本發(fā)明涉及明涉及紡織品檢測技術(shù)領(lǐng)域，進一步涉及山羊絨與細羊毛的分子生物學(xué)鑒別與定量技術(shù)，具體涉及一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法。

背景技術(shù)：

山羊絨(簡稱羊絨)是山羊外表皮層粗毛根部的一些薄薄的細絨，其纖維細、強度大、光澤好、保暖性強，由于產(chǎn)量稀少，因此價格也比較貴，是目前世界紡織原料中品質(zhì)最好、價格最高的原料之一，被人們譽為“纖維寶石”、“軟黃金”。細羊毛是綿羊身上一層類似于羊絨特質(zhì)的很軟的細毛，因此也被稱為“細支羊毛”“拉細羊毛”。綿羊是沒有絨毛的，細羊毛雖然特性與山羊絨極為相似，但并不是真正的羊絨，二者的區(qū)別主要體現(xiàn)在其纖維的長度和細度上面。

山羊絨的纖維比較短，纖維細度比較細，絨毛直徑一般為14～17μm，長度為32～40mm；而細羊毛的纖維細度就比較粗，其纖維長度也會長一些，毛的細度與毛的支數(shù)相關(guān)，常見的有70支，直徑一般為18～20μm，長度約為55～100mm。由此可見，盡管其來源不同、物質(zhì)基礎(chǔ)也存在差異，但在表觀形態(tài)層面極為近似，利用常規(guī)的觀察方法很難區(qū)分，即使在顯微鏡觀測條件下也需要細致比對才能正確判斷。

由于山羊絨紡織性能優(yōu)異、產(chǎn)量稀少、價格較高，在巨大的經(jīng)濟利益驅(qū)使下，山羊絨摻假偽造現(xiàn)象不斷，近年來摻假手段越來越復(fù)雜，所用的摻假原料極易與山羊絨纖維混淆，其中細羊毛就是常見的摻假原料之一。細羊毛織物與山羊絨織物在形態(tài)和手感上都極難分辨，因此對山羊絨與細羊毛的準(zhǔn)確鑒定勢在必行。

目前對山羊絨產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗方法以物理性的顯微觀察法為主，由檢驗人員對纖維的細度、異型纖維率、含雜率、長度、強度、伸長度等進行檢驗(參見《關(guān)于山羊絨國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定意見》)。這類檢測方法需要檢驗人員接觸過大量的山羊絨樣品，積累數(shù)十年的實踐經(jīng)驗，主觀性強。除了最常用的光學(xué)顯微鏡檢測法，國外研究者也嘗試過使用掃描電鏡觀察紡織纖維的表面形態(tài)和精細結(jié)構(gòu)，但這種方法實驗成本高、操作繁瑣，而且無法區(qū)分與山羊絨纖維形、結(jié)構(gòu)非常近似的其他種類纖維，其中就以細羊毛的混淆作用最為突出。另外，研究者也通過分析纖維材料中的脂質(zhì)分子、dna序列差異或者制備特異性識別山羊絨的抗體來鑒別其成分，這類探索性的方法往往受到生產(chǎn)過程中多種化學(xué)處理(比如漂白、染色)的干擾，使得結(jié)果出現(xiàn)偏差。

除了上述定性檢測之外，確定紡織品中山羊絨含量對產(chǎn)品品質(zhì)評價更為重要。為了獲得紡織品中的山羊絨含量，首要的技術(shù)問題是確定一種有效的檢測目標(biāo)，由于紡織品中廣泛存在其他蛋白成分，尤其存在諸如細羊毛等與山羊絨微觀結(jié)構(gòu)較為類似的蛋白，如果檢測目標(biāo)選擇不合適則很容易影響檢測結(jié)果。此外，標(biāo)志物的檢測信號與山羊絨實際含量間的對應(yīng)關(guān)系是否穩(wěn)定、實驗操作難度乃至實驗結(jié)果的重現(xiàn)性等技術(shù)問題都有待突破。盡管現(xiàn)有技術(shù)的研究者做過諸多嘗試，但截至目前尚缺乏一種有效的定量方法。

