專利名稱：：用于目視檢測(cè)條的化學(xué)計(jì)時(shí)器的制作方法本申請(qǐng)是1995年3月27日提交的美國(guó)未決申請(qǐng)411,238號(hào)的部分繼續(xù)申請(qǐng)。本發(fā)明涉及用化學(xué)方法檢測(cè)時(shí)間間隔的裝置；更確切地說(shuō)，是檢測(cè)條測(cè)量出生物溶液中被分析物的濃度的時(shí)間間隔。為測(cè)量生物溶液中某種被分析物的濃度，人們研究了很多目測(cè)裝置。例如，這些裝置已用于測(cè)量血液、尿或唾液中的葡萄糖、膽固醇、蛋白質(zhì)、酮、苯丙氨酸或酶。含有酶組合物的干相試劑條在臨床實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)生辦公室、醫(yī)院及家庭中廣泛用來(lái)檢測(cè)生物體液試樣中的葡萄糖濃度。實(shí)際上，試劑條已經(jīng)成為很多國(guó)家的數(shù)百萬(wàn)糖尿病患者每日的必需品。由于糖尿病能引起血液化學(xué)上危險(xiǎn)的異常變化，因此會(huì)導(dǎo)致視覺(jué)喪失、腎功能衰竭及其它嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)后果。為減少產(chǎn)生這些后果的風(fēng)險(xiǎn)，大多數(shù)糖尿病人必須定期進(jìn)行自我檢測(cè)，并據(jù)此調(diào)節(jié)體內(nèi)的葡萄糖水平，例如可通過(guò)控制飲食和/或注射胰島素。一些病人對(duì)血糖濃度的檢測(cè)次數(shù)可達(dá)每日四次或更多。糖尿病人必須控制飲食，以調(diào)節(jié)糖的攝入和/或指導(dǎo)胰島素的注射，還必須在這方面接受經(jīng)常進(jìn)行的血糖濃度檢測(cè)結(jié)果的指導(dǎo)，對(duì)于他們來(lái)說(shuō)，尤為重要的是擁有快速、廉價(jià)、精確的測(cè)定葡萄糖的試劑條。已知試劑條含有一種指示劑，該指示劑根據(jù)涂在試劑上的生物體液中葡萄糖濃度的不同而顯示不同的色調(diào)。一些試劑條用到化學(xué)的還原反應(yīng)，不過(guò)更普遍的情況是涉及一種可氧化的染料或染料對(duì)。某些試劑條含有一種酶，如葡萄糖氧化酶，它能將葡萄糖氧化為葡糖酸和過(guò)氧化氫。試劑條中還含有一種可氧化的染料和一種具有過(guò)氧化活性的物質(zhì)，該物質(zhì)在過(guò)氧化氫的存在下能選擇性地催化氧化可氧化的染料。(例如美國(guó)專利5,306,623號(hào)。)Hochstrasser于1976年6月22日公布的美國(guó)專利3,964,871號(hào)公開(kāi)了一種一次性指示劑條，可直接測(cè)量生物體液中的物質(zhì)、如葡萄糖的濃度。記錄物質(zhì)濃度的指示劑既包括一種指示試劑，它在與被檢測(cè)物質(zhì)反應(yīng)后氧化變色，也包括一種“拮抗劑”，它在一定程度上防止氧化了的指示劑積聚，直至其被完全消耗殆盡時(shí)為止。Palmer等人在1989年5月24日出版的歐洲專利公開(kāi)申請(qǐng)0317070號(hào)中公開(kāi)了一種葡萄糖及其它被分析物的“數(shù)字”定量檢測(cè)系統(tǒng)(亦見(jiàn)于1991年7月30日公布的美國(guó)專利5,036,000號(hào))。該系統(tǒng)測(cè)量生物體液中有機(jī)化合物濃度，方法是先用一種對(duì)有機(jī)化合物具有特效作用的氧化酶氧化有機(jī)化合物，得到過(guò)氧化氫。該系統(tǒng)包括一個(gè)發(fā)色團(tuán)為過(guò)氧化氫的還原劑，和一個(gè)在空氣中穩(wěn)定且具有更大的還原電位的過(guò)氧化氫還原劑，在空氣中穩(wěn)定的第一種過(guò)氧化氫還原劑被消耗掉以前，更大的還原電勢(shì)的存在使由發(fā)色團(tuán)引起的任何顏色變化不被檢測(cè)出來(lái)。因此如果所測(cè)量的過(guò)氧化氫低于一個(gè)預(yù)定水平，該水平是相應(yīng)于空氣中穩(wěn)定的過(guò)氧化物還原劑濃度的，那么結(jié)果是沒(méi)有顏色變化。所以該系統(tǒng)定量測(cè)量濃度，而不依賴于顏色變化的強(qiáng)度。Ismail等人在1987年3月10日公布的美國(guó)專利4649122中公開(kāi)了一種生活力檢測(cè)裝置，該裝置可確認(rèn)用于檢測(cè)被分析物濃度的受試組合物是否還具有生活力。通過(guò)潤(rùn)濕該裝置來(lái)測(cè)量生活力。用水潤(rùn)濕后，檢測(cè)條變色或發(fā)生其它改變，使用戶確認(rèn)檢測(cè)條是具有生活力的。White-Stevenx和Stover在《臨床化學(xué)》1982年28卷4期589-595頁(yè)中討論了抗壞血酸對(duì)診斷檢測(cè)的干擾作用。在使用了過(guò)氧化酶和氧化還原指示劑的檢測(cè)中，抗壞血酸延遲了顏色的形成。無(wú)論檢測(cè)是在家庭、醫(yī)生辦公室、診所還是在醫(yī)院中進(jìn)行，葡萄糖測(cè)定的精確性與再現(xiàn)性極為重要。如果是指示顏色變化的試劑條，就需要變色顯著，而且對(duì)生物體液中所含有的葡萄糖以外的化合物的變化不敏感。雖然因給定波長(zhǎng)吸光度的變化而產(chǎn)生的變色對(duì)于儀器測(cè)量的試劑條的精確性來(lái)說(shuō)也是很重要的，但如果是目測(cè)試劑條，尤為重要的是，視力也許很差的糖尿病人應(yīng)擁有一種檢測(cè)試劑，該試劑依據(jù)葡萄糖濃度的不同而發(fā)生顯著的顏色變化。由于變色涉及一系列化學(xué)反應(yīng)，它就不是瞬時(shí)發(fā)生的。因此用戶必須為反應(yīng)的發(fā)生等上一段時(shí)間—一般為一分鐘或不到。當(dāng)用儀器讀取試劑條時(shí)，計(jì)時(shí)器電路會(huì)給出一個(gè)顯示反應(yīng)完成的信號(hào)。不過(guò)，當(dāng)試劑條為目測(cè)而不用儀器時(shí)，用戶可能低估了反應(yīng)所需的時(shí)間，過(guò)早讀數(shù)，而得到不正確結(jié)果?；蛘?，用戶可能認(rèn)為有必要等上足夠的時(shí)間再進(jìn)行讀數(shù)，以確定反應(yīng)完全，于是造成不必要的耽擱，用戶也會(huì)感到不甚滿意。