一種快速測(cè)定人凝血因子viii成品中水分含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種近紅外光譜分析技術(shù)快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人凝血因子VIII (human coagulation factor VIII，F(xiàn)VIII)是內(nèi)源性凝血途徑的 一種重要的凝血因子，參與凝血因子X(jué)的激活，在正常的凝血過(guò)程中發(fā)揮著無(wú)可替代的作 用。人凝血因子VIII遺傳性的缺乏將導(dǎo)致甲型血友病，因此定期靜注人凝血因子VIII制劑 是甲型血友病的主要的治療手段。目前，由于原料來(lái)源的嚴(yán)重缺乏，加之生產(chǎn)工藝的限制， 我國(guó)人凝血因子VIII制劑嚴(yán)重短缺。
[0003] 目前市場(chǎng)上銷(xiāo)售的人凝血因子VIII制劑均為經(jīng)過(guò)冷凍干燥得到的凍干制劑，水 分是確保產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)重要參數(shù)，它的含量和存在形式對(duì)人凝血因子VIII的結(jié)構(gòu)和功 能影響很大，直接關(guān)系人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品的穩(wěn)定性。現(xiàn)有技術(shù)中，水分含量的測(cè)定 方法一般為操作復(fù)雜、耗時(shí)耗力且具有破壞性的化學(xué)方法，不能實(shí)現(xiàn)制劑產(chǎn)品的全檢，以保 證流入市場(chǎng)藥品的安全性和有效性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決現(xiàn)有水分含量測(cè)定方法中費(fèi)時(shí)費(fèi)力、具有破壞性等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一 種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，本方法簡(jiǎn)單快速、綠色環(huán)保，且在隔 著西林瓶、不破壞樣品的情況下進(jìn)行樣品水分含量的測(cè)定，可實(shí)現(xiàn)出廠藥品的全部檢驗(yàn)。
[0005] 本發(fā)明是通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，包括步驟如下：
[0007] (1)對(duì)樣品進(jìn)行冷凍干燥和解析干燥，在不同的干燥時(shí)間或溫度條件下制備得到 不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品；
[0008] (2)將得到的不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品，采用近紅外光譜儀直接 進(jìn)行近紅外光譜的采集，采用卡爾費(fèi)休水分測(cè)定法對(duì)各樣品中的水分含量進(jìn)行測(cè)定；
[0009] (3)采用SPXY方法對(duì)不同水分含量的樣品集進(jìn)行劃分，得到用于建立模型的校正 集和用于驗(yàn)證模型預(yù)測(cè)能力的驗(yàn)證集；
[0010] (4)對(duì)比不同預(yù)處理方法及建模波段下模型的評(píng)價(jià)參數(shù)，得到最佳的預(yù)處理方法 及建模波段，建立用于水分含量測(cè)定的PLS定量分析模型；
[0011] (5)取凍干后的樣品，進(jìn)行近紅外光譜的采集，將得到的樣品光譜對(duì)模型進(jìn)行擬 合，得到人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品中水分含量值。
[0012] 上述方法中：
[0013] 步驟（1)中優(yōu)選的冷凍干燥時(shí)間為12h_48h，冷凍干燥溫度為-20°C，優(yōu)選的解析 干燥的溫度為32°C，真空度為10Pa，干燥時(shí)間為5-24h。
[0014] 步驟（2)中近紅外光譜儀為Antaris II傅里葉變換近紅外光譜儀，近紅外光譜的 采集條件為：光譜分辨率為8CHT1，掃描次數(shù)為32,光譜范圍為lOOOO1000 cnT 1，每個(gè)樣品采 集3張光譜進(jìn)行平均，將包裝在西林瓶中的樣品直接進(jìn)行光譜的采集。
[0015] 步驟（3)中采用的樣品集劃分方法為sample set partitioning based on joint xy distance (SPXY)法，根據(jù)2. 0-2. 2:1的比例進(jìn)行校正集和驗(yàn)證集的劃分，最終得到59個(gè) 校正集樣品和29個(gè)驗(yàn)證集樣品。
[0016] 步驟（4)中考察不同的預(yù)處理方法，預(yù)處理方法為SG 15點(diǎn)平滑、SNV、MSC、一階導(dǎo) 數(shù)SG15點(diǎn)平滑、SNV+ -階導(dǎo)數(shù)SG 15點(diǎn)平滑、或MSC+ -階導(dǎo)數(shù)SG 15點(diǎn)平滑，最終得到最 佳的光譜預(yù)處理方法為SNV+ -階導(dǎo)數(shù)SG 15點(diǎn)平滑；對(duì)UVE、iPLS、CARS等變量選擇方法 進(jìn)行比較，模型結(jié)果顯示最佳的波段選擇方法為iPLS法，選擇的用于模型建立的近紅外光 譜波段為 7471-7660CHT1，6121-6310CHT1，4964-5153CHT1 和 4000-4189〇11'
[0017] 步驟（5)中取凍干后的樣品，按照步驟⑵中條件進(jìn)行近紅外光譜的采集，然后將 得到的近紅外光譜擬合建立的最佳PLS定量分析模型，得到人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品中水 分含量值。
[0018] 本方法簡(jiǎn)單易行、快速無(wú)損、綠色環(huán)保，在不破壞包裝和樣品的情況下能準(zhǔn)確快速 測(cè)定成品中水分含量，能夠?qū)崿F(xiàn)產(chǎn)品的實(shí)時(shí)放行，對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量、提高藥品的安全性和有 效性提供重要的支撐。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1為本發(fā)明采集的人凝血因子VIII成品的漫反射近紅外光譜；
[0020] 圖2為本發(fā)明經(jīng)預(yù)處理后的光譜以及選擇用于數(shù)學(xué)模型建立的光譜區(qū)間；
