專利名稱：一種參麥注射液中5-羥甲基糠醛的定量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑中有害成分的檢測及定量分析方法。具體的說，是一種對參麥 注射液中所含5-羥甲基糠醛進行檢測和定量的方法。
背景技術(shù)：
5-羥甲基糠醛(5-(Hydroxymethy1)-2-furaldehyde， 5-HMF)是葡萄糖或者果糖在高溫或酸 性等條件下脫水產(chǎn)生的一個醛類化合物，存在于焦糖、酒類、醬油、咖啡、葡萄干、乳制品、 蜂蜜、某些天然產(chǎn)物和殺蟲劑中。研究認為5-HMF對眼、粘膜、皮膚有刺激性，能與人體蛋白 質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生蓄積中毒，造成動物橫紋肌麻痹和內(nèi)臟損害，并且具有神經(jīng)毒性，且有報道稱其 存在潛在的遺傳及生殖毒性等；研究發(fā)現(xiàn)5-HMF能促進導(dǎo)致結(jié)腸小囊的產(chǎn)生，并呈劑量依賴性。 并認為5-HMF可能會產(chǎn)生一定程度的基因毒性，其機制為5-HMF在體內(nèi)經(jīng)硫化和氯化的過程產(chǎn) 生致突變作用。因此各國對食品、飲料和環(huán)境中的5-HMF限定都比較嚴格。從85年版開始我國 藥典對含糖輸液中5-HMF含量作了限量規(guī)定。
參麥注射液是古方"生脈散"的衍變方，由紅參和麥冬兩種中藥材經(jīng)現(xiàn)代工藝提取加工 而成，用于治療氣陰兩虛型之休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒細胞減少癥， 為國家中藥保護品種，系基本急救藥品。參麥注射液已有20余年的臨床應(yīng)用，但對其中的活 性成分，尤其是可能引發(fā)毒副反應(yīng)的化學(xué)成分一直不是很清楚。
參麥注射液里因含有大量的果糖和蔗糖，在進行制劑時不可避免產(chǎn)生5-羥甲基糠醛。同 時，參麥注射液產(chǎn)品說明書要求使用250ml葡萄糖注射液稀釋使用，兩者配伍使用很可能對用 藥患者產(chǎn)生一定的不良作用。
目前，參麥注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚未有制定5-羥甲基糠醛的含量限定項，也未見有關(guān)于參 麥注射液中5-羥甲基糠醛的定性和定量分析的報導(dǎo)，因此申請人認為，目前迫切需要發(fā)明一 種簡便快捷的，并且可以定量的檢測參麥注射液生產(chǎn)過程中和產(chǎn)品質(zhì)量檢驗時對5-羥甲基糠 醛的含量測定方法，用以檢測并控制5-羥甲基糠醛的含量，提高藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，減少藥物 對人體的不良作用，增加藥物的安全性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是尋找一種可以應(yīng)用于參麥注射液生產(chǎn)和產(chǎn)品質(zhì)量控制的過程中檢測5-羥 甲基糠醛及定量的方法，用以檢測并控制5-羥甲基糠醛的含量，減少藥物對人體的不良作用。 本發(fā)明利用高效液相色譜法建立了一種簡便快捷可靠的參麥注射液中的5-羥甲基糠醛的檢測 和定量的方法。
該法不僅可以用于參麥注射液成品中5-羥基糠醛的含量i!!l定，在參麥注射液的生產(chǎn)環(huán)節(jié) 中也可作為生產(chǎn)過程檢測的一部分使用。
本發(fā)明的實現(xiàn)系通過以下步驟
本發(fā)明中的液相色譜測定采用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；以甲醇一水為 流動相，其中甲醇的比例為5 15%，流動相的速度可為0.2 2.0ml/min:紫外檢測波長為 285 ± 5 nm;柱溫為30 ± 5 。C。
本發(fā)明用于定量檢測參麥注射液中的5-羥甲基糠醛的HPLC方法經(jīng)方法學(xué)考察，表明該方 法在大范圍的進樣量內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，精密度良好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為
0. 1、，重現(xiàn)性良好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.2%。


5-羥甲基糠醛對照品(上)和參麥注射液(下)的HPLC圖譜
具體實施例方式
1、 儀器與試藥
Waters alliance 2695高效液相色譜儀； Waters 2489雙波長紫外檢測器； Sartorius MC21S型電子分析天平； 甲醇(Merck，色譜純)； 水(蒸餾水)。
參麥注射液由正大青春寶藥業(yè)有限公司提供；
5-羥甲基糠醛(批號081216)對照品由上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司提供，含量為99. 45%。
2、 方法與結(jié)果 2.1色譜條件
色譜柱Alltima C18 (4.6 X 150隱，5州)；流動相甲醇-水溶液(8: 92);檢測波長,-284 nm;流速1 ml/min;柱溫30 ± 5 。C。 2.2方法學(xué)考察
說明書第3/4頁
2. 2. 1空白對照與陰性對照試驗
取蒸餾水進行空白測定，按樣品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液，相同條件下進行考察， 高效液相色譜圖中5-羥甲基糠醛特征峰相應(yīng)位置無干擾峰的存在。
2.2.2 5-羥甲基糠醛對照品溶液的制備
精密稱取5-羥甲基糠醛對照品3. 086 mg置于100 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解定容至刻度， 搖勻即得。
2. 2. 3供試品溶液的制備