因此需要一種“化學(xué)”計(jì)時(shí)器，也就是檢測(cè)條上的一個(gè)元件，其變色與試樣中葡萄糖(或其它所研究的被分析物)濃度無(wú)關(guān)，但是變色僅在一段時(shí)間過(guò)去以后才發(fā)生，這段時(shí)間足以完成與試樣的產(chǎn)色反應(yīng)。按照本發(fā)明，目視檢測(cè)條在測(cè)量生物體液中被分析物濃度時(shí)，其化學(xué)計(jì)時(shí)器能使檢測(cè)條用戶確信，他或她已等候了足以得到正確的讀數(shù)的時(shí)間，而無(wú)需用戶再等候過(guò)長(zhǎng)時(shí)間?；瘜W(xué)計(jì)時(shí)器包括下列物質(zhì)的干燥涂層，a)一種顯色指示劑組合物，b)一種含酶試劑，當(dāng)它形成水合物后，能與葡萄糖反應(yīng)，使指示劑變色，c)一種抑制劑，能抑制指示劑顏色上的改變，d)葡萄糖，和e)一種醛糖，基本上不與試劑中的酶反應(yīng)，其中干燥涂層中的抑制劑與葡萄糖的濃度選擇，要使得葡萄糖在生物體液試樣點(diǎn)在檢測(cè)條上之后的預(yù)定時(shí)間內(nèi)與試劑反應(yīng)，以使指示劑變色。我們說(shuō)指示劑“顯色”，并非指定不是白色；實(shí)際上在優(yōu)選的實(shí)施方式中，白色是指示劑水合之前的顏色。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)量點(diǎn)在目視檢測(cè)條上的生物體液中被分析物濃度所用化學(xué)計(jì)時(shí)器的制備方法包括下列步驟a)在多孔膜上涂覆一層含酶試劑的溶液，當(dāng)該含酶試劑形成水合物后能與葡萄糖反應(yīng)，生成一反應(yīng)產(chǎn)物；b)將涂層干燥，形成第一層，然后c)在第一層上涂第二層，第二層含有i)一種指示劑，能與上述反應(yīng)產(chǎn)物反應(yīng)，引起變色，ii)一種抑制劑，抑制指示劑顏色上的改變，iii)葡萄糖，和iv)一種醛糖，基本上不與試劑中的酶反應(yīng)。“基本上不與試劑中的酶反應(yīng)”這樣一種措詞，用在本說(shuō)明書和權(quán)利要求書中，意思是說(shuō)與葡萄糖相比，與酶反應(yīng)的程度要低得多；也就是說(shuō)，不到葡萄糖反應(yīng)能力的10％。檢測(cè)條以可見(jiàn)方式顯示出點(diǎn)在檢測(cè)條“樣本面”的生物體液中所含有的被分析物濃度。結(jié)果在檢測(cè)條的另一面(“檢測(cè)面”)可見(jiàn)地顯示出來(lái)。從液體樣本點(diǎn)在樣本面到在檢測(cè)面看到相應(yīng)的結(jié)果顯示—一般為變色—之間通常存在一個(gè)延遲時(shí)間。因此，除非用戶至少在等上最短一段時(shí)間以后再進(jìn)行讀數(shù)，否則讀數(shù)值也許不正確。而且，正確的最小延遲時(shí)間還會(huì)受到環(huán)境或檢測(cè)條化學(xué)的影響而改變，如環(huán)境溫度或老化作用。本發(fā)明的化學(xué)計(jì)時(shí)器在液體樣本點(diǎn)在檢測(cè)條上之后經(jīng)過(guò)足夠長(zhǎng)的時(shí)間給用戶提供可見(jiàn)的顯示。檢測(cè)條的化學(xué)組成自然要取決于所測(cè)量的被分析物/生物體液?？蓪z測(cè)條設(shè)計(jì)為能檢測(cè)生物體液如血液、尿和唾液以及水中的葡萄糖或其它糖類、醇、膽固醇、蛋白質(zhì)、酮、尿酸、苯丙氨酸或酶等被分析物。試劑檢測(cè)條的化學(xué)計(jì)時(shí)器一般可以但不是必需采用與試劑檢測(cè)條本身相同的被分析物/生物體液組合。例如，如果檢測(cè)條用于測(cè)量全血中的醇成分，它實(shí)際上可以在其化學(xué)計(jì)時(shí)器中不包含醇和用于醇與檢測(cè)條試劑之間的顯色反應(yīng)的抑制劑。這種情況下，計(jì)時(shí)器可能含有葡萄糖、與萄萄糖反應(yīng)形成可區(qū)別顏色的試劑、和該反應(yīng)的抑制劑。當(dāng)血液點(diǎn)在檢測(cè)條上，計(jì)時(shí)器被水合，并在一定時(shí)間后變色，這段延遲時(shí)間持續(xù)的長(zhǎng)短取決于抑制劑的濃度。當(dāng)然，有必要使葡萄糖反應(yīng)時(shí)間能調(diào)整為適用于醇檢測(cè)條，這樣，“葡萄糖計(jì)時(shí)器”就適用于“醇檢測(cè)條”了。為方便和簡(jiǎn)潔起見(jiàn)，本說(shuō)明書詳盡公開(kāi)了計(jì)時(shí)器與試劑檢測(cè)條用于檢測(cè)血液中的葡萄糖。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員很容易將本文公開(kāi)的信息用于檢測(cè)其它被分析物/生物體液組合。本發(fā)明的指示劑條提供了一種相對(duì)簡(jiǎn)便、快速的血糖濃度測(cè)定方法。它包括一個(gè)多孔基體，該基體具有一個(gè)樣本面和一個(gè)檢測(cè)面。通?；w為一種膜，這兩種提法在本說(shuō)明書及權(quán)利要求書中可互換使用。涂在基體上的檢測(cè)試劑或多或少地浸潤(rùn)在基體孔中。為簡(jiǎn)化計(jì)，在本說(shuō)明書及權(quán)利要求書中我們將基體上的試劑稱為“涂層”，這是考慮到試劑涂層在一定程度上滲入了基體?；w接受點(diǎn)在樣本面的未經(jīng)測(cè)量的全血樣本，該全血樣本中含有紅細(xì)咆和葡萄糖。基體的多孔性使液體從樣本面到達(dá)檢測(cè)面。例如借助于毛細(xì)管作用。于是檢測(cè)試劑能與血液中的葡萄糖反應(yīng)，在檢測(cè)面或附近發(fā)生變色。由于紅細(xì)胞具有明顯的顏色，可能會(huì)給檢測(cè)變色帶來(lái)較大困難，因此基體孔徑從樣本面至檢測(cè)面逐漸減小，這樣在遠(yuǎn)離檢測(cè)面處就可以截獲紅細(xì)胞。有多種材料可用于本發(fā)明的指示劑條及計(jì)時(shí)器的各種部件。其中一些材料公開(kāi)在Kiser等人于1994年4月26日公布的美國(guó)專利5,306,623號(hào)中，結(jié)合在此作為參考。檢測(cè)試劑含有一種將葡萄糖轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫的成分，如葡糖氧化酶，和一種或幾種用于檢測(cè)由樣本中存在的葡萄糖產(chǎn)生的過(guò)氧化氫的成分。