一種宮頸癌hpv快速檢測(cè)裝置的試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及宮頸癌檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]HPV病毒是一種雙鏈DNA病毒，具有球形外殼，直徑55nm，主要感染皮膚粘膜上皮，導(dǎo)致不同病變。目前已經(jīng)鑒定的HPV病毒超過(guò)200種，至少30種與生殖道粘膜感染相關(guān)。HPV婦女一生中80%可感染HPV，通常在8-10個(gè)月內(nèi)被自然清除，只有少數(shù)(5%)婦女呈持續(xù)感染狀態(tài)。
[0003]HPV持續(xù)感染是引起宮頸癌的首要病因。宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位。我國(guó)是一個(gè)宮頸癌高發(fā)區(qū)，每年新增病例20萬(wàn)人左右，占世界總發(fā)病人數(shù)的近1/3，且每年約有5萬(wàn)人死于宮頸癌。隨著現(xiàn)在年輕人性生活的提前，早育、性生活紊亂、免疫力低等又在很大程度上增加患宮頸癌及相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)。如何防治及治療宮頸癌已成為當(dāng)今社會(huì)發(fā)展的一個(gè)重要課題。
[0004]目前，對(duì)HPV病毒的檢測(cè)多采用PCR、HCI1、TCT等方法。但是上述幾種方法操作繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、準(zhǔn)確率較低、需要特定的儀器設(shè)備檢測(cè)、需要專(zhuān)門(mén)的技術(shù)人員操作并且檢測(cè)成本較高，所以這些因素不利于核酸的早期快速篩查。因此，需要一種新的快速檢測(cè)病原體核酸的方法，可以直接檢測(cè)病原體的存在。雖然已經(jīng)有多種確定微生物核酸的方法，然而現(xiàn)有的技術(shù)在被用來(lái)作為診斷指標(biāo)方面仍然存在不足。因此，建立一種靈敏、快速的核酸檢測(cè)技術(shù)一直是研宄工作者探討的問(wèn)題。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005]本實(shí)用新型的目的為解決以上技術(shù)問(wèn)題，提供一種靈敏度高、穩(wěn)定性高、檢測(cè)快速、攜帶方便、無(wú)污染的宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條。
[0006]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，采取的具體技術(shù)方案如下:一種宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條，包括底板、樣品墊、結(jié)合墊、吸收墊，所述底板一端上方為樣品墊，底板另一端上方為吸收墊，樣品墊一端下方重疊有結(jié)合墊，結(jié)合墊與吸收墊之間為硝酸纖維素膜墊，硝酸纖維素膜墊上設(shè)置有測(cè)試線和控制線，測(cè)試線和控制線上分別設(shè)置有核酸探針。
[0007]進(jìn)一步，所述的底板為惰性樹(shù)脂。
[0008]進(jìn)一步，所述的結(jié)合墊為玻璃纖維墊，玻璃纖維墊上涂抹有納米材料，納米材料為金納米粒子及由納米粒子修飾的娃納米線制成。
[0009]本實(shí)用新型的有益效果是，本試紙條具有以下優(yōu)點(diǎn):1.靈敏度高:核酸探針的設(shè)計(jì)，使其在應(yīng)用時(shí)可極大地提高檢測(cè)方法的靈敏度。2.特異性強(qiáng):抗原抗體的非特異性結(jié)合干擾較強(qiáng)相比，特異的核酸探針的設(shè)計(jì)使其在實(shí)際應(yīng)用中可最大限度地降低樣品中非特異作用。3.穩(wěn)定性高:本實(shí)用新型中，標(biāo)記的是核酸探針，因?yàn)樵谕饨绾怂犭s交的穩(wěn)定性比抗原抗體結(jié)合的穩(wěn)定性高。4.檢測(cè)快速:結(jié)果判讀一般在20分鐘內(nèi)即可完成。5.攜帶方便，操作簡(jiǎn)單:檢測(cè)不需要任何特殊的儀器或設(shè)備，操作步驟簡(jiǎn)單，無(wú)需PCR擴(kuò)增，非專(zhuān)業(yè)人員即可操作。便于醫(yī)護(hù)人員攜帶，也可供普通人群或患者自我檢測(cè)與監(jiān)控。便于HPV的快速篩查及術(shù)后跟蹤治療，適合邊遠(yuǎn)地區(qū)及醫(yī)療衛(wèi)生條件不發(fā)達(dá)的醫(yī)院等基層單位。6.成本低；7.可快速進(jìn)行HPV分型檢測(cè)；8.該試紙條為一次性用品，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，按照一般的醫(yī)療垃圾處理即可。
【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；
【具體實(shí)施方式】
[0011]為了使本實(shí)用新型的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本實(shí)用新型，并不用于限定本實(shí)用新型。
[0012]根據(jù)圖1如示，一種宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條，包括底板6、樣品墊1、結(jié)合墊2、吸收墊5，所述底板6 —端上方為樣品墊1，底板6另一端上方為吸收墊5，樣品墊I一端下方重疊有結(jié)合墊2，結(jié)合墊2與吸收墊5之間為硝酸纖維素膜墊8，硝酸纖維素膜墊8上設(shè)置有測(cè)試線3和控制線4，測(cè)試線3和控制線4上分別設(shè)置有核酸探針7，底板6為惰性樹(shù)脂，結(jié)合墊2為玻璃纖維墊，玻璃纖維墊上涂抹有納米材料，納米材料為金納米粒子及由納米粒子修飾的娃納米線制成。
