專利名稱：白血球分析用試劑及白血球的分類方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白血球分析用試劑及白血球的分類方法，更詳細(xì)地說，是涉及在臨床檢查領(lǐng)域中的、白血球分類計(jì)數(shù)用試劑及將白血球分類計(jì)數(shù)的方法。
臨床檢查領(lǐng)域中，用患者的全血對(duì)白血球分類計(jì)數(shù)的工作，在診斷各種疾病時(shí)是很重要的。
白血球中的嗜堿細(xì)胞，在正常檢體中占白血球全部的比率僅為0.5—2.0％左右，因此，在對(duì)白血球分類計(jì)數(shù)時(shí)，要溶解嗜堿細(xì)胞之外的白血球或?qū)⑵渎愫嘶?，僅僅特異地將嗜堿細(xì)胞殘留，測(cè)定細(xì)胞的電阻信號(hào)及散射光信號(hào)，求出其信號(hào)強(qiáng)度的差異，由此辨別嗜堿細(xì)胞和其它白血球。
作為這些方法，已知有特開平3—20667號(hào)、特開平4—230854號(hào)、特開昭61—88896號(hào)。
特開平3—20667號(hào)涉及使用聚氧乙烯加成聚合摩爾數(shù)為12—30的非離子性表面活性劑和陽(yáng)離子性表活性劑組成的PH為3.0—4.0的水溶液，測(cè)定細(xì)胞的電阻信號(hào)(DC法)。
特開平4—230854涉及使用含有聚氧乙烯系非離子性表面活性劑、SDS、鄰苯二甲酸—鹽酸，抗氧化劑的PH為2.5—3.2的水溶液，測(cè)定細(xì)胞的電阻信號(hào)。
特開昭61—88896號(hào)涉及使用稀酸和水溶性表面活性劑組成的PH為1.8—2.3的水溶液，測(cè)定細(xì)胞的低角散射光和廣角散射光，由此對(duì)嗜堿細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。
在特開平3—20667號(hào)中，可通過使嗜堿細(xì)胞和未成熟粒細(xì)胞(幼若顆粒球)以外的白血球裸核化，對(duì)嗜堿細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，進(jìn)而可通過DC法來檢測(cè)未成熟粒細(xì)胞的出現(xiàn)。然而未成熟粒細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞重疊，不能分別對(duì)其每一種進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，也不能對(duì)其它的白血球進(jìn)行細(xì)分類。而且，將這種試劑用于流體檢查計(jì)，測(cè)定細(xì)胞的低角散射光和廣角散射光，也同樣如

圖12和圖13所示，不能對(duì)未成熟粒細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞進(jìn)行各自的分類計(jì)數(shù)。
特開平4—230854號(hào)中只公開了僅能對(duì)嗜堿細(xì)胞進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，對(duì)其它的白血球的計(jì)數(shù)，或成髓細(xì)胞，未成熟粒細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)，沒有任何暗示。
特開昭61—88896號(hào)中，通過使嗜堿細(xì)胞以外的白血球裸核化，將嗜堿細(xì)胞、單核細(xì)胞(淋巴球，單細(xì)胞)、PMN(嗜中性白細(xì)胞，嗜酸性白細(xì)胞)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，此外還可通過對(duì)核形態(tài)信息(廣角散射光強(qiáng)度)和過氧化物酶通道的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較研討，來檢測(cè)成髓細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、左移(レフトシフト)的出現(xiàn)。然而，用這種方法，未成熟粒細(xì)胞包括在單核細(xì)胞范疇內(nèi)，因此未成熟粒細(xì)胞的檢測(cè)是通過與過氧化物酶通道(チャネル)的單核細(xì)胞數(shù)之差進(jìn)行，單獨(dú)的通道則不能檢測(cè)出未成熟粒細(xì)胞。
本發(fā)明的目的在于提供以單獨(dú)的通道進(jìn)行嗜堿細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)的同時(shí)，還可以對(duì)未成熟粒細(xì)胞、單核細(xì)胞(淋巴球、單細(xì)胞)、嗜堿細(xì)胞以外的粒細(xì)胞(嗜中性白細(xì)胞及嗜酸性白細(xì)胞)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)的試劑及方法。
