擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量的測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥用昆蟲中特定成分含量的測(cè)定方法，特別是一種擬黑多刺蟻中棕櫚 酸和油酸含量的測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 擬黑多刺蟻為藥用昆蟲擬黑多刺蟻的干燥蟲體。 收載于《中華本草》、《中藥大辭典》等，產(chǎn)于廣西，云南等地。其性平、微溫、味咸酸、微腥。擬 黑多刺蟻富含鋅、硒、錳、銅、鐵等量元素81、82、8633以及28種人體必須的氨基酸，具有 補(bǔ)益肝腎、調(diào)理奇經(jīng)、行氣和血、消腫止痛、抗風(fēng)濕、鎮(zhèn)靜、消炎、降脂、降糖、抗疲勞、解痛鎮(zhèn) 靜、改善睡眠的功能及抑制腫瘤等藥理作用，能改善全身營(yíng)養(yǎng)狀況，強(qiáng)身益壽。
[0003]研究表明，擬黑多刺蟻有降低痛風(fēng)模型血清尿酸水平及抗炎作用，而擬黑多刺蟻 脂溶性成分為其降低高尿酸血癥模型小鼠血清尿酸水平的成分。擬黑多刺蟻中脂溶性成分 中的主要成分為棕櫚酸及油酸，棕櫚酸和油酸均為長(zhǎng)鏈脂肪酸，揮發(fā)性較差，若直接采用氣 相色譜法法對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，則有可能氣化不完全，導(dǎo)致測(cè)量出現(xiàn)偏差。
[0004]目前，尚無擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量測(cè)定等方面的研究?jī)?nèi)容報(bào)道。為了促 進(jìn)擬黑多刺蟻的深入開發(fā)與利用，急需研發(fā)一種靈敏度高、重現(xiàn)性好的擬黑多刺蟻中棕櫚 酸和油酸含量的測(cè)定方法，為擬黑多刺蟻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了研究基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好的擬黑多刺蟻中棕櫚酸 和油酸含量的測(cè)定方法。
[0006]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的： 一種擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量的測(cè)定方法，其特征在于，包括如下步驟： (1)內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液的制備： 取正十八烷250mg，精密稱定，置于100mL容量瓶中，加60~90°C石油醚溶解并稀釋至100ml，即得內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。
[0007](2 )對(duì)照品溶液的制備： A)精密稱取對(duì)照品棕櫚酸甲酯100mg、油酸甲酯lOOmg，置于同一 25ml容量瓶中，用 60~90°C石油醚溶解并稀釋至25ml，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。
[0008] B)精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2ml，置于25ml容量瓶中，用60~90°C石油醚溶解并稀 釋至25ml，搖勻，即得對(duì)照品溶液。
[0009](3 )供試品溶液的制備： C)取擬黑多刺蟻樣品適量，研碎，精密稱取樣品lg，置于100mL塞錐形瓶中，加入60~ 90°C石油醚IOml，搖勻，置于90°C水浴中回流60min，然后放置冷卻。
[0010] D)用60~90°C石油醚補(bǔ)足水浴回流中減失的重量，然后濾過，取2ml濾液至容量 為IOml具塞試管中，加入含有l(wèi)mol/L氫氧化鉀的甲醇溶液2ml，在50°C水浴中震蕩加熱 15min，取出冷卻，加入超純水3ml，然后將濾液放入離心機(jī)進(jìn)行離心，取上清液，即得供試品 儲(chǔ)備液； E)精密量取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液、供試品儲(chǔ)備液各0. 5ml置于同一 5ml容量瓶中，加60~90°C石油醚稀釋至5ml，搖勻，即得供試品溶液。
[0011] (4)用氣相色譜儀、檢測(cè)器及色譜檢測(cè)軟件配套使用，精密吸取IML供試品溶液和 對(duì)照品溶液分別注入氣相色譜儀中，測(cè)定棕櫚酸和油酸的色譜分析圖，即得擬黑多刺蟻中 棕櫚酸和油酸的含量。
[0012] (5)設(shè)定色譜測(cè)定條件為：色譜柱為RtxK_5毛細(xì)管色譜柱，色譜柱規(guī)格為 30mX0. 32mmX0. 25Mm;柱溫采用程序升溫方式，以15°C/min的方式從80°C升溫到220°C后 保持5分鐘；柱流量為2. 0ml/min;載氣為高純氦氣；進(jìn)樣口溫度230 °C;進(jìn)樣量1ML，分 流比10:1。
[0013] F)線性關(guān)系的測(cè)定：精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0. 1、0. 5、1.0、2.0、3.0、4.0ml于 IOml容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液I.Oml,用石油醚稀釋至10ml，搖勻；按步驟（5)的色譜條 件下測(cè)定，以對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比（Awms /Aws)為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物濃度 比（C對(duì)照品/C_)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；棕櫚酸甲酯的回歸方程為Y=0. 9808X-0. 1563 (Y=O. 9994);油酸甲酯的回歸方程為Y=L1033X+ 0. 1467 (Y=O. 9994)。結(jié)果顯示，棕櫚 酸甲酯、油酸甲酯分別在〇. 〇399~1. 597吒、0. 0394~1. 576吒范圍內(nèi)線性良好。
[0014]G)精密度的測(cè)定：取同一批適量供試品溶液，精密吸取供試品溶液1ML，按步驟 (5)的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各種成分的峰面積，計(jì)算對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比（A 對(duì)照品/A內(nèi)標(biāo)），測(cè)得A様櫚酸酷/A正十八燒的RSD=L7%;A油酸甲酯/A正十八燒的RSD=O. 17%，表明儀器精? 度良好。
