一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置的制造方法
專利名稱:一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置的制造方法
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于：包括密閉式外管(12)和密閉式內(nèi)管(5)，密閉式內(nèi)管(5)設(shè)有內(nèi)管腔(1)和內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，密閉式外管(12)設(shè)有外管腔(10)和外過濾系統(tǒng)(13)，密閉式內(nèi)管(5)位于外管腔(10)中，卵子或胚胎(3)放置在內(nèi)管腔(1)中，外部液氮依次通過外過濾系統(tǒng)(13)、內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)除菌后將卵子或胚胎(3)進(jìn)行冷凍。本實(shí)用新型充分利用了液氮無菌過濾系統(tǒng)以及多次過濾的方式，大大提高了卵子和胚胎冷凍的安全性。
【專利說明】
一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型涉及醫(yī)學(xué)與生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙封閉式卵子或胚胎玻 璃化冷凍保存裝置，其利用無菌過濾系統(tǒng)，用于無菌低溫冷凍保存卵子或胚胎。
【背景技術(shù)】
[0002] 人類的卵子和胚胎的冷凍保存已經(jīng)是人類輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域中一個重要部分。在 過去這二十年中，冷凍保存技術(shù)的發(fā)展亦可反映人類輔助生殖技術(shù)的發(fā)展程度，現(xiàn)在的冷 凍技術(shù)已可用在冷凍保存卵子和不同時期的胚胎，尤其是玻璃化冷凍技術(shù)，已經(jīng)取代傳統(tǒng) 慢術(shù)冷凍法，而成為冷凍技術(shù)的最優(yōu)選擇，甚而將此技術(shù)運(yùn)用在高難度的卵子、卵巢組織和 人類胚胎干細(xì)胞的冷凍上。
[0003] 無論是卵子冷凍還是胚胎冷凍保存，都需要一個物理載體，通常所說的載桿或麥 管等。目前生殖醫(yī)學(xué)中心采用的卵子或胚胎冷凍系統(tǒng)，如載桿多為開發(fā)式，即胚胎直接裸露 在未經(jīng)過濾的普通液氮中，使得液氮中的病原體可能對卵子或胚胎造成潛在的污染。如開 放式冷凍載體(cryotop)、冷凍環(huán)（cryoloop)、開放式玻璃微細(xì)管(GMP)、開放式拉長麥管 (0PS )、電子顯微鏡銅網(wǎng)等。這些類型的冷凍載體，如日本ΚΙ ΤΑΖΑΤ0公司采用的冷凍載桿，其 管內(nèi)和管外均為有污染的液氮，含有胚胎的溶液被直接暴露于液氮中，該方法并不能完全 消除在胚胎凍存期間的交叉感染風(fēng)險。即使有部分廠家設(shè)計和生產(chǎn)了半封閉式的冷凍裝 置，但未考慮過液氮過濾，只是將卵子或胚胎置入一個封閉的環(huán)境中，隔絕了胚胎與液氮罐 中其他含有毒物質(zhì)液氮的接觸，加拿大JY公司，這種冷凍管內(nèi)的液氮仍然是存在污染的。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0004] 本實(shí)用新型設(shè)計了一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其解決的技術(shù) 問題是目前生殖醫(yī)學(xué)中心采用的卵子或胚胎冷凍系統(tǒng)多為開發(fā)式，即胚胎直接裸露在未經(jīng) 過濾的普通液氮中，使得液氮中的病原體可能對卵子或胚胎造成潛在的污染。
[0005] 為了解決上述存在的技術(shù)問題，本實(shí)用新型采用了以下方案：
[0006] -種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于：包括密閉式外管 (12)和密閉式內(nèi)管(5)，密閉式內(nèi)管(5)設(shè)有內(nèi)管腔（1)和內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，密閉式外管（12) 設(shè)有外管腔（10)和外過濾系統(tǒng)（13)，密閉式內(nèi)管(5)位于外管腔（10)中，卵子或胚胎(3)放 置在內(nèi)管腔（1)中，外部液氮依次通過外過濾系統(tǒng)（13)、內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)除菌后將卵子或胚 胎(3)進(jìn)行冷凍。