按照本發(fā)明，則可提供由(1)聚氧乙烯的加成聚合摩爾數(shù)為3—10的至少一種非離子性表面活性劑和，(2)至少一種陽(yáng)離子性表面活性劑和，(3)使PH為2.5—4.0的緩沖劑組成的白血球分析用試劑。
由于將本發(fā)明的白血球分析用試劑與血液試樣混合，使紅血球溶血到不妨礙以后測(cè)定的程度，另一方面，白血球則是使嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞被裸核化。然后，測(cè)定細(xì)胞大小方面的信息和形態(tài)學(xué)方面的信息(有關(guān)核的形態(tài)、顆粒等細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的狀態(tài)的信息)，由此就可將白血球分類計(jì)數(shù)成嗜堿細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、單核細(xì)胞(淋巴球，單細(xì)胞)、嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞(嗜中性細(xì)胞及嗜酸性細(xì)胞)。
本發(fā)明中，含有聚氧乙烯的加成聚合摩爾數(shù)為3—10的至少一種非離子性表面活性劑。
作為可在本發(fā)明中使用的非離子性表面活性劑，可采用以下結(jié)構(gòu)式表示的物質(zhì)
R1—R2—(CH2CH2O)n—H〔式中，R1表示碳數(shù)為8—18的烷基或鏈烯基，R2表示—0—或一(C6H4)—0—，n表示聚氧乙烯的平均加成聚合摩爾數(shù)為3—10的實(shí)數(shù)〕。
在上式中，作為碳數(shù)為8—18的烷基或鏈烯基，例如可列舉辛基、壬基、癸基、十一烷基、月桂基(十二烷基)、十三烷基、肉豆蔻基(十四烷基)、十五烷基、鯨蠟基(十六烷基)、十七烷基、硬脂?；?十八烷基)等，其中優(yōu)選十二烷基。
作為非離子性表面活性劑的具體例子，可列舉聚氧乙烯(4，2)十二烷基醚(BL4，2、日光ケミカルス(株))、聚氧乙烯(9)十二烷基醚(BL9，日光ヶミカルス(株))、聚氧乙烯(5)十二烷基醚(日光ケミカス(株))、聚氧乙烯(5，5)十六烷基醚(日光ケミカルズ(株))、聚氧乙烯(7)十六烷基醚(日光ケミカルズ(株))、聚氧乙烯(7)油醚(日光ケミカルズ(株))等。
非離子表面活性劑，可以300—20000mg/l的濃度使用，更優(yōu)選為500—10000mg/l。具體說，最好以500—8000mg/l使用聚氧乙烯(3—10)十二烷基醚。濃度過低時(shí)，不能使嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞全裸核化；濃度過高時(shí)，妨礙用陽(yáng)離子性表面活性劑來使嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞裸核化。除上述以外的非離子性表面活性劑，例如聚氧乙烯的加成聚合摩爾數(shù)過大的情況下，如圖13所示，不能使嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞完全裸核化。而且，聚氧乙烯的加成聚合摩爾數(shù)過小的情況下，難溶于水，故使用困難。
作為本發(fā)明的白血球分析用試劑中的陽(yáng)離子性表面活性劑，含有選自具有以下結(jié)構(gòu)的四級(jí)銨鹽和吡啶嗡鹽型表面活性劑中的至少一種陽(yáng)離子性表面活性劑。 〔式中，R1表示碳數(shù)為10—18的烷基或鏈烯基，R2、R3或R1表示碳數(shù)為1—3的烷基或鏈烯基，X表示鹵素〕或者R1—N+C5H5X-〔式中的R1、X的定義與上述相同)上式中，作為碳素為10—18的烷基或鏈烯基，例如，可列舉癸基、十一烷基、十二烷基(月桂基)、十三烷基、十四烷基(肉豆寇基)、十五烷基、十六烷基(鯨蠟基)、十七烷基、硬脂?；?十八烷基)等，其中優(yōu)選癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基或硬脂?；?。
作為碳數(shù)為1—3的烷基或鏈烯基，可列舉甲基、乙基、丙基、乙炔基、丙炔基等。作為陽(yáng)離子的具體例子，可列舉癸基三甲基銨、月桂基三甲基銨、豆肉寇基三甲基銨、十六烷基三甲基銨、十六烷基二甲基乙基銨、月桂基二甲基乙基銨、豆肉寇基二甲基乙基銨、月桂基吡啶嗡、十六烷基吡啶嗡等。
作為鹵素，可列舉氟、氯、溴、碘等。