檢測(cè)過(guò)氧化氫的成分可以是一種過(guò)氧化酶，優(yōu)選辣根過(guò)氧化酶，以及一種在反應(yīng)過(guò)程中變色的“指示劑”。指示劑可以是一種可氧化染料或染料對(duì)。在過(guò)氧化氫的存在下，過(guò)氧化酶催化指示劑的氧化反應(yīng)。試劑檢測(cè)條涂層的最后一種成分是抑制劑，它延緩指示劑變色的氧化反應(yīng)的進(jìn)行。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，指示劑條沿徑向分段，使其相鄰的節(jié)段具有不同的指示劑/抑制劑平衡。我們把這些節(jié)段稱為“結(jié)果節(jié)段”。當(dāng)存在足夠的葡萄糖，首先使所有抑制劑都用完，其次氧化指示劑產(chǎn)生特有的顏色變化，某一結(jié)果節(jié)段才會(huì)變色。因此某一結(jié)果節(jié)段變色，表示出了最初的血樣中葡萄糖的臨界濃度。沿檢測(cè)條的特定方向，每一個(gè)連續(xù)的結(jié)果節(jié)段都有相應(yīng)于逐步升高的臨界葡萄糖濃度的抑制劑/指示劑平衡。這一點(diǎn)是可以做到的，比如，所有節(jié)段的指示劑濃度都相同，而每個(gè)連續(xù)節(jié)段都具有比前一個(gè)節(jié)段逐步升高的抑制劑濃度。顯然，其它抑制劑/指示劑平衡也是可能的。如果結(jié)果節(jié)段的指示劑/抑制劑濃度范圍對(duì)某一特定試樣來(lái)說(shuō)是適當(dāng)?shù)模徑墓?jié)段與被分析物反應(yīng)導(dǎo)致一個(gè)結(jié)果節(jié)段顯色而相鄰的節(jié)段不顯色。此結(jié)果說(shuō)明，樣本中的葡萄糖濃度至少等于顯色節(jié)段變色所需的臨界濃度，但小于相鄰節(jié)段變色所需的臨界濃度。計(jì)時(shí)器涂層中含有指示劑條—上涂檢測(cè)試劑的多孔基體—的成分，此外還含有葡萄糖。優(yōu)選地，計(jì)時(shí)器中葡萄糖含量大大超過(guò)克服抑制劑作用所需的量。這種情況下，變色(在樣本與計(jì)時(shí)器涂層發(fā)生水合作用之后)所需的時(shí)間長(zhǎng)短，取決于抑制劑存在的多或少。檢測(cè)條和計(jì)時(shí)器上的顏色變化，既可以直接用眼觀測(cè)，也可以使用檢測(cè)反射光變化的光學(xué)儀器。理論上，試劑的化學(xué)狀態(tài)在干燥時(shí)非常穩(wěn)定，也不被計(jì)時(shí)器涂層中的葡萄糖所活化。不過(guò)如上所述，計(jì)時(shí)器即使保持干燥狀態(tài)也不十分穩(wěn)定。反而是在計(jì)時(shí)中的葡萄糖與小分子蛋白質(zhì)之間形成穩(wěn)定的化合物，也許還會(huì)在葡萄糖與涂層中的酶之間形成穩(wěn)定的化合物。為防止上述糖基化反應(yīng)對(duì)葡萄糖的消耗，可加入一種穩(wěn)定劑。該穩(wěn)定劑的糖基化作用比葡萄糖更強(qiáng)，但不與葡糖氧化酶反應(yīng)。計(jì)時(shí)器產(chǎn)生結(jié)果顯示所需時(shí)間受到檢測(cè)條參數(shù)的影響，后者同樣影響產(chǎn)生可見(jiàn)的萄萄糖濃度顯示所需時(shí)間。因此，如果環(huán)境溫度較低或者檢測(cè)條成分老化延長(zhǎng)了正確測(cè)定葡萄糖濃度所必需的時(shí)間，也會(huì)使化學(xué)計(jì)時(shí)器顯示結(jié)果的時(shí)間延長(zhǎng)。最后還有一點(diǎn)，如果對(duì)檢測(cè)條進(jìn)行了誤操作—如暴露在潮濕環(huán)境中—使檢測(cè)條在使用前即發(fā)生標(biāo)志著化學(xué)計(jì)時(shí)器反應(yīng)完成的變色，用戶應(yīng)當(dāng)留心，檢測(cè)條已經(jīng)不夠精確，無(wú)法使用。圖1為本發(fā)明的直接讀數(shù)的試劑檢測(cè)條基體的透視圖。圖2為本發(fā)明的直接讀數(shù)的試劑檢測(cè)條檢測(cè)面的平面圖。圖3為圖2的檢測(cè)條樣本面的平面圖。本發(fā)明的計(jì)時(shí)器用化學(xué)方法測(cè)量預(yù)定的時(shí)間間隔。尤其是指測(cè)定生物體液中被分析物濃度的目視檢測(cè)條。該檢測(cè)條含有一種多孔基體，其上結(jié)合了一種檢測(cè)試劑，該檢測(cè)試劑產(chǎn)生與點(diǎn)在試劑上的生物體液樣本中被分析物相應(yīng)的顏色變化。基體可以是均一的組合物，或是涂層的底物，可以是各向同性的或是各向異性的。它具有一個(gè)樣本面，供上樣之用，和一個(gè)檢測(cè)面，進(jìn)行變色觀測(cè)。基體優(yōu)選一種各向異性的膜；更優(yōu)選具有較大范圍孔徑的各向異性膜。例如，延伸至整個(gè)基體的孔徑梯度從約0.1微米至約150微米。在大孔一端，孔徑范圍更優(yōu)選約30微米至約40微米。在基體孔徑最小的一端，空體積相對(duì)較小，膜材料密度一般相當(dāng)大，一層結(jié)構(gòu)占到膜厚度的10％-20％。該層孔徑范圍優(yōu)選為約0.1至約0.8微米，標(biāo)準(zhǔn)孔徑優(yōu)選為約0.3微米。生物體液點(diǎn)在樣本面上后，在它滲入膜時(shí)會(huì)遇到不斷變小的孔。最終，如紅細(xì)胞等的固體成分到達(dá)膜中的某個(gè)位置后就不能進(jìn)一步滲入了。標(biāo)本的其余部分含有溶解的葡萄糖，滲入到達(dá)檢測(cè)面。膜的各向異性和/或基體中分離成分的使用(詳見(jiàn)下文)使這部分成分以相對(duì)較快的流速流經(jīng)膜，即使同時(shí)進(jìn)行固體成分的過(guò)濾作用也是如此。當(dāng)樣本通過(guò)基體時(shí)，它與試劑的反應(yīng)使檢測(cè)面附近的空體積中的光吸收染料生成或分解，于是影響到了基體對(duì)光的反射作用。聚砜和聚酰胺(尼龍)是合適的基體材料。也可使用其它具有類似性質(zhì)的聚合物。聚合物經(jīng)改性可引入其它官能團(tuán)，使其具有荷電結(jié)構(gòu)，因此基體表面可以是中性、陽(yáng)性或陰性。形成基體的多孔材料的一種優(yōu)選的制備方法是不使用載體心層而使聚合物成型。