卷第4期23-24頁(yè).經(jīng)皮氣管穿刺法接種白念菌菌液，建立家兔的肺炎動(dòng)物模型。
6.楊瓊，宋祥福，王桂云.系統(tǒng)性白色念珠菌感染小鼠動(dòng)物模型的研究[J]東北師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)2005年02期。介紹了經(jīng)小鼠尾靜脈直接注射白色念珠菌建立穩(wěn)定的系統(tǒng)性白色念珠菌感染的C57BL/6小鼠模型的方法。
7.陳建魁，等.實(shí)驗(yàn)性大鼠念珠菌病的血液學(xué)和生物化學(xué)指標(biāo)的觀察[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理15(1)19984-7頁(yè)。將白色念珠菌經(jīng)尾靜脈注入于大鼠體內(nèi)建立了全身感染動(dòng)物模型。
但是上述建立白色念珠菌感染的動(dòng)物模型的方法有不足之處，如上述例1、2中裸鼠和無(wú)特殊病原菌小鼠資源短缺，價(jià)格較貴，應(yīng)用起來(lái)比較困難；上述例4、5中動(dòng)物模型的制造需要手術(shù)等復(fù)雜操作；另外上述動(dòng)物模型的感染不易觀察，需要處死動(dòng)物進(jìn)行病理學(xué)觀察等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本的目的在于提供一種操作簡(jiǎn)單，易于觀察的建立白色念珠菌感染的動(dòng)物模型的方法，以克服目前白色念珠菌感染的動(dòng)物模型所存在的問題。
本發(fā)明的白色念珠菌感染的動(dòng)物模型，是將白色念珠菌注射于家兔(體重2.0～5.0Kg)耳部皮下(避開耳部動(dòng)、靜脈主干)，白色念珠菌濃度為1×105個(gè)孢子/ml～1×1010/ml，既可以耳部形成局部膿腫(耳部感染狀態(tài)局部紅腫、溫度增高，面積為0.5cm×1cm～5cm×7cm)，又可以通過血液循環(huán)感染全身臟器。操作簡(jiǎn)單，耳部局部膿腫易于觀察，兩只耳朵可以形成對(duì)照，同時(shí)，可以檢測(cè)全身臟器的感染情況，如腎臟、肝臟、肺臟、心臟等(感染狀態(tài)為臟器粟粒狀散在分布的膿腫灶，臟器充血、瘀腫)。為研究白色念珠菌感染的治療新方法和藥物提供了簡(jiǎn)單、方便的動(dòng)物模型。
根據(jù)以上所述白色念珠菌感染的動(dòng)物模型，可以是1.以耳部形成局部膿腫感染為主的白色念珠菌感染的動(dòng)物模型。
2.耳部局部形成膿腫，同時(shí)伴有全身臟器感染的白色念珠菌感染的動(dòng)物模型。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單，易于觀察的特性。下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。


圖1為家兔注射白色念珠菌菌液后的局部膿腫圖。
圖2腎臟感染圖，2-1為腎臟感染剖面圖，2-2為腎臟感染外部圖(白點(diǎn)為膿腫病灶)。
圖3肝臟感染圖(白點(diǎn)為膿腫病灶)。
圖4心臟感染圖(白點(diǎn)為膿腫病灶)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一將白色念珠菌(Candida albicans)菌株接種于沙氏固體培養(yǎng)基(Sabouraud’sbroth)上(成分葡萄糖40g，蛋白胨10g，瓊脂20g，溶于1000ml蒸餾水)，接種后37℃培養(yǎng)48小時(shí)，無(wú)菌條件下將無(wú)菌生理鹽水加入培養(yǎng)基表面，無(wú)菌白金耳挑取菌落，使之與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，以細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法用無(wú)菌生理鹽水配制成1×105個(gè)孢子/ml菌液，雄兔重3.75kg，雙側(cè)耳部備皮，左耳(避開耳部動(dòng)、靜脈主干)2％碘酒、75％酒精消毒，無(wú)菌注射1.0ml，24h后出現(xiàn)2cm×3cm的局部膿腫感染。
實(shí)施例二同實(shí)施例一的方法將白色念珠菌菌株接種、培養(yǎng)、與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×105.5個(gè)孢子/ml菌液，在重4.05kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出現(xiàn)2.5cm×3cm的局部膿腫感染。