上述陽(yáng)離子性表面活性劑的使用濃度，應(yīng)該是使紅血球、血小板大致完全溶解，至少使嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞大致裸核化所需的足夠濃度。該濃度，例如可通過用普通的光學(xué)顯微鏡觀察裸核化的狀態(tài)來簡(jiǎn)便地決定適宜的濃度。具體說，是約100mg/l—10000mg/l，優(yōu)選300mg/l—5000mg/l的濃度，但可根據(jù)陽(yáng)離子性表面活性劑的種類，適宜地配制。如果太少，則不能完全溶解紅血球、血小板，如果有過量的陽(yáng)離子性表面活性劑存在，則對(duì)促進(jìn)單及檸檬酸組合而成的試劑，將LTAC、BL9及檸檬酸組合而成的試劑，將MTAB、BL9及檸檬酸組合而成的試劑，將CTAC、BL9及檸檬酸組合而成的試劑，將STAC、BL9及檸檬酸組合而成的試劑，將CDMEB、BL9及檸檬酸組合而成的試劑，將CPyC、BL9及檸檬酸組合而成的試劑，將DTAB、BL4，2及琥珀酸組合而成的試劑，將LTAC、BL4，2琥珀酸組合而成的試劑，將MTAB、BL4，2及琥珀酸組合而成的試劑，將CTAC、BL4，2及琥珀酸組合而成的試劑，將STAC、BL4，2及琥珀酸組合而成的試劑，將CDMEB、BL4，2及琥珀酸組合而成的試劑，將CRyC、BL4，2及琥珀酸組合而成的試劑，將DTAB、BL9及琥珀酸組合而成的試劑、將LTAC、BL9及琥珀酸組合而成的試劑，將MTAB、BL9及琥珀酸組合而成的試劑，將CTAC、BL9及琥珀酸組合而成的試劑，將STAC、BL9及琥珀酸組合而成的試劑，將CDMEB、BL9及琥珀酸組合而成的試劑，將CPyC、BL9及琥珀酸組合而成的試劑。
在本發(fā)明試劑中，還可進(jìn)一步添加金屬鹽。通常不需要金屬鹽，但是使用利用檢測(cè)電阻，信號(hào)進(jìn)行測(cè)定的裝置時(shí)，為了在試料的電導(dǎo)率低的情況下進(jìn)行測(cè)定，需用金屬鹽將電導(dǎo)率調(diào)整成適宜值。作為可使用的金屬鹽，沒有特別的限定，例如氯化鈉、氯化鉀、氯化鋰等堿金屬鹽是適宜的。此時(shí)的使用量，最好是使溶液的電導(dǎo)率在3—20mS/cm范圍內(nèi)的量。
使用本發(fā)明的試劑對(duì)白血球進(jìn)行分類時(shí)，只要將本發(fā)明的試劑和血液試樣混合起來的簡(jiǎn)單操作就可配制測(cè)定試樣。試劑和血液試樣的混合，最好是構(gòu)成試劑的成分和血液試樣大致同時(shí)接觸，也可按照試劑的構(gòu)成成分的種類或濃度，順次與血液試樣混合。血液試樣與本發(fā)明試劑的混合比沒有特別的限定，但以1∶2—1∶100左右的比例混合是適宜的。
反應(yīng)大致是在瞬時(shí)間進(jìn)行，混合后約10秒到至少120秒左右可穩(wěn)定地測(cè)定。反應(yīng)溫度在10—40℃左右可以沒特別問題地進(jìn)行測(cè)定。反應(yīng)溫度高的情況下以稍短的時(shí)間，反應(yīng)溫度低的情況下以稍長(zhǎng)的時(shí)間進(jìn)行反應(yīng)是必要的。
本發(fā)明的白血球分類計(jì)數(shù)方法中，為了測(cè)定大小方面的信息(細(xì)胞的體積)，在電阻信號(hào)或前方低角散射光信號(hào)中至少測(cè)定1種信號(hào)；為了測(cè)定形態(tài)學(xué)方面的信息(細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的信息)，在前方廣角散射光信號(hào)或側(cè)方散射光信號(hào)中至少測(cè)定1種信號(hào)。
例如，用具有圖14所示構(gòu)造的流體檢查計(jì)(フロ-サイトメ-ト)測(cè)定前方低角散射光信號(hào)和前方廣角散射光信號(hào)的組合能提供廉價(jià)的測(cè)定裝置。圖14的裝置備有簡(jiǎn)單的2角度前方散射光檢測(cè)部。在流體室(フロ-セル)CELL的前方，使聚光鏡L2和平行光管透鏡(L1介于中間，配置有半導(dǎo)體激光LD。在流體室CELL的后方使并置有射束制動(dòng)器BS的會(huì)聚透鏡L3介于中間，設(shè)置有光電二極管PD。在光電二極管PD的傳感器的中心部位，有前方低角散射光檢測(cè)傳感器LF，在其上部有前方廣角散射光檢測(cè)傳感器HF。通過這種裝置，可在散射的前方方向的散射光中測(cè)定低角度(1—5°)和廣角度(6—20°)二種散射光強(qiáng)度，根據(jù)散射光強(qiáng)度之差，就可將白血球進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。
本發(fā)明中使用的裝置，不僅限于這種裝置，還可以檢測(cè)用于測(cè)定大小方面的信息，也就是測(cè)定體積的電阻信號(hào)，也可以測(cè)定用于測(cè)定形態(tài)學(xué)方面信息的測(cè)方散射光。
