一種瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物試劑，特別是一種瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞染色是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)、科研教學(xué)中最基本的技術(shù)手段，良好的染色效果是細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察準(zhǔn)確的首要條件。瑞氏(Wright)染液、吉姆薩(Giemsa)染液是細(xì)胞檢查的常規(guī)染色液，但單獨(dú)使用效果均不夠理想，其中，瑞氏染液對(duì)細(xì)胞質(zhì)成分染色較好，但對(duì)細(xì)胞核的著色效果差；吉姆薩染液對(duì)細(xì)胞核著色較好，但對(duì)細(xì)胞漿及細(xì)胞膜和其中的中性顆粒染色欠佳。
[0003]為了克服瑞氏染液、吉姆薩染液染色存在的缺點(diǎn)，研究者開(kāi)發(fā)了同時(shí)含有瑞氏染料和吉姆薩染料的復(fù)合染液配方，并在臨床實(shí)踐中取得了一定的應(yīng)用。但目前報(bào)道的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液仍存在缺陷，要么染色時(shí)間長(zhǎng)、染色效果差；要么復(fù)合染液配方復(fù)雜，成本高。開(kāi)發(fā)成本低廉、染色效果好、使用方便的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液，對(duì)臨床、科研教學(xué)具有重要的實(shí)際意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種成本低廉、染色效果好、使用方便的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液。
[0005]本發(fā)明提供了一種瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液，它是由下述配比的原料制備而成:
[0006]瑞氏染粉15-17重量份、吉姆薩染粉3-4重量份、甘油33_35體積份、甲醇5000體積份。
[0007]其中，所述重量份/體積份與g/ml相對(duì)應(yīng)。
[0008]其中，所述甲醇為分析純。
[0009]其中，它是由下述配比的原料制備而成:
[0010]瑞氏染粉15重量份、吉姆薩染粉3重量份、甘油33體積份、甲醇5000體積份。
[0011]其中，它是由下述方法制備而成的:
[0012]a、稱取各配比的原料；
[0013]b、將瑞氏染粉、吉姆薩染粉、甘油混合，研磨2小時(shí)，然后37°C放置12-16小時(shí)，研磨15-20分鐘；
[0014]c、加500體積份甲醇，繼續(xù)研磨15分鐘后放置15-20分鐘，取出上層染液；
[0015]d、重復(fù)步驟c多次，至甲醇總用量為5000體積份；
[0016]e、將步驟c、d得到的上層染液在室溫下，密封避光保存5天，每天早晚各振搖2分鐘；再密封避光保存半月，過(guò)濾后即可。
[0017]本發(fā)明提供了一種復(fù)合染液的制備方法，它包括如下步驟:
[0018]a、稱取下述配比的原料:瑞氏染粉15-17重量份、吉姆薩染粉3_4重量份、甘油33-35體積份、甲醇5000體積份；
[0019]b、將瑞氏染粉、吉姆薩染粉、甘油混合，研磨2小時(shí)，然后37°C放置12-16小時(shí)，研磨15-20分鐘；
[0020]c、加500體積份甲醇，繼續(xù)研磨15分鐘后放置15-20分鐘，取出上層染液；
[0021]d、重復(fù)步驟c多次，至甲醇總用量為5000體積份；
[0022]e、將步驟c、d得到的上層染液在室溫下，密封避光保存5天，每天早晚各振搖2分鐘；再密封避光保存半月，過(guò)濾后即可。
[0023]其中，步驟(a)中，所述甲醇為分析純。
[0024]其中，步驟(a)中，所述原料為瑞氏染粉15重量份、吉姆薩染粉3重量份、甘油33體積份、甲醇5000體積份。
[0025]本發(fā)明還提供了上述復(fù)合染液在細(xì)胞染色中的用途。
[0026]其中，所述細(xì)胞是指人源細(xì)胞和/或動(dòng)物細(xì)胞。
[0027]其中，所述細(xì)胞染色是指對(duì)血涂片和骨髓涂片的染色。
[0028]本發(fā)明的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液，以瑞氏染料和吉姆薩染料為主要原料通過(guò)研磨配制而成，可有效地應(yīng)用于細(xì)胞染色，尤其是應(yīng)用于血液和骨髓細(xì)胞涂片。使用本發(fā)明染液能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果，使細(xì)胞的胞質(zhì)、顆粒、胞核等均獲得滿意的染色效果，染出的細(xì)胞分辨率好；而且本發(fā)明復(fù)合染液染色快速、染液配方簡(jiǎn)單、配制成本低，染色時(shí)操作簡(jiǎn)單，利于推廣。