[0007] 進(jìn)一步，密閉式內(nèi)管(5) -端通過內(nèi)載桿(4)進(jìn)行密閉，內(nèi)載桿(4)上設(shè)有卵子或胚 胎放置點(diǎn)（2)，密閉式內(nèi)管(5)另一端通過內(nèi)金屬圈（7)進(jìn)行密閉，內(nèi)金屬圈（7)內(nèi)側(cè)設(shè)有內(nèi) 過濾系統(tǒng)(6)，內(nèi)金屬圈（7)上開有內(nèi)管腔液氮入口（9)，進(jìn)入內(nèi)管腔液氮入口（9)的液氮通 過內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)后最終進(jìn)入內(nèi)管腔(1)中。
[0008] 進(jìn)一步，所述內(nèi)載桿(4) 一端較細(xì)，另一端較粗;卵子或胚胎放置點(diǎn)（2)位于較細(xì)端 上，較粗端與內(nèi)套管端部開口（ 8)進(jìn)行密封連接。
[0009] 進(jìn)一步，所述內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。
[0010] 進(jìn)一步，密閉式外管（12) -端通過外桿栓（11)進(jìn)行密閉，密閉式外管（12)另一端 通過外金屬圈（14)進(jìn)行密閉，外金屬圈（14)上內(nèi)側(cè)設(shè)有外過濾系統(tǒng)（13)，外金屬圈（14)上 開有外管腔液氮入口（16)，進(jìn)入外管腔液氮入口（16)的液氮通過外過濾系統(tǒng)（13)后最終進(jìn) 入外管腔(10)中。
[0011] 進(jìn)一步，所述外過濾系統(tǒng)（13)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。
[0012] 進(jìn)一步，所述卵子或胚胎來源于哺乳動物。
[0013] 進(jìn)一步，所述哺乳動物為人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓或牛。
[0014] 該雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置具有以下有益效果：
[0015] (1)本實(shí)用新型充分利用了液氮無菌過濾系統(tǒng)以及多次過濾的方式，大大提高了 卵子和胚胎冷凍的安全性。
[0016] (2)本實(shí)用新型利用過濾系統(tǒng)過濾液氮，使卵子或胚胎處于無菌保存的環(huán)境中，且 不影響玻璃化冷凍過程中的溫度速率，大大降低了卵子或胚胎冷凍保存過程中污染的可能 性。
【附圖說明】
[0017] 圖1:本實(shí)用新型雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018] 附圖標(biāo)記說明：
[0019] 1-內(nèi)管腔;2-卵子或胚胎放置點(diǎn)；3-卵子或胚胎;4-內(nèi)載桿;5-密閉式內(nèi)管;6-內(nèi)過 濾系統(tǒng);7-內(nèi)金屬圈；8-內(nèi)套管端部開口；9-內(nèi)管腔液氮入口； 10-外管腔；11-外桿栓;12-密 閉式外管；13-外過濾系統(tǒng)；14-外金屬圈；15-外套管端部開口； 16-外管腔液氮入口。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合圖1，對本實(shí)用新型做進(jìn)一步說明：
[0021] 如圖1所示，本實(shí)用新型所述一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，是利 用無菌過濾系統(tǒng)，用于低溫?zé)o菌冷凍保存卵子或胚胎。
[0022] -種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，包括密閉式外管12和密閉式內(nèi)管 5,密閉式外管12和密閉式內(nèi)管5均有濾膜或?yàn)V柱，以確保液氮無菌過濾后進(jìn)入官腔。
[0023] 密閉式內(nèi)管5包括內(nèi)載桿4和內(nèi)管腔1。內(nèi)載桿4為實(shí)體，前粗后細(xì)，變細(xì)的后端含有 卵子或胚胎放置點(diǎn)2。密閉式內(nèi)管5為管道狀，前端開口，其末端含金屬內(nèi)栓(金屬內(nèi)圈）和無 菌濾膜(無菌濾柱），內(nèi)載桿4裝載胚胎后插入內(nèi)管腔1，兩者結(jié)合形成密閉式內(nèi)管5。再插入 液氮后，管腔的超快速降溫形成負(fù)壓狀態(tài)，液氮借助負(fù)壓經(jīng)內(nèi)管的無菌濾膜或無菌濾柱快 速進(jìn)入內(nèi)管腔1，以保證進(jìn)入的液氮為無菌狀態(tài)，同時促使胚胎形成玻璃化冷凍。
[0024] 密閉式外管12體積較密閉式內(nèi)管粗大，可容納密閉式內(nèi)管5置入其內(nèi)。密閉式外管 12包括外桿栓11和外管腔10，外管腔10末端含金屬內(nèi)栓(金屬內(nèi)圈）和濾膜(濾柱），外桿栓 11插入外管腔10兩者結(jié)合使得管腔為密閉狀，密閉式外管12置入液氮后，液氮僅能通過濾 膜(濾柱)進(jìn)出外管腔10,確保密閉外管腔10的無菌狀態(tài)。
