菌落密度可調(diào)的高精度接種與影印工具的制作方法
【專利說明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種菌落密度可調(diào)的高精度接種與影印工 具。
【背景技術(shù)】
[0003] 1952年，J. Lederberg發(fā)明了平板影印（Replica plating)方法，即通過影印平板 的接種培養(yǎng)方法，在母、子平板的對(duì)應(yīng)位置上形成相同遺傳型菌落。平板影印法不僅在微生 物遺傳理論研究中有重要應(yīng)用，而且在育種實(shí)踐和其他研究中均有應(yīng)用。傳統(tǒng)的影印法是 將滅菌絲絨繃在一個(gè)比培養(yǎng)皿稍小的圓柱上，構(gòu)成印章式的接種工具，然后把長有菌落的 培養(yǎng)皿倒置在絲絨印章上，輕輕印一下，原平板的菌落轉(zhuǎn)移到絲絨上面，通過按壓將菌轉(zhuǎn)接 到另一個(gè)含有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿的一種接種方法。平板影印法的優(yōu)點(diǎn)在于它方便菌的大規(guī)模 篩選。
[0004] 目前的影印工具的缺點(diǎn)主要表現(xiàn)為：1、無接種功能：目前的影印工具由于無法控 制接種微生物密度，間距無法調(diào)控，而微生物生長速度不一致，菌落的擴(kuò)張速度也不一致， 導(dǎo)致無法用于初始接種。2、影印精度低：使用印章工具影印時(shí)，距離相近的菌落易被擠壓， 造成菌落間污染；使用牙簽工具影印時(shí)，若牙簽之間存在菌落，則無法被影印，造成漏?。?使用牙簽工具影印時(shí)，一個(gè)大菌落可能被增印成多個(gè)菌落；平板培養(yǎng)基表面不平整時(shí)，印章 /牙簽影印工具分別會(huì)造成漏印/刺破培養(yǎng)基。3、滅菌時(shí)間長：由于絨布、牙簽、豬鬃等均 不能在火焰上灼燒滅菌，所以在批量操作時(shí)，需事先濕熱滅菌大量影印工具(每個(gè)工具影印 一次后就必須重新濕熱滅菌才能用于另一母板)，單次濕熱滅菌即需要1~2小時(shí)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種菌落密度可調(diào)的高精度接種與影印工具。 使用該工具，既可定量接種菌落，又能夠高精度影印復(fù)制菌落，且能夠快速灼燒滅菌。
[0006] 本發(fā)明的接種與影印工具，包括圓盤狀、同樣大小的底板、中間板和面板，它們通 過邊緣上均勻分布的四根不銹鋼螺絲固定，在四根不銹鋼螺絲外套銅螺柱，底板、中間板、 面板的中心與一手柄通過螺母固定連接；在中間板和面板上有1448個(gè)小孔，有10~1448根 平頭不銹鋼釘穿過中間板和面板的小孔，且釘頭在底板和中間板之間可上下移動(dòng)。
[0007] 中間板與底板的距離是4mm。
[0008] 中間板與面板的距離是8mm〇
[0009] 所述底板、中間板、面板厚I. 6mm，直徑95mm。
[0010] 平頭不銹鋼釘長30 ± 1mm，直徑1mm。平頭不銹鋼釘10~1448根，根據(jù)微生物菌落 大小自由調(diào)節(jié)，為避免菌落互相黏連融合同時(shí)兼顧分離效率，菌落較大時(shí)針數(shù)應(yīng)較少，菌落 較小時(shí)針數(shù)應(yīng)較多。 toon] 本發(fā)明裝置定量接種菌落的功能指：根據(jù)菌落大小的不同，每個(gè)直徑10厘米的培 養(yǎng)皿上能夠形成的最大菌落數(shù)在1〇~1448個(gè)之間連續(xù)可調(diào)；高精度影印復(fù)制菌落的功能 指：能夠?qū)⑼还ぞ呓臃N形成的菌落有效復(fù)制到另一平板上，避免漏印與增印，影印部件 (鋼針）與平板表面完全貼合；滅菌性能指：整個(gè)工具能夠耐受121Γ濕熱滅菌，接種針部分 能夠直接用酒精燈火焰快速灼燒滅菌。
[0012] 本發(fā)明的工具與現(xiàn)有工具比較總結(jié)如上表所示。
【附圖說明】
[0013] 圖1，面板、中間板結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014] 圖2,本發(fā)明裝置結(jié)構(gòu)示意圖。
[0015] 圖3,底泥中微生物案例，原代平板，顯示接種效果。
[0016] 圖4,底泥中微生物案例，子代平板，顯示影印效果。
[0017] 圖5,放線菌紫外誘變案例，原代平板，顯示接種效果。
[0018] 圖6,放線菌紫外誘變案例，子代平板，顯示影印效果。