[0021] 圖3為本發(fā)明獲得的數(shù)學(xué)模型結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] (1)不同水分含量FVIII凍干樣品的制備：取FVIII凍干劑，每瓶加10mL注射用 水溶解完全，置于_80°C超低溫冰箱預(yù)凍2h以上，-20°C條件下凍干12h-48h不等，取凍干 24h以上的部分樣品，于溫度為32°C、真空度為10Pa的真空干燥箱中解析干燥5-24h不等， 得到88個(gè)不同水分含量的凍干樣品。
[0025] (2)采用Antaris II傅里葉變換近紅外光譜儀積分球漫反射分析模塊進(jìn)行近紅外 光譜的采集，儀器的工作參數(shù)為：光譜掃描范圍為lOOOOcnrilOOOcnr 1，分辨率為8CHT1，光譜 掃描次數(shù)為32,每個(gè)樣品采集3張光譜。近紅外漫反射光譜吸收強(qiáng)度設(shè)定為L(zhǎng)og (1/R)。
[0026] (3)采用SPXY方法對(duì)樣品集進(jìn)行劃分，獲得校正集樣品59個(gè)，驗(yàn)證集樣品29個(gè)， 具體的劃分信息如表1所示。
[0027] 表1樣品集劃分信息
[0028]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特征是，包括步驟如下： (1) 對(duì)樣品進(jìn)行冷凍干燥和解析干燥，在不同的干燥時(shí)間或溫度條件下制備得到不同 水分含量的人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品； (2) 將得到的不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品，采用近紅外光譜儀直接進(jìn)行 近紅外光譜的采集，采用卡爾費(fèi)休水分測(cè)定法對(duì)各樣品中的水分含量進(jìn)行測(cè)定； (3) 采用SPXY方法對(duì)不同水分含量的樣品集進(jìn)行劃分，得到用于建立模型的校正集和 用于驗(yàn)證模型預(yù)測(cè)能力的驗(yàn)證集； (4) 對(duì)比不同預(yù)處理方法及建模波段下模型的評(píng)價(jià)參數(shù)，得到最佳的預(yù)處理方法及建 模波段，利用數(shù)學(xué)處理軟件建立用于水分含量測(cè)定的PLS定量分析模型； (5) 取凍干后的樣品，進(jìn)行近紅外光譜的采集，將得到的樣品光譜對(duì)模型進(jìn)行擬合，得 到人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品中水分含量值。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特 征是，步驟（1)中冷凍干燥時(shí)間為12h-48h，冷凍干燥溫度為-20°C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特 征是，步驟（1)中解析干燥的溫度為32°C，真空度為lOPa，干燥時(shí)間為5-24h。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其 特征是，步驟（2)中近紅外光譜儀為AntarisII傅里葉變換近紅外光譜儀，近紅外光譜的采 集條件為：光譜分辨率為8CHT1，掃描次數(shù)為32,光譜范圍為lOOOO-^OOcnT1，每個(gè)樣品采集 3張光譜進(jìn)行平均，將包裝在西林瓶中的樣品直接進(jìn)行光譜的采集。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特 征是，步驟（3)中劃分得到59個(gè)校正集樣品和29個(gè)驗(yàn)證集樣品。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特 征是，步驟（4)中預(yù)處理方法為SG15點(diǎn)平滑、SNV、MSC、一階導(dǎo)數(shù)SG15點(diǎn)平滑、SNV+ -階 導(dǎo)數(shù)SG15點(diǎn)平滑、或MSC+ -階導(dǎo)數(shù)SG15點(diǎn)平滑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特 征是，步驟（4)中預(yù)處理方法為SNV+-階導(dǎo)數(shù)SG15點(diǎn)平滑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特 征是，步驟（4)波段選擇方法包括UVE、iPLS、CARS法。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特 征是，波段選擇方法為iPLS波段選擇方法，選擇的建模波段為7471-7660011' 6121-6310cm ' 4964-5153CHT1 和 4000-4189〇11'
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種快速測(cè)定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，(1)制備不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品；(2)采用近紅外光譜儀直接進(jìn)行近紅外光譜的采集，對(duì)樣品中的水分含量進(jìn)行測(cè)定；(3)對(duì)不同水分含量的樣品集進(jìn)行劃分，得到用于建立模型的校正集和用于驗(yàn)證模型預(yù)測(cè)能力的驗(yàn)證集；(4)對(duì)比不同預(yù)處理方法及建模波段下模型的評(píng)價(jià)參數(shù)，得到最佳的預(yù)處理方法及建模波段，建立用于水分含量測(cè)定的PLS定量分析模型；(5)取待測(cè)樣品，進(jìn)行近紅外光譜的采集，將得到的光譜對(duì)模型進(jìn)行擬合，得到人凝血因子VIII制劑產(chǎn)品中水分含量值。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行、快速無(wú)損、綠色環(huán)保，特別適合凍干型人凝血因子VIII凍干成品中的水分快速測(cè)定。
【IPC分類(lèi)】G01N21-359
【公開(kāi)號(hào)】CN104697956
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510148952
【發(fā)明人】臧恒昌, 龐廣禮, 仲立軍, 王斐, 姜瑋, 李連, 張惠, 李 燦
【申請(qǐng)人】山東大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年6月10日
【申請(qǐng)日】2015年3月31日