[0025] 卵子或胚胎來源于哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓、牛等。
[0026] 具體實(shí)施例，本實(shí)用新型的無菌保存技術(shù)優(yōu)選于開放式或半封閉式冷凍保存裝 置：
[0027] 實(shí)施例1:
[0028] 1、將利用gamma射線滅菌法對，對本實(shí)用新型雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保 存裝置進(jìn)行滅菌；
[0029] 2、將液氮傾倒至一小容器中；
[0030] 3、將密閉式外管12插液氮中，保持外套管管口部分和外桿栓11都位于在液氮之 外，并保持傾斜狀；
[0031 ] 4、3分鐘后，待液氮經(jīng)外管下方的外過濾系統(tǒng)13進(jìn)入外管腔10，拔出外桿栓11;
[0032] 5、將密閉式內(nèi)管5插入密閉式外管12內(nèi)；
[0033] 6、3分鐘后，液氮經(jīng)密閉式內(nèi)管5下方的內(nèi)過濾系統(tǒng)6進(jìn)入內(nèi)管腔1;
[0034] 7、利用無菌鑷子將內(nèi)管夾出，并置入細(xì)菌培養(yǎng)基，37攝氏度培養(yǎng)48小時，觀察細(xì)菌 生長情況：
[0035] 8、同樣對商業(yè)化的開放式和半封閉式冷凍裝置進(jìn)行處理，即直接將其暴露在液氮 中，然置入細(xì)菌培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)；
[0036] 9、結(jié)果如下：
[0038] 實(shí)施例2:
[0039] 1、將胚胎玻璃化冷凍液從冰箱中取出，置于室溫平衡5分鐘；
[0040] 2、在平皿中制作冷凍液ES液小滴和VS液小滴；
[0041] 3、將雙封閉系統(tǒng)玻璃化冷凍裝置的密閉式外管12置入液氮中平衡；
[0042] 4、將胚胎從培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移至ES液中平衡5分鐘；
[0043] 5、再將培養(yǎng)從ES液中轉(zhuǎn)移至VS液中30秒；
[0044] 6、將胚胎迅速轉(zhuǎn)移至雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置的密閉式內(nèi)管5的 胚胎放置點(diǎn)；
[0045] 7、密閉式內(nèi)管5進(jìn)行密閉后，放入液氮中的密閉式外管12內(nèi)；
[0046] 8、將外桿栓11封閉密閉式外管12;
[0047] 9、將整個裝置轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。
[0048]上面結(jié)合附圖對本實(shí)用新型進(jìn)行了示例性的描述，顯然本實(shí)用新型的實(shí)現(xiàn)并不受 上述方式的限制，只要采用了本實(shí)用新型的方法構(gòu)思和技術(shù)方案進(jìn)行的各種改進(jìn)，或未經(jīng) 改進(jìn)將本實(shí)用新型的構(gòu)思和技術(shù)方案直接應(yīng)用于其它場合的，均在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍 內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:包括密閉式外管（12) 和密閉式內(nèi)管(5)，密閉式內(nèi)管(5)設(shè)有內(nèi)管腔（1)和內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，密閉式外管（12)設(shè)有 外管腔（10)和外過濾系統(tǒng)（13)，密閉式內(nèi)管(5)位于外管腔（10)中，卵子或胚胎(3)放置在 內(nèi)管腔(1)中，外部液氮依次通過外過濾系統(tǒng)（13)、內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)除菌后將卵子或胚胎(3) 進(jìn)行冷凍。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:密閉式 內(nèi)管(5) -端通過內(nèi)載桿(4)進(jìn)行密閉，內(nèi)載桿(4)上設(shè)有卵子或胚胎放置點(diǎn)（2)，密閉式內(nèi) 管(5)另一端通過內(nèi)金屬圈（7)進(jìn)行密閉，內(nèi)金屬圈（7)內(nèi)側(cè)設(shè)有內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，內(nèi)金屬圈 (7)上開有內(nèi)管腔液氮入口（9)，進(jìn)入內(nèi)管腔液氮入口（9)的液氮通過內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)后最終 進(jìn)入內(nèi)管腔(1)中。