按照本發(fā)明的白血球分析用試劑，可以對(duì)白血球分類計(jì)數(shù)為嗜堿細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞，單核細(xì)胞(淋巴球，單細(xì)胞)、嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞(嗜中性白細(xì)胞及嗜酸性白細(xì)胞)。
也就是，通過將本發(fā)明的試劑與血液試樣混合，紅血球、白小板幾乎瞬時(shí)溶解。另一方面，白血球中除嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞被裸核化，嗜堿細(xì)胞則幾乎不變化地殘留下來。單核細(xì)胞(淋巴球、單細(xì)胞)稍微收縮。未成熟粒細(xì)胞幾乎不收縮、不裸核化地殘留下來。其結(jié)果是，細(xì)胞的大小按未成熟粒細(xì)胞＞嗜堿細(xì)胞＞單核細(xì)胞＞嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞的順序變小。在形態(tài)學(xué)方面，單核細(xì)胞僅有圓的核和細(xì)胞膜，復(fù)雜度最??；嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞的核是分節(jié)狀或棒狀；嗜堿細(xì)胞還進(jìn)一步具有嗜堿性顆粒；未成熟粒細(xì)胞由于具有未成熟顆粒而具有復(fù)雜的形態(tài)。因此，用本發(fā)明試劑處理過的白血球，可以通過測(cè)定上述的大小信息和形態(tài)學(xué)的信息而被分類計(jì)數(shù)為嗜堿細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、單核細(xì)胞(淋巴球、單細(xì)胞)、嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞(嗜中性白細(xì)胞及嗜酸性白細(xì)胞)。
按照本發(fā)明的白血球分類方法，將白血球分析用試劑和血液試樣混合后，使用流體檢查計(jì)來測(cè)定上述的細(xì)胞大小信息和形態(tài)學(xué)信息的至少2種信息，故而白血球能很好地被分類計(jì)數(shù)。
如本發(fā)明試劑，將陽(yáng)子性表面活性劑和非離子表面活性劑組合使用，使用緩沖劑使PH在設(shè)定的2.5—4.0范圍內(nèi)，因而可以選擇性地僅僅使嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞裸核化。
如本發(fā)明試劑，以適宜濃度使用陽(yáng)離子表面活性劑的情況下，除了細(xì)胞溶解作用外，陽(yáng)離子性表面活性劑的正電荷將白血球細(xì)胞的陰離子性物質(zhì)(例如，RNA、嗜堿性顆粒等)的電荷中和，因此陰離子物質(zhì)不溶化。其結(jié)果是，含較多RNA的淋巴球及單核細(xì)胞，含大量RNA和嗜堿性顆粒的未成熟粒細(xì)胞，以及含嗜堿性顆粒的嗜堿細(xì)胞難以收縮，在細(xì)胞大小方面提供了差異。
表面活性劑，眾所周知，具有溶解紅血球、血小板，使白血球裸核化的作用，而將陽(yáng)離子性表面活性劑或非離子性表面活性劑單獨(dú)作用于白血球時(shí)，如圖5及圖8所示，不能進(jìn)行選擇性的裸核化。
例如，單獨(dú)使用陽(yáng)離子性表面活性劑時(shí)，以表1示出的適宜濃度，淋巴球，單細(xì)胞難以收縮。未成熟粒細(xì)胞，比單核細(xì)胞(淋巴球，單細(xì)胞)更難以收縮。然而，嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)的一部分殘存而不能完全裸核化，如圖8所示，不能區(qū)分單核細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞。
在親水基上具有聚氧乙烯的非離子性表面活性劑，眾所周知，一般是如果加成聚合摩爾數(shù)變小則細(xì)胞溶解作用增強(qiáng)。在本發(fā)明的試劑中，非離子性表面活性劑的作用機(jī)理尚不明確，但由于和陽(yáng)離子性表面活性劑同時(shí)使用，則可以通過使陽(yáng)離子性表面活性劑不能除去的嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)完全溶解，裸核化，進(jìn)而使之收縮的作用，以及多含RNA的細(xì)胞收縮的抑制作用這兩個(gè)相反的作用，提供適宜的細(xì)胞大小方面的信息和形態(tài)方面的信息。