將參麥注射液搖勻后直接取樣過微孔濾膜(O. 45州)即可。 2. 2. 4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗
對供試樣品溶液和對照品溶液進樣測定，所得液相色譜圖中理論塔板數(shù)以被測組分5-羥甲基 糠醛計算大于9000， 5-羥甲基糠醛與相鄰峰的分離度大于4.0，拖尾因子符合要求。
2. 2. 5線性范圍考察
精密吸取對照品溶液l、 2、 4、 8、 12、 16和20 /^注入液相色譜儀測定，以5-羥甲基糠醛 峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以進樣量(A)為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線，得回歸方程為Y=7. 19X106 X-5 . 88 X 104， R2=0. 999992，表明5-羥甲基糠醛在0. 03069 0. 6138/^進樣量范圍內(nèi)與峰 面積呈良好的線性關(guān)系。
2. 2. 6精密度試驗
精密吸取同一對照品溶液12W在上述色譜條件下重復(fù)進樣分析6次，結(jié)果表明該方法精密度 良好，5-羥甲基糠醛含量(雄Anl)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為O. 1%。
2. 2. 7重復(fù)性試驗
精密吸取同一供試品溶液(批號0810222) 20W在上述色譜條件下重復(fù)進樣分析5次，結(jié)果 表明，重現(xiàn)性良好，5-羥甲基糠醛含量(傳/ml)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.2%
2. 2. 8穩(wěn)定性試驗
分別在Oh、 2h、 4h、 8h、 12h、 24h精密吸取同一供試品溶液(批號0810222) 20 W在上述 色譜條件下進樣分析，結(jié)果表明，穩(wěn)定性良好，5-羥甲基糠醛含量(/fe/ml)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.3% 2.2.9回收率試驗
精密量取同一批(0809252)已知含量的供試參麥注射液溶液2 ml五份分別置于5個10 ml容 量瓶中，然后分別精密加入對照品溶液5 ml，加蒸餾水至刻度，搖勻，精密吸取20W在上 述色譜條件下測定，平均回收率為103.2%， RSD=0.7%，結(jié)果表明5-羥甲基糠醛回收率良好。
2. 2.10耐用性試驗
精密吸取同一供試品溶液(批號0810222) 20 W在不同的色譜條件下，測定5-羥甲基 糠醛的含量，分別計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，均符合要求(RSD〈2.0%)
色譜條件分別為
1) 流動相比例的變化甲醇-水溶液(5 : 95)和甲醇-水溶液(15 : 85);
2) 柱溫的變化25°C和35°C;
3) 檢測波長的變化279nm和289nm;
4) 色譜柱的變化Extend-C18和Eclipse XDB-C18 ，
2.3.測定結(jié)果
直接取五個批次的參麥注射液，過微孔濾膜(0.45/m)后，每次精密量取20W注入高效液相 色譜儀，在上述色譜條件下測定，記錄色譜峰面積，計算含量，結(jié)果見表l.
表l參麥注射液中5-羥甲基糠醛含量
批次含量(/^/ml)平均含量(堆/ml)
081110115. 0215. 2715. 14
090120113.8313. 8513. 84
090212110. 8610. 6910.77
090328112.8612. 8412.85
090519215.0315. 1115. 0權(quán)利要求
1.一種參麥注射液中5-羥甲基糠醛的定量測定方法。其特征在于1)參麥注射液直接進樣，無需預(yù)處理；2)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以甲醇-水為流動相；流動相中甲醇的比例為5-15％；3)取5-羥甲基糠醛作對照品適量配成對照品溶液，采用反相液相色譜分別對對照品和樣品溶液進行分析，紫外檢測，紫外檢測的波長為284±5nm，按外標(biāo)法以峰面積計算樣品中5-羥甲基糠醛的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的參麥注射液中的5-羥甲基糠醛的定量測定方法，其特征在于1) 參麥注射液直接進樣，無需預(yù)處理；2) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以甲醇一水為流動相；流動相中甲醇的比例為8%;3) 取5-羥甲基糠醛作對照品適量配成對照品溶液，采用反相液相色譜分別對對照品和樣品溶 液進行分析，紫外檢測，紫外檢測的波長為284mn，按外標(biāo)法以峰面積計算樣品中5-羥甲基 糠醛的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種對參麥注射液中所含5-羥甲基糠醛的定量測定方法。5-羥甲基糠醛會對人體造成一定的毒副作用，對其進行含量控制有利于提高參麥注射液的質(zhì)量。含量測定步驟包括配置5-羥甲基糠醛對照品溶液，樣品和對照品溶液在液相色譜條件下測定并計算5-羥基糠醛的含量，色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以甲醇-水為流動相；流動相中甲醇的比例為5-15％，紫外檢測的波長為284±5nm。該法快捷、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適合在參麥注射液整個生產(chǎn)流程中使用。
文檔編號G01N30/02GK101620207SQ20091010093
公開日2010年1月6日 申請日期2009年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月10日
發(fā)明者鶴 馮, 凌益平, 張建兵, 張曉麗, 朱大元, 牧 李, 潘迎鋒, 王木蘭, 許正宇, 譚俊杰, 譚昌恒 申請人:正大青春寶藥業(yè)有限公司