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述內(nèi) 載桿(4) 一端較細(xì)，另一端較粗;卵子或胚胎放置點(diǎn)（2)位于較細(xì)端上，較粗端與內(nèi)套管端部 開口（8)進(jìn)行密封連接。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所 述內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:密閉式 外管（12)-端通過外桿栓(11)進(jìn)行密閉，密閉式外管（12)另一端通過外金屬圈（14)進(jìn)行密 閉，外金屬圈（14)上內(nèi)側(cè)設(shè)有外過濾系統(tǒng)（13)，外金屬圈（14)上開有外管腔液氮入口（16)， 進(jìn)入外管腔液氮入口（16)的液氮通過外過濾系統(tǒng)（13)后最終進(jìn)入外管腔(10)中。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述外 過濾系統(tǒng)（13)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。7. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、5或6所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在 于:所述卵子或胚胎來源于哺乳動物。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述卵 子或胚胎來源于哺乳動物。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述哺 乳動物為人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓或牛。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述 哺乳動物為人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓或牛。
【文檔編號】A01N1/02GK205695269SQ201620353840
【公開日】2016年11月23日
【申請日】2016年4月26日
【發(fā)明人】薛志剛, 曾橋, 鹿麗娜, 薛金鋒, 房海燕
【申請人】同濟(jì)大學(xué)蘇州研究院, 浙江星博生物科技股份有限公司
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于：包括密閉式外管(12)和密閉式內(nèi)管(5)，密閉式內(nèi)管(5)設(shè)有內(nèi)管腔(1)和內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，密閉式外管(12)設(shè)有外管腔(10)和外過濾系統(tǒng)(13)，密閉式內(nèi)管(5)位于外管腔(10)中，卵子或胚胎(3)放置在內(nèi)管腔(1)中，外部液氮依次通過外過濾系統(tǒng)(13)、內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)除菌后將卵子或胚胎(3)進(jìn)行冷凍。本實(shí)用新型充分利用了液氮無菌過濾系統(tǒng)以及多次過濾的方式，大大提高了卵子和胚胎冷凍的安全性。
【專利說明】
一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型涉及醫(yī)學(xué)與生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙封閉式卵子或胚胎玻 璃化冷凍保存裝置，其利用無菌過濾系統(tǒng)，用于無菌低溫冷凍保存卵子或胚胎。
【背景技術(shù)】
[0002] 人類的卵子和胚胎的冷凍保存已經(jīng)是人類輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域中一個重要部分。在 過去這二十年中，冷凍保存技術(shù)的發(fā)展亦可反映人類輔助生殖技術(shù)的發(fā)展程度，現(xiàn)在的冷 凍技術(shù)已可用在冷凍保存卵子和不同時期的胚胎，尤其是玻璃化冷凍技術(shù)，已經(jīng)取代傳統(tǒng) 慢術(shù)冷凍法，而成為冷凍技術(shù)的最優(yōu)選擇，甚而將此技術(shù)運(yùn)用在高難度的卵子、卵巢組織和 人類胚胎干細(xì)胞的冷凍上。
