本發(fā)明涉及一種用由血液制備的測定試樣分析感染了瘧原蟲的血液試樣的血液分析裝置及血液分析方法。

背景技術(shù)：

特開（日本專利公開）2006-304774號公報公開了一種感染瘧原蟲的紅細胞（以下稱瘧疾感染紅細胞）的檢測方法。此檢測方法將試劑（該試劑包含相較于RNA而言更強地染色DNA的染色色素且部分溶解紅細胞細胞膜以使染色色素能在內(nèi)部含有瘧原蟲的狀態(tài)下透過）與血液試樣混合，制備測定試樣，將測定試樣導(dǎo)入流式細胞儀的流動室，用光照射流過流動室的測定試樣，檢測出測定試樣發(fā)出的散射光和熒光，以散射光強度和熒光強度為二軸繪制散點圖。

感染了環(huán)狀體這一瘧原蟲形態(tài)的紅細胞中有帶一個瘧原蟲的紅細胞（以下稱“單環(huán)狀體”）和帶兩個以上瘧原蟲的紅細胞（以下稱“多環(huán)狀體”）， 單環(huán)狀體和多環(huán)狀體所包含的DNA量不同。而惡性瘧具有多環(huán)狀體比例更高的傾向。特開2006-304774號公報上記述的檢測方法著眼于此，其在散點圖上分別檢測出熒光強度不同的區(qū)域中出現(xiàn)的單環(huán)狀體和多環(huán)狀體，根據(jù)存在于多環(huán)狀體區(qū)域中的點的數(shù)量（細胞數(shù)量）判斷是否為惡性瘧。

惡性瘧也有不出現(xiàn)多環(huán)狀體的情況。專利文獻1公開的檢測方法利用的是多環(huán)狀體數(shù)量，因此其對這種血液試樣恐難作出正確判斷。因此，人們希望提高判斷血液試樣是否感染惡性瘧原蟲的精確度。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的范圍只由后附權(quán)利要求書所規(guī)定，在任何程度上都不受這一節(jié)發(fā)明內(nèi)容的陳述所限。

本發(fā)明第一方案涉及的血液分析裝置具有試樣制備部件、檢測部件、輸出部件和分析部件。試樣制備部件用使紅細胞收縮的稀釋液、染色核酸的染色色素和血液試樣制備測定試樣。檢測部件檢測出用光照射試樣制備部件制備的測定試樣所獲得的熒光強度和散射光強度。分析部件根據(jù)檢測部件檢測出的熒光強度和散射光強度確定包含感染了環(huán)狀體瘧原蟲的紅細胞的集團，根據(jù)確定的包含感染了環(huán)狀體瘧原蟲的紅細胞的集團中所屬粒子的散射光強度分布，讓輸出部件輸出有關(guān)感染惡性瘧原蟲的信息。

優(yōu)選地，所述分析部件根據(jù)所述熒光強度和所述散射光強度確定包含帶一個環(huán)狀體瘧原蟲的紅細胞的集團，根據(jù)確定的所述包含帶一個環(huán)狀體瘧原蟲的紅細胞的集團中所屬的粒子的散射光強度分布，讓所述輸出部件輸出有關(guān)惡性瘧原蟲的感染的信息。

優(yōu)選地，包含感染了所述環(huán)狀體瘧原蟲的紅細胞的集團是第三粒子群，所述第三粒子群的所述散射光強度比包含白細胞的集團——即第一粒子群小，所述熒光強度比所述第一粒子群小且比包含未感染瘧原蟲的紅細胞的集團——即第二粒子群大。

優(yōu)選地，所述分析部件根據(jù)所述第三粒子群中所屬的粒子的散射光強度的代表值，讓所述輸出部件輸出有關(guān)所述惡性瘧原蟲感染的信息。

優(yōu)選地，所述分析部件根據(jù)所述第三粒子群中所屬的粒子的散射光強度的眾數(shù)，讓所述輸出部件輸出有關(guān)所述惡性瘧原蟲的感染的信息。

優(yōu)選地，當所述代表值小于一定值時，所述分析部件讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣有可能感染了惡性瘧原蟲的信息。

優(yōu)選地，當所述代表值在所述一定值以上時，所述分析部件讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣有可能感染了惡性瘧原蟲以外的其他瘧原蟲的信息。

優(yōu)選地，當所述代表值小于所述一定值時，所述分析部件確定所述散射光強度與所述第三粒子群為相同程度、且所述熒光強度大于所述第三粒子群的第四粒子群，當所述第四粒子群中所屬的粒子數(shù)量在第二一定值以上時，讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣感染了惡性瘧原蟲的可能性很高的信息。

優(yōu)選地，當所述第四粒子群中所屬的粒子數(shù)量小于所述第二一定值時，所述分析部件讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣疑似感染了惡性瘧原蟲的信息。

優(yōu)選地，當所述代表值在所述一定值以上時，所述分析部件確定所述散射光強度大于所述第三粒子群、且所述熒光強度大于所述第三粒子群的第五粒子群，當所述第五粒子群中所屬的粒子數(shù)量在第三一定值以上時，讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣感染了惡性瘧原蟲以外的其他瘧原蟲的可能性很高的信息。

優(yōu)選地，當所述第五粒子群中所屬的粒子數(shù)量小于所述第三一定值時，所述分析部件讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣疑似感染了惡性瘧原蟲以外的其他瘧原蟲的信息。

優(yōu)選地，當所述第五粒子群中所屬的粒子數(shù)量在所述第三一定值以上時，所述分析部件再讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣中可能已出現(xiàn)了滋養(yǎng)體或裂殖體的信息。

優(yōu)選地，所述分析部件確定所述散射光強度大于所述第三粒子群、且所述熒光強度與所述第三粒子群為相同程度的第六粒子群，根據(jù)所述第六粒子群中所屬的粒子數(shù)量，讓所述輸出部件輸出表示所述血液試樣中可能已出現(xiàn)了配子體的信息。

優(yōu)選地，所述分析部件確定所述散射光強度小于所述第一粒子群、且所述熒光強度大于所述第二粒子群的第七粒子群，讓所述輸出部件輸出所述第七粒子群中所屬的粒子數(shù)量。

