穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其包括R1試劑和R2試劑，其中，所述R2試劑包含如下組分：緩沖液、氯化鈉、防腐劑、PA抗體、穩(wěn)定劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：1、本發(fā)明R2試劑中加入了一種特殊的穩(wěn)定劑氯化膽堿，這個(gè)穩(wěn)定劑可以通過改變PA抗體的構(gòu)型，來達(dá)到穩(wěn)定試劑的效果，同時(shí)該穩(wěn)定劑雖然改變了抗體的構(gòu)型，但是不影響該抗體的效價(jià)；2、試驗(yàn)表明，應(yīng)用本發(fā)明所述試劑盒檢測準(zhǔn)確度高，精密度好，而且本發(fā)明試劑盒穩(wěn)定性佳，保存時(shí)間長。本發(fā)明所述試劑盒適用范圍廣，便于推廣使用，可應(yīng)用于各級(jí)醫(yī)院、衛(wèi)生預(yù)防部門和醫(yī)學(xué)生物科研單位測定人血清或血漿樣本中的前白蛋白的含量。
【專利說明】
穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，屬于臨床體外檢測試劑技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 前白蛋白，又稱轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白，簡稱PA，由肝細(xì)胞合成，在電泳分離時(shí)常顯示在 白蛋白的前方，其半衰期約12小時(shí)。臨床上測定前白蛋白在血漿中的濃度對(duì)于了解蛋白質(zhì) 的營養(yǎng)不良、肝功能不全、比之白蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白具有更高的敏感性，了解前白蛋白是什么 意思，要知道前白蛋白偏高的主要原因是由血液濃縮造成。另外還有一種可能是肝臟的代 謝能力強(qiáng)也是引起前白蛋白偏高的原因。了解前白蛋白是什么意思，要知道肝臟疾病中的 肝癌、肝硬化、慢性活動(dòng)性肝炎、阻塞性黃疸等都可以表現(xiàn)為前白蛋白偏低。一般情況下，前 白蛋白、轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素均增高，多屬急性肝臟疾病，尤其在肝癌患者和阻塞性黃疸患者中， 如果前白蛋白持續(xù)降低，說明病情持續(xù)惡化。
[0003] PA除了作為組織修補(bǔ)的材料外，還可視為一種運(yùn)載蛋白，它結(jié)合T4和T3,而對(duì)T3親 和力更大，PA與視黃醇結(jié)合蛋白形成復(fù)合物，具有運(yùn)載維生素A的作用。除了作為一種靈敏 的營養(yǎng)蛋白質(zhì)指標(biāo)，PA在急性炎癥、惡性腫瘤、肝硬化或腎炎時(shí)其血濃度下降。具體來講，前 白蛋白的含量與病癥的關(guān)聯(lián)如下：
[0004] 1)肝臟疾病時(shí)前白蛋白更敏感，有人認(rèn)為有30%白蛋白正常的肝病患者的前白蛋 白減少，壞死后肝硬化幾乎是零。肝硬化肝細(xì)胞壞死較輕，前白蛋白變化不大，預(yù)后較好，當(dāng) 病情改善時(shí)，如白蛋白亦迅速升尚；
[0005] 2)亞急性肝壞死前白蛋白一直在低值，故前白蛋白可用作判斷肝病預(yù)后指標(biāo)。肝 癌以及阻塞性黃疸患者均可降低，其降低程度與病情有密切關(guān)系；
[0006] 3)結(jié)合轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素檢測對(duì)不同類型肝臟疾病和非肝臟疾病有鑒別意義，如前 白蛋白、轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素均增高，多屬急性肝臟疾病，如前白蛋白不增高，僅轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素 增高則應(yīng)考慮非肝臟本身疾病；
[0007] 4)腎病綜合征前白蛋白不僅不減少，而且在飲食充分時(shí)還可以升高。營養(yǎng)不良負(fù) 氮平衡時(shí)前白蛋白減少。
[0008] 目前市場上的前白蛋白檢測試劑盒穩(wěn)定性較差，降低了在臨床上的使用價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑 盒。本發(fā)明通過在R2試劑中加入了一種特殊的穩(wěn)定劑來達(dá)到穩(wěn)定試劑的效果，研發(fā)出了一 種穩(wěn)定性尚的如白蛋白檢測試劑盒。