在獲得了理想標(biāo)志物的基礎(chǔ)上，從待測樣品出發(fā)如何進行檢測也影響著結(jié)果的準(zhǔn)確性。在以測定待測樣品中標(biāo)志物肽段為手段的檢測方法中，蛋白酶解是重要環(huán)節(jié)之一?，F(xiàn)有技術(shù)中，采用限制性內(nèi)切酶對蛋白質(zhì)進行酶解，是采用質(zhì)譜技術(shù)進行蛋白質(zhì)(或多肽)標(biāo)志物鑒定的重要預(yù)處理方法之一。該方法技術(shù)成熟度高、重復(fù)性好。最常用的蛋白酶為胰蛋白酶，其可以特異性的自賴氨酸和精氨酸兩個位點處切斷蛋白質(zhì)氨基酸序列。蛋白質(zhì)構(gòu)成中上述兩種氨基酸的含量及其在蛋白質(zhì)序列中的分布，甚至蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)都會對胰蛋白酶酶解的效果具有直接的影響。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中山羊絨與細羊毛難以區(qū)分的技術(shù)問題。

本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中山羊絨織物與細羊毛織物難以區(qū)分。

本發(fā)明要解決的再一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中難以確定紡織品中山羊絨成分的含量。

本發(fā)明要解決的又一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中山羊絨含量檢測操作較繁瑣。

為實現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno1的肽段含量或seqidno2的肽段含量；

3)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno3的肽段含量或seqidno4的肽段含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟2)相同的檢測方法確定紡織品中山羊絨含量與序列為seqidno1的肽段含量之間對應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟2)所檢測得到的序列為seqidno1的肽段含量確定出待測樣品中山羊絨含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟2)相同的檢測方法確定紡織品中山羊絨含量與序列為seqidno2的肽段含量之間對應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟2)所檢測得到的序列為seqidno2的肽段含量確定出待測樣品中山羊絨含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟3)相同的檢測方法確定紡織品中細羊毛含量與序列為seqidno3的肽段含量之間對應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟3)所檢測得到的序列為seqidno3的肽段含量確定出待測樣品中細羊毛含量。

作為優(yōu)選，還包括步驟4)：利用與步驟3)相同的檢測方法確定紡織品中細羊毛含量與序列為seqidno4的肽段含量之間對應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟3)所檢測得到的序列為seqidno4的肽段含量確定出待測樣品中細羊毛含量。

作為優(yōu)選，步驟1)包括以下步驟：將待測樣品分別通過乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提?。粭壋恋?、取上清液待用。

作為優(yōu)選，步驟2)和步驟3)所述的檢測，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

作為優(yōu)選，所述共同酶解包括以下步驟：將步驟1)得到的總蛋白溶解后加入二硫鍵還原劑孵育，而后加入巰基封閉試劑，最后加入胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶于35～39℃下孵育，將酶解后的蛋白脫鹽、干燥，即得到酶解產(chǎn)物。

作為優(yōu)選，所述二硫鍵還原劑是二硫蘇糖醇或三(2-羧乙基)膦。在此優(yōu)選技術(shù)方案中，二硫蘇糖醇、三(2-羧乙基)膦僅是效果較佳的優(yōu)選例，在本發(fā)明的技術(shù)思路下，其他常規(guī)的二硫鍵還原劑同樣可以用于實現(xiàn)本發(fā)明。

作為優(yōu)選，所述巰基封閉試劑是碘乙酰胺或碘乙酸。在此優(yōu)選技術(shù)方案中，碘乙酰胺、碘乙酸僅是效果較佳的優(yōu)選例，在本發(fā)明的技術(shù)思路下，其他常規(guī)的巰基封閉試劑同樣可以用于實現(xiàn)本發(fā)明。