優(yōu)選地，所述試樣制備部件將與所述稀釋液不同的第二稀釋液與所述血液試樣混合來制備第二測定試樣；所述血液分析裝置還包括用于檢測出所述試樣制備部件制備的所述第二測定試樣中所包含的各粒子的電阻的第二檢測部件；所述分析部件根據(jù)所述第二檢測部件檢測出的電阻，檢測出所述第二測定試樣中所包含的紅細胞，讓所述輸出部件輸出檢測出的紅細胞數(shù)量與所述第七粒子群中所包含的粒子數(shù)量的比率。

優(yōu)選地，供所述試樣制備部件制備的所述測定試樣流動的流動室、向所述流動室中流動的所述測定試樣照射藍紫色激光的光源部件；其中，所述檢測部件檢測出從所述光源部件向所述流動室中流動的所述測定試樣照射藍紫色激光時獲得的所述熒光強度和所述散射光強度。

本發(fā)明第二方案涉及的血液分析方法用光照射由使紅細胞收縮的稀釋液、染色核酸的染色色素和血液試樣制備的測定試樣，檢測出用光照射測定試樣所獲得的熒光強度和散射光強度。此血液分析方法根據(jù)檢測出的熒光強度和散射光強度確定包含感染了環(huán)狀體瘧原蟲的紅細胞的集團。此血液分析方法根據(jù)包含感染了環(huán)狀體瘧原蟲的紅細胞的集團中所屬粒子的散射光強度分布，進行關(guān)于感染惡性瘧原蟲的判斷。

發(fā)明效果

通過本發(fā)明就能精確判斷血液試樣是否感染惡性瘧原蟲。

附圖說明

圖1為實施方式涉及的血液分析裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為分析部件的結(jié)構(gòu)框圖；

圖3為實施方式涉及的血液分析裝置的作業(yè)流程圖；

圖4為測定試樣制備處理的步驟流程圖；

圖5為測定數(shù)據(jù)分析處理的步驟流程圖；

圖6為在前向散射光強度為縱軸、熒光強度為橫軸的散點圖中白細胞、血小板凝集、正常紅細胞及瘧疾感染紅細胞的各粒子群的出現(xiàn)區(qū)域的說明圖；

圖7為瘧疾種類判斷處理的步驟流程圖；

圖8為感染了惡性瘧原蟲的血液試樣散點圖的一例示圖；

圖9為在前向散射光強度為縱軸、熒光強度為橫軸的散點圖中白細胞、血小板凝集、正常紅細胞、單環(huán)狀體、多環(huán)狀體、滋養(yǎng)體(trophozoite)·裂殖體(schizont)、以及配子體(gametocyte)的各粒子群出現(xiàn)區(qū)域的說明圖；

圖10為感染了間日瘧原蟲（Plasmodium vivax）的血液試樣散點圖的一例示圖；

圖11為惡性瘧原蟲的單環(huán)狀體的前向散射光強度和間日瘧原蟲的單環(huán)狀體的前向散射光強度的比較圖；

圖12為感染了惡性瘧原蟲的血液試樣散點圖的另一例示圖；

圖13為感染了間日瘧原蟲的血液試樣散點圖的另一例示圖；

圖14為感染了惡性瘧原蟲的血液試樣散點圖的又一例示圖；

圖15為分析結(jié)果的輸出例示圖。

優(yōu)選實施方式

下面將參照附圖說明本發(fā)明的優(yōu)選實施方式。

本實施方式中說明根據(jù)光照由血液試樣和試劑制備的測定試樣時產(chǎn)生的熒光強度和前向散射光強度，確定包含瘧疾感染紅細胞的集團,判斷感染了紅細胞的瘧原蟲是否為惡性瘧原蟲的血液分析裝置。

（血液分析裝置的結(jié)構(gòu)）

下面參照圖1就血液分析裝置的結(jié)構(gòu)進行說明。血液分析裝置1具有測定部件2、分析部件3。測定部件2取入血液試樣，用血液試樣制備測定試樣，對測定試樣進行光學(xué)測定。分析部件3對測定部件2通過測定獲得的測定數(shù)據(jù)進行處理，輸出血液試樣的分析結(jié)果。

測定部件2具有吸移部件4、試樣制備部件5、光學(xué)檢測部件6、第二檢測部件7、信號處理電路81、微型計算機82和通信接口83。

吸移部件4有無圖示的吸管，用吸管吸移試管中所裝有的血液試樣。

試樣制備部件5有反應(yīng)槽54且其連接試劑容器51、52、53。試劑容器52裝使紅細胞收縮的第一稀釋液。試劑容器53裝含有染色核酸的染色色素的染色用試劑。試劑容器51裝第二稀釋液。吸移部件4向反應(yīng)槽54上方移動吸管，將吸移的血液試樣排出到反應(yīng)槽54。血液試樣、第一稀釋液和染色用試劑在反應(yīng)槽54混合，制備測定試樣。測定試樣用于測定白細胞和瘧疾感染紅細胞。吸移部件4所吸移的血液試樣與第二稀釋液在反應(yīng)槽54混合，制備第二測定試樣。第二測定試樣用于紅細胞的測定。

下面就試劑容器52所裝的第一稀釋液進行說明。第一稀釋液包含溶血能力不同的兩種表面活性劑。具體而言，第一稀釋液包含：陽離子表面活性劑——即2.95mM的十二烷基三甲基氯化銨（Lauryltrimethylammonium chloride）、以及陽離子表面活性劑——即1.11mM的十八烷基三甲基氯化銨（stearyltrimethylammonium chloride）。十八烷基三甲基氯化銨比十二烷基三甲基氯化銨的溶血能力更強。只要是溶血能力不同的兩種表面活性劑即可，不限于上述組合。此外，第一稀釋液還包含非離子表面活性劑——即2.90mM的PBC-44、20mM的ADA、適量的NaCl，以及1L的純水。ADA的pH為6.1。此外，第一稀釋液的pH為5.0以上7.0以下。為了使血細胞收縮，第一稀釋液的滲透壓最好為200mOsm/kg?H2O以上。具體而言，第一稀釋液的滲透壓為200mOsm/kg?H2O以上，300mOsm/kg?H2O以下。