[0015]H)穩(wěn)定性的測(cè)定：取同一批適量供試品溶液，按步驟（5)的色譜條件于0、2、4、 8、24h分別測(cè)定各種成分的峰面積；結(jié)果顯示，棕櫚酸甲酯、油酸甲酯的峰面積RSD分別為 0. 26%、0. 22%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。
[0016] I)重復(fù)性的測(cè)定：取同一批擬黑多刺蟻樣品適量，按步驟（3)平行制備6份供試品 溶液，分別吸取1W，在步驟（5)的色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定各種成分的峰面積，計(jì)算棕櫚酸甲 酯及油酸甲酯的平均含量、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD);結(jié)果表明棕櫚酸甲酯平均含量為22. 0mg/ g;油酸甲酯平均含量為51. 3mg/g，RSD分別為2. 9%、2. 9%，表明該方法重現(xiàn)性良好。
[0017] J)加樣回收的測(cè)定：精密量取濃度為3. 887mg/ml的棕櫚酸甲酯對(duì)照品儲(chǔ)備液3ml 和濃度為3. 869mg/ml的油酸甲酯對(duì)照品儲(chǔ)備液7ml，置于水浴上揮干溶劑，平行制備6份， 然后在每1份中加入棕櫚酸甲酯含量為22. 0mg/g及油酸甲酯含量為51. 3mg/g的樣品 〇. 5g，然后按步驟（3)制備供試品溶液，在步驟（5)的色譜條件下測(cè)定各種成分的峰面積， 計(jì)算回收率。結(jié)果見表1、表2。
[0018] 表1棕櫚酸甲酯加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量的測(cè)定方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液的制備： 取正十八烷250mg，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加60~90°C石油醚溶解并稀釋至 100ml，即得內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液； (2) 對(duì)照品溶液的制備： A) 精密稱取對(duì)照品棕櫚酸甲酯100mg、油酸甲酯100mg，置于同一 25ml容量瓶中，用 60~90°C石油醚溶解并稀釋至25ml，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液； B) 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2ml，置于25ml容量瓶中，用60~90°C石油醚溶解并稀釋至 25ml，搖勻，即得對(duì)照品溶液； (3) 供試品溶液的制備： C) 取擬黑多刺蟻樣品適量，研碎，精密稱取樣品lg，置于100ml塞錐形瓶中，加入60~ 90°C石油醚10ml，搖勻，置于90°C水浴中回流60min，然后放置冷卻； D) 用60~90°C石油醚補(bǔ)足水浴回流中減失的重量，然后濾過，取2ml濾液至容量 為10ml具塞試管中，加入含有l(wèi)mol/L氫氧化鉀的甲醇溶液2ml，在50°C水浴中震蕩加熱 15min，取出冷卻，加入超純水3ml，然后將濾液放入離心機(jī)進(jìn)行離心，取上清液，即得供試品 儲(chǔ)備液； E) 精密量取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液、供試品儲(chǔ)備液各0. 5ml置于同一 5ml容量瓶中，加60~90°C 石油醚稀釋至5ml，搖勻，即得供試品溶液； (4) 用氣相色譜儀、檢測(cè)器及色譜檢測(cè)軟件配套使用，精密吸取1ML供試品溶液和對(duì)照 品溶液分別注入氣相色譜儀中，測(cè)定棕櫚酸和油酸的色譜分析圖，即得擬黑多刺蟻中棕櫚 酸和油酸的含量； (5) 設(shè)定色譜測(cè)定條件為：色譜柱為RtxK-5毛細(xì)管色譜柱，色譜柱規(guī)格為 30mX0. 32mmX0. 25Mm ;柱溫采用程序升溫方式，以15°C/min的方式從80°C升溫到220°C后 保持5分鐘；柱流量為2. 0 ml/min ;載氣為高純氦氣；進(jìn)樣口溫度230 ° C ;進(jìn)樣量1ML，分 流比10:1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量的測(cè)定方法，其特征在于： 所述的所述的氣相色譜儀為GC2010PLUS氣相色譜儀。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量的測(cè)定方法，其特征在于： 所述的檢測(cè)器為FID檢測(cè)器。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量的測(cè)定方法，其特征在于： 所述的正十八烷的純度為98%。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種擬黑多刺蟻中棕櫚酸和油酸含量的測(cè)定方法，其特征在于：將棕櫚酸和油酸與甲醇在堿催化甲酯化后，采用氣相色譜法，以色譜柱為RtxR-5毛細(xì)管色譜柱，色譜柱規(guī)格為30m×0.32mm×0.25μm；柱溫采用程序升溫方式，以15oC/min的方式從80℃升溫到220℃后保持5分鐘；柱流量為2.0 ml/min；載氣為高純氦氣；進(jìn)樣口溫度230 °C；進(jìn)樣量1μL，分流比10:1。本發(fā)明測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度高，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，可用于擬黑多刺蟻中油酸和棕櫚酸的含量測(cè)定。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號(hào)】CN104655774
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510064283
【發(fā)明人】陸國(guó)壽, 韋桂寧, 劉吉成, 黃建猷, 盧文杰, 譚曉, 黃周峰, 何飛, 蘇華, 曾憲彪, 韋寶偉
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2015年2月9日