作為優(yōu)選，步驟2)所述檢測是氨基酸序列測定。

作為優(yōu)選，步驟2)所述生物質(zhì)譜分析是通過色譜-生物質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢測實現(xiàn)的。

本發(fā)明中所述的山羊絨，是指生長在山羊外表皮層，掩在山羊粗毛根部的一層薄薄的細絨，其應(yīng)當(dāng)具有本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的常規(guī)含義；其具體限定范圍可依據(jù)gb18267-2013所規(guī)定的山羊絨定義來確定。本發(fā)明所述的細羊毛，是指綿羊身上一層類似于羊絨特質(zhì)的很軟的細毛，其具體限定為：產(chǎn)自與綿羊體表的、直徑為18～20μm、長度為55～100mm的羊毛。

在以上技術(shù)方案中，序列為seqidno1和seqidno2的肽段被確定為山羊絨的標(biāo)志性肽段，當(dāng)利用液相色譜-生物質(zhì)譜方法檢測發(fā)現(xiàn)待測物總蛋白中具有上述兩肽段之一時，則證明待測物中含有山羊絨成分，反之則不含有山羊絨成分。同時，序列為seqidno3和seqidno4的肽段被確定為細羊毛的標(biāo)志性肽段，當(dāng)利用液相色譜-生物質(zhì)譜方法檢測發(fā)現(xiàn)待測物總蛋白中具有上述兩肽段之一時，則證明待測物中含有細羊毛成分，反之則不含有細羊毛成分。進一步的，可以利用待測物總蛋白中以上標(biāo)志性肽段的含量反應(yīng)其中山羊絨或細羊毛的含量。

其中，確定山羊絨含量與標(biāo)志性肽段含量之間對應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以是通過以下方法實現(xiàn)的：取山羊絨標(biāo)準(zhǔn)品，與其他紡織品混合成為其中含有5％、10％、20％、30％、50％、70％等不同含量山羊絨的待測物，再利用上述已知山羊絨含量的待測物執(zhí)行目標(biāo)肽段含量檢測，從而得到山羊絨含量與目標(biāo)肽段含量之間的對應(yīng)關(guān)系，進而可以繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線以后，可以將某待測物的檢測結(jié)果帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式求得該待測物中的山羊絨含量。在以上標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用中，應(yīng)當(dāng)注意規(guī)避系統(tǒng)性誤差。

本發(fā)明基于實驗手段確定了山羊絨的標(biāo)志性肽段seqidno1、seqidno2以及細羊毛的標(biāo)志性肽段seqidno3、seqidno4，上述標(biāo)志物分別對山羊絨和細羊毛具有良好的特異性，若上述肽段能夠通過生物質(zhì)譜方法檢出則可以相應(yīng)證明山羊絨或細羊毛成分的存在，實驗結(jié)果不會受到其他常規(guī)紡織品成分的影響。同時，由于其穩(wěn)定性良好，不會受常規(guī)織物處理方法(如漂白、染色等)的影響，因此檢測結(jié)果更加穩(wěn)定。

除了定性檢測之外，可以利用上述標(biāo)志性肽段的含量進行定量檢測，肽段含量與山羊絨含量間具有較好的線性關(guān)系，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。本發(fā)明以指向性優(yōu)異的標(biāo)志性肽段為基礎(chǔ)開發(fā)了針對山羊絨與細羊毛的鑒別方法，可用于混紡織物中山羊絨和細羊毛的定性、定量分析，其操作簡便、準(zhǔn)確有效，具有突出的推廣前景。

