[0220] 相比之下，Li細胞群在梗塞體積或神經(jīng)功能方面未能示出任何統(tǒng)計學(xué)顯著的活 性。因此，這些數(shù)據(jù)證實了 NCS-01群治療神經(jīng)變性的能力由生產(chǎn)方法限定，并且NCS-01細 胞群與Li在2000年的出版物中所述的細胞群不同。
[0221] 本說明書中提到的任何專利、專利申請、出版物或其他公開材料都在此通過引用 而全文并入。所述通過引用在此并入的任何材料或其部分若與本文所述現(xiàn)有定義、陳述 或其他公開材料相矛盾，則僅以不在所并入的材料與本公開材料之間產(chǎn)生矛盾的程度而并 入。
【主權(quán)項】
1. 一種通過以下方法制備的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，所述方法包括： a) 從未處理的骨髓獲得骨髓細胞群； b) 將所述骨髓細胞群以低密度接種在塑料表面上； c) 洗滌所述接種的細胞群以除去未附著的細胞； d) 在含血清的培養(yǎng)基中將所述附著的細胞群培養(yǎng)至接近匯合；將所述培養(yǎng)的細胞群 連續(xù)傳代不超過約七次連續(xù)傳代，其中，在每次傳代時，以低密度接種所述培養(yǎng)的細胞；和 e) 獲得所述異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中有效量的所述異質(zhì)性骨髓細胞亞群有效治療神 經(jīng)變性。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述神經(jīng)變性由缺血引起。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其進一步在神經(jīng)變性實驗?zāi)Ｐ椭袦y 試，其中選擇顯示治療神經(jīng)變性的能力的那些細胞群。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述神經(jīng)變性實驗?zāi)Ｐ褪茄?葡 萄糖剝奪（OGD)細胞培養(yǎng)模型。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述神經(jīng)變性實驗?zāi)Ｐ褪侵酗L(fēng)動 物模型。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述骨髓細胞群以約10 2_106個 細胞/cm2的密度接種。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述獲得的骨髓細胞亞群在含血 清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中，在每次傳代時，所述培養(yǎng)的細胞 以少于約750個細胞/cm2的密度接種。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中在注射至血流中后，所述亞群中 的細胞迀移至神經(jīng)變性位點。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述未處理的骨髓從沒有使用 化療劑預(yù)治療的受試者獲得。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述化療劑是5-氟尿嘧啶。12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述骨髓細胞群不能通過密度 分離法或通過ACK裂解液來分離。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述密度分離法需要Ficoll ? 或Perco 11?梯度。14. 一種治療神經(jīng)變性的方法，其包括： 將根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群注射至患有神經(jīng)變性的哺乳動物的血 流中， 其中所述骨髓細胞亞群的所述注射減少由所述神經(jīng)變性造成的神經(jīng)功能缺損。15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述神經(jīng)變性由缺血性中風(fēng)引 起。16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的治療神經(jīng)變性的方法，其還包括用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療， 其中注射所述骨髓細胞亞群與所述附加治療的組合導(dǎo)致比單獨的附加治療或者注射 所述骨髓細胞亞群但不使用所述附加治療后的所述神經(jīng)功能缺損的更大減少。17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療與注射所述骨髓細胞亞群同時進行。18. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中在注射所述骨髓細胞亞群前， 進行所述用于增加通過阻塞血管的血流的附加治療。19. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述血管被血塊阻塞。20. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述血塊由動脈粥樣硬化斑塊 破裂產(chǎn)生。21. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療包括施用溶栓劑。22. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述溶栓劑是選自鏈激酶、尿 激酶和重組組織纖溶酶原活化劑中的至少一個。23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述重組組織纖溶酶原活化劑 是阿替普酶、瑞替普酶、去氨普酶或替奈普酶。24. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療包括從所述阻塞血管機械性除去血塊。25. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療還包括使用過濾器捕捉所述血塊。26. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療包括進行血管成形術(shù)和/或血管支架手術(shù)。27. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述骨髓細胞亞群通過靜脈或 動脈注射。28. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述骨髓細胞亞群注射至頸動 脈中。29. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述骨髓細胞亞群通過腦內(nèi)注 射。30. -種治療由缺血性中風(fēng)引起的神經(jīng)變性的方法，其包括： 將根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群注射至患有由缺血引起的神經(jīng)變性的 哺乳動物的血流中， 其中所述骨髓細胞亞群的所述注射減少由所述神經(jīng)變性引起的梗塞體積。31. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的治療神經(jīng)變性的方法，其還包括用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療， 其中注射所述骨髓細胞亞群與所述附加治療的組合導(dǎo)致比單獨的附加治療或者注射 所述骨髓細胞亞群但不使用所述附加治療后的所述梗塞體積的更大減少。32. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療包括施用溶栓劑。33. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述溶栓劑是選自鏈激酶、尿 激酶和重組纖溶酶原活化劑中的至少一個。34. 根據(jù)權(quán)利要求33所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述重組纖溶酶原活化劑是阿 替普酶、瑞替普酶、去氨普酶或替奈普酶。35. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療包括進行血管成形術(shù)和/或支架手術(shù)。36. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述用于增加通過阻塞血管的 血流的附加治療包括機械性除去所述梗塞位點附近的血塊。37. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述骨髓細胞亞群通過靜脈或 動脈注射。38. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述骨髓細胞亞群注射至頸動 脈中。39. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的治療神經(jīng)變性的方法，其中所述骨髓細胞亞群通過腦內(nèi)注 射。40. -種試劑盒，其包含溶栓劑和根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群。41. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的試劑盒，其中所述溶栓劑是選自鏈激酶、尿激酶和重組組 織纖溶酶原活化劑中的至少一個。42. 根據(jù)權(quán)利要求41所述的試劑盒，其中所述重組組織纖溶酶原活化劑是阿替普酶、 瑞替普酶或替奈普酶。43. -種試劑盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的異質(zhì)性骨髓細胞亞群和用于機械性除 去血塊的工具。44. 一種用于治療由缺血性中風(fēng)引起的神經(jīng)變性的組合物，其包含溶栓劑、根據(jù)權(quán)利要 求1所述的骨髓細胞亞群和用于注射所述組合物的載體。45. 根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中所述溶栓劑是選自鏈激酶、尿激酶和重組組 織纖溶酶原活化劑中的至少一個。46. 根據(jù)權(quán)利要求45所述的組合物，其中所述重組組織纖溶酶原活化劑是阿替普酶、 瑞替普酶或替奈普酶。47. -種制備用于治療神經(jīng)變性的異質(zhì)性骨髓細胞亞群的方法，其包括： a) 從未處理的骨髓獲得骨髓細胞群； b) 將所述骨髓細胞群以低密度接種在塑料表面上； c) 洗滌所述接種的細胞群以除去未附著的細胞； d) 在含血清的培養(yǎng)基中將來自所述洗滌的細胞群的所述附著的細胞培養(yǎng)至接近匯 合； e) 將所述培養(yǎng)的細胞連續(xù)傳代不超過約七次連續(xù)傳代，其中，在每次傳代時，以低密度 接種所述培養(yǎng)的細胞；和 f) 獲得所述異質(zhì)性骨髓細胞亞群，其中所述異質(zhì)性骨髓細胞亞群治療神經(jīng)變性。48. 根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述未處理的骨髓從沒有使用化療劑進行預(yù)治 療的受試者獲得。49. 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述化療劑是5-氟尿嘧啶。50. 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述骨髓細胞群不能通過密度分離法或通過 ACK裂解液來分離。51. 根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中所述密度分離法需要Ficoll ?或Percoll ?梯 度。52. 根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述神經(jīng)變性由缺血引起。53. 根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其還包括在神經(jīng)變性實驗?zāi)Ｐ椭袦y試所述異質(zhì)性骨 髓細胞亞群，其中只選擇顯示治療神經(jīng)變性的能力的那些群。54. 根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述實驗?zāi)Ｐ褪侨毖獙嶒災(zāi)Ｐ汀?5. 根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述缺血實驗?zāi)Ｐ褪茄?葡萄糖剝奪（OGD)細 胞培養(yǎng)模型。56. 根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述實驗?zāi)Ｐ褪侵酗L(fēng)動物模型。57. -種優(yōu)化用于分離治療神經(jīng)變性的細胞群的實驗方案的方法，其包括： 根據(jù)實驗方案分離細胞群； 其中所述細胞群治療神經(jīng)變性；和 其中通過測試每個參數(shù)對所述分離的細胞群在神經(jīng)變性實驗動物模型中治療神經(jīng)變 性的效果的影響來確定所述方案的每個步驟的最佳參數(shù)。58. 根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述神經(jīng)變性由缺血性中風(fēng)引起。59. 根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述參數(shù)包括接種時的細胞密度、細胞傳代次 數(shù)、培養(yǎng)基組成或細胞分離方法。60. 根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述神經(jīng)變性實驗?zāi)Ｐ褪侨毖獙嶒災(zāi)Ｐ汀?1. 根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中所述缺血實驗動物模型是氧/葡萄糖剝奪 (OGD)細胞培養(yǎng)模型。62. 根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中所述缺血實驗動物模型是中風(fēng)動物模型。63. 根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中所述缺血實驗?zāi)Ｐ褪谴竽X中動脈阻塞（MCAO)動 物模型。
【專利摘要】描述了用于分離和選擇稱為NCS-01的有效治療神經(jīng)變性的異質(zhì)骨髓細胞群的方法。例如，顯示NCS-01細胞治療由缺血引起的神經(jīng)變性。體內(nèi)研究證實所選擇的NCS-01細胞群治療在暫時性或永久性完全動脈阻塞情況下的標準大鼠大腦中動脈阻塞(MCAO)動物模型中的神經(jīng)變性。這些研究還公開了神經(jīng)變性由缺血性中風(fēng)引起時，施用所選擇的NCS-01細胞群與溶栓劑和/或機械性凝塊除去方法的組合導(dǎo)致由急性發(fā)作神經(jīng)變性引起的梗塞體積減少。所公開的細胞療法有望對中風(fēng)后存活的患者造成顯著的臨床影響。
【IPC分類】A01N63/00, C12N5/00, C12N5/071
【公開號】CN105072914
【申請?zhí)枴緾N201380075366
【發(fā)明人】托馬斯·N·蔡斯, 佐佐木經(jīng)世, 古賀三奈子
【申請人】Nc醫(yī)學(xué)研究公司, 托馬斯·N·蔡斯
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2013年2月6日
【公告號】EP2953473A1, US20140219969, WO2014123516A1