這樣一種基體比如購(gòu)自Memter，Inc.，Tinonium，MD的各向異性聚砜膜。通常使用厚度不到200微米的基體，優(yōu)選為約115至155微米。特別是當(dāng)基體為尼龍或各向異性聚砜時(shí)，最優(yōu)選約130至140微米的厚度?；w可選擇粘附在一種載體上，使其具有物理形狀和剛性，不過(guò)這并不是必要的。優(yōu)選的，載體是將基體夾在中間的熱塑片。樣本面上的熱塑片有一開(kāi)口，供上樣之用。檢測(cè)面上的熱塑片不影響對(duì)基體檢測(cè)面顏色的觀察。用檢測(cè)試劑處理膜的方法可以是用各種成分的混合物浸漬膜，于是使膜基體飽和。過(guò)量試劑可用機(jī)械方法除去，如手術(shù)刀或玻璃棒。然后將膜干燥。檢測(cè)試劑含有(i)一種將葡萄糖轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫的成分，(ii)一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的成分，和(iii)一種抑制檢測(cè)過(guò)氧化氫的成分的成分。試劑可進(jìn)一步選擇含有一種分離成分，它能使諸如紅細(xì)胞的固體成分被粘附或被截獲在基體中，有效地除去生物體液中的固體成分。還可包括其它附加成分，詳見(jiàn)下文和實(shí)施例。將葡萄糖轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫的成分優(yōu)選葡糖氧化酶，它是一種來(lái)自黑曲霉或青霉屬的酶。葡糖氧化酶與葡萄糖及氧反應(yīng)，生成葡糖酸內(nèi)酯及過(guò)氧化氫。最佳葡糖氧化酶濃度取決于指示劑系統(tǒng)的組成。例如，如果指示劑系統(tǒng)為MBTHSB-ANS(詳見(jiàn)下文)，適宜的葡糖氧化酶濃度范圍為約500-1000U/ml，更優(yōu)選為約700-2000U/ml，最優(yōu)選為約1000U/ml。一般葡糖氧化酶濃度越高，反應(yīng)進(jìn)行得越快，反之亦然。如此產(chǎn)生的過(guò)氧經(jīng)氫與檢測(cè)過(guò)氧化氫的成分反應(yīng)，該成分含有一種過(guò)氧化酶，后者選擇性催化過(guò)氧化氫與指示劑之間的反應(yīng)。過(guò)氧化酶將過(guò)氧化氫作為氧化劑，能除去各種被反應(yīng)物的氫原子。適宜的過(guò)氧化酶可含有正鐵血紅素，這是一種來(lái)自植物的紅色氯化血紅素。來(lái)自動(dòng)物的過(guò)氧化酶也適用，如來(lái)自動(dòng)物的甲狀腺。尤其優(yōu)選辣根過(guò)氧化酶(HRPO)作為檢測(cè)過(guò)氧化氫的組成成分。優(yōu)選由過(guò)氧化酶催化過(guò)氧化氫反應(yīng)直接或間接生成或分解指示劑染料，后者在預(yù)定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)吸收光。優(yōu)選地，指示劑染料產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收的波長(zhǎng)不同于檢測(cè)試劑產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收的波長(zhǎng)。指示劑的氧化形式可以是有色、淺色或無(wú)色的最終產(chǎn)品，該產(chǎn)品在基體的檢測(cè)面顯示顏色變化。也就是說(shuō)，檢測(cè)試劑是通過(guò)有色區(qū)域脫色、或者通過(guò)無(wú)色區(qū)域顯色來(lái)表明樣本中被分析物的存在。用于本發(fā)明的指示劑包括(a)鹽酸3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙(MBTH)與3，3-二甲氨基苯甲酸(DMAB)相結(jié)合；(b)MBTH與3，5-二氯-2-羥基苯磺酸(DCHBS)相結(jié)合；(c)4-氨基安替比林(4-AAP)與5-氧-1-(對(duì)磺苯基)-2-吡唑啉-3-羧酸(OPSP)；(d)4-AAP與N-(間甲苯基)-二乙醇胺(NDA)；(e)間2，2′-連氮基-二(3-乙基苯并噻唑啉)磺酸(ABTS)；(f)4-AAP與4-甲氧基萘酚；(g)焦棓酚紅(PGR)；(h)溴焦棓酚紅(BPR)；(i)酸性綠25(AG)；或(J)[3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙]N-磺?；交撬嵋烩c(MBTHSB)，與8-苯胺基-1-萘磺酸銨(ANS)相結(jié)合。優(yōu)選MBTHSB-ANS。有關(guān)MBTHSB-ANS的其它信息見(jiàn)1995年9月7日提交的未決PCT申請(qǐng)US95/12091號(hào)，結(jié)合在此作為參考。起抑制作用的成分延遲了過(guò)氧化氫與染料或染料前體的反應(yīng)，例如通過(guò)還原過(guò)氧化氫或還原已氧化了的染料。抑制劑的作用原理有兩種不同的作用方式。一是抑制劑與指示劑競(jìng)爭(zhēng)，使指示劑發(fā)生變色的速度減慢。另一種方式是抑制劑不與指示劑競(jìng)爭(zhēng)，因此在指示劑發(fā)生真正變色之前抑制劑實(shí)際上已經(jīng)被消耗掉了。本發(fā)明的抑制劑作用機(jī)制優(yōu)選后者。適用的抑制劑包括2，3，4-三羥基苯甲酸；棓酸丙酯；3，4-二羥基肉桂酸；3，4-二羥基苯甲醛；棓酸；5，6-二氨基尿嘧啶；抗壞血酸；和異抗壞血酸。優(yōu)選抗壞血酸；不過(guò)，抗壞血酸在水溶液中會(huì)起氧化反應(yīng)。為還原氧化反應(yīng)，可使用其它溶劑。優(yōu)選的溶劑為伯醇，如乙醇、甲醇或異丙醇。優(yōu)選乙醇，特別是其濃縮的溶液；也就是說(shuō)，乙醇含量為50％以上。盡管基體所優(yōu)選的各向異性膜可以濾除紅細(xì)胞并將它們留在遠(yuǎn)離檢測(cè)面之處，檢測(cè)試劑也可選擇含有一種分離成分。分離成分通過(guò)在基體中螯合紅細(xì)胞，能從含有紅細(xì)咆的液體、即全血得到相對(duì)無(wú)色透明的液體。用于本發(fā)明的分離成分包括但不限于聚乙二醇、聚(甲基乙烯基醚/馬來(lái))酐、聚丙二醇、聚苯乙烯磺酸、聚丙烯酸、聚乙烯醇、和聚乙烯磺酸，它們的pH在約4.0-8.0之間。