[0029]目前報(bào)道的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液多是對(duì)人源細(xì)胞進(jìn)行染色檢測(cè)，并未考慮動(dòng)物細(xì)胞染色效果。發(fā)明人在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，市售的瑞氏-吉姆薩染色液(購(gòu)買(mǎi)自珠海貝索)雖然對(duì)人源細(xì)胞有效染色，但對(duì)動(dòng)物細(xì)胞著色困難、染色效果差。
[0030]本發(fā)明染液不但可以對(duì)人源細(xì)胞有效染色，而且對(duì)動(dòng)物細(xì)胞染色效果好，滿足了動(dòng)物試驗(yàn)研究中對(duì)動(dòng)物骨髓及血液涂片的染色需求，可有效的應(yīng)用于臨床、教學(xué)及動(dòng)物試驗(yàn)檢驗(yàn)。
[0031]顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0032]以下通過(guò)實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1本發(fā)明復(fù)合染液的成熟指數(shù)(RA)
[0034]圖2對(duì)照染液的大鼠骨髓涂片(1000倍視野)。
[0035]圖3對(duì)照染液的犬骨髓涂片(400倍視野)。
[0036]圖4本發(fā)明染液的大鼠骨髓涂片，正常骨髓象，4A為400倍視野，4B為1000倍視野。
[0037]圖5本發(fā)明染液的大鼠骨髓涂片，淋巴瘤骨髓浸潤(rùn)(1000倍視野)。
【具體實(shí)施方式】
[0038]下面以實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明不局限于這些實(shí)施例。
[0039]本發(fā)明所用的試劑、儀器如下:
[0040]瑞氏染粉、吉姆薩染粉:RS_Sigma ;
[0041]甲醇(AR級(jí))、甘油:成都市科龍化工試劑廠；
[0042]顯微鏡:奧林巴斯顯微鏡(OLYMPUS BX51)。
[0043]實(shí)施例1本發(fā)明復(fù)合染液的制備
[0044]1、染液配方
[0045]瑞氏染粉15g、吉姆薩染粉3g/甘油33mL/甲醇5000mL。
[0046]2、制備方法
[0047]取瑞氏染粉15g、吉姆薩染粉3g，甘油33mL，置潔凈研缽中研磨2小時(shí)后37°C過(guò)夜放置15.5小時(shí)；
[0048]取出后，研磨15-20分鐘后，加500mL甲醇，研磨片刻后放置15-20分鐘，吸出上層染液；
[0049]再在研缽中加500mL甲醇，繼續(xù)研磨15分鐘后放置15_20分鐘，吸出上層染液；如此連續(xù)多次共用甲醇(分析純)5000ml ；
[0050]將得到的所有上層染液收集于棕色玻璃瓶中密封保存，室溫放置，每天早晚各振搖2分鐘，共5天，再存放半月，過(guò)濾后即可使用，配制后可長(zhǎng)期保存。
[0051]3、檢測(cè)指標(biāo)
[0052]本發(fā)明的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液的成熟指數(shù)(RA)為(A640± 10nm/A520±5nm)=
1.4±0.I。
[0053]實(shí)施例2本發(fā)明復(fù)合染液的制備
[0054]1、染液配方
[0055]瑞氏染粉17g、吉姆薩染粉4g、甘油35mL、甲醇5000mL。
[0056]2、制備方法及檢測(cè)指標(biāo)同實(shí)施例1。
[0057]以下用試驗(yàn)例的方式說(shuō)明本發(fā)明的有益效果:
[0058]試驗(yàn)例1本發(fā)明染液對(duì)動(dòng)物骨髓涂片的染色
[0059]一、試驗(yàn)材料
[0060]本發(fā)明染液:依據(jù)實(shí)施例1方法制備的復(fù)合染液；
[0061]對(duì)照染液:市售的瑞氏-吉姆薩染色液(廠家:珠海貝索批號(hào):415016有效期:2017-1-29)；
[0062]骨髓涂片:大鼠涂片、犬涂片。
[0063]二、染色方法
[0064]1、加入I液(本發(fā)明染液或?qū)φ杖疽?:在涂片上滴加I液，以染液覆蓋整個(gè)細(xì)胞膜為度，靜置0.5?1分鐘。
[0065]2、加II液(PBS緩沖液):滴加等量的II液，用洗耳球吹氣混勻，染色即可。
[0066]三、染色結(jié)果
[0067]對(duì)照染液對(duì)骨髓涂片的染色結(jié)果見(jiàn)圖2-3，其中圖2為1000倍視野下的大鼠骨髓涂片；圖3為400倍視野下的犬骨髓涂片。
[0068]本發(fā)明染液對(duì)骨髓涂片的染色結(jié)果見(jiàn)圖4-5，其中圖4為正常骨髓象的大鼠骨髓涂片，圖5為淋巴瘤骨髓浸潤(rùn)的大鼠骨髓涂片。
[0069]由圖2、圖3可見(jiàn)，對(duì)照染液對(duì)動(dòng)物骨髓涂片染色效果不佳:涂片細(xì)胞受色整體泛藍(lán)，導(dǎo)致鏡下辨認(rèn)困難，從而影響細(xì)胞觀察，即使調(diào)整染液與磷酸鹽緩沖液(II液)的比例亦不能解決；而且用對(duì)照染液染色時(shí)細(xì)胞不易著色，加長(zhǎng)染色時(shí)間亦不能加強(qiáng)染色效果，染色過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)，易導(dǎo)致染料沉渣附著于涂片上。