[0010] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0011] 本發(fā)明提供一種穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其包括R1試劑和R2試劑，其中， 所述R2試劑包含按濃度計(jì)的如下組分： 緩沖液 100 ~200mmol/:L; 氯化鈉 7~9g/L;
[0012] 防腐劑 0,3 ~ PA 抗體 80-150ml; 穩(wěn)定劑 40~60g/L。
[0013] 作為優(yōu)選方案，所述穩(wěn)定劑為環(huán)糊精、氯化膽堿或甘露醇。
[0014] 作為優(yōu)選方案，所述穩(wěn)定劑為氯化膽堿。
[0015]作為優(yōu)選方案，所述R1試劑包含按濃度或重量百分?jǐn)?shù)計(jì)的如下組分： 緩沖液 100 ~200mmol/L; 聚乙二醇 4.00~6.00%; 防腐劑 0.3~0.8g/L;
[0016] 氯化鈉 7-9g/L; 乙二胺四乙酸二鈉 1.5~2.0g/L; 表面活性劑 0.8~1.2g/L。
[0017]作為優(yōu)選方案，所述緩沖液的PH值為7.0~7.4。
[0018]作為優(yōu)選方案，所述緩沖液為三羥甲基氨基甲烷、丙磺酸或4-輕乙基哌嗪乙磺酸。
[0019] 作為優(yōu)選方案，所述緩沖液為丙磺酸。
[0020] 作為優(yōu)選方案，所述防腐劑為Proclin 300。
[0021] 作為優(yōu)選方案，所述表面活性劑為吐溫80、吐溫20或曲拉通X-100。
[0022] 作為優(yōu)選方案，其特征在于，所述表面活性劑為吐溫-20。
[0023] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：
[0024] 1、本發(fā)明R2試劑中加入了一種特殊的穩(wěn)定劑氯化膽堿，這個(gè)穩(wěn)定劑可以通過改變 PA抗體的構(gòu)型，來達(dá)到穩(wěn)定試劑的效果，同時(shí)該穩(wěn)定劑雖然改變了抗體的構(gòu)型，但是不影響 該抗體的效價(jià)；
[0025] 2、試驗(yàn)表明，應(yīng)用本發(fā)明所述試劑盒檢測準(zhǔn)確度高，精密度好，而且本發(fā)明試劑盒 穩(wěn)定性佳，保存時(shí)間長；
[0026] 3、本發(fā)明的試劑盒適用范圍廣，便于推廣使用，可應(yīng)用于各級(jí)醫(yī)院、衛(wèi)生預(yù)防部門 和醫(yī)學(xué)生物科研單位測定人血清或血漿樣本中的前白蛋白的含量。
【附圖說明】
[0027]通過閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、 目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯：
[0028] 圖1為PA參考標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0029] 圖2為本發(fā)明與康華生物試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證檢測的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0030] 圖3為分別采用本發(fā)明試劑和現(xiàn)有技術(shù)中的PA試劑對(duì)人血清按各自參數(shù)同時(shí)進(jìn)行 測定，對(duì)測定值進(jìn)行相關(guān)分析的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。以下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù) 人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)。這些都屬于本發(fā)明 的保護(hù)范圍。
[0032] 實(shí)施例1
[0033]測定試劑盒組成如下：
[0034] 1)試劑R1的組成為： 丙磺酸（MOPS)緩沖液 100nimo!/L (PH=7.0); 聚乙二醇 4.00%;
[0035] Proclin 300 0.3g/L； 氯化鈉 7g/L; 乙二胺四乙酸二鈉 1,5 g/L;
[0036] 吐溫 20 0;8：g/Lt
[0037] 2)試劑R2的組成為： 丙磺酸（MOPS)緩沖液 100nimoi,''L (PH=7 0); 氯化鈉