這些分離成分在基體中的含量將依據(jù)其電荷及分子量、嵌入基體的其它成分、基體的pH及孔徑、和基體干燥后的殘余水分而變化。這些參數(shù)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)很容易確定。例如，若使用聚丙二醇作為分離成分，(如BASF，Wyandotte，MT出品的PPG-410)，含量?jī)?yōu)選2-30％重量體積比(w/v)，更好的優(yōu)選為8-10w/v。其它分離成分的使用濃度也可為2-30％w/v。聚合的分離成分可滲入或嵌入基體中。某些水溶性鹽也對(duì)分離作用有效。適用于分離血液成分的鹽有檸檬酸鹽、富馬酸鹽、和硫酸鹽，某些酸也可用，如氨基酸、檸檬酸、肌醇六磷酸、和馬來(lái)酸。(例如參見(jiàn)M.C.Fetter于1971年1月5日公布的美國(guó)專利3,552,928號(hào))含有分離成分的一個(gè)有利之處在于由于固體成分如紅細(xì)胞已基本上從生物體液中除去，使檢測(cè)位置的背景顏色較少，不致于使由檢測(cè)試劑產(chǎn)生的變色模糊不清?；w中還可以嵌入其它成分，以提高試劑條的顯色作用及可讀性，保持基體的均一性及完整性。例如，檢測(cè)試劑可包括鹽和/或緩沖系，以使有助于分離基體中的染料。此緩沖系列如可含有檸檬酸，其在溶液中的含量為約0.01M至約1.0M，優(yōu)選為約0.1M。也可使用其它酸性緩沖系。也可使用使基體具有吸水性的化合物或起到穩(wěn)定劑作用的化合物，如水解蛋白。此類化合物包括但不限于來(lái)自CROTEINSPA(CRODA，Inc，NewYork，N.Y.)的牛血清蛋白、多肽及小分子蛋白質(zhì)，此類化合物的使用濃度為約1.0mg/ml至約100.0mg/ml。若用CROTEIN，優(yōu)選20mg/ml?；w涂層中也可包括其它穩(wěn)定劑和防腐劑。如乙二胺四乙酸(EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、及有關(guān)化合物；其使用濃度例如為約0.01mg/ml至約10.0mg/ml。防腐劑的目的之一是有助于使抑制劑保持穩(wěn)定。某些指示劑(如BPR)在基體中具有不必要的遷移趨勢(shì)。如果使用這樣一種指示劑，就要用一種離子對(duì)試劑來(lái)防止該遷移作用。例如，特別選用聚乙二醇衍生物商品POLYQUART(H)(Henkel，Inc.，Ambler，PA)，它能促進(jìn)指示劑與其它基體取代基之間形成離子對(duì)。當(dāng)通過(guò)顯色反應(yīng)顯示出存在有被分析物(如MBTHSB-ANS)時(shí)，可加入表面活性劑，使顏色增強(qiáng)，提高與周圍顏色的對(duì)比。本發(fā)明在實(shí)施中也可使用有機(jī)溶劑，并可以將其包括在基體的檢測(cè)試劑的配方之中，當(dāng)然只要它與基體及檢測(cè)試劑成分的性質(zhì)相容?？赡苓m用的有機(jī)溶劑包括氯仿、丙酮、醇、二氯甲烷、乙醚及石油醚、乙腈、及其混合物。本發(fā)明在實(shí)施中，特別優(yōu)選70％乙醇水溶液。涂在基體上或滲入基體中的檢測(cè)試劑在檢測(cè)條表面不是均一性的。相反，試劑優(yōu)選地在基體上涂成一系列平行的條帶，或稱“結(jié)果節(jié)段”，其中相毗鄰的結(jié)果節(jié)段的組合物中抑制劑濃度逐步升高。因此每一個(gè)連續(xù)節(jié)段需要樣本中逐步增大的萄萄糖濃度，才能使節(jié)段變色。基體的計(jì)時(shí)器節(jié)段涂上一種組合物，或用組合物滲入節(jié)段中，該組合物由檢測(cè)試劑以及萄萄糖和一種醛糖組成，該醛糖不與試劑中的酶反應(yīng)。加入萄萄糖的目的是使計(jì)時(shí)器節(jié)段在被加入到檢測(cè)條上的含水樣本水合之后發(fā)生變色。加入醛糖是為了使計(jì)時(shí)器節(jié)段穩(wěn)定。我們并不希望拘泥于任何特定的理論，不過(guò)我們相信，需要加入醛糖是為了許多單糖與蛋白質(zhì)中的氨基形成穩(wěn)定的共價(jià)配合物的緣故。因此，計(jì)時(shí)器中某些葡萄糖可能與小分子蛋白質(zhì)反應(yīng)，也許還與檢測(cè)試劑中的酶反應(yīng)生成配合物。該過(guò)程(“糖基化作用”)無(wú)需酶的參與，分兩步進(jìn)行。第一步是可逆的，生成一種席夫堿，這是醛中糖的一種醛亞胺。在該醛亞胺轉(zhuǎn)化為酮胺后，由于后者高度穩(wěn)定，是不可逆的。為防止在糖基化作用過(guò)程中葡萄糖被消耗，相信這種情況相是會(huì)發(fā)生在計(jì)器中的，因此我們將一種糖用作穩(wěn)定劑，它是一種更有效的糖基化試劑，可成功地與葡萄糖競(jìng)爭(zhēng)蛋白質(zhì)上的氨基。也有必要使用一種不與葡糖氧化酶反應(yīng)的糖，原因是顯而易見(jiàn)的。Bunn和Higgins發(fā)表在《科學(xué)》213，222(1981年7月10日)上的文章中稱他們發(fā)現(xiàn)，單糖的糖基化作用的效率與溶液中糖的比例有關(guān)，該糖呈直鏈醛構(gòu)型。摘自該文中的表1列出了一些醛糖與血紅蛋白的反應(yīng)速率，以k表示，所有這些醛糖都不與葡糖氧化酶發(fā)生反應(yīng)。k值在理論上應(yīng)盡可能地高，無(wú)論如何應(yīng)高于葡萄糖的k值。實(shí)際上，穩(wěn)定劑必須比葡萄糖更易于與蛋白質(zhì)的氨基部分反應(yīng)，否則，氨基部分將與葡萄糖反應(yīng)并耗盡葡萄糖。因此穩(wěn)定劑的含量應(yīng)當(dāng)足以能與所有這些氨基部分反應(yīng)(也就是說(shuō)，穩(wěn)定劑至少與氨基部分具有相等的克分子數(shù))。優(yōu)選加入過(guò)量的穩(wěn)定劑，尤其是當(dāng)其k值僅僅比葡萄糖稍高一點(diǎn)的時(shí)候。這種情況下沒(méi)有明顯的葡萄糖消耗。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，將甘露糖和半乳糖確定為合適的穩(wěn)定劑。因?yàn)樗鼈兗攘畠r(jià)又易得，優(yōu)選使用它們。表1醛糖反應(yīng)速率(k)D-葡萄糖0.60D-甘露糖3.26-脫氧-L-甘露糖(巖藻糖)0.7D-阿洛糖1.4D-半乳糖2.8D-木糖2.9D-塔羅糖5.2D-阿卓糖5.0D-核糖10.0D-艾杜糖555，6-二-O-甲基-D-葡萄糖104檢測(cè)試劑根據(jù)葡萄糖的存在而變色。