實(shí)施例將本發(fā)明的白血球分析用試劑的適宜組成說明如下。
實(shí)施例1—4陽(yáng)離子性表面活性劑 1000—2000mg/lBL9(非離子性表面活性劑聚氧乙烯(9)十二烷基醚、日光ケミカルズ(株))4000mg/l檸檬酸 2.1g/lNaOH 使PH為3.3的量作為陽(yáng)離子性表面活性劑，使用各種濃度的各種表面活性劑情況下，將上述組成的試劑1ml和健康人血液30μl混合，10秒鐘后用流體檢查計(jì)測(cè)定前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度。在圖1至圖4中示出，作為陽(yáng)離子性表面活性劑，使用LTAC2000mg/l(實(shí)施例1)、MTAB 2000mg/l(實(shí)施例2)、CTAC1000mg/l(實(shí)施例3)、CDMEB 1000mg/l(實(shí)施例4)時(shí)的散布圖象。任何一種情況下，都能將白血球分類計(jì)數(shù)成單核細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞。
比較例1作為比較例，除了不添加陽(yáng)離子性表面活性劑外，使用了上述實(shí)施例同樣的試劑，圖5示出這種情況下的散布圖象。此種情況下，嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞不收縮，因此不能區(qū)別。
實(shí)施例5，6CTAC 1000mg/l非離子性表面活性劑4000mg/l檸檬酸2.1g/lNaOH 使PH為3.3的量作為非離子性表面活性劑，使用各種濃度的各種表面活性劑情況下，將上述組成的試劑1ml和健康人血液30μl混合，10秒鐘后用流體檢查計(jì)測(cè)定前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度。在圖6及圖7中示出，作為非離子性表面活性劑，使用BL4，2(聚氧乙烯(4，2)十二烷基醚)(實(shí)施例5)。BL9(聚氧乙烯(9)十二烷基醚)(實(shí)施例6)時(shí)的散布圖象。任何一種情況下，都能將白血球分類計(jì)數(shù)成單核細(xì)胞，嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞。
比較例2作為比較例，除了不添加非離子性表面活性劑外，使用與上述實(shí)施例同樣的試劑，圖8示出這種情況下的散布圖象。這種情況下，嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)有一部分殘存，不完全裸核化，不能區(qū)分單核細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞。
實(shí)施例7—9MTAB1000mg/lBL9 4000mg/ll檸檬酸 2.1g/lNaOH使PH為3.3的量將上述組成的試劑1ml和健康人血(實(shí)施例7)、出現(xiàn)未成熟粒細(xì)胞的患者血液(實(shí)施例8)、出現(xiàn)成髓細(xì)胞及未成熟粒細(xì)胞的檢體(實(shí)施例9)30μl分別混合，10秒鐘后用流體檢查計(jì)測(cè)定前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度。將測(cè)定結(jié)果示于圖9—11中。
未成熟粒細(xì)胞在IG領(lǐng)域中出現(xiàn)，成髓細(xì)胞在Blast領(lǐng)域中出現(xiàn)，可以進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。
比較例3作為先有技術(shù)(特開平3—20667號(hào))，配制以下示出組成的試劑。
CDMEB 600mg/lBO—20(聚氧乙烯(20)油醚，日光ケミカルズ(株)) 25.0g/l
甲酸鈉1.6g/l鹽酸 1.8g/l氯化鈉0.4g/l將上述組成的試劑1ml和出現(xiàn)未成熟粒細(xì)胞的檢體30μl分別混合，10秒鐘后用流體檢查計(jì)測(cè)定前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度。將測(cè)定結(jié)果示于圖13中。如圖13所示，可以將未成熟粒細(xì)胞，嗜堿細(xì)胞各自分類計(jì)數(shù)。
另一方面，使用本申請(qǐng)的實(shí)施例7—9的試劑測(cè)定相同檢體，將測(cè)定結(jié)果示于圖12中。如圖12所示，未成熟粒細(xì)胞，嗜堿細(xì)胞可各自分類。