[0013]具體的工作原理為:
[0014]一、樣本處理
[0015]本試紙條應(yīng)用于HPV快速篩查和術(shù)后監(jiān)測(cè)，適用范圍廣，可用于檢測(cè)石蠟包埋組織(FFPE)、福爾馬林浸泡組織、血樣、宮頸脫落細(xì)胞等多種類(lèi)型樣本。此處具體說(shuō)明宮頸脫落細(xì)胞和FFPE兩種樣本的處理方法。
[0016]1、宮頸脫落細(xì)胞的處理:
[0017]A.將標(biāo)本倒入15mL離心管離心(3000rpm)后倒掉上清液，用2mLDDH20清洗后再次離心，倒掉上清液；B.加入如下混合液:200 μ L裂解液和400 μ L DDH20(混合比例為1:2)，用移液槍吹打細(xì)胞團(tuán)，使細(xì)胞分散懸?。籆.再加入5 μ L蛋白酶K，65°C中放置I小時(shí)，裂解過(guò)程中可進(jìn)行2?3次震蕩。D.取上清液用于檢測(cè)。
[0018]2、FFPE切片狀樣品的處理:
[0019]A.取石蠟包埋組織切片置于65°C烘箱中烘烤20-30min，將石蠟初步融化；B.石蠟初步融化后，依次加入下列溶液中進(jìn)行脫蠟、水化:二甲苯I (1min)、二甲苯II (1min)、無(wú)水乙醇(2min)、50%乙醇(2min)、水洗；C.將水洗后的切片組織用蓋玻片輕輕刮入1.5mLEP管中，加入300 μ L組織裂解液和2 μ L蛋白酶K，65°C孵育l_3h，每隔I小時(shí)震蕩一次，直至溶液變得清亮(如組織較多可延長(zhǎng)孵育時(shí)間至3-5h ;標(biāo)本裂解后會(huì)殘留部分結(jié)締組織等沉淀，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn))；D.直接取上清進(jìn)行檢測(cè)。
[0020]3.FFPE管狀樣品的處理:
[0021]A.觀察石蠟組織樣本，將管中大塊石蠟可先去除；B.二甲苯洗滌:加入800 μ L 二甲苯，混勾后置于65°C，lOmin，加速石錯(cuò)的溶解；C.13000rpm離心3min。小心吸取上清，不要碰到底部組織沉淀(如有較多石蠟，可重復(fù)步驟2、3，直至石蠟去除)；D.乙醇水化:加Λ 800 μ L 100%乙醇，震蕩混勻，13000rpm，5min。小心移去上清；Ε.加入800 μ L 50%乙醇，震蕩混勻，14000rpm，10min。小心移去上清，注意不要碰到底部組織沉淀(注意:組織水化后不易沉淀，不同于脫水組織易沉淀；如遇未沉淀組織，可將離心時(shí)間增加至15min。);F.加入500 yL組織裂解液和5yL蛋白酶K，65°C孵育l_3h，每隔I小時(shí)震蕩一次，直至溶液變得清亮(如組織較多可延長(zhǎng)孵育時(shí)間至3-5h ;標(biāo)本裂解后會(huì)殘留部分結(jié)締組織等沉淀，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn))；G.直接取上清進(jìn)行檢測(cè)。
[0022]二、試紙條檢測(cè):
[0023]取10 μ L樣本裂解后的上清與40 μ L DDH20混均后，加入試紙條加樣孔，加樣完畢靜置15min后，再加入30 μ L DDH20清洗，等待5min后即可觀察結(jié)果。
[0024]三、結(jié)果分析
[0025]若標(biāo)本中有待測(cè)特異核酸，試紙條的測(cè)試線和控制線均可見(jiàn)一條色帶。
[0026]若標(biāo)本中無(wú)待測(cè)特異核酸，僅試紙條的控制線處可見(jiàn)一條色帶。
[0027]若試紙條的測(cè)試線和控制線均無(wú)可見(jiàn)色帶，說(shuō)明該檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條，包括底板、樣品墊、結(jié)合墊、吸收墊，其特征在于，所述底板一端上方為樣品墊，底板另一端上方為吸收墊，樣品墊一端下方重疊有結(jié)合墊，結(jié)合墊與吸收墊之間為硝酸纖維素膜墊，硝酸纖維素膜墊上設(shè)置有測(cè)試線和控制線，測(cè)試線和控制線上分別設(shè)置有核酸探針。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條，其特征在于，所述的底板為惰性樹(shù)脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條，其特征在于，所述的結(jié)合墊為玻璃纖維墊，玻璃纖維墊上涂抹有納米材料，納米材料為金納米粒子及由納米粒子修飾的娃納米線制成。
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型提供的一種宮頸癌HPV快速檢測(cè)裝置的試紙條，包括底板、樣品墊、結(jié)合墊、吸收墊，所述底板一端上方為樣品墊，底板另一端上方為吸收墊，樣品墊一端下方重疊有結(jié)合墊，結(jié)合墊與吸收墊之間為硝酸纖維素膜墊，硝酸纖維素膜墊上設(shè)置有測(cè)試線和控制線，測(cè)試線和控制線上分別設(shè)置有核酸探針。本試紙條具有以下優(yōu)點(diǎn)：1.靈敏度高：核酸探針的設(shè)計(jì)，使其在應(yīng)用時(shí)可極大地提高檢測(cè)方法的靈敏度。2.特異性強(qiáng)：抗原抗體的非特異性結(jié)合干擾較強(qiáng)相比，特異的核酸探針的設(shè)計(jì)使其在實(shí)際應(yīng)用中可最大限度地降低樣品中非特異作用。
【IPC分類(lèi)】G01N33-569
【公開(kāi)號(hào)】CN204462154
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520119712
【發(fā)明人】劉國(guó)東, 張鷺鷺, 李先坤, 李曉磊, 程昀靜
【申請(qǐng)人】河南省科隆醫(yī)療器械有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2015年3月1日