因此在將葡萄糖與試劑組合在計(jì)時(shí)器中而不使其發(fā)生變色，在操作上需加小心。應(yīng)使抑制劑的含量超過(guò)計(jì)時(shí)功能所需的量，以抵消上述影響。在涂上含有葡萄糖的溶液后，控制計(jì)時(shí)節(jié)段的干燥速率。實(shí)際操作中，首先將膜涂上含有緩沖系和酶的溶液，再將此涂層干燥形成第一層。然后涂第二層，溶液中含有指示劑、抑制劑、葡萄糖或醛糖。參數(shù)已預(yù)先設(shè)置好，如織物速率、烘箱溫度和空氣流量、以及涂層溶液的沉淀量，并適當(dāng)調(diào)整抑制劑和/或葡萄糖濃度。如果不涂上第二層，另一種不太常用的做法是在一單獨(dú)織物上制成第二涂層，疊合在第一層上。樣本點(diǎn)到檢測(cè)條上時(shí)，計(jì)時(shí)器節(jié)段組合物發(fā)生水合作用，使顯色反應(yīng)開(kāi)始進(jìn)行。然后借助溫度和檢測(cè)試劑的性質(zhì)，特別是抑制劑濃度、葡萄糖含量、水合速率及氧擴(kuò)散速率來(lái)測(cè)定計(jì)時(shí)器節(jié)段變色所需的時(shí)間。計(jì)時(shí)器變色時(shí)間取決于樣本中葡萄糖濃度，也可以與該濃度無(wú)關(guān)。計(jì)時(shí)器中加入極過(guò)量的葡萄糖，變色時(shí)間就基本上與樣本的葡萄糖濃度無(wú)關(guān)了。計(jì)時(shí)器中加入少量葡萄糖，變色時(shí)間也許就取決于樣本中的葡萄糖了，也就是說(shuō)，如果樣本中葡萄糖濃度越大，計(jì)時(shí)器變色越快。優(yōu)選地，計(jì)時(shí)器涂層溶液中的葡萄糖濃度大于1500mg/dL，這使計(jì)時(shí)器基本上與樣本葡萄糖濃度無(wú)關(guān)，無(wú)論樣本濃度在所需的40-400mg/dL范圍之內(nèi)，還是在該范圍以外。其次計(jì)時(shí)器組合物含有的抑制劑應(yīng)當(dāng)至少與具有最高抑制劑濃度的結(jié)果節(jié)段(與最高葡萄糖讀數(shù)相對(duì)應(yīng))所含的同樣多或更多。計(jì)時(shí)器還發(fā)揮了重要的質(zhì)量控制作用，在檢測(cè)條因暴露于潮濕環(huán)境而被污染時(shí)，該作用尤為明顯。檢測(cè)條在使用前必須保持干燥，因?yàn)槠渲袑⑵咸烟寝D(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫的成分(一般為酶)因暴露于潮濕環(huán)境中而易發(fā)生降解。因此如果檢測(cè)條預(yù)先暴露于潮濕環(huán)境中了，檢測(cè)結(jié)果會(huì)變得不可靠。但是用戶對(duì)檢測(cè)條的不可靠性不易察覺(jué)，可能還會(huì)使用它而得到不正確的結(jié)果。不過(guò)如果檢測(cè)條含有計(jì)時(shí)器部分，則暴露于潮濕環(huán)境中會(huì)引起計(jì)時(shí)器變色，這樣就會(huì)給用戶發(fā)出一個(gè)警告該檢測(cè)條已壞?，F(xiàn)在參考附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。圖1為本發(fā)明的用于測(cè)量生物體液中被分析物含量的基體10。雖然圖中基體10為弓形，不過(guò)它具有彈性，在使用時(shí)一般是平的?；w包括一個(gè)樣本面12，供生物體液上樣之用，和一個(gè)檢測(cè)面14，其上或附近發(fā)生的變色指示存在有被分析物。變色來(lái)自被分析物與滲入孔16的試劑之間的相互作用。在測(cè)量血糖濃度中，優(yōu)選樣本面12附近的孔徑較大，而檢測(cè)面14的孔徑減小?？讖教荻绕鸬皆跇颖久?2附近截獲紅細(xì)胞的作用，這樣紅細(xì)胞的顏色就不會(huì)干擾對(duì)指示被分析物存在的變色的觀察。a、b、c、d是四個(gè)示意的結(jié)果節(jié)段。每一個(gè)連續(xù)的結(jié)果節(jié)段所含有的抑制劑比前一個(gè)節(jié)段逐步增多。因此舉例來(lái)說(shuō)，如果樣本引起節(jié)段a、b、c變色，而d不變色(如圖1所示)，這說(shuō)明樣本中葡萄糖濃度至少等于耗盡節(jié)段C所含抑制劑所需的葡萄糖濃度，但不足以克服節(jié)段d中抑制劑的作用。一旦結(jié)果節(jié)段固定標(biāo)準(zhǔn)，上述結(jié)果可得出葡萄糖濃度的定量測(cè)量值。節(jié)段t為計(jì)時(shí)器，除了滲入結(jié)果節(jié)段中的檢測(cè)試劑以外，還加入了高濃度的萄萄糖。節(jié)段t中抑制劑含量至少等于結(jié)果節(jié)段，而且耗盡節(jié)段t中抑制劑所需時(shí)間至少等于耗盡其它節(jié)段中抑制劑所需時(shí)間。因此當(dāng)節(jié)段t發(fā)生變色(如圖1所示)時(shí)，表示已經(jīng)過(guò)了足夠使所有結(jié)果節(jié)段都發(fā)生變色的時(shí)間，結(jié)果節(jié)段的抑制劑濃度低至足以被樣本中葡萄糖濃度耗盡的程度，于是能做出正確的測(cè)量而無(wú)需進(jìn)一步的延遲。實(shí)際做成的檢測(cè)條中，圖1的膜基體夾在兩層蓋片之間，蓋片可以是本領(lǐng)域已知的任何適當(dāng)?shù)臒崴苣?。圖2和圖3分別是檢測(cè)條20的樣本面22和檢測(cè)面24。使用時(shí)，血樣加到樣本面22的開(kāi)口26中。樣本經(jīng)毛細(xì)管作用沿徑向擴(kuò)散開(kāi)來(lái)，到達(dá)檢測(cè)條的頂部和底部，并滲透至基體的檢測(cè)面24。可選的通氣孔28有助于樣本沿檢測(cè)條的擴(kuò)散。通過(guò)可選的透明小窗30可以觀察到樣本的外觀，使用戶確認(rèn)已有足夠的樣本供測(cè)量之需。檢測(cè)面24上的指示劑環(huán)接納顯色反應(yīng)所需的氧，并標(biāo)示出血糖濃度。隨著檢測(cè)的進(jìn)行，如果樣本中血糖濃到達(dá)到或超過(guò)對(duì)應(yīng)于指示劑環(huán)的量，檢測(cè)面24上的指示劑環(huán)隨之變色。因此，圖3描繪的結(jié)果顯示出樣本葡萄糖濃度至少為120mg/dL，但小于150mg/dL。在計(jì)器環(huán)32變色后的任何時(shí)間都能進(jìn)行讀數(shù)。