此外，本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，單獨采用胰蛋白酶對所涉及的毛絨纖維蛋白(主要為角蛋白keratin及角蛋白相關(guān)蛋白keratinassociateprotein，其性質(zhì)較普通蛋白質(zhì)具有較大差異)進行酶解處理，雖可以獲得一定效果，但可供進行纖維種屬鑒別的標(biāo)志性肽段數(shù)量較少，不利于混紡織物中山羊絨和細羊毛鑒定分析方法的開發(fā)。故而本發(fā)明在胰蛋白酶基礎(chǔ)上聯(lián)合使用金黃色葡萄球菌v8蛋白酶進行共同酶解處理。在該酶解條件下，可以特異性的自賴氨酸、精氨酸和谷氨酸三個位點處切斷蛋白質(zhì)氨基酸序列。從而極大的擴展了可供進行纖維種屬鑒別的標(biāo)志性肽段數(shù)量，經(jīng)實驗驗證，該方法所獲得的標(biāo)志性候選肽段數(shù)量可增加2-3倍，經(jīng)反復(fù)驗證，最終選擇四條肽段用于實現(xiàn)本發(fā)明。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；

圖2是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)細羊毛纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；

圖3是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維與標(biāo)準(zhǔn)細羊毛纖維混合物的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；

圖4是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)兔絨纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；

圖5是本發(fā)明實施例2中山羊絨纖維含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖6是本發(fā)明實施例3中代號為s1的樣品的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；

圖7是本發(fā)明實施例3中代號為s2的樣品的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；

在以上附圖1～7中，所有可檢出的標(biāo)準(zhǔn)肽段均標(biāo)注在譜圖中，未標(biāo)注表示該標(biāo)準(zhǔn)肽段未被檢出。

具體實施方式

以下將對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節(jié)，在以下實施例中對屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進行詳細描述。

以下實施例中所使用的近似性語言可用于定量表述，表明在不改變基本功能的情況下可允許數(shù)量有一定的變動。因此，用“大約”、“左右”等語言所修正的數(shù)值不限于該準(zhǔn)確數(shù)值本身。在一些實施例中，“大約”表示允許其修正的數(shù)值在正負(fù)百分之十(10％)的范圍內(nèi)變化，比如，“大約100”表示的可以是90到110之間的任何數(shù)值。此外，在“大約第一數(shù)值到第二數(shù)值”的表述中，大約同時修正第一和第二數(shù)值兩個數(shù)值。在某些情況下，近似性語言可能與測量儀器的精度有關(guān)。

除有定義外，以下實施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。

實施例1(山羊絨、細羊毛組成鑒別方法的特異性實驗)

一、材料

標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)細羊毛纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)兔絨纖維樣品由天津紡織工程研究院提供。

二、方法

分別取山羊絨纖維標(biāo)準(zhǔn)品、細羊毛纖維標(biāo)準(zhǔn)品進行混合。將上述混合樣品及標(biāo)準(zhǔn)山羊絨纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)細羊毛纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)兔絨纖維樣品作為受試物，提取總蛋白質(zhì)并采用生物質(zhì)譜分析技術(shù)檢測羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe、cgpcssyvr和細羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr、shsawsilpr。

(1)自紡織纖維樣品中提取蛋白：

將紡織纖維樣品剪碎，乙醇浸泡，氯仿-甲醇溶液浸泡。濾去浸泡溶液后干燥纖維樣品，加入蛋白提取溶液提取。過濾，濾液離心，取上清液用丙酮沉淀蛋白。

(2)胰蛋白酶與金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解處理：

取蛋白，用8m尿素、100mm三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液，或8m尿素、50-100mm碳酸氫銨溶液溶解。取蛋白溶液30μl加二硫蘇糖醇至終濃度為10-20mm，37℃，孵育4小時。加入碘乙酰胺使終濃度為40mm，避光孵育40分鐘。再加入二硫蘇糖醇使終濃度為10mm。加入50mm碳酸氫銨溶液稀釋至300μl，按蛋白：酶＝1：50(w/w)加入胰蛋白酶；按蛋白：酶＝1：40(w/w)加入金黃色葡萄球菌v8蛋白酶，37℃孵育4小時。再按蛋白：酶＝1:100(w/w)加入胰蛋白酶；按蛋白：酶＝1:40(w/w)，加入金黃色葡萄球菌v8蛋白酶，37℃孵育12小時。加入甲酸至ph＝3，終止酶切。