[0003] 無論是卵子冷凍還是胚胎冷凍保存，都需要一個物理載體，通常所說的載桿或麥 管等。目前生殖醫(yī)學(xué)中心采用的卵子或胚胎冷凍系統(tǒng)，如載桿多為開發(fā)式，即胚胎直接裸露 在未經(jīng)過濾的普通液氮中，使得液氮中的病原體可能對卵子或胚胎造成潛在的污染。如開 放式冷凍載體(cryotop)、冷凍環(huán)（cryoloop)、開放式玻璃微細(xì)管(GMP)、開放式拉長麥管 (0PS )、電子顯微鏡銅網(wǎng)等。這些類型的冷凍載體，如日本ΚΙ ΤΑΖΑΤ0公司采用的冷凍載桿，其 管內(nèi)和管外均為有污染的液氮，含有胚胎的溶液被直接暴露于液氮中，該方法并不能完全 消除在胚胎凍存期間的交叉感染風(fēng)險。即使有部分廠家設(shè)計和生產(chǎn)了半封閉式的冷凍裝 置，但未考慮過液氮過濾，只是將卵子或胚胎置入一個封閉的環(huán)境中，隔絕了胚胎與液氮罐 中其他含有毒物質(zhì)液氮的接觸，加拿大JY公司，這種冷凍管內(nèi)的液氮仍然是存在污染的。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0004] 本實(shí)用新型設(shè)計了一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其解決的技術(shù) 問題是目前生殖醫(yī)學(xué)中心采用的卵子或胚胎冷凍系統(tǒng)多為開發(fā)式，即胚胎直接裸露在未經(jīng) 過濾的普通液氮中，使得液氮中的病原體可能對卵子或胚胎造成潛在的污染。
[0005] 為了解決上述存在的技術(shù)問題，本實(shí)用新型采用了以下方案：
[0006] -種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于：包括密閉式外管 (12)和密閉式內(nèi)管(5)，密閉式內(nèi)管(5)設(shè)有內(nèi)管腔（1)和內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，密閉式外管（12) 設(shè)有外管腔（10)和外過濾系統(tǒng)（13)，密閉式內(nèi)管(5)位于外管腔（10)中，卵子或胚胎(3)放 置在內(nèi)管腔（1)中，外部液氮依次通過外過濾系統(tǒng)（13)、內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)除菌后將卵子或胚 胎(3)進(jìn)行冷凍。
[0007] 進(jìn)一步，密閉式內(nèi)管(5) -端通過內(nèi)載桿(4)進(jìn)行密閉，內(nèi)載桿(4)上設(shè)有卵子或胚 胎放置點(diǎn)（2)，密閉式內(nèi)管(5)另一端通過內(nèi)金屬圈（7)進(jìn)行密閉，內(nèi)金屬圈（7)內(nèi)側(cè)設(shè)有內(nèi) 過濾系統(tǒng)(6)，內(nèi)金屬圈（7)上開有內(nèi)管腔液氮入口（9)，進(jìn)入內(nèi)管腔液氮入口（9)的液氮通 過內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)后最終進(jìn)入內(nèi)管腔(1)中。
[0008] 進(jìn)一步，所述內(nèi)載桿(4) 一端較細(xì)，另一端較粗;卵子或胚胎放置點(diǎn)（2)位于較細(xì)端 上，較粗端與內(nèi)套管端部開口（ 8)進(jìn)行密封連接。
[0009] 進(jìn)一步，所述內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。
[0010] 進(jìn)一步，密閉式外管（12) -端通過外桿栓（11)進(jìn)行密閉，密閉式外管（12)另一端 通過外金屬圈（14)進(jìn)行密閉，外金屬圈（14)上內(nèi)側(cè)設(shè)有外過濾系統(tǒng)（13)，外金屬圈（14)上 開有外管腔液氮入口（16)，進(jìn)入外管腔液氮入口（16)的液氮通過外過濾系統(tǒng)（13)后最終進(jìn) 入外管腔(10)中。
[0011] 進(jìn)一步，所述外過濾系統(tǒng)（13)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。
[0012] 進(jìn)一步，所述卵子或胚胎來源于哺乳動物。
[0013] 進(jìn)一步，所述哺乳動物為人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓或牛。
[0014] 該雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置具有以下有益效果：
[0015] (1)本實(shí)用新型充分利用了液氮無菌過濾系統(tǒng)以及多次過濾的方式，大大提高了 卵子和胚胎冷凍的安全性。
[0016] (2)本實(shí)用新型利用過濾系統(tǒng)過濾液氮，使卵子或胚胎處于無菌保存的環(huán)境中，且 不影響玻璃化冷凍過程中的溫度速率，大大降低了卵子或胚胎冷凍保存過程中污染的可能 性。
【附圖說明】
[0017] 圖1:本實(shí)用新型雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018] 附圖標(biāo)記說明：