第二稀釋液與使紅細胞收縮的第一稀釋液不同，其是運用鞘流DC檢測法測定紅細胞用的稀釋液。此外，第二稀釋液在用流式細胞術(shù)測定血細胞時也作為鞘液使用。第一稀釋液不作為鞘液使用。

下面就試劑容器53中裝的染色用試劑進行說明。染色用試劑包含染色色素（Hoechst34580）。染色用試劑中染色色素的濃度最好為0.3μM以上0.6μM以下，具體而言，為0.45μM。此外，染色色素在測定試樣中的濃度最好為0.15μM以上1.0μM以下。Hoechst34580的化學(xué)式如下：

[化1]

也可以不分第一稀釋液與染色用試劑，將含有使紅細胞收縮的第一稀釋液和染色色素的一種試劑與血液試樣混合，制備測定試樣。

在通過流式細胞法測定白細胞和瘧疾感染紅細胞時使用光學(xué)檢測部件6。光學(xué)檢測部件6具有流動室61、光源部件62、檢測部件63和64。向流動室61供應(yīng)試劑容器51所裝的第二稀釋液和試樣制備部件5制備的測定試樣。流動室61形成用第二稀釋液——即鞘液包裹測定試樣而成的流體。

光源部件62為半導(dǎo)體激光光源，其向流動室61照射波長405nm的藍紫色激光。

檢測部件63和64會檢測出光照射到流動室61中的測定試樣流時測定試樣發(fā)出的光。檢測部件63和64可以采用雪崩光電二極管。在以下說明中，將連接光源部件62與流動室61的方向稱為“X方向”，與X方向垂直相交的方向稱為Y方向。檢測部件63通過配置在從流動室61向Y方向一側(cè)的鏡子能夠檢測出測定試樣發(fā)出的熒光。檢測部件64配置在從流動室61向X方向一側(cè)。更具體而言，檢測部件64配置在光源部件62相反一側(cè)，中間隔著流動室61。檢測部件64能夠檢測出測定試樣發(fā)出的前向散射光。

此外，也可以檢測出側(cè)向散射光、后向散射光等其他散射光，以其代替前向散射光。

檢測部件63和64分別輸出表示受光強度的模擬信號。以下稱檢測部件63輸出的模擬信號為“熒光信號”，稱檢測部件64輸出的模擬信號為“前向散射光信號”。

在通過鞘流DC檢測法測定紅細胞時使用第二檢測部件7。由試樣制備部件5向第二檢測部件7供應(yīng)第二測定試樣。第二檢測部件7具有無圖示的鞘流室，向流經(jīng)鞘流室的第二測定試樣施加電壓。血細胞通過鞘流室時，由于血細胞的電阻，電壓會發(fā)生變化。第二檢測部件7捕捉電壓的變化，檢測出電阻，以此檢測出血細胞。第二檢測部件7輸出表示電壓的模擬信號。

信號處理電路81對檢測部件63和64以及第二檢測部件7輸出的模擬信號進行信號處理。信號處理電路81提取熒光信號和前向散射光信號中所包含的脈沖的峰值作為特征參數(shù)。以下稱熒光信號的峰值為“熒光強度”，稱前向散射光信號的峰值為“前向散射光強度”。信號處理電路81提取第二檢測部件7的輸出信號的峰值作為紅細胞的檢測數(shù)據(jù)。

微型計算機82控制吸移部件4、試樣制備部件5、光學(xué)檢測部件6、第二檢測部件7、信號處理電路81和通信接口83。

通信接口83通過通信電纜連接到分析部件3。測定部件2通過通信接口83與分析部件3進行數(shù)據(jù)通信。如進行血液試樣測定，則通信接口83向分析部件3傳送包括各特征參數(shù)在內(nèi)的測定數(shù)據(jù)。

下面參照圖2就分析部件3的結(jié)構(gòu)進行說明。分析部件3具有主機300、輸入部件309和輸出部件310。主機300有CPU（Central Processing Unit，中央處理器）301、ROM（Read Only Memory，只讀存儲器）302、以及RAM（Random Access Memory，隨機存取存儲器）303、硬盤304、讀取裝置305、輸入輸出接口306、圖像輸出接口307和通信接口308。在本實施方式中，輸出部件310使用的是顯示圖像的顯示器。但輸出部件310也可以使用通過印刷向紙張等進行輸出的打印機。

CPU301執(zhí)行存儲在ROM302的計算機程序和下載到RAM303中的計算機程序。RAM303用于讀取存在ROM302和硬盤304的計算機程序。當執(zhí)行計算機程序時，RAM303還作為CPU301的工作空間使用。

硬盤304中安裝有分析測定部件2發(fā)出的測定數(shù)據(jù)并輸出分析結(jié)果的計算機程序320。

讀取裝置305是軟盤驅(qū)動器、CD-ROM驅(qū)動器或DVD-ROM驅(qū)動器等，其能夠讀取存儲于便攜式存儲介質(zhì)321的計算機程序或數(shù)據(jù)。此外，便攜式存儲介質(zhì)321中存有使計算機作為分析部件3發(fā)揮功能的計算機程序320。從便攜式存儲介質(zhì)321讀取的計算機程序320安裝入硬盤304。

輸入部件309連接著輸入輸出接口306。輸出部件310連接著圖像輸出接口307。通信接口308連接著測定部件2的通信接口83。

（血液分析裝置的作業(yè)）

參照圖3就血液分析裝置1的作業(yè)進行說明。

首先，分析部件3的CPU301通過輸入部件309接受來自用戶的實施測定的指示（步驟S101）。收到實施測定的指示后，CPU301向測定部件2傳送用于指示開始測定的指示數(shù)據(jù)（步驟S102），測定部件2接收指示數(shù)據(jù)（步驟S103）。微型計算機82實施測定試樣制備處理（步驟S104），實施第一測定處理（步驟S105），實施第二測定處理（步驟S106）。

下面參照圖4說明測定試樣制備處理。微型計算機82控制吸移部件4，向反應(yīng)槽54供應(yīng)一定量比如17μL血液試樣（步驟S201）。然后，微型計算機82控制試樣制備部件5，從試劑容器52向反應(yīng)槽54供應(yīng)一定量比如1mL第一稀釋液，從試劑容器53向反應(yīng)槽54供應(yīng)一定量比如20μL染色用試劑（步驟S202）。

