本申請屬于生物化學和分析化學領域，主要涉及基于陽離子交換高效液相色譜(cex-hplc)和放射性標記物檢測抗白介素17a?(il-17a)抗體質(zhì)量的方法。

背景技術：

1、白細胞介素17?(il-17)家族目前包括il-17a、il-17b、il-17c、il-17d、il-17e和il-17f六種細胞因子。il-17家族的成員與任何其它已知的細胞因子沒有序列相似性，而且家族成員之間的序列相似性也比較低(gaffen?sl,nat.rev.immunol.2009aug；9(8):556-67)。il-17家族成員的功能主要是參與免疫應答的調(diào)節(jié)。il-17a?(以下簡稱il-17)是20-30kd的同源二聚體糖蛋白，其主要由活化的cd4+t細胞產(chǎn)生并作為促炎細胞因子起作用。il-17由活化的t細胞在炎性位點分泌，而不在體循環(huán)中分泌。il-17具有多種生物學特性，包括上調(diào)黏附分子并在多種細胞類型包括滑膜細胞、軟骨細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞、上皮細胞、角質(zhì)形成細胞和巨噬細胞中誘導產(chǎn)生大量炎性細胞因子和趨化因子。同樣，il-17通過誘導趨化因子的釋放誘導嗜中性粒細胞聚集到炎性位點上，刺激前列腺素和金屬蛋白酶的產(chǎn)生，并抑制蛋白聚糖的合成。此外，il-17在造血祖細胞的成熟中起重要作用。il-17在不同的器宮和組織包括肺、關節(jié)軟骨、骨、腦、造血細胞、腎、皮膚和腸中具有信號轉(zhuǎn)導功能。因此，由il-17a/th17介導的免疫反應是全身性的，由此引發(fā)的炎癥反應主要表現(xiàn)為中性粒細胞浸潤。

2、抗體由于其獨特的生物學特性和功能，在疾病治療方面得到越來越多的應用。目前，已有多種針對il-17a的抗體，有望通過與il-17a的結(jié)合來預防或治療由il-17a引起的疾病。

3、作為藥物，抗體的質(zhì)量控制和檢測是至關重要的。因此，本領域技術人員需要開發(fā)新的有效的抗il-17a抗體的檢測方法以保證抗體的安全應用。

技術實現(xiàn)思路

1、第一方面，本申請?zhí)峁┝嘶陉栯x子交換高效液相色譜(cex-hplc)檢測抗白介素17a?(il-17a)抗體的質(zhì)量的方法，其包括：

2、將包含所述抗il-17a抗體的樣品加入cex-hplc柱中，所述陽離子交換高效液相色譜柱的柱溫為30℃或40℃；

3、根據(jù)色譜圖中所述抗il-17a抗體主峰與相鄰的酸性峰和堿性峰的分離度判斷所述抗il-17a抗體的質(zhì)量，其中當所述抗il-17a抗體主峰與相鄰的酸性峰和堿性峰的分離度大于1.2或1.5時，所述抗il-17a抗體的質(zhì)量符合要求；

4、其中：

5、所述cex-hplc的流動相的所使用的緩沖鹽為mes、甘氨酸、磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉；

6、所述cex-hplc的流動相的ph值低于所述抗il-17a抗體的等電點(pi)值；以及

7、所述cex-hplc的流動相包括流動相a和流動相b，并且所述流動相a和所述流動相b的洗脫梯度如下所示：

8、

9、在第一方面的一些實施方案中，所述流動相的ph值為約6.4。

10、在第一方面的一些實施方案中，所述cex-hplc的流動相采用直接稱取氫氧化鈉的方法來調(diào)節(jié)ph值。

11、在第一方面的一些實施方案中，所述cex-hplc的流動相包括流動相a和流動相b；在流動相a中，氫氧化鈉的加入量為0.5225-0.5775?g/l；和/或在流動相b中，氫氧化鈉的加入量為0.573?g/l；和/或在流動相b中，氯化鈉的加入量為26.298-32.142?g/l。

12、在第一方面的一些實施方案中，所述cex-hplc的色譜柱的柱溫為約30℃或約40℃。

13、在第一方面的一些實施方案中，包含所述抗il-17a抗體的樣品濃度為4-15?mg/ml。

14、在第一方面的一些實施方案中，包含所述抗il-17a抗體的樣品上樣體積為10?μl。

15、根據(jù)上述方法，基于色譜圖中所述抗il-17a抗體主峰與相鄰的酸性峰和堿性峰的分離度判斷所述抗il-17a抗體的質(zhì)量，其中當所述抗il-17a抗體主峰與相鄰的堿性峰的分離度大于1.17或1.45時，所述抗il-17a抗體的質(zhì)量符合要求。

16、第二方面，本申請?zhí)峁┝丝膳c第一方面所述的基于陽離子交換高效液相色譜(cex-hplc)檢測抗白介素17a?(il-17a)抗體的方法聯(lián)合使用的基于放射性標記物檢測抗白介素17a?(il-17a)抗體的方法，所述基于放射性標記物檢測抗白介素17a?(il-17a)抗體的方法包括：

17、使用放射性標記物對樣品中的所述抗il-17a抗體進行標記；

18、將標記后的樣品進行凝膠柱分離；

19、測定相應峰的放射性強度確定所述樣品中抗il-17a抗體的純度；

20、其中，所述放射性標記物為125i、124i、131i、89zr或68ga。

21、在第二方面的一些實施方案中，使用放射性標記物對樣品中的所述抗il-17a抗體中的酪氨酸、組氨酸和/或精氨酸殘基進行標記。

22、在第二方面的一些實施方案中，所述放射性強度為γ放射性強度。

23、在第二方面的一些實施方案中，使用用于抗白介素17a?(il-17a)抗體質(zhì)量檢測的試劑盒進行基于放射性標記物檢測抗白介素17a?(il-17a)抗體的質(zhì)量的方法，所述用于抗白介素17a?(il-17a)抗體質(zhì)量檢測的試劑盒包含：

24、放射性標記物和使用說明書；和/或

25、兩性電解質(zhì)、氫氧化鈉、氯化鈉和使用說明書；

26、其中，所述放射性標記物為125i、124i、131i、89zr或68ga；和/或

27、所述兩性電解質(zhì)為mes、甘氨酸、磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉。

28、通過第一方面和/或第二方面所述的方法對抗il-17a抗體分子的質(zhì)量進行控制和把關，能夠保證抗體質(zhì)量，以更好地應用于疾病的治療。

技術特征：

1.基于陽離子交換高效液相色譜檢測抗il-17a抗體的方法，其包括：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述流動相的ph值為6.40。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中采用直接稱取配制氫氧化鈉的方法來調(diào)節(jié)所述陽離子交換高效液相色譜的流動相的ph值。

4.?如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述陽離子交換高效液相色譜的流動相包括流動相a和流動相b；

5.?如權(quán)利要求1所述的方法，其中包含所述抗il-17a抗體的樣品濃度為4-15?mg/ml。

6.?如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗il-17a抗體的樣品上樣體積為10?μl。

技術總結(jié)
本申請涉及用于抗白介素17A抗體質(zhì)量檢測的方法。具體地，本申請?zhí)峁┝嘶陉栯x子交換高效液相色譜(CEX?HPLC)檢測抗白介素17A(IL?17A)抗體的方法，以及進一步基于放射性標記物檢測抗白介素17A(IL?17A)抗體的方法。

技術研發(fā)人員：常志遠,戴力,錢軍華,王恒,陳韻竹
受保護的技術使用者：智翔（上海）醫(yī)藥科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/19