[0019] 1-內(nèi)管腔;2-卵子或胚胎放置點(diǎn)；3-卵子或胚胎;4-內(nèi)載桿;5-密閉式內(nèi)管;6-內(nèi)過 濾系統(tǒng);7-內(nèi)金屬圈；8-內(nèi)套管端部開口；9-內(nèi)管腔液氮入口； 10-外管腔；11-外桿栓;12-密 閉式外管；13-外過濾系統(tǒng)；14-外金屬圈；15-外套管端部開口； 16-外管腔液氮入口。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合圖1，對本實(shí)用新型做進(jìn)一步說明：
[0021] 如圖1所示，本實(shí)用新型所述一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，是利 用無菌過濾系統(tǒng)，用于低溫?zé)o菌冷凍保存卵子或胚胎。
[0022] -種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，包括密閉式外管12和密閉式內(nèi)管 5,密閉式外管12和密閉式內(nèi)管5均有濾膜或?yàn)V柱，以確保液氮無菌過濾后進(jìn)入官腔。
[0023] 密閉式內(nèi)管5包括內(nèi)載桿4和內(nèi)管腔1。內(nèi)載桿4為實(shí)體，前粗后細(xì)，變細(xì)的后端含有 卵子或胚胎放置點(diǎn)2。密閉式內(nèi)管5為管道狀，前端開口，其末端含金屬內(nèi)栓(金屬內(nèi)圈）和無 菌濾膜(無菌濾柱），內(nèi)載桿4裝載胚胎后插入內(nèi)管腔1，兩者結(jié)合形成密閉式內(nèi)管5。再插入 液氮后，管腔的超快速降溫形成負(fù)壓狀態(tài)，液氮借助負(fù)壓經(jīng)內(nèi)管的無菌濾膜或無菌濾柱快 速進(jìn)入內(nèi)管腔1，以保證進(jìn)入的液氮為無菌狀態(tài)，同時促使胚胎形成玻璃化冷凍。
[0024] 密閉式外管12體積較密閉式內(nèi)管粗大，可容納密閉式內(nèi)管5置入其內(nèi)。密閉式外管 12包括外桿栓11和外管腔10，外管腔10末端含金屬內(nèi)栓(金屬內(nèi)圈）和濾膜(濾柱），外桿栓 11插入外管腔10兩者結(jié)合使得管腔為密閉狀，密閉式外管12置入液氮后，液氮僅能通過濾 膜(濾柱)進(jìn)出外管腔10,確保密閉外管腔10的無菌狀態(tài)。
[0025] 卵子或胚胎來源于哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓、牛等。
[0026] 具體實(shí)施例，本實(shí)用新型的無菌保存技術(shù)優(yōu)選于開放式或半封閉式冷凍保存裝 置：
[0027] 實(shí)施例1:
[0028] 1、將利用gamma射線滅菌法對，對本實(shí)用新型雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保 存裝置進(jìn)行滅菌；
[0029] 2、將液氮傾倒至一小容器中；
[0030] 3、將密閉式外管12插液氮中，保持外套管管口部分和外桿栓11都位于在液氮之 外，并保持傾斜狀；
[0031 ] 4、3分鐘后，待液氮經(jīng)外管下方的外過濾系統(tǒng)13進(jìn)入外管腔10，拔出外桿栓11;
[0032] 5、將密閉式內(nèi)管5插入密閉式外管12內(nèi)；
[0033] 6、3分鐘后，液氮經(jīng)密閉式內(nèi)管5下方的內(nèi)過濾系統(tǒng)6進(jìn)入內(nèi)管腔1;
[0034] 7、利用無菌鑷子將內(nèi)管夾出，并置入細(xì)菌培養(yǎng)基，37攝氏度培養(yǎng)48小時，觀察細(xì)菌 生長情況：
[0035] 8、同樣對商業(yè)化的開放式和半封閉式冷凍裝置進(jìn)行處理，即直接將其暴露在液氮 中，然置入細(xì)菌培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)；
[0036] 9、結(jié)果如下：
[0038] 實(shí)施例2:
[0039] 1、將胚胎玻璃化冷凍液從冰箱中取出，置于室溫平衡5分鐘；
[0040] 2、在平皿中制作冷凍液ES液小滴和VS液小滴；
[0041] 3、將雙封閉系統(tǒng)玻璃化冷凍裝置的密閉式外管12置入液氮中平衡；
[0042] 4、將胚胎從培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移至ES液中平衡5分鐘；
[0043] 5、再將培養(yǎng)從ES液中轉(zhuǎn)移至VS液中30秒；
[0044] 6、將胚胎迅速轉(zhuǎn)移至雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置的密閉式內(nèi)管5的 胚胎放置點(diǎn)；
[0045] 7、密閉式內(nèi)管5進(jìn)行密閉后，放入液氮中的密閉式外管12內(nèi)；
[0046] 8、將外桿栓11封閉密閉式外管12;