注意到圖中由與葡萄糖的反應(yīng)所引起的變色是從白色變?yōu)椴噬?。不過(guò)，本系統(tǒng)用一種指示劑染料也能以另一種方式工作，該染料被葡萄糖誘發(fā)的氧化反應(yīng)破壞后，相應(yīng)的顏色變化是從彩色到白色。為更好地理解本發(fā)明，下列實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的各種實(shí)施方式。這些實(shí)施例不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明進(jìn)行任何限制。例1———BPR指示劑制備如下溶液蒸餾水83.5g1％(W/W)EDTA二鈉23.8g烏頭酸6.0gNaOH(固體)2.2gCROTEINSPA4.2g咪唑0.6g甘露糖醇3.0g5％(W/W)SURFACTOLQ13.0g調(diào)至pH4.8乙醇40.0gPPG-405.6g酶溶液28.0g酶溶液0.2M烏頭酸27.0g葡糖氧化酶165,000UHRPO340,000U將MemetecBTSH.55膜浸在上述溶液中進(jìn)行包覆，過(guò)量部分用玻璃棒刮去。在80F、中等空氣流量下在浮選干燥器中干燥已包覆的膜，使網(wǎng)膜在20秒內(nèi)完全干燥。將網(wǎng)膜卷起來(lái)，準(zhǔn)備進(jìn)行第二次包覆，如下所述。制備如下溶液抗壞血酸(抑制劑)標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋液蒸餾水190g370g1％EDTA二鈉55g107gBPR0.36g0.71gPOLYQUARTH6g11.8gPPG41014.2g27.8g抗壞血酸1.37g-乙醇243g477g計(jì)時(shí)器溶液稀釋液(上述每份配方)120g抗壞血酸0.885g葡萄糖溶液*17.25g*該葡萄糖溶液為一種經(jīng)變旋作用處理24小時(shí)的16,000mg/dL的葡萄糖水溶液，冷凍貯藏。按如下比例制得儲(chǔ)備溶液的稀釋液0.0405∶1、0.108∶1、0.236∶1、0.369∶1、0.569∶1、1.260∶1。抑制劑濃度的逐步升高相應(yīng)于結(jié)果環(huán)所顯示的葡萄糖濃度的逐步增大。這些溶液以及計(jì)時(shí)器溶液一起涂在含酶膜的孔徑較大的一面，使每平方毫米膜上積聚大約1×10-4毫升溶液。將膜濕潤(rùn)的十五秒，再按上述酶包覆步驟中相同的干燥條件進(jìn)行干燥。結(jié)果表明，計(jì)時(shí)器反應(yīng)時(shí)間約為70秒，95％的情況是在64秒和79秒之間。例2———MBTHSB-ANS指示劑制備下列溶液HPLC水1500ml檸檬酸16.92g檸檬酸鈉20.88g甘露糖醇15gEDTA二鈉1.26gGANTREZS956.75gCroteinSPA36g葡糖氧化酶1.69MUHRPO1.5MUCARBOPOL910*75ml檸檬酸二鈉**225ml*11％的乙腈溶液**0.1M，pH5.0MemtecBTS30膜的包覆在液槽中進(jìn)行，使大孔表面與包覆溶液接觸；過(guò)量溶液同上用玻璃棒除去。將膜按實(shí)施例1進(jìn)行干燥并卷起。制得下列溶液溶液A(指示劑)溶液B(潤(rùn)濕劑)70％(V/V)乙醇2819mlMAPHOS60A41gMBTHSB2.98g70％(v/v)乙醇205ml(NH4)ANS25.83g溶液B205ml2％DTPA51.25ml溶液C(抗壞血酸儲(chǔ)備溶液)溶液D(計(jì)時(shí)器)水115ml水53ml抗壞血酸4.58g抗壞血酸8.75g乙醇267ml乙醇123ml用70％乙醇使體積為175ml葡萄糖溶液40.5ml對(duì)于每一份抑制劑溶液，將溶液A體積定為263ml。為得到各種結(jié)果環(huán)，70％乙醇溶液C的比率從58.9至0.200不等，這樣在所有抑制劑溶液中加到溶液A中的70％乙醇+溶液C的體積均為87.5ml。這樣僅改變了每份溶液中抑制劑的濃度。含有逐步升高的抑制劑的溶液和計(jì)時(shí)器溶液(溶液D)一起涂在膜孔徑較大的一面。調(diào)整溶液沉積的速率，使每平方毫米膜上有8×10-5ml抑制劑。膜的干燥方法同上，只是在包覆與干燥之間的間隔為1.6分鐘。結(jié)果表明，計(jì)時(shí)器反應(yīng)時(shí)間約為60秒，血細(xì)胞比率從30％至55％或葡萄糖濃度從78mg/dl至420mg/dl均對(duì)其影響很小。例3———嵌高計(jì)時(shí)器穩(wěn)定性各向異性聚膜MemterBTS-30用試劑A包覆。所得膜在56℃的空氣循環(huán)爐中干燥10分鐘。然后用試劑B包覆，再按上述條件干燥。然后將膜加工成條形，供檢測(cè)之用。試劑A重量(g)</tables>試劑B染料溶液乙醇22.5ml水25mlMBTHSB36.3mg(NH4)NS472.5mg葡萄糖溶液(1)16,000mg/dlD-葡萄糖水溶液(2)16,000mg/dlD-葡萄糖+16,000mg/dl半乳糖水溶液(3)16,000mg/dlD-葡萄糖+16,000mg/dl核糖水溶液(4)16,000mg/dlD-葡萄糖+16,000mg/dl甘露糖水溶液四種組合物的檢測(cè)條分成兩組貯藏·一組在56℃下貯藏七天—加速老化·另一組在5℃下貯藏七天—對(duì)照七天結(jié)束后，檢測(cè)條用含有100mg/dl葡萄糖、血細(xì)胞比率為42.5％的全血進(jìn)行測(cè)試。“老化”的檢測(cè)條只含有葡萄糖了，它顯色完全所需時(shí)間(“反應(yīng)終止時(shí)間”)比“新鮮”(即在5℃下貯藏)的檢測(cè)條長(zhǎng)得多。含有醛糖的檢測(cè)條表現(xiàn)為反應(yīng)終止時(shí)間明顯縮短。結(jié)果如表2所示。表2在上述說(shuō)明書和實(shí)施例中，出現(xiàn)了下列商標(biāo)CARBOPOL910聚丙烯酸聚合物(B.F.Goodrich)CROTEINSPA水解膠原蛋白—分子量4000(CrodaInc.)GANTREZ595聚(甲基乙烯基醚/馬來(lái)酸)(國(guó)際特殊產(chǎn)品)MAPHOS60A復(fù)合有機(jī)磷酸酯(PPG工業(yè)公司)POLYQUARTH聚乙二醇-15牛脂聚胺(Henkel加拿大有限公司)SURFACTOLQ1乙氧基化蓖麻油(CasChem，Inc.)