本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，涉及一種試劑盒，具體來說是一種檢測(cè)尿纖維連接蛋白濃度水平的試劑盒及方法。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)于人體尿液及組織中纖維連接蛋白(FN)水平的檢測(cè)方法主要有兩種，一種是酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，另一種是放射免疫擴(kuò)散法。ELISA法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，操作步驟復(fù)雜；放射免疫擴(kuò)散法雖檢測(cè)時(shí)間短，但需有放射性保護(hù)。而且兩種方法中單次可檢測(cè)的樣本量少，故兩種檢測(cè)方法都不能實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)批量的尿纖維連接蛋白(FN)水平，不能滿足臨床的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)尿纖維連接蛋白(FN)濃度水平的試劑盒及方法，所述的這種檢測(cè)尿纖維連接蛋白(FN)濃度水平的試劑盒及方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中的檢測(cè)尿纖維連接蛋白(FN)濃度水平的方法時(shí)間長(zhǎng)、操作步驟復(fù)雜、單次檢測(cè)樣本量少的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)尿纖維連接蛋白(FN)濃度水平的試劑盒，包括：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、PEG800、抗人纖維連接蛋白抗體或包被于載體的抗人纖維連接蛋白抗體，所述的PEG800的質(zhì)量百分比濃度為10-800g/L；所述的抗人纖維連接蛋白抗體或包被于載體的抗人纖維連接蛋白抗體的體積濃度為0.1-1000ml/L；還包括尿維連接蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。

進(jìn)一步的，所述的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液和PEG800組成試劑Ⅰ；所述的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、PEG800和抗人纖維連接蛋白抗體組成試劑Ⅱ。

進(jìn)一步的，包被抗人纖維連接蛋白抗體的載體為膠乳微?；蛘呷槟z微粒，也可以是其它可以包被蛋白的微粒載體。

進(jìn)一步的，所述抗人纖維連接蛋白抗體來源于使用人纖維連接蛋白免疫羊、免、鼠、馬、驢動(dòng)物產(chǎn)生的抗血清；或者來源于單克隆抗人纖維連接蛋白抗體或抗纖維連接蛋白中A單抗、B單抗、C單抗、D單抗中的任意一種，單抗的效價(jià)為1:1-1024。

本發(fā)明還提供了采用上述的試劑盒檢測(cè)尿纖維連接蛋白(FN)濃度水平的方法，向試劑Ⅰ中加入待測(cè)樣本，37℃孵育5min，測(cè)量透射光強(qiáng)度A1；然后加入試劑II，37℃孵育5min，測(cè)量最終產(chǎn)物的透射光強(qiáng)度A2，向試劑Ⅰ中加入標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育5min，測(cè)量透射光強(qiáng)度B1；然后加入試劑II，37℃孵育5min，測(cè)量最終產(chǎn)物的透射光強(qiáng)度B2，

進(jìn)一步的，所述的檢測(cè)方法包括但不限于免疫透射比濁法，免疫散射比濁法，免疫增強(qiáng)透射比濁法，免疫增強(qiáng)散射比濁法。

本發(fā)明還提供了另外一種采用上述的試劑盒(FN單試劑)檢測(cè)尿纖維連接蛋白(FN)濃度水平的方法，向所述試劑Ⅰ中加入所述試劑II，混合，然后加入待測(cè)樣本，反應(yīng)至終點(diǎn)，測(cè)量最終產(chǎn)物的透射或者散射光強(qiáng)度值A(chǔ)，向所述試劑Ⅰ中加入所述試劑II，混合，然后加入標(biāo)準(zhǔn)品，反應(yīng)至終點(diǎn)，測(cè)量最終產(chǎn)物的透射或者散射光強(qiáng)度值B，

具體的，所述尿纖維連接蛋白(FN)濃度水平適用任何一種自動(dòng)化分析儀可以實(shí)現(xiàn)檢測(cè)計(jì)算功能的裝置。

具體的，所述試劑Ⅰ中PEG800的質(zhì)量百分比濃度為0.1-800g/L，優(yōu)選為60g/L。所述試劑Ⅱ中PEG800的質(zhì)量百分比濃度為0.1-800g/L，優(yōu)選為60g/L。所述抗人纖維連接蛋白(FN)抗體的體積濃度為0.1-1000ml/L，優(yōu)選為600ml/L。