[0038] Proclin 300 0.3g/L； PA抗體 80mh 氯化膽堿 40g/L。
[0039] 各種成分可以室溫下依次添加，或者同時(shí)添加，或者是分別單獨(dú)包裝并于檢測之 前再即時(shí)配制。試劑檢測比例為3:1。
[0040] 本實(shí)施例描述的PA檢測試劑盒，適用于各種類型的全自動(dòng)生化儀，以日立7080全 自動(dòng)生化儀為例，其操作如表1。分析方法:兩點(diǎn)終點(diǎn)法，即試劑R1、R2的用量分別為225ul和 75ul，樣本量6ul;225ul試劑R1加入6ul樣本于37°C孵育3~5min，讀取吸光度A0,加入75ul R2，37°C孵育5min，讀取吸光度A1，計(jì)算A A=A1-A0;檢測主波長為340nm。
[0041]采用本試劑及上述測定方法，采用日立7080生化分析儀測得的PA標(biāo)準(zhǔn)品的曲線 (如圖1所不），其中X軸表不PA含量(mg/L) ;Y軸表不吸光度。
[0042]表 1
[0044] 實(shí)施例2
[0045] 測定試劑盒組成如下：
[0046] 1)試劑R1的組成為： 丙磺酸（MOPS)緩沖液 150mm〇l/L (:PH=7:.2):; 聚乙二醇 5.00%: Prod in 300 0.5g/L ：
[0047] 氯化鈉 8_g/L; 乙二胺四乙酸二鈉 1.8g/L; 吐溫 20 l.Og/L。
[0048] 2)試劑R2的組成為： 丙磺酸（MQPS)緩沖液 150_i〇l/L (PH=7,2); 氯化鈉 8g/L;
[0049] Proclin 300 0.5g/L； PA 抗體 llOnll; 氯化膽堿 50g/L。
[0050] 各種成分可以室溫下依次添加，或者同時(shí)添加，或者是分別單獨(dú)包裝并于檢測之 前再即時(shí)配制。試劑檢測比例為3:1。
[0051] 本實(shí)施例描述的PA檢測試劑盒，適用于各種類型的全自動(dòng)生化儀，以日立7080全 自動(dòng)生化儀為例，其操作如表1。分析方法:兩點(diǎn)終點(diǎn)法，即試劑R1、R2的用量分別為225ul和 75ul，樣本量6ul;225ul試劑R1加入6ul樣本于37°C孵育3~5min，讀取吸光度A0,加入75ul R2，37°C孵育5min，讀取吸光度A1，計(jì)算A A=A1-A0;檢測主波長為340nm。
[0052] 實(shí)施例3
[0053] 測定試劑盒組成如下：
[0054] 1)試劑R1的組成為： 丙磺酸（MOPS)緩沖液 200mmol L (PH=7.4) t 聚乙二醇 6.00%; Proclin 300 0.Jg/L;
[0055] 氯化鈉 9g/L; 乙二胺四乙酸二鈉 2g/L; 吐溫 20 1.2g/L；
[0056] 2)試劑R2的組成為：
[0057] 丙磺酸（MOPS)緩沖液 200mmol/L (丨)1-丨=7.4); 氯化鈉 9g/L; Proclin 300 0.8g'L:
[0058] PA 抗體 150ml; 氯化膽堿 60g/L,,
[0059] 各種成分可以室溫下依次添加，或者同時(shí)添加，或者是分別單獨(dú)包裝并于檢測之 前再即時(shí)配制。試劑檢測比例為3:1。
[0060] 本實(shí)施例描述的PA檢測試劑盒，適用于各種類型的全自動(dòng)生化儀，以日立7080全 自動(dòng)生化儀為例，其操作如表1。分析方法:兩點(diǎn)終點(diǎn)法，即試劑R1、R2的用量分別為225ul和 75ul，樣本量6ul;225ul試劑R1加入6ul樣本于37°C孵育3~5min，讀取吸光度A0,加入75ul R2，37°C孵育5min，讀取吸光度A1，計(jì)算A A=A1-A0;檢測主波長為340nm。
[00611 實(shí)施例4:穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0062]本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測試劑穩(wěn)定性。
[0063]操作步驟:利用日立7080全自動(dòng)生化分析儀，檢測在2~8°C環(huán)境下不同時(shí)間的實(shí) 施例1所述試劑的空白吸光度，比較其吸光度變化。采用純水作為空白樣本在生化分析儀上 檢測，根據(jù)要求記錄檢測樣本吸光度。如樣本空白吸光度則在測試主波長下，記錄儀器測試 讀數(shù)結(jié)束時(shí)(該項(xiàng)目設(shè)置參數(shù)的末尾一點(diǎn)）的吸光度。