反應(yīng)槽54由加熱器加熱到一定溫度。在已加熱的狀態(tài)下攪拌反應(yīng)槽54內(nèi)的混合物（步驟S203）。通過步驟S201~S203的作業(yè)在反應(yīng)槽54制備測定試樣。微型計算機82控制試樣制備部件5，將測定試樣從反應(yīng)槽54導(dǎo)出到光學(xué)檢測部件6（步驟S204）。

微型計算機82控制吸移部件4，使其從試管吸移一定量血液試樣，向反應(yīng)槽54供應(yīng)一定量，比如4μL血液試樣（步驟S205）。然后，微型計算機82控制試樣制備部件5，從試劑容器51向反應(yīng)槽54供應(yīng)一定量，比如2000μL的第二稀釋液（步驟S206）。

接著，試樣制備部件5攪拌反應(yīng)槽54內(nèi)的混合物（步驟S207）。通過步驟S205~S207的作業(yè)在反應(yīng)槽54制備第二測定試樣。微型計算機82控制試樣制備部件5，將第二測定試樣從反應(yīng)槽54導(dǎo)出到第二檢測部件7（步驟S208）。

步驟S208的處理結(jié)束后，微型計算機82將處理返回到主程序。

再次參照圖3。在第一測定處理中，由光學(xué)檢測部件6進行測定試樣的測定。試樣制備部件5將測定試樣與鞘液一起供應(yīng)到流動室61。光源部件62向流動室61中的測定試樣流照射光。

測定試樣流過流動室61，則白細胞、血小板凝集及紅細胞依次通過流動室61。在此，所謂“血小板凝集”指兩個以上的血小板凝集而成的物質(zhì)。當紅細胞中包含瘧疾感染紅細胞時，瘧疾感染紅細胞內(nèi)部有瘧原蟲進入。在第一稀釋液的作用下，測定試樣中的紅細胞縮小。瘧疾感染紅細胞在內(nèi)部含有瘧原蟲的狀態(tài)下被第一稀釋液縮小。瘧原蟲中有核存在，所以被染色用試劑染色。白細胞也有核，因此也被染色試劑染色。未感染瘧原蟲的紅細胞（以下稱“正常紅細胞”）及血小板凝集中不存在核，故幾乎不被染色用試劑染色。

每當光照射到血細胞時，血細胞（白細胞、血小板凝集及紅細胞）就會發(fā)出熒光和前向散射光。血細胞發(fā)出的熒光被檢測部件63檢測出來。血細胞發(fā)出的前向散射光被檢測部件64檢測出來。

檢測部件63和64分別輸出與受光水平相應(yīng)的電信號作為熒光信號和前向散射光信號。信號處理電路81從熒光信號中提取熒光強度，從前向散射光信號提取前向散射光強度。

在第二測定處理中，由第二檢測部件7進行第二測定試樣的測定。第二檢測部件7向流過鞘流室的第二測定試樣施加電壓，向信號處理電路81輸出表示電壓的模擬信號。每當紅細胞通過鞘流室，與其電阻相應(yīng)地，電壓會變化。信號處理電路81通過信號處理捕捉電阻變化，檢測出紅細胞。以此，信號處理電路81將第二檢測部件7的輸出信號轉(zhuǎn)換為紅細胞的檢測數(shù)據(jù)。

第二測定處理后，微型計算機82向分析部件3傳送包含各特征參數(shù)在內(nèi)的測定數(shù)據(jù)（步驟S107），結(jié)束處理。

分析部件3接收測定數(shù)據(jù)（步驟S108）。然后，CPU301實施測定數(shù)據(jù)分析處理，生成血液試樣的分析結(jié)果，將分析結(jié)果存入硬盤304（步驟S109）。

下面參照圖5，說明測定數(shù)據(jù)分析處理。測定數(shù)據(jù)分析處理開始后，首先CPU301用測定數(shù)據(jù)中所包含的紅細胞的檢測數(shù)據(jù)計數(shù)紅細胞（步驟S301）。

也可以用測定數(shù)據(jù)中所包含的前向散射光強度計數(shù)紅細胞，以此取代鞘流DC檢測法。紅細胞被第一稀釋液縮小。前向散射光強度是反映血細胞大小的特征參數(shù)，縮小后的紅細胞的前向散射光強度取特定范圍的值。因此，也可以將具有紅細胞出現(xiàn)的特定范圍內(nèi)的前向散射光強度的粒子作為紅細胞，對紅細胞進行計數(shù)。也可以用前向散射光脈沖寬度、脈沖面積取代前向散射光強度來檢測出紅細胞。還可以檢測出側(cè)向散射光，用側(cè)向散射光的脈沖峰值、脈沖寬度或脈沖面積來檢測出紅細胞，以此取代前向散射光。

然后，CPU301根據(jù)測定數(shù)據(jù)中所包含的熒光強度及前向散射光強度分類并分別計數(shù)白細胞、血小板凝集、正常紅細胞和瘧疾感染紅細胞（步驟S302）。另外，在此處理中，要將正常紅細胞從分析對象粒子排除，故熒光強度在一定閾值以下的粒子被排除在外。大多數(shù)正常紅細胞都不能被染色色素充分染色，所以其不發(fā)熒光或只發(fā)出微弱的熒光。因此，從分析對象中排除熒光強度在一定閾值以下的粒子，以此就能夠排除幾乎所有正常紅細胞。但是，網(wǎng)織紅細胞等發(fā)出少量熒光的正常紅細胞不會被排除。在步驟S302，將上述未被排除的正常紅細胞與其他血細胞區(qū)分開并檢測出來。

下面參照圖6，就白細胞、血小板凝集、正常紅細胞和瘧疾感染紅細胞的分類進行說明。在圖6的散點圖中，縱軸表示前向散射光強度，橫軸表示熒光強度。

包含白細胞的集團大致出現(xiàn)在前向散射光強度和熒光強度大的區(qū)域401。包含血小板凝集的集團大致出現(xiàn)在前向散射光強度與含白細胞的集團的區(qū)域401為相同程度、且熒光強度小于區(qū)域401的區(qū)域402。正常紅細胞被第一稀釋液強烈縮小。且如上所述，熒光強度在一定閾值以下的正常紅細胞已從分析對象排除，但未被排除的正常紅細胞也未被染色用試劑充分染色，其只發(fā)出微弱熒光。因此，包含被第一稀釋液縮小的正常紅細胞的集團作為正常紅細胞大致出現(xiàn)在前向散射光強度比含白細胞的集團的區(qū)域401小、且熒光強度小于區(qū)域401的區(qū)域403。