[0070]由圖4、圖5可見(jiàn)，使用本發(fā)明染液染色時(shí)，可在短時(shí)間內(nèi)使涂片細(xì)胞受色均勻，不同顏色分辨清晰，紅細(xì)胞染粉紅色，有核細(xì)胞核質(zhì)分明，細(xì)胞核染紫紅色，染色質(zhì)和副染色質(zhì)清晰，粗細(xì)松緊可辨，呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果。而且對(duì)同樣的涂片，對(duì)照染液染色10-20分鐘效果仍不理想，用本發(fā)明染液染色5分鐘就可達(dá)到良好的染色效果。
[0071]可見(jiàn)，本發(fā)明染液對(duì)動(dòng)物骨髓涂片的染色效果好，本發(fā)明染液可有效用于細(xì)胞染色。
[0072]綜上所述，本發(fā)明的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液，對(duì)人源及動(dòng)物細(xì)胞的染色快速、染色效果好，而且本發(fā)明復(fù)合染液配方簡(jiǎn)單、配制成本低，染色時(shí)操作簡(jiǎn)單，利于推廣。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液，其特征在于:它是由下述配比的原料制備而成: 瑞氏染粉15-17重量份、吉姆薩染粉3-4重量份、甘油33-35體積份、甲醇5000體積份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合染液，其特征在于:所述甲醇為分析純。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合染液，其特征在于:它是由下述配比 的原料制備而成: 瑞氏染粉15重量份、吉姆薩染粉3重量份、甘油33體積份、甲醇5000體積份。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的復(fù)合染液，其特征在于:它是由下述方法制備而成的: a、稱取各配比的原料； b、將瑞氏染粉、吉姆薩染粉、甘油混合，研磨2小時(shí)，然后37°C放置12-16小時(shí)，研磨15-20分鐘； c、加500體積份甲醇，繼續(xù)研磨15分鐘后放置15-20分鐘，取出上層染液； d、重復(fù)步驟c多次，至甲醇總用量為5000體積份； e、將步驟c、d得到的上層染液在室溫下，密封避光保存5天，每天早晚各振搖2分鐘；再密封避光保存半月，過(guò)濾后即可。5.一種復(fù)合染液的制備方法，其特征在于:它包括如下步驟: a、稱取下述配比的原料:瑞氏染粉15-17重量份、吉姆薩染粉3-4重量份、甘油33-35體積份、甲醇5000體積份； b、將瑞氏染粉、吉姆薩染粉、甘油混合，研磨2小時(shí)，然后37°C放置12-16小時(shí)，研磨15-20分鐘； c、加500體積份甲醇，繼續(xù)研磨15分鐘后放置15-20分鐘，取出上層染液； d、重復(fù)步驟c多次，至甲醇總用量為5000體積份； e、將步驟c、d得到的上層染液在室溫下，密封避光保存5天，每天早晚各振搖2分鐘；再密封避光保存半月，過(guò)濾后即可。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于:步驟(a)中，所述甲醇為分析純。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于:步驟(a)中，所述原料為瑞氏染粉15重量份、吉姆薩染粉3重量份、甘油33體積份、甲醇5000體積份。8.權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的復(fù)合染液在細(xì)胞染色中的用途。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于:所述細(xì)胞是指人源細(xì)胞和/或動(dòng)物細(xì)胞。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于:所述細(xì)胞染色是指對(duì)血涂片和骨髓涂片的染色。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液，它是由下述配比的原料制備而成：瑞氏染粉15-17重量份、吉姆薩染粉3-4重量份、甘油33-35體積份、甲醇5000體積份。本發(fā)明還提供了該復(fù)合染液的制備方法和用途。本發(fā)明的瑞氏-吉姆薩復(fù)合染液對(duì)人源及動(dòng)物細(xì)胞染色快速、染色效果好，而且本發(fā)明復(fù)合染液配方簡(jiǎn)單、配制成本低，染色時(shí)操作簡(jiǎn)單，利于推廣。
【IPC分類(lèi)】G01N1/30
【公開(kāi)號(hào)】CN105300772
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510640377
【發(fā)明人】劉斌, 魏新玉, 趙璐君
【申請(qǐng)人】成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年9月30日