取c18脫鹽柱進行脫鹽。依次次加入乙腈，乙腈-水-甲酸(70：29.5：0.5，v/v/v)溶液及0.5％甲酸水溶液活化并平衡柱子。加入樣本，流過c18脫鹽柱。加入0.5％甲酸水溶液洗滌柱子，洗掉雜質(zhì)。最后用0.2ml乙腈洗脫，收集洗脫液。用冷凍離心濃縮儀干燥，-80℃保存待分析。

(3)生物質(zhì)譜分析

將上述處理后的紡織纖維蛋白的酶解樣品注入色譜-生物質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢測，利用生物質(zhì)譜分析方法獲得羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe、cgpcssyvr和細羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr、shsawsilpr的檢測信號。

三、結(jié)果

如圖1～4所示，山羊絨成分標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe、cgpcssyvr僅在山羊絨標(biāo)準(zhǔn)品(圖1)及含山羊絨纖維的混合樣品(圖3)中鑒定到，細羊毛纖維以及兔絨纖維的存在對山羊絨的鑒定結(jié)果未產(chǎn)生干擾(圖2，圖4)；細羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr、shsawsilpr僅在細羊毛標(biāo)準(zhǔn)品(圖2)及含細羊毛纖維的混合樣品(圖3)中鑒定到，山羊絨纖維以及兔絨纖維的存在對細羊毛的鑒定結(jié)果未產(chǎn)生干擾(圖1，圖4)。因此本發(fā)明的山羊絨與細羊毛標(biāo)志性肽段檢測方法顯示很好的特異性。

實施例2(建立山羊絨成分標(biāo)志肽段定量標(biāo)準(zhǔn)曲線)

一、材料

山羊絨纖維標(biāo)準(zhǔn)品、細羊毛纖維標(biāo)準(zhǔn)樣品。

二、方法

分別取標(biāo)準(zhǔn)山羊絨樣品按不同比例分別與細羊毛纖維標(biāo)準(zhǔn)樣品混合，獲得山羊絨含量分別為5％、10％、25％、50％、75％、100％的一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品，提取總蛋白質(zhì)，加入等量的牛血清白蛋白(bsa)，以牛血清白蛋白肽段lvneltefak作為內(nèi)標(biāo)，檢測山羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe相對于內(nèi)標(biāo)肽段的質(zhì)譜信號，根據(jù)不同比例混合樣本中該肽段的不同質(zhì)譜信號，建立用于實際樣本定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

三、結(jié)果

如圖5及表1所示，基于對山羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe的分析，山羊絨定量標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為5％～100％，線性相關(guān)系數(shù)(r2)在0.99以上。上述結(jié)果表明，建立的山羊絨定量檢測方法的靈敏度及線性范圍已足夠滿足羊絨紡織行業(yè)的質(zhì)量檢測要求。

表1山羊絨成分標(biāo)志肽段標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

實施例3(供試材料中山羊絨、細羊毛的鑒定分析)

一、材料

市售羊絨衣料s1、s2。經(jīng)纖維細度儀鑒定s1、s2的山羊絨比例約為70～85％

二、方法

分別處理各供試品，提取總蛋白質(zhì)，加入等量的牛血清白蛋白(bsa)，以牛血清白蛋白肽段lvneltefak作為內(nèi)標(biāo)，檢測山羊絨標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe和細羊毛標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr或shsawsilpr相對于內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜信號，根據(jù)鑒定結(jié)果判斷供試品種是否含有山羊絨或細羊毛以及山羊絨的相關(guān)含量。

三、結(jié)果

如圖6～7所示，供試品s1、s2中山羊絨成分標(biāo)志性肽段yavpvvtvsspe均為鑒定陽性，說明供試品s1、s2中均含有山羊絨成分；供試品s1、s2中細羊毛成分標(biāo)志性肽段tcceptvcqstcyqptpcvsspvr和shsawsilpr均為鑒定陰性，說明供試品s1、s2中均不含有細羊毛成分或含量較低，未達到檢測下限。供試品s1、s2中山羊絨檢測結(jié)果列于表2，可見檢測結(jié)果重復(fù)性好且供試品s1、s2山羊絨含量測定與用纖維細度儀鑒定結(jié)果一致。