瘧疾感染紅細胞被第一稀釋液強烈縮小，而其內(nèi)部含有有核的瘧原蟲，故其被染色用試劑染色。因此，包含瘧疾感染紅細胞的集團大致出現(xiàn)在前向散射光強度小于含白細胞的集團的區(qū)域401，且熒光強度比含正常紅細胞的集團的區(qū)域403大的區(qū)域404。

在步驟S302的處理中，CPU301組合測定數(shù)據(jù)中前向散射光強度的粒徑分布和熒光強度的粒徑分布，確定含白細胞的集團、含血小板凝集的集團、含正常紅細胞的集團、以及含瘧疾感染紅細胞的集團。更具體而言，CPU301確定前向散射光強度比含白細胞的集團——即第一粒子群小、且熒光強度比含正常紅細胞的集團——即第二粒子群大的第七粒子群。此第七粒子群為含瘧疾感染紅細胞的集團。另外，在此所謂前向散射光強度或熒光強度比特定粒子群小的粒子群指在至少一部分中前向散射光強度或熒光強度比特定粒子群小的粒子群。所謂前向散射光強度或熒光強度比特定粒子群大的粒子群指在至少一部分中前向散射光強度或熒光強度比特定粒子群大的粒子群。所謂前向散射光強度或熒光強度與特定粒子群為相同程度的粒子群指在至少一部分中前向散射光強度或熒光強度與特定粒子群為相同程度的粒子群。

再參照圖5。CPU301實施瘧疾種類判斷處理（步驟S303）。

下面參照圖7，就瘧疾種類判斷處理進行說明。瘧疾種類判斷處理用于判斷血液試樣是否疑似感染惡性瘧原蟲，是否疑似感染惡性瘧以外的種類（以下稱“其他種類”）的瘧原蟲。

CPU301判斷瘧疾感染紅細胞的數(shù)量是否在一定值T1以上（步驟S401）。在此，關(guān)于T1這一數(shù)值，若瘧疾感染紅細胞的數(shù)量不到T1，則考慮到噪聲因素可以判斷為未出現(xiàn)瘧疾感染紅細胞。當瘧疾感染紅細胞的數(shù)量不到T1時（步驟S401為否），則可以判斷血液試樣未感染瘧原蟲。此時，CPU301結(jié)束瘧疾種類判斷處理，返回測定數(shù)據(jù)分析處理。

當瘧疾感染紅細胞數(shù)量在T1以上時（步驟S401為是），則可以判斷血液試樣可能已感染瘧原蟲。此時，CPU301將處理移至步驟S402。

瘧原蟲的形態(tài)之一的裂殖子(merozoite)入侵紅細胞，由此開始瘧原蟲在紅細胞內(nèi)的生命周期。在紅細胞內(nèi)的生命周期中，瘧原蟲的形態(tài)按照環(huán)狀體、滋養(yǎng)體、裂殖體的順序變化。裂殖體分裂成數(shù)個裂殖子，此時破壞紅細胞。由此，眾多的裂殖子釋出到血液中。裂殖子入侵下一個紅細胞，再次開始紅細胞內(nèi)的生命周期。如此循環(huán)往復(fù)，瘧原蟲不斷增殖。

釋出到血液中的裂殖子的一部分分化成雌雄異體的配子體。當感染者被蚊子吸血時，配子體入侵到蚊子體內(nèi)，蚊子便攜帶了瘧原蟲。

在步驟S402，CPU301分別將瘧疾種類判斷標記、以及階段標記設(shè)定為初始值0，其中，瘧疾種類判斷標記涉及血液試樣可能感染的瘧原蟲的種類，所述階段標記涉及血液試樣可能感染的瘧原蟲的階段。瘧疾種類判斷標記和階段標記設(shè)置在RAM303的特定區(qū)域。

瘧疾種類判斷標記設(shè)為0時，表示血液試樣感染瘧原蟲的可能性很小。當瘧疾種類判斷標記設(shè)為1時，表示血液試樣疑似感染了惡性瘧原蟲。當瘧疾種類標記設(shè)為2時，表示血液試樣感染了惡性瘧原蟲的可能性很大。另外，疑似感染了惡性瘧原蟲是指有可能感染了惡性瘧原蟲，但可能性說不上很大。

瘧疾種類判斷標記設(shè)為3時，表示血液試樣疑似感染了其他種類的瘧原蟲。瘧疾種類判斷標記設(shè)為4時，表示血液試樣很可能感染了其他種類的瘧原蟲。

當階段標記設(shè)為0時，表示出現(xiàn)了滋養(yǎng)體和裂殖體以及配子體的可能性很小。當階段標記設(shè)為1時，表示血液試樣中很可能出現(xiàn)了滋養(yǎng)體或裂殖體。當階段標記設(shè)為2時，表示很可能出現(xiàn)了配子體。

接著，CPU301確定包含單環(huán)狀體的集團——即第三粒子群、包含多環(huán)狀體的集團——即第四粒子群、包含內(nèi)部包含滋養(yǎng)體或裂殖體的紅細胞（以下稱“滋養(yǎng)體·裂殖體”）的集團——即第五粒子群、以及包含配子體的集團——即第六粒子群，并對各粒子群中所屬的粒子進行計數(shù)（步驟S403）。

下面對步驟S403的處理進行詳述。圖8顯示了包含單環(huán)狀體的集團和包含多環(huán)狀體的集團出現(xiàn)的散點圖的示例。如圖8所示，包含單環(huán)狀體的集團的前向散射光強度比包含白細胞的集團小，且熒光強度比包含白細胞的集團小。此外，包含單環(huán)狀體的集團的熒光強度比包含正常紅細胞的集團大。也就是說，包含單環(huán)狀體的集團大致出現(xiàn)在圖9的區(qū)域411。CPU301將這種包含單環(huán)狀體的集團確定為第三粒子群。