【具體實(shí)施方式】
[0019] -、本發(fā)明工具的制備 面板、中間板設(shè)計(jì)如1所示。其中，1、圓盤：直徑95_，厚1.6_ 2、 中心孔：直徑3mm小孔，位于圓盤正中心，共1個(gè)； 3、 中軸線孔：直徑2mm小孔，位于黃色圓盤縱橫中軸線上，圓心距圓盤邊緣為5mm，共4 個(gè)； 4、 小孔：在圓盤上打滿直徑I. 15mm小孔，縱橫孔距（圓心間距）均為2. 15mm，共1448 個(gè)； 5、 定位孔：直徑Imm小孔，位于圓盤橫中軸線上，圓心距圓盤邊界為I. 5mm，共1個(gè)。
[0020] 底板無1448個(gè)小孔，中心孔直徑增大為7mm，中軸線孔徑增大為4mm，其他與面板 一樣。
[0021] 針數(shù)可在10~1448孔之間連續(xù)調(diào)整，安裝過程本說明以357針為例：兩塊板應(yīng)先用 銅螺柱隔離，間距8mm。將357根平頭不銹鋼釘插入中間板、面板。由于不銹鋼釘?shù)闹睆铰?小于孔直徑，釘可在孔內(nèi)可以上下移動(dòng)；不銹鋼釘安裝完畢后再組裝底板，底板的作用在于 限制不銹鋼釘?shù)囊苿?dòng)范圍并通過自身重力作用壓迫所有不銹鋼釘自然下滑(從而保證不銹 鋼釘與平板貼合度良好)，底板與中間板用銅螺柱隔離，底板與中間面板的間距活動(dòng)范圍為 〇~4_;再用不銹鋼螺絲固定底板、中間板、面板，然后安裝手柄。整個(gè)裝置可耐受121°C濕 熱滅菌1000次，其接種部位(釘尖）可用酒精燈火焰灼燒滅菌。
[0022] 二、本發(fā)明工具的應(yīng)用兩例 例一、底泥中微生物的分離與影印傳代 1、樣品來源及培養(yǎng)基 分離微生物的樣品來源：來自湖北省某水庫的底泥。
[0023] 培養(yǎng)基：可溶性淀粉 20g，KNO3 lg，NaCl 0· 5g，K2HPO4 0· 5g，MgSO4 0· 5g，F(xiàn)eSO40.0 lg，瓊脂20g，蒸餾水1L，pH=7. 2,瓊脂粉含量為I. 6%。
[0024] 2、底泥菌懸液的制備 稱取Ig底泥加到錐形瓶中，然后加入50ml滅菌的生理鹽水，再加入玻璃珠，置于搖床 中，25°C，160r/min震蕩lh，然后靜置備用。
[0025] 3、平板影印接種菌(制備原代平板） 取在121°C的溫度下滅菌的IOcm培養(yǎng)皿放入潔凈工作臺(tái)中紫外線照射30分鐘，取底泥 菌懸液>10mL倒入清潔的滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用接種影印工具沾取菌懸液后放置(依靠工具的 自身重力，無需按壓）于事先制備好的高氏一號(hào)固體平板（IOcm培養(yǎng)皿）上，用記號(hào)筆在接 種影印工具定位孔對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿邊緣做定位孔標(biāo)記，蓋上平皿蓋25°C倒置培養(yǎng)。
[0026] 4、平板影印傳代(制備子代平板） 待平板中菌落長到適當(dāng)大小(菌落明顯但又尚未黏連融合)，采用無菌操作，用同一接 種影印工具的定位孔對(duì)準(zhǔn)培養(yǎng)皿上的定位孔標(biāo)記，放下接種影印工具(依靠工具的自身重 力，無需按壓)，鋼針針頭上將沾染原平板上對(duì)應(yīng)的菌落，再轉(zhuǎn)印于另一個(gè)含有高氏一號(hào)培 養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上面進(jìn)行傳代（依靠工具的自身重力放置即可，同時(shí)做定位孔標(biāo)記)，蓋上平 皿蓋25°C倒置培養(yǎng)。影印完成后，將原代平板于4°C保藏待用。
[0027] 例二、放線菌誘變育種的分離與影印傳代 1、樣品來源及培養(yǎng)基 分離微生物的樣品來源：放線菌純菌株--鏈霉菌AN02。
[0028] 培養(yǎng)基：可溶性淀粉 20g，KNO3 lg，NaCl 0· 5g，K2HPO4 0· 5g，MgSO4 0· 5g，F(xiàn)eSO40.0 lg，瓊脂20g，蒸餾水1L，pH=7. 2,瓊脂粉含量為I. 6%。
[0029] 2、菌懸液的紫外誘變處理 將菌懸液置于PHILIPS PL-S9W/01/2P中波紫外燈管25厘米處照射3分鐘。