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員采說(shuō)，上述說(shuō)明書和實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明如何實(shí)施，但不是以任何方式限制本發(fā)明。也可對(duì)文中的詳細(xì)描述作出各種替換，但不背離本發(fā)明的范圍和宗旨。權(quán)利要求1.一種用于目測(cè)試劑條的化學(xué)計(jì)時(shí)器，該試劑條用于測(cè)量涂在其上的生物體液中的葡萄糖濃度，該計(jì)時(shí)器含有一干燥涂層，該涂層由a)一種有色的指示劑組合物，b)一種試劑，當(dāng)其被水合后與葡萄糖反應(yīng)，使指示劑變色，c)一種抑制指示劑變色的抑制劑，和d)葡萄糖組成，其中干燥涂層中抑制劑與葡萄糖濃度的選擇要使葡萄糖在生物體液涂在試劑條上之后經(jīng)過(guò)一段預(yù)定時(shí)間與該試劑反應(yīng)，使指示劑變色。2.權(quán)利要求1的計(jì)時(shí)器，其中的試劑含有一種氧化酶。3.權(quán)利要求1的計(jì)時(shí)器，其中的抑制劑含有抗壞血酸。4.一種用于測(cè)量涂在其上的生物體液中的葡萄糖濃度的目測(cè)試劑條，含有權(quán)利要求1的化學(xué)計(jì)器。5.一種用于目測(cè)試劑條的化學(xué)計(jì)器的制備方法，該試劑條用于測(cè)量涂在其上的生物體液中的葡萄糖濃度，該方法包括下列步驟a)在一種多孔膜上涂覆一種試劑的溶液，當(dāng)該試劑被水合后與葡萄糖反應(yīng)生成一反應(yīng)產(chǎn)物，b)將涂層干燥，形成第一層，c)在第一層上涂第二層，第二層含有i)葡萄糖，ii)一種指示劑，與上述反應(yīng)產(chǎn)物反應(yīng)發(fā)生變色，和iii)一種抑制指示劑變色的抑制劑。6.一種生物體液中葡萄糖濃度的測(cè)量方法，該方法包括下列步驟a)將生物體涂在一種檢測(cè)條上，該檢測(cè)條含有i)大量結(jié)果節(jié)段，每個(gè)節(jié)段與生物體液接觸后變色，每個(gè)節(jié)段中至少含有預(yù)定量的葡萄糖，其含量與引起其它節(jié)段變色的葡萄糖含量各不相同，和ii)一個(gè)計(jì)時(shí)器節(jié)段，在一段時(shí)間后變色，該時(shí)間段持續(xù)的長(zhǎng)短基本上與生物體液葡萄糖含量無(wú)關(guān)，和b)測(cè)定葡萄糖濃度，是通過(guò)觀察在計(jì)時(shí)器節(jié)段變色以后發(fā)生變色的結(jié)果節(jié)段來(lái)進(jìn)行的。7.一種用于目視檢測(cè)條的化學(xué)計(jì)時(shí)器，該檢測(cè)條用于測(cè)量涂在其上的生物體液中的被分析物濃度，該計(jì)時(shí)器含有一干燥涂層，該涂層由a)一種有色的指示劑組合物，b)一種含酶試劑，當(dāng)其被水合后，能與葡萄糖反應(yīng)使指示劑變色，c)一種抑制指示劑變色的抑制劑，d)葡萄糖，和e)一種醛糖，基本上不與上述試劑中的酶反應(yīng)。8.權(quán)利要求7的計(jì)時(shí)器，其中的醛糖選自甘露糖和半乳糖。9.權(quán)利要求7的計(jì)時(shí)器，其中的指示劑選自下列物質(zhì)組(a)鹽酸3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙(MBTH)與3，3-二甲氨基苯甲酸(DMAB)組合；(b)MBTH與3，5-二氯-2-羥基苯磺酸(DCHBS)組合；(c)4-氨基安替比林(4-AAP)與5-氧-1-(對(duì)磺苯基)-2-吡唑啉-3-羧酸(OPSP)；(d)4-AAP與N-(間甲苯基)-二乙醇胺(NDA)；(e)2，2’-連氮基-二(3-乙基苯并噻唑啉)磺酸(ABTS)；(f)4-AAP與4-甲氧基苯酚；(g)焦棓酚紅(PGR)；(h)澳焦棓酚紅(BPR)；(i)酸性綠25(AG)；或(j)[3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙]N-磺?；交撬嵋烩c(MBTHSB)與8-苯胺基-1-萘磺酸銨(ANS)組合。10.權(quán)利要求9的計(jì)時(shí)器，其中的指示劑為MBTHSB-ANS。11.權(quán)利要求7的計(jì)時(shí)器，其中試劑中的酶含有一種氧化酶。12.權(quán)利要求7的計(jì)時(shí)器，其中的抑制劑含有抗壞血酸。13.一種用于測(cè)量涂在其上的生物體液中被分析物濃度的目視檢測(cè)條，含有權(quán)利要求7的化學(xué)計(jì)器。14.一種用于目視檢測(cè)條的化學(xué)計(jì)器的制備方法，該檢測(cè)條用于測(cè)量涂在其上的生物體液中的被分析物濃度，該方法包括下列步驟a)在一種多孔膜上涂覆一種含酶試劑的溶液，當(dāng)該試劑被水合后能與葡萄糖反應(yīng)生成一反應(yīng)產(chǎn)物，b)將涂層干燥，形成第一層，和c)在第一層上涂覆第二層，第二層含有i)一種指示劑，能與上述反應(yīng)產(chǎn)物反應(yīng)發(fā)生變色，ii)一種抑制指示劑變色的抑制劑，iii)葡萄糖，和iv)一種醛糖，基本上不與試劑中的酶反應(yīng)。15.權(quán)利要求14的方法，其中的被分析物為葡萄糖，其中的酶含有葡糖氧化酶。全文摘要一種用于直接讀數(shù)的試劑檢測(cè)條的化學(xué)計(jì)時(shí)器在涂上生物體液之后預(yù)定的時(shí)間變色。該檢測(cè)條測(cè)量生物體液中被分析物的濃度。計(jì)時(shí)器是一干燥涂層,其組成為一種指示劑、一種水合后能與葡萄糖反應(yīng)使指示劑變色的含酶試劑、一種抑制指示劑變色的抑制劑、葡萄糖、且可選一種不與試劑中的酶反應(yīng)的醛糖。優(yōu)選在涂層中含過(guò)量的試劑與葡萄糖,而且計(jì)時(shí)器變色所需的時(shí)間能由抑制劑濃度控制。醛糖使計(jì)時(shí)器穩(wěn)定,很可能是通過(guò)干擾干燥狀態(tài)下葡萄糖的糖基化反應(yīng)而發(fā)揮其作用的。文檔編號(hào)G01N33/558GK1186956SQ97120550公開(kāi)日1998年7月8日申請(qǐng)日期1997年9月3日優(yōu)先權(quán)日1996年9月3日發(fā)明者E·J·基瑟爾,M·F·托馬斯科,E·G·里斯,Y·S·余申請(qǐng)人:生命掃描有限公司