浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 浮萍科植物是被子植物中最小和最簡(jiǎn)化的，以其生長(zhǎng)迅速、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、生物產(chǎn)量 高而著稱，在生活污水處理、飼料和沼氣生產(chǎn)中具有較大的作用。浮萍為漂浮水生維管束植 物，全球廣泛分布，多年來(lái)被用于植物生理學(xué)研究，近年來(lái)，國(guó)外許多學(xué)者已經(jīng)就浮萍的應(yīng) 用進(jìn)行了深入的水生生態(tài)毒理學(xué)研究，在國(guó)內(nèi)，浮萍植物作為毒理學(xué)材料加以應(yīng)用的報(bào)道 尚屬少見(jiàn)。
[0003] 我國(guó)《化學(xué)品測(cè)試方法生物系統(tǒng)效應(yīng)卷》中推薦使用浮萍作為試驗(yàn)物種，用于評(píng)價(jià) 化學(xué)品及其有毒物質(zhì)對(duì)水生植物的毒性。目前國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)多是對(duì)浮萍生長(zhǎng)條件及生長(zhǎng)環(huán)境方 面的研究，一般在水田池沼或其它靜水水域中采用種子繁殖和分株繁殖的方法去進(jìn)行種 植，而大面積的繁殖與培養(yǎng)，很難保證檢測(cè)試驗(yàn)中對(duì)浮萍質(zhì)量的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可操作的、實(shí)現(xiàn)浮萍 在室內(nèi)自然培養(yǎng)的方法，可為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)試驗(yàn)提供高質(zhì)量的生物試材，有利于浮萍生物毒性 試驗(yàn)的順利開(kāi)展。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，提供了一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法，包括以下步驟：
[0000] S1、將浮萍去根、滅菌后，置于Hoagland's E+培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
[0007] S2、選擇培養(yǎng)后的一簇單克隆浮萍，在無(wú)菌環(huán)境下轉(zhuǎn)接至Hoagland's E+培養(yǎng)基 中，繼續(xù)培養(yǎng)。
[0008] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟Sl中，所述Hoagland's E+培養(yǎng)基的液面高度為5cm ~10cm;培養(yǎng)過(guò)程中，每隔5天更換一次Hoagland's E+培養(yǎng)基。
[0009] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟S2中，所述的Hoagland's E+培養(yǎng)基的液面高度為 3cm;培養(yǎng)過(guò)程中，每隔2天更換一次Hoagland's E+培養(yǎng)基。
[0010] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟Sl中所述滅菌具體為:將去根后的浮萍用0.1%次 氯酸鈉浸泡滅菌Imin，再清水沖洗3次。
[0011] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟Sl中所述Hoagland's E+培養(yǎng)基的pH為6~9。
[0012]上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟Sl中，所述浮萍的培養(yǎng)密度為15~30葉/缸。
[0013]上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟Sl中，所述步驟Sl的培養(yǎng)條件為:溫度24±2°C;采 用全波長(zhǎng)熒光燈照明，光照強(qiáng)度6500~lOOOOLux;光照比為16h/8h(光照條件下放置16h，黑 暗條件下放置8h)。進(jìn)一步的，所述全波長(zhǎng)焚光等固定在距植株30cm~50cm的上方。
[0014]上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟S2中所述繼續(xù)培養(yǎng)的條件為:溫度24±2°C;光照強(qiáng) 度6500~lOOOOLux;光照比為16h/8h(光照條件下放置16h，黑暗條件下放置8h)。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0016] (1)本發(fā)明提供了一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法，操作簡(jiǎn)單易行，成本低，該方 法可保證浮萍的生長(zhǎng)，存活率高，符合非洲浮萍的生活規(guī)律，可為藥物安全性評(píng)價(jià)提供高質(zhì) 量的生物試材，可實(shí)現(xiàn)浮萍的批量培養(yǎng)。
[0017] (2)本發(fā)明提供了一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法法，選取一簇單克隆浮萍，標(biāo)記 浮萍的名稱品系及世代。
[0018] (3)本發(fā)明提供了一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法，在pH為6~9的環(huán)境下培養(yǎng)，低 pH對(duì)浮萍的生長(zhǎng)具有抑制作用，浮萍對(duì)pH耐受的低限在5~6之間，在6~9的pH范圍內(nèi)，能夠 正常生長(zhǎng)。
[0019] (4)本發(fā)明提供了一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法，將浮萍在溫度為24±2°C，光 照強(qiáng)度6500~lOOOOLux;光照比為16h/8h的條件先培養(yǎng)，其中浮萍在溫度為24 ± 2 °C下可防 止浮萍在低溫下形成冬芽；將燈固定在距植株30~50cm的上方，控制光照強(qiáng)度6500~ lOOOOLux可預(yù)防熱損傷。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例 中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整的描述。
[0021] 圖1為實(shí)施例1中浮萍的生長(zhǎng)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下結(jié)合說(shuō)明書附圖和具體優(yōu)選的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但并不因此而 限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023] 實(shí)施例
[0024]以下實(shí)施例中所采用的材料和儀器均為市售。
[0025] 實(shí)施例1:
[0026] -種本發(fā)明的浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖方法，包括以下步驟：