在圖8中，包含正常紅細胞的集團出現(xiàn)在比包含單環(huán)狀體的集團和包含多環(huán)狀體的集團前向散射光強度大的區(qū)域。這是因為熒光強度在一定閾值以下的粒子已經(jīng)被排除在分析對象之外。如果熒光強度在一定閾值以下的粒子沒有被排除在分析對象之外，則這些粒子（正常紅細胞）將出現(xiàn)在熒光強度和前向散射光強度小的區(qū)域。即，正常紅細胞將出現(xiàn)在前向散射光強度與包含單環(huán)狀體的集團和包含多環(huán)狀體的集團為相同程度、且熒光強度比包含單環(huán)狀體的集團小的區(qū)域。

此外，如圖8所示，包含多環(huán)狀體的集團的前向散射光強度與包含單環(huán)狀體的集團為相同程度、且其熒光強度比包含單環(huán)狀體的集團大。即，包含多環(huán)狀體的集團大致出現(xiàn)在圖9中的區(qū)域412。CPU301檢測出這種粒子群時，就將其確定為第四粒子群。

圖8所示散點圖中并未出現(xiàn)滋養(yǎng)體·裂殖體。如果滋養(yǎng)體·裂殖體出現(xiàn)，將出現(xiàn)在圖中虛線所示區(qū)域。即，包含滋養(yǎng)體·裂殖體的集團的前向散射光強度比包含單環(huán)狀體的集團大，且熒光強度比包含單環(huán)狀體的集團大。也就是說，包含滋養(yǎng)體·裂殖體的集團大致出現(xiàn)在圖9的區(qū)域413。CPU301檢測出這種粒子群時，將其確定為第五粒子群。

圖10顯示了包含配子體的集團出現(xiàn)的散點圖的示例。如圖10所示，包含配子體的集團的前向散射光強度比包含單環(huán)狀體的集團大，且熒光強度與包含單環(huán)狀體的集團為相同程度。即，包含配子體的集團大致出現(xiàn)在圖9的區(qū)域414。CPU301檢測出這種粒子群時，將其確定為第六粒子群。

再次參照圖7。CPU301判斷第六粒子群中所屬的粒子數(shù)量——即配子體的數(shù)量是否在一定值T2以上（步驟S404）。在此，關(guān)于T2這一數(shù)值，若第六粒子群中所屬的粒子數(shù)量小于T2，則考慮到噪聲因素可以判斷為未出現(xiàn)配子體。當?shù)诹Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ訑?shù)量在T2以上時（步驟S404為是），可以判斷配子體出現(xiàn)在血液試樣中。此時，CPU301將階段標記設(shè)為2（步驟S405），將處理移至步驟S406。

當?shù)诹Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ訑?shù)量小于T2時（步驟S404為否），可以判斷配子體未出現(xiàn)在血液試樣中。此時，CPU301將處理移至步驟S406。

在此，步驟S404的配子體出現(xiàn)與否的判斷處理也可以省略。

CPU301判斷第三粒子群中所屬的粒子數(shù)量——即單環(huán)狀體的數(shù)量是否在一定值T3以上（步驟S406）。在此，關(guān)于T3這一數(shù)值，若第三粒子群中所屬的粒子數(shù)量小于T3，則考慮到噪聲因素可以判斷未出現(xiàn)單環(huán)狀體。當?shù)谌Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ訑?shù)量小于T3時（步驟S406為否），CPU301將處理移至步驟S411。

當?shù)谌Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ訑?shù)量在T3以上時（步驟S406為是），CPU301判斷第三粒子群中所屬的粒子的前向散射光強度的代表值是否在一定值T4以上（步驟S407）。

另外，也可以在不實施步驟S406的單環(huán)狀體出現(xiàn)與否的判斷處理的情況下實施步驟S407。

惡性瘧原蟲的單環(huán)狀體的大小比其他種類的瘧原蟲的單環(huán)狀體的大小要小。此外，前向散射光強度反映細胞的大小。因此，如圖11所示，包含惡性瘧原蟲的單環(huán)狀體的集團比包含其他種類的瘧原蟲的單環(huán)狀體的集團的前向散射光強度在整體上小。此外，代表值表示數(shù)據(jù)群的特征。因此，包含惡性瘧原蟲單環(huán)狀體的集團的前向散射光強度的代表值M1小于包含其他種類瘧原蟲的單環(huán)狀體的集團的前向散射光強度的代表值M2。在此，T4是用于識別惡性瘧原蟲與其他種類瘧原蟲的數(shù)值。如上所述，判斷第三粒子群中所屬的粒子的前向散射光強度的代表值小于T4還是在T4以上，以此就可以判斷疑似感染了血液試樣的瘧原蟲是惡性瘧原蟲還是其他種類的瘧原蟲。如此，血液分析裝置1能夠在不受單環(huán)狀體和多環(huán)狀體的數(shù)量等影響的情況下精確判斷是否感染了惡性瘧原蟲。

代表值可以采用眾數(shù)、平均值、中值和重心值等。其中，眾數(shù)是在第三粒子群中所屬的粒子中最多的前向散射光強度的值，其反映有關(guān)第三粒子群中所屬的粒子大小的整體傾向。因此，代表值最好采用眾數(shù)。

此外，也可以采用側(cè)向散射光強度（側(cè)向散射光峰值）或后向散射光強度（后向散射光峰值）等其他散射光強度的代表值取代前向散射光強度的代表值。

在步驟S407，也可以取代包含單環(huán)狀體的集團——即第三粒子群，而根據(jù)包含多環(huán)狀體的集團——即第四粒子群中所屬的粒子的前向散射光強度的代表值判斷疑似感染的瘧原蟲是否為惡性瘧原蟲。此外，也可以確定單環(huán)狀體和多環(huán)狀體組合而成的環(huán)狀體整體的粒子群，根據(jù)此粒子群中所屬的粒子的前向散射光強度的代表值判斷疑似感染的瘧原蟲是否為惡性瘧原蟲。