[0064]表2結(jié)果顯示，與康華生物試劑相比，本發(fā)明試劑半年內(nèi)空白吸光度變化明顯小于 康華生物試劑的空白吸光度，表明本發(fā)明所述試劑穩(wěn)定性優(yōu)于康華生物試劑。圖2為本發(fā)明 試劑與康華生物試劑180天的穩(wěn)定性驗(yàn)證試驗(yàn)空白吸光度的對(duì)比圖。
[0065] 分別采用本發(fā)明試劑和北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司的PA試劑，采用日立全自 動(dòng)生化分析儀對(duì)50份人血清(包含正常和異常標(biāo)本)按各自參數(shù)同時(shí)進(jìn)行測定，對(duì)測定值進(jìn) 行相關(guān)分析；圖3為分析結(jié)果，其中X軸表示的是本發(fā)明試劑測定的病人血清結(jié)果，Y軸表示 的是北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司試劑測定的病人血清結(jié)果，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.9992,回 歸方程為y = l.〇191x-1.1458。
[0066] 表 2
[0069]以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述 特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影 響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，包括R1試劑和R2試劑，其中，所 述R2試劑包含按濃度計(jì)的如下組分： 緩沖液 10.0.~20.0mmol/L; 氯化鈉 7~9g/L; 防腐劑 0.3~0.8g/L; PA 抗體 8〇~15〇nih 穩(wěn)定劑 40~60g/L。2. 如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述穩(wěn)定劑為P-環(huán)糊精、氯化膽堿或甘露醇。3. 如權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述穩(wěn)定劑為氯 化膽堿。4. 如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述R1試劑包含 按濃度或重量百分?jǐn)?shù)計(jì)的如下組分： 緩沖液 100 -200mmol/L; 聚乙：醇 4.00-6.00%; 防腐劑 Q.3~0Jg/L;: 氯化鈉 7-_9g/L; 乙二胺四乙酸二鈉 1.5_-2.0g/L; 表面活性劑 OJ~1.2g/L。.5. 如權(quán)利要求1或4所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液 的PH值為7.0~7.4。6. 如權(quán)利要求1或4所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液 為三羥甲基氨基甲烷、丙磺酸或4-羥乙基哌嗪乙磺酸。7. 如權(quán)利要求6所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液為丙 磺酸。8. 如權(quán)利要求1或4所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述防腐劑 為Proclin 300。9. 如權(quán)利要求1或4所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，所述表面活 性劑為吐溫80、吐溫20或曲拉通X-100。10. 如權(quán)利要求1或4所述的穩(wěn)定性高的前白蛋白檢測試劑盒，其特征在于，其特征在 于，所述表面活性劑為吐溫-20。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK106053851SQ201610643014
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年8月8日 公開號(hào)201610643014.4, CN 106053851 A, CN 106053851A, CN 201610643014, CN-A-106053851, CN106053851 A, CN106053851A, CN201610643014, CN201610643014.4
【發(fā)明人】李偉奇, 林愛蘭, 房君江, 張秀文, 林清玉
【申請(qǐng)人】上海?？瞪锟萍加邢薰?br>