[0047] 9、將整個裝置轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。
[0048]上面結(jié)合附圖對本實(shí)用新型進(jìn)行了示例性的描述，顯然本實(shí)用新型的實(shí)現(xiàn)并不受 上述方式的限制，只要采用了本實(shí)用新型的方法構(gòu)思和技術(shù)方案進(jìn)行的各種改進(jìn)，或未經(jīng) 改進(jìn)將本實(shí)用新型的構(gòu)思和技術(shù)方案直接應(yīng)用于其它場合的，均在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍 內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:包括密閉式外管（12) 和密閉式內(nèi)管(5)，密閉式內(nèi)管(5)設(shè)有內(nèi)管腔（1)和內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，密閉式外管（12)設(shè)有 外管腔（10)和外過濾系統(tǒng)（13)，密閉式內(nèi)管(5)位于外管腔（10)中，卵子或胚胎(3)放置在 內(nèi)管腔(1)中，外部液氮依次通過外過濾系統(tǒng)（13)、內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)除菌后將卵子或胚胎(3) 進(jìn)行冷凍。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:密閉式 內(nèi)管(5) -端通過內(nèi)載桿(4)進(jìn)行密閉，內(nèi)載桿(4)上設(shè)有卵子或胚胎放置點(diǎn)（2)，密閉式內(nèi) 管(5)另一端通過內(nèi)金屬圈（7)進(jìn)行密閉，內(nèi)金屬圈（7)內(nèi)側(cè)設(shè)有內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)，內(nèi)金屬圈 (7)上開有內(nèi)管腔液氮入口（9)，進(jìn)入內(nèi)管腔液氮入口（9)的液氮通過內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)后最終 進(jìn)入內(nèi)管腔(1)中。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述內(nèi) 載桿(4) 一端較細(xì)，另一端較粗;卵子或胚胎放置點(diǎn)（2)位于較細(xì)端上，較粗端與內(nèi)套管端部 開口（8)進(jìn)行密封連接。4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所 述內(nèi)過濾系統(tǒng)(6)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:密閉式 外管（12)-端通過外桿栓(11)進(jìn)行密閉，密閉式外管（12)另一端通過外金屬圈（14)進(jìn)行密 閉，外金屬圈（14)上內(nèi)側(cè)設(shè)有外過濾系統(tǒng)（13)，外金屬圈（14)上開有外管腔液氮入口（16)， 進(jìn)入外管腔液氮入口（16)的液氮通過外過濾系統(tǒng)（13)后最終進(jìn)入外管腔(10)中。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述外 過濾系統(tǒng)（13)為無菌濾膜柱或無菌濾柱。7. 根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、5或6所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在 于:所述卵子或胚胎來源于哺乳動物。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述卵 子或胚胎來源于哺乳動物。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述哺 乳動物為人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓或牛。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述雙封閉式卵子或胚胎玻璃化冷凍保存裝置，其特征在于:所述 哺乳動物為人、小鼠、大鼠、兔、羊、狗、貓或牛。
【文檔編號】A01N1/02GK205695269SQ201620353840
【公開日】2016年11月23日
【申請日】2016年4月26日
【發(fā)明人】薛志剛, 曾橋, 鹿麗娜, 薛金鋒, 房海燕
【申請人】同濟(jì)大學(xué)蘇州研究院, 浙江星博生物科技股份有限公司
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