[0030] 3、平板影印接種菌(制備原代平板） 取在121°C的溫度下滅菌的IOcm培養(yǎng)皿放入潔凈工作臺(tái)中紫外線照射30分鐘，取底 泥菌懸液>10mL倒入清潔的滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用接種影印工具沾取經(jīng)紫外誘變處理的菌懸液 后放置(依靠工具的自身重力，無需按壓)于事先制備好的高氏一號(hào)固體平板（IOcm培養(yǎng)皿） 上，用記號(hào)筆在接種影印工具定位孔對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿邊緣做定位孔標(biāo)記，蓋上平皿蓋25°C倒 置培養(yǎng)。
[0031] 4、平板影印傳代(制備子代平板） 待平板中菌落長到適當(dāng)大小(菌落明顯但又尚未黏連融合)，采用無菌操作，用同一接 種影印工具的定位孔對(duì)準(zhǔn)培養(yǎng)皿上的定位孔標(biāo)記，放下接種影印工具(依靠工具的自身重 力，無需按壓)，鋼針針頭上將沾染原平板上對(duì)應(yīng)的菌落，再轉(zhuǎn)印于另一個(gè)含有高氏一號(hào)培 養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上面進(jìn)行傳代（依靠工具的自身重力放置即可，同時(shí)做定位孔標(biāo)記)，蓋上平 皿蓋25°C倒置培養(yǎng)。影印完成后，將原代平板于4°C保藏待用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種菌落密度可調(diào)的高精度接種與影印工具，其特征在于，包括圓盤狀、同樣大小 的底板、中間板和面板，它們通過邊緣上均勻分布的四根不銹鋼螺絲固定，在四根不銹鋼螺 絲外套銅螺柱，底板、中間板、面板的中心與一手柄通過螺母固定連接；在中間板和面板上 有1448個(gè)小孔，有10~1448根平頭不銹鋼釘穿過中間板和面板的小孔，且釘頭在底板和中 間板之間可上下移動(dòng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高精度接種和影印工具，其特征在于，底板是可以活動(dòng)的，并 通過自身重力作用壓迫所有不銹鋼釘自然下滑(從而保證不銹鋼釘與平板貼合度良好)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高精度接種和影印工具，其特征在于，不銹鋼釘為平頭，其 直徑略小于孔直徑，釘可在孔內(nèi)可以小幅度上下移動(dòng)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高精度接種和影印工具，其特征在于，所述底板、中間板可 配備的平頭不銹鋼釘數(shù)量和針間間隙可以根據(jù)需要自由調(diào)節(jié)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高精度接種和影印工具，其特征在于，所述的工具整體能夠 耐受濕熱滅菌，不銹鋼釘能夠耐受酒精燈火焰灼燒滅菌； 此外，本工具設(shè)計(jì)的中間板、面板、底板的外形尺寸，開孔的孔徑大小和密度，不銹鋼釘 的材質(zhì)、直徑、長度等均可根據(jù)需要調(diào)節(jié)； 如分離霉菌(菌落很大）時(shí)可采用直徑20厘米的大培養(yǎng)皿，此時(shí)，中間板、面板、底板的 直徑應(yīng)增加至19. 5厘米，開孔孔徑增加(不銹鋼釘直徑相應(yīng)增加)，開孔密度減小，不銹鋼釘 長度增加，不銹鋼針材質(zhì)也可替換為鋁針、銅針等耐熱不銹材料。
【專利摘要】本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種菌落密度可調(diào)的高精度接種與影印工具。包括圓盤狀、同樣大小的底板、中間板和面板，它們通過邊緣上均勻分布的四根不銹鋼螺絲固定，在四根不銹鋼螺絲外套銅螺柱，底板、中間板、面板的中心與一手柄通過螺母固定連接；在中間板和面板上有1448個(gè)小孔，有10~1448根平頭不銹鋼釘穿過中間板和面板的小孔，且釘頭在底板和中間板之間可上下移動(dòng)。使用該工具，既可定量接種菌落，又能夠高精度影印復(fù)制菌落，且能夠快速灼燒滅菌。
【IPC分類】C12M1/26
【公開號(hào)】CN105176802
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】程凱, 章登嵐, 孫軼群, 吳剛, 趙以軍
【申請(qǐng)人】湖北工業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年8月17日