按照本發(fā)明的白血球分析用試劑及方法，可以用僅僅將基本上由1種水溶液組成的試劑與血液試樣混合的簡(jiǎn)單操作，就可配制測(cè)定用試樣，僅僅測(cè)定2種散射光信號(hào)或散射光信號(hào)和DC法的體積，就可將白血球分類計(jì)數(shù)。特別是，以先有技術(shù)用單獨(dú)的通道不能分類計(jì)數(shù)的未成熟粒細(xì)胞為首，嗜堿細(xì)胞，單核細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞也都可同時(shí)分類計(jì)數(shù)。
以下簡(jiǎn)單說明附圖。
圖1是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，作為陽(yáng)離子性表面活性劑，使用氯化月桂基三甲基銨時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖2是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，作為陽(yáng)離子性表面活性劑，使用溴化十四烷基三甲基銨時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖3是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，作為陽(yáng)離子性表面活性劑，使用氯化十六烷基三甲基銨時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散光強(qiáng)度的散布圖。
圖4是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，作為陽(yáng)離子性表面活性劑，使用溴化十六烷基二甲基乙基銨時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖5是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，僅使用非離子性表面活性劑時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖6是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，作為非離子性表面活性劑，使用BL4，2時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖7是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，作為非離子性表面活性劑，使用BL9時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖8是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，僅使用陽(yáng)離子性表面活性劑時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散光強(qiáng)度的散布圖。
圖9是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，測(cè)定健康人的檢體時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖10是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，測(cè)定出現(xiàn)未成熟粒細(xì)胞的檢體時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖11是表示，在本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑中，測(cè)定出現(xiàn)未成熟粒細(xì)胞和成髓細(xì)胞的檢體時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖12是表示，使用本發(fā)明涉及的白血球分析用試劑，測(cè)定出現(xiàn)未成熟粒細(xì)胞的檢體時(shí)的前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖13是表示，使用作為先有技術(shù)例的特開平3—20667號(hào)的試劑測(cè)定出現(xiàn)未成熟粒細(xì)胞檢體時(shí)前方低角散射光強(qiáng)度和前方廣角散射光強(qiáng)度的散布圖。
圖14是用于測(cè)定經(jīng)本發(fā)明的白血球分析用試劑處理過的試樣的裝置概略圖。
圖中符號(hào)說明如下。