表2受試紡織衣料樣品中山羊絨含量檢測結(jié)果

實施例4

一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno1的肽段含量；

3)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno3的肽段含量。

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

還包括步驟4)：利用與步驟2)相同的檢測方法確定紡織品中山羊絨含量與序列為seqidno1的肽段含量之間對應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟2)所檢測得到的序列為seqidno1的肽段含量確定出待測樣品中山羊絨含量。

還包括以下步驟5)：利用與步驟3)相同的檢測方法確定紡織品中細羊毛含量與序列為seqidno3的肽段含量之間對應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，而后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線和步驟3)所檢測得到的序列為seqidno3的肽段含量確定出待測樣品中細羊毛含量。

步驟1)包括以下步驟：將待測樣品分別通過乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提?。粭壋恋?、取上清液待用。

步驟2)和步驟3)所述的檢測，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

所述共同酶解包括以下步驟：將步驟1)得到的總蛋白溶解后加入三(2-羧乙基)膦孵育，而后加入碘乙酸，最后加入胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶于35℃下孵育，將酶解后的蛋白脫鹽、干燥，即得到酶解產(chǎn)物。

實施例5

一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno2的肽段含量；

3)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno4的肽段含量。

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

步驟2)和步驟3)所述的檢測，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

所述共同酶解包括以下步驟：將步驟1)得到的總蛋白溶解后加入二硫鍵還原劑孵育，而后加入巰基封閉試劑，最后加入胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶于39℃下孵育，將酶解后的蛋白脫鹽、干燥，即得到酶解產(chǎn)物。

最終檢測結(jié)果顯示，待測樣品總蛋白中序列為seqidno2的肽段處具有明顯的吸收峰，而序列為seqidno4的肽段處沒有吸收峰，從而表明該待測樣品中含有山羊絨成分而不含有細羊毛成分。

實施例6

一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno1的肽段含量；

3)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno4的肽段含量。

在以上技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，滿足以下條件：

步驟1)包括以下步驟：將待測樣品分別通過乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提??；棄沉淀、取上清液待用。

步驟2)和步驟3)所述的檢測，是將步驟1)所述的總蛋白質(zhì)利用胰蛋白酶和金黃色葡萄球菌v8蛋白酶共同酶解，而后利用生物質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物。

最終檢測結(jié)果顯示，待測樣品總蛋白中序列為seqidno1的肽段處、序列為seqidno4的肽段處各自具有明顯的吸收峰，從而表明該待測樣品中同時含有山羊絨成分和細羊毛成分。

實施例7

一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法，包括以下步驟：

1)自待測樣品中提取總蛋白質(zhì)；

2)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno2的肽段含量；

3)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中序列為seqidno3的肽段含量。

最終檢測結(jié)果顯示，待測樣品總蛋白中序列為seqidno2的肽段處、序列為seqidno3的肽段處均沒有吸收峰，從而表明該待測樣品中既不含有山羊絨成分也不含有細羊毛成分。

以上對本發(fā)明的實施例進行了詳細說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

sequencelisting

<110>中國科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所

<120>一種鑒別山羊絨與細羊毛的方法

<160>4

<210>1

<211>12

<212>prt

<213>天然序列（山羊絨標(biāo)志性肽段）

<400>1

yavpvvtvsspe12

<210>2

<211>9

<212>prt

<213>天然序列（山羊絨標(biāo)志性肽段）

<400>2

cgpcssyvr9

<210>3

<211>24

<212>prt

<213>天然序列（細羊毛標(biāo)志性肽段）

<400>3

tcceptvcqstcyqptpcvsspvr24

<210>4

<211>10

<212>prt

<213>天然序列（細羊毛標(biāo)志性肽段）

<400>4

shsawsilpr10