再次參照圖7。當?shù)谌Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ拥那跋蛏⑸涔鈴姸鹊拇碇敌∮赥4時（步驟S407為否），則有可能感染了惡性瘧原蟲。此時，CPU301判斷第四粒子群中所屬的粒子數(shù)量是否在一定值T5以上（步驟S408）。在此，關(guān)于T5這一數(shù)值，若第四粒子群中所屬的粒子數(shù)量小于T5，則考慮到噪聲因素可以判斷未出現(xiàn)多環(huán)狀體。

惡性瘧原蟲的感染者末梢血中大多會出現(xiàn)多環(huán)狀體，而其他種類的瘧原蟲感染者末梢血中幾乎不出現(xiàn)多環(huán)狀體。當?shù)谒牧Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ訑?shù)量小于T5時（步驟S408為否），則可以判斷血液試樣中未出現(xiàn)多環(huán)狀體。此時，不能說血液試樣感染了惡性瘧原蟲的可能性很高。另一方面，在步驟S407中，判斷血液試樣有可能感染了惡性瘧原蟲。因此，CPU301將瘧疾種類判斷標記設(shè)為1（步驟S409），結(jié)束瘧疾種類判斷處理，返回測定數(shù)據(jù)分析處理。

即使是感染了惡性瘧原蟲的血液試樣，有時也會不出現(xiàn)多環(huán)狀體（參照圖12）。關(guān)于這種血液試樣，也可以通過上述瘧疾種類判斷處理來判斷血液試樣疑似感染了惡性瘧原蟲。

再次參照圖7。第四粒子群中所屬的粒子數(shù)量在T5以上時（步驟S408為是），可以判斷多環(huán)狀體可能出現(xiàn)在了血液試樣中。此時，可以判斷血液試樣感染了惡性瘧原蟲的可能性很高。于是，CPU301將瘧疾種類判斷標記設(shè)為2（步驟S410），結(jié)束瘧疾種類判斷處理，返回測定數(shù)據(jù)分析處理。

在此，也可以省略步驟S408的多環(huán)狀體出現(xiàn)與否的判斷處理。此時，如果在步驟S407中第三粒子群中所屬的粒子的前向散射光強度的代表值小于T4，將瘧疾種類判斷標記設(shè)為1即可。

當?shù)谌Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ拥那跋蛏⑸涔鈴姸鹊拇碇翟赥4以上時（步驟S407為是），則有可能感染了其他種類的瘧原蟲。此時，CPU301判斷第五粒子群中所屬的粒子數(shù)量是否在一定值T6以上（步驟S411）。在此，T6是在考慮到噪聲因素的情況下判斷未出現(xiàn)滋養(yǎng)體·裂殖體的基準值。

惡性瘧原蟲的感染者末梢血中幾乎不出現(xiàn)滋養(yǎng)體·裂殖體，其他種類的瘧原蟲的感染者末梢血中多出現(xiàn)滋養(yǎng)體·裂殖體。當?shù)谖辶Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ訑?shù)量小于T6時（步驟S411為否），可以判斷滋養(yǎng)體·裂殖體未出現(xiàn)在血液試樣中。此時，不能說血液試樣感染了其他種類的瘧原蟲的可能性很高。另一方面，在步驟S407已判斷血液試樣疑似感染了其他種類的瘧原蟲。因此，CPU301將瘧疾種類判斷標記設(shè)為3（步驟S412），結(jié)束瘧疾種類判斷處理，返回測定數(shù)據(jù)分析處理。

感染了其他種類的瘧原蟲血液試樣有時也不出現(xiàn)滋養(yǎng)體·裂殖體（參照圖13）。關(guān)于這種血液試樣，通過上述瘧疾種類判斷處理就能夠判斷血液試樣疑似感染了其他種類的瘧原蟲。

再次參照圖7。當?shù)谖辶Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ訑?shù)量在T6以上時（步驟S411為是），可以判斷滋養(yǎng)體·裂殖體出現(xiàn)在血液試樣中 。此時，可以判斷血液試樣感染了其他種類的瘧原蟲的可能性很高。因此，CPU301將瘧疾種類判斷標記設(shè)為4，階段標記設(shè)為1（步驟S413），結(jié)束瘧疾種類判斷處理，返回測定數(shù)據(jù)分析處理。

感染了惡性瘧原蟲的血液試樣有時也會出現(xiàn)滋養(yǎng)體·裂殖體（參照圖14）。在上述瘧疾種類判斷處理中，在判斷是否出現(xiàn)了滋養(yǎng)體·裂殖體的步驟S409之前，先實施步驟S406的處理，即判斷疑似感染的瘧原蟲是惡性瘧原蟲還是其他種類的瘧原蟲。因此，關(guān)于上述血液試樣，也可以判斷疑似感染了惡性瘧原蟲。另外，也可以在實施步驟S409之后再實施步驟S406。

此外，也可以省略步驟S411的滋養(yǎng)體·裂殖體出現(xiàn)與否的判斷處理。此時，如果在步驟S406中第三粒子群中所屬的粒子數(shù)量小于T3或在步驟S407中第三粒子群中所屬的粒子的前向散射光強度的代表值在T4以上，將瘧疾種類判斷標記設(shè)為3即可。

再次參照圖5。上述瘧疾種類判斷處理結(jié)束后，CPU301算出紅細胞數(shù)量與瘧疾感染紅細胞數(shù)量的比率（以下稱“瘧疾感染紅細胞比率”）（步驟S304）。至此，CPU301結(jié)束測定數(shù)據(jù)分析處理，將處理返回主程序。

再次參照圖3。上述測定數(shù)據(jù)分析處理結(jié)束后，CPU301向輸出部件310輸出分析結(jié)果（步驟S110），結(jié)束處理。分析結(jié)果中包括紅細胞數(shù)量、白細胞數(shù)量、瘧疾感染紅細胞數(shù)量和瘧疾感染紅細胞比率的各測定結(jié)果、以及供診斷參考用的參考信息。關(guān)于瘧疾種類判斷處理，根據(jù)第三粒子群中所屬的粒子的前向散射光強度的代表值在T4以上還是小于T4，輸出有關(guān)惡性瘧感染的信息作為參考信息。即，關(guān)于瘧疾種類判斷處理，當?shù)谌Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ拥那跋蛏⑸涔鈴姸鹊拇碇敌∮赥4時，輸出表示血液試樣有可能感染了惡性瘧原蟲的信息（以下稱為“惡性瘧感染信息”）作為參考信息。 關(guān)于瘧疾種類判斷處理，當?shù)谌Ｗ尤褐兴鶎俚牧Ｗ拥那跋蛏⑸涔鈴姸鹊拇碇翟赥4以上時，輸出表示血液試樣有可能感染了其他種類的瘧原蟲的信息（以下稱為“其他感染信息”）作為參考信息。