LM單核細(xì)胞GRA 除嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞Baso 嗜堿細(xì)胞IG未成熟粒細(xì)胞other 除嗜堿細(xì)胞以外的白血球blast 成髓細(xì)胞CELL 流體室L1 平行光管透鏡L2 聚光鏡L3 會(huì)聚透鏡BS 射束制動(dòng)器PD 光電二極管LD 半導(dǎo)體激光LF 前方低角散射光檢測(cè)傳感器HF 前方廣角散射光檢測(cè)傳感器
權(quán)利要求
1.白血球分析用試劑，其特征在于它是由(1)聚氧乙烯的加成聚合摩爾數(shù)為3—10的至少一種非離子性表面活性劑，(2)至少一種陽(yáng)離子性表面活性劑，(3)使PH為2.5—4.0的緩沖劑組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白血球分析用試劑，其中，它還含有堿金屬鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的白血球分析用試劑，其中，非離子性表面活性劑是下式R1—R2—(CH2CH2O)n—H〔式中，R1表示碳數(shù)為8—18的烷基或鏈烯基，R2表示—0—或—(C6H4)—0—，n是3—10的實(shí)數(shù)〕表示的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的白血球分析用試劑，其中，非離子性表面活性劑是聚氧乙烯(4，2)十二烷基醚、聚氧乙烯(9)十二烷基醚，聚氧乙烯(5)十二烷基醚、聚氧乙烯(5，5)十六烷基醚、聚氧乙烯(7)十六烷基醚、聚氧乙烯(7)油醚中的任何一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1—3所述的白血球分析用試劑，其中，陽(yáng)離子性表面活性劑是下式 〔式中，R1表示碳數(shù)為10—18的烷基或鏈烯基，R2、R3或R4表示碳數(shù)為1—3的烷基或鏈烯基，X表示鹵素〕或R1—N+C5H5X-〔式中，R1及X的定義與上述相同〕表示的至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的白血球分析用試劑，其中，陽(yáng)離子性表面活性劑是溴化癸基三甲基銨、溴化月桂基三甲基銨、溴化十四烷基三甲基銨、溴化十六烷基三甲基銨、溴化硬脂酰三甲基銨、溴化十六烷基二甲基乙基銨、氯化十六烷基吡啶嗡中的任何一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1—6中任何一項(xiàng)所述的白血球分析用試劑，其中，非離子性表面活性劑的使用濃度為300—20000mg/l，陽(yáng)離子表面活性劑的使用濃度為100—10000mg/l。
8.白血球的分類方法，該方法包括(i)將權(quán)利要求1—7中任一項(xiàng)所述的試劑與血液試樣混合，(ii)測(cè)定上述血液樣中的細(xì)胞大小信息和形態(tài)信息中至少2種信息從而將白血球分類計(jì)數(shù)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，細(xì)胞大小信息的測(cè)定，是用流體檢查計(jì)測(cè)定前方低角散射光的工序或由檢測(cè)電阻信號(hào)來測(cè)定細(xì)胞體積的工序中的至少一種測(cè)定工序。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，形態(tài)信息的測(cè)定，是用流體檢查計(jì)測(cè)定細(xì)胞的側(cè)方散射光的工序或測(cè)定細(xì)胞的前方廣角散射光的工序中的至少一種測(cè)定工序。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種用單獨(dú)的通道進(jìn)行嗜堿細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的同時(shí)，還能對(duì)未成熟粒細(xì)胞、單核細(xì)胞(淋巴球、單細(xì)胞)、嗜堿細(xì)胞以外的顆粒細(xì)胞(嗜中性白細(xì)胞、嗜酸性白細(xì)胞)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)的試劑及方法。該白血球分析用試劑是由(1)聚氧乙烯的加成聚合摩爾數(shù)為3-10的至少一種非離子性表面活性劑，(2)至少一種陽(yáng)離子性表面活性劑，(3)使pH為2.5-4.0的緩沖劑組成。
文檔編號(hào)G01N33/49GK1114422SQ9510422
公開日1996年1月3日 申請(qǐng)日期1995年4月20日 優(yōu)先權(quán)日1994年4月21日
發(fā)明者坂田孝, 赤井保正, 寶田馨, 甲月千尋, 兵佐義浩 申請(qǐng)人:東亞醫(yī)用電子株式會(huì)社