本發(fā)明采用抗原-抗體檢測(cè)原理及測(cè)量散射光、透射光的測(cè)量方法，提供一種可以快速檢測(cè)尿液或組織液或組織樣本中纖維連接蛋白(FN)水平、并可同時(shí)檢測(cè)大量樣本、操作簡(jiǎn)單的方法。

本發(fā)明的檢測(cè)原理是：待測(cè)尿樣本與試劑成分反應(yīng)，測(cè)量反應(yīng)初始產(chǎn)物與最終產(chǎn)物的透射光或散射光的強(qiáng)度差變化。或測(cè)量試劑空白與反應(yīng)最終產(chǎn)物的透射光或散射光的強(qiáng)度變化。具體的測(cè)量過程是將A2與A1的差值除以標(biāo)準(zhǔn)品的B2與B1的差值，乘以標(biāo)準(zhǔn)品尿纖維連接蛋白(FN)的已知濃度，得到待測(cè)樣本中纖維連接蛋白(FN)的濃度值?；蛘邔除以標(biāo)準(zhǔn)品的B，乘以標(biāo)準(zhǔn)品纖維連接蛋白(FN)的已知濃度，得到待測(cè)樣本中纖維連接蛋白(FN)的濃度值。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

1、本發(fā)明提供的方法檢測(cè)區(qū)間廣，在10-200mg/l濃度范圍內(nèi)的尿纖維連接蛋白(FN)水平都可以檢測(cè)，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

2、本發(fā)明方法檢測(cè)效率高，可以在10分鐘內(nèi)檢測(cè)出一個(gè)樣本的尿纖維連接蛋白(FN)的濃度。

3、本發(fā)明方法對(duì)尿液的保存條件要求低，保存溫度在-20℃的尿液樣本、保存長(zhǎng)達(dá)60天的尿液樣本、反復(fù)凍融過5次以內(nèi)的尿液樣本都可以進(jìn)行檢測(cè)，且檢測(cè)結(jié)果不受影響。

4、本發(fā)明提供的方法操作簡(jiǎn)單，僅對(duì)待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品前后的吸光度進(jìn)行測(cè)定和計(jì)算，就可測(cè)定人體尿液中纖維連接蛋白(FN)的水平，因此檢測(cè)成本低，普適性高。本發(fā)明快速，結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定；適用于自動(dòng)化批量檢測(cè)。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。需要說明的是，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1尿纖維結(jié)合蛋白(FN)雙試劑檢測(cè)1：

試劑Ⅰ：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液

PEG800 60g/L。

試劑Ⅱ：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液

PEG800 60g/L

兔抗人纖維連接蛋白(FN)抗血清600ml/L。

操作方法：向試劑Ⅰ中加入待測(cè)樣本，37℃孵育5min，測(cè)量透射光強(qiáng)度A1；然后加入試劑II，37℃孵育5min，測(cè)量最終產(chǎn)物的透射光強(qiáng)度A2。標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣本同樣操作測(cè)量分別得到B1、B2。

計(jì)算結(jié)果：

實(shí)施例II尿纖維結(jié)合蛋白(FN)雙試劑(膠乳增強(qiáng))檢測(cè)2：

試劑I：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液

PEG分子量800 60g/L

試劑II：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液

PEG分子量800 60g/L

兔抗人纖維連接蛋白(FN)抗體包被交聯(lián)膠乳600ml/L

操作方法及計(jì)算結(jié)果同雙試劑1。

實(shí)施例III尿纖維結(jié)合蛋白(FN)單試劑檢測(cè)：

試劑：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液

PEG分子量800 60g/L，

兔抗人FN抗體600ml/L。

操作方法：

測(cè)量試劑的透射光強(qiáng)度A1；然后加入待測(cè)樣本，37℃孵育10min，測(cè)量透射光強(qiáng)度A2。標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣本同樣操作測(cè)量分別得到B1、B2。

計(jì)算結(jié)果：