具體而言，惡性瘧感染信息包括表示血液試樣感染了惡性瘧原蟲的可能性很高的信息（以下稱“第一惡性瘧感染信息”）、以及表示血液試樣疑似感染了惡性瘧原蟲的信息（以下稱“第二惡性瘧感染信息”）。當瘧疾種類判斷標記設(shè)為2時，輸出第一惡性瘧感染信息作為參考信息，當瘧疾種類判斷標記設(shè)為1時，輸出第二惡性瘧感染信息作為參考信息。

其他感染信息包括表示血液試樣感染了其他種類的瘧原蟲的可能性很高的信息（以下稱“第一其他感染信息”）、以及表示血液試樣疑似感染了其他種類的瘧原蟲的信息（以下稱“第二其他感染信息”）。 當瘧疾種類判斷標記設(shè)為4時，輸出第一其他感染信息作為參考信息，當瘧疾種類判斷標記設(shè)為3時，輸出第二其他感染信息作為參考信息。

當階段標記設(shè)為1時，輸出表示出現(xiàn)了滋養(yǎng)體或裂殖體的可能性很高的信息（以下稱“滋養(yǎng)體·裂殖體出現(xiàn)信息”）作為參考信息。

當階段標記設(shè)為2時，輸出表示出現(xiàn)了配子體的可能性很高的信息（以下稱“配子體出現(xiàn)信息”）作為參考信息。

參照圖15，進一步就所顯示的分析結(jié)果進行說明。輸出部件310上顯示分析結(jié)果界面500。分析結(jié)果界面500具有試樣信息顯示區(qū)域510、患者信息顯示區(qū)域520、測定結(jié)果顯示區(qū)域530和參考信息顯示區(qū)域540。測定結(jié)果顯示區(qū)域530具有CBC項目顯示區(qū)域531和瘧疾項目顯示區(qū)域532。

試樣信息顯示區(qū)域510中顯示充當分析結(jié)果界面500中顯示的分析結(jié)果的基礎(chǔ)的血液試樣的信息?；颊咝畔@示區(qū)域520中顯示被采集血液試樣的受檢者的信息。

測定結(jié)果顯示區(qū)域530中顯示通過測定數(shù)據(jù)分析處理獲得的各項目的測定值。CBC項目顯示區(qū)域531中顯示血細胞分析中的基本測定項目的測定值。CBC項目顯示區(qū)域531中顯示的測定值包括紅細胞（RBC）和白細胞（WBC）的測定值。瘧疾項目顯示區(qū)域532中顯示有關(guān)瘧疾感染紅細胞的測定項目的測定值。瘧疾項目顯示區(qū)域532中顯示的測定值包括瘧疾感染紅細胞數(shù)（M-RBC）和瘧疾感染紅細胞比率（MR）的測定值。

當通過測定數(shù)據(jù)分析處理獲得的是疑似感染瘧原蟲等的應(yīng)該要向用戶報告的結(jié)果時，參考信息顯示區(qū)域540中顯示提供給用戶的參考信息。關(guān)于測定數(shù)據(jù)分析處理，當瘧疾種類判斷標記設(shè)為2時，參考信息顯示區(qū)域540中顯示第一惡性瘧感染信息“惡性瘧”，當瘧疾種類判斷標記設(shè)為1時，參考信息顯示區(qū)域540中顯示第二惡性瘧感染信息“惡性瘧?”。此外， 第一惡性瘧感染信息不限于上述信息，只要是表示血液試樣感染了惡性瘧原蟲的可能性很高的信息即可。第二惡性瘧感染信息也不限于上述信息，只要是表示血液試樣疑似感染了惡性瘧原蟲的信息即可。此外，也可以當瘧疾種類判斷標記設(shè)為1或2時輸出表示血液試樣有可能感染了惡性瘧原蟲的同一信息。

關(guān)于測定數(shù)據(jù)分析處理，當瘧疾種類判斷標記設(shè)為4時，參考信息顯示區(qū)域540中顯示第一其他感染信息“其他種類”， 瘧疾種類判斷標記設(shè)為3時，參考信息顯示區(qū)域540中顯示第二其他感染信息“其他種類？”。另外，第一其他感染信息不限于上述信息，只要是表示血液試樣感染了其他種類的瘧原蟲的可能性很高的信息即可。第二其他感染信息也不限于上述信息，只要是表示血液試樣疑似感染了其他種類的瘧原蟲的信息即可。也可以當瘧疾種類判斷標記設(shè)為3或4時輸出表示血液試樣有可能感染了其他種類的瘧原蟲的同一信息。

關(guān)于測定數(shù)據(jù)分析處理，當階段標記設(shè)為1時，參考信息顯示區(qū)域540中顯示滋養(yǎng)體·裂殖體出現(xiàn)信息“出現(xiàn)滋養(yǎng)體／裂殖體”。 在瘧原蟲的生命周期中，在從環(huán)狀體進一步進化的階段中會出現(xiàn)滋養(yǎng)體或裂殖體。因此，當檢測出滋養(yǎng)體或裂殖體時，輸出滋養(yǎng)體·裂殖體出現(xiàn)信息，以此就能通知用戶感染者處于滋養(yǎng)體或裂殖體出現(xiàn)的階段。

關(guān)于測定數(shù)據(jù)分析處理，當階段標記設(shè)為2時，參考信息顯示區(qū)域540中顯示配子體出現(xiàn)信息“出現(xiàn)配子體？”。在從滋養(yǎng)體和裂殖體出現(xiàn)的階段進一步進化的階段中會出現(xiàn)配子體。在瘧疾感染癥中，有時就算其癥狀減輕了但血液中仍然存在配子體。因此，在瘧疾感染癥的治療中，消滅配子體是非常重要的。因此，檢測出配子體時，通過輸出配子體出現(xiàn)信息就能通知用戶已處于配子體出現(xiàn)的階段。