實(shí)施例三同實(shí)施例一的方法將白色念珠菌菌株接種、培養(yǎng)、與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×106個(gè)孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出現(xiàn)3cm×4cm的局部膿腫感染。
實(shí)施例四同實(shí)施例一的方法將白色念珠菌菌株接種、培養(yǎng)、與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×106.5個(gè)孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出現(xiàn)3.5cm×4cm的局部膿腫感染。
實(shí)施例五同實(shí)施例一的方法將白色念珠菌菌株接種、培養(yǎng)、與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×107個(gè)孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出現(xiàn)3.5cm×5cm的局部膿腫感染，一周后處死家兔，進(jìn)行病理解剖，發(fā)現(xiàn)腎臟出現(xiàn)膿腫感染。此時(shí)，形成以耳部局部形成膿腫，同時(shí)伴有腎臟感染為主的全身臟器感染的動(dòng)物模型。
實(shí)施例六同實(shí)施例一的方法將白色念珠菌菌株接種、培養(yǎng)、與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×108個(gè)孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出現(xiàn)3.5cm×5cm的局部膿腫感染，一周后處死家兔，進(jìn)行病理解剖，發(fā)現(xiàn)腎臟、肝臟出現(xiàn)膿腫感染。此時(shí)，形成以耳部局部形成膿腫，同時(shí)伴有腎臟、肝臟等全身臟器感染的動(dòng)物模型。
實(shí)施例七同實(shí)施例一的方法將白色念珠菌菌株接種、培養(yǎng)、與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×109個(gè)孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出現(xiàn)3.5cm×5cm的局部膿腫感染，一周后處死家兔，進(jìn)行病理解剖，發(fā)現(xiàn)腎臟、肝臟出現(xiàn)膿腫感染。此時(shí)，形成以耳部局部形成膿腫，同時(shí)伴有腎臟、肝臟、肺臟等全身臟器感染的動(dòng)物模型。
實(shí)施例八同實(shí)施例一的方法將白色念珠菌菌株接種、培養(yǎng)、與無(wú)菌生理鹽水形成混懸液，離心，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×1010個(gè)孢子/ml菌液，在重3.75kg雄兔左耳注射1.0ml，24h后出現(xiàn)3.5cm×5cm的局部膿腫感染，一周后處死家兔，進(jìn)行病理解剖，發(fā)現(xiàn)腎臟、肝臟出現(xiàn)膿腫感染。此時(shí)，形成以耳部局部形成膿腫，同時(shí)伴有腎臟、肝臟、肺臟、心臟等全身臟器感染的動(dòng)物模型。
權(quán)利要求
1.一種白色念珠菌感染模型，其特征在于以家兔白色念珠菌感染的動(dòng)物模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種白色念珠菌感染模型，其特征在于以家兔耳部局部形成膿腫為主的白色念珠菌感染的動(dòng)物模型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種白色念珠菌感染模型，其特征在于以家兔耳部局部形成膿腫，同時(shí)伴有全身臟器感染的白色念珠菌感染的動(dòng)物模型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種白色念珠菌感染模型，其特征在于所述伴有全身臟器感染包括腎臟、肝臟、心臟、肺臟。
5.一種白色念珠菌感染模型的構(gòu)建方法，其特征在于是將白色念珠菌注射于家兔耳部皮下，白色念珠菌濃度為1×105/ml～1×1010/ml。
全文摘要
白色念珠菌感染的動(dòng)物模型，以耳部形成局部膿腫感染為主的白色念珠菌感染的動(dòng)物模型，以及同時(shí)伴有全身臟器感染的白色念珠菌感染的動(dòng)物模型。是將白色念珠菌注射于家兔耳部皮下，白色念珠菌濃度為1×10
文檔編號(hào)A01K67/027GK101078011SQ20071001034
公開日2007年11月28日 申請(qǐng)日期2007年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月5日
發(fā)明者劉為國(guó) 申請(qǐng)人:大連大學(xué)