[0027] (1)選擇體積為30L，長(zhǎng)X寬X高= 5cmX 3cmX 2cm的方形玻璃缸作為浮萍的養(yǎng)殖 缸，使用前用2mg/L高錳酸鉀溶液(或者采用4mg/L次氯酸鈉溶液)浸泡養(yǎng)殖缸30min，再用清 水沖洗干凈。
[0028] (2)在洗凈的養(yǎng)殖缸內(nèi)放置Hoag land' s E+培養(yǎng)基，控制養(yǎng)殖缸內(nèi)的液面高度為 IOcm(液面高度為5~IOcm均可實(shí)施）。
[0029]使用的Hoagland's E+培養(yǎng)基，其配方為：
[0030] 表1:Hoagland s E+培養(yǎng)基配方表

L〇〇32」表1中，F(xiàn)eEDTA浴液的制備方法為：取2.78g的七水硫酸亞鐵和3.73g的乙二胺四乙 酸二鈉 (EDTA-Na2),用蒸餾水定容至500mL，配制成乙二胺四乙酸鐵鹽(FeEDTA)溶液。
[0033] (3)在野外使用IL燒杯及孔徑為2mm的抄網(wǎng)于田間采集健康的浮萍，用清水沖洗干 凈，再刀片去根得到去根浮萍。
[0034] (4)將去根浮萍用0.1%次氯酸鈉浸泡滅菌lmin，然后用清水沖洗滅菌后的浮萍3 次。
[0035] (5)將經(jīng)過(guò)步驟（2)滅菌后的去根浮萍置于步驟2的含Hoagland's E+培養(yǎng)基（用 HCl和KOH調(diào)整Hoagland's E+培養(yǎng)基pH為7.0)的養(yǎng)殖缸中培養(yǎng)，控制浮萍的培養(yǎng)密度為20 葉/缸，培養(yǎng)溫度為24± 2°C，光照強(qiáng)度為8000LuX± 200LUX，光照時(shí)間為16h，黑暗時(shí)間為8h。 培養(yǎng)過(guò)程中，每5天更換一次Hoagland's E+培養(yǎng)基。
[0036] (6)按照步驟(5)的培養(yǎng)方法培養(yǎng)一個(gè)月后，從養(yǎng)殖缸中隨機(jī)選取4片浮萍，在無(wú)菌 環(huán)境下轉(zhuǎn)接至含IOOmL的無(wú)菌Hoagland's E+培養(yǎng)基(pH為7)的組織培養(yǎng)瓶中（組織培養(yǎng)瓶 的體積為250mL，控制培養(yǎng)溫度為24±2°C，光照強(qiáng)度為8000Lux± 200LUX，光照時(shí)間為16h， 黑暗時(shí)間為8h。培養(yǎng)過(guò)程中，每2天更換一次培養(yǎng)基，共設(shè)3個(gè)重復(fù)，每天統(tǒng)計(jì)葉片總數(shù)，周期 為7天。表2為浮萍葉片數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，圖1為浮萍的生長(zhǎng)曲線圖。
[0037]表2:浮萍的葉片數(shù)量統(tǒng)計(jì)表
[0040] 從表2的結(jié)果中可知:6天葉狀體數(shù)目平均可增長(zhǎng)20倍，最高增長(zhǎng)近21倍，浮萍的生 長(zhǎng)基本為指數(shù)增長(zhǎng)。
[0041] 以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制。雖 然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例揭示如上，然而并非用以限定本發(fā)明。任何熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)和技術(shù)方案的情況下，都可利用上述揭示的方法和技術(shù)內(nèi) 容對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案做出許多可能的變動(dòng)和修飾，或修改為等同變化的等效實(shí)施例。因此， 凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單 修改、等同替換、等效變化及修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案保護(hù)的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法，其特征在于，包括以下步驟： 51、 將浮萍去根、滅菌后，置于Hoagland' s E+培養(yǎng)基中培養(yǎng)； 52、 選擇培養(yǎng)后的一簇單克隆浮萍，在無(wú)菌環(huán)境下轉(zhuǎn)接至Hoagland's E+培養(yǎng)基中，繼 續(xù)培養(yǎng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述Hoagland's E+培養(yǎng)基 的液面高度為5cm~10cm;培養(yǎng)過(guò)程中，每隔5天更換一次Hoagland's E+培養(yǎng)基。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S2中，所述的Hoagland's E+培養(yǎng) 基的液面高度為3cm;培養(yǎng)過(guò)程中，每隔2天更換一次Hoagland's E+培養(yǎng)基。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中所述滅菌具體為:將去根后 的浮萍用〇. 1 %次氯酸鈉浸泡滅菌lmin，再清水沖洗3次。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中所述Hoagland' s E+培養(yǎng)基 的pH為6~9。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述浮萍的培養(yǎng)密度為15 ~30葉/缸。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述步驟S1的培養(yǎng)條件為： 溫度24±2°C ;采用全波長(zhǎng)熒光燈照明，光照強(qiáng)度6500~lOOOOLux;光暗比為16h/8h。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S2中所述繼續(xù)培養(yǎng)的條件為:溫 度24±2°C;光照強(qiáng)度6500~lOOOOLux;光照比為16h/8h。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種浮萍室內(nèi)培養(yǎng)與繁殖的方法，包括以下步驟：將浮萍去根、滅菌后，置于Hoagland`s？E+培養(yǎng)基中培養(yǎng)；選擇培養(yǎng)后的一簇單克隆浮萍，在無(wú)菌環(huán)境下轉(zhuǎn)接至無(wú)菌培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)。本發(fā)明提供了一種可操作的、實(shí)現(xiàn)浮萍在室內(nèi)自然培養(yǎng)的方法，可為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)試驗(yàn)提供高質(zhì)量的生物試材，有利于浮萍生物毒性試驗(yàn)的順利開(kāi)展。
【IPC分類】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105638484
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】劉勇, 張德詠, 陳源, 蔣桂芳, 羅杰, 陳昂, 羅香文, 奚慶, 羅源華, 劉志邦, 嚴(yán)清平, 何安頔, 劉建宇
【申請(qǐng)人】湖南省植物保護(hù)研究所
【公開(kāi)日】2016年6月8日
【申請(qǐng)日】2016年3月29日