一種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，該方法綜合了薄層色譜鑒別藥物中是否含有赤芍和/或葛根成分；丹參和/或遠志成分含量測定以及藥物整體紅外、紫外波長段活性成分的標(biāo)準吸收曲線，填補了原成品無含量測定檢驗的空白，進一步增加了產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準的可控性，能直觀地表征產(chǎn)品的性質(zhì)，有利于從整體上控制產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
【專利說明】一種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 清腦復(fù)神液含48味原藥材，成分十分復(fù)雜，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準僅含兩個定性鑒別項， 無含量測定項，更無整體藥品質(zhì)量控制方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法。
[0004] 本發(fā)明提供的清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，包括薄層色譜法鑒別清腦復(fù)神液中是 否含有赤芍成分和/或是否含有葛根成分；其中赤芍成分的鑒別方法為：（1)供試品溶液制 備：取供試品溶液100mL，用30mL乙醚萃取，棄去乙醚層，用水飽和的正丁醇萃取2次，每次 30mL，合并正丁醇液，用30mL水洗滌，正丁醇層揮干，加入lmL乙醇溶解，加入適量中性氧化 鋁在水浴上攪拌，干燥，加在中性氧化鋁柱上，用體積比為3 : 1的乙酸乙酯-甲醇混合溶 液30mL洗脫，棄去洗脫液，用體積比為1 : 1的乙酸乙酯-甲醇混合溶液30mL洗脫，收集 洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇〇. 5mL使溶解，作為供試品溶液；
[0005] (2)對照品溶液制備：取芍藥苷對照品，加乙醇制成lmL含2mg的溶液，作對照品 溶液；
[0006] (3)薄層條件及結(jié)果：吸供試品溶液和對照品溶液各10yL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以體積比為20 : 2.5 : 5 : 0.1的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液為展開 齊U，展開，取出，晾干，噴以質(zhì)量百分含量為5%的香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，根 據(jù)顯色斑點的位置判斷清腦復(fù)神液樣品中是否含有赤芍成分。
[0007] 優(yōu)選地，上述清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法中，葛根成分的鑒別方法為：
[0008] (1)供試品溶液制備：取供試品溶液100mL，用乙酸乙酯萃取2次，每次30mL，合并 乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；
[0009] (2)對照品溶液制備：取葛根素，加甲醇制成每lmL含2mg的溶液，作對照品溶液；
[0010] (3)薄層條件及結(jié)果：吸供試品溶液和對照品溶液各10yL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以體積比為7 : 2.5 : 0.25的氯仿-甲醇-水混合液為展開劑，展開，取出，晾 干，置氨蒸汽中熏15min，在波長365nm的紫外燈下檢視，根據(jù)顯色斑點的位置判斷清腦復(fù) 神液樣品中是否含有葛根成分。
[0011] 優(yōu)選地，上述清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法中，還包括對丹參的含量測定方法，以丹 參中丹參酮IIA為檢測對象：
[0012] (1)供試品溶液制備：精密量取清腦復(fù)神液50mL，用乙醚提取3次，每次30mL，合 并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取 續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0013] (2)對照品溶液的制備：取丹參酮IIA對照品，精密稱定，加甲醇制成每lmL含 20yg的溶液，作為對照品溶液；
[0014] (3)測定條件及結(jié)果：液相色譜儀以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，精密吸取 對照品溶液與供試品溶液各10UL，分別注入液相色譜儀，以體積比為75 : 25的甲醇-水 為流動相，檢測波長為270nm，理論板數(shù)按丹參酮IIA峰計算應(yīng)不低于1000。
[0015] 優(yōu)選地，上述清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法中，還包括對遠志的含量測定方法，以遠 志中細葉遠志皂苷為檢測對象：
[0016] (1)供試品溶液的制備：精密量取清腦復(fù)神液50mL，蒸干，殘渣加體積比為70%的 甲醇水溶液溶解并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，加體積比為70%的甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻， 濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，置圓底燒瓶中，蒸干，殘渣加質(zhì)量百分含量為10%的氫氧化鈉 溶液50mL，加熱回流2小時，放冷，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4?5,用水飽和的正丁醇振搖提取 3次，每次50mL，合并正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中， 加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0017] (2)對照品溶液的制備：取細葉遠志皂苷，精密稱定，加甲醇制成每lmL含80yg 的溶液，作為對照品溶液；
[0018] (3)測定條件及結(jié)果：液相色譜儀以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，精密吸取 對照品溶液與供試品溶液各10UL，分別注入液相色譜儀，以體積比為70 : 30的甲醇-磷 酸水溶液為流動相，檢測波長為210nm，理論板數(shù)按細葉遠志皂苷峰計算應(yīng)不低于1000 ;所 述磷酸水溶液中磷酸的質(zhì)量百分比為〇. 05%。
[0019] 一種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，是采用紫外-可見分光光度法進行測定：
[0020] (1)參照物溶液制備：乙醇用水稀釋至體積百分含量為15%，得到參照物溶液；
[0021] (2)供試品溶液制備：直接取清腦復(fù)神液作為供試品；
[0022] (3)測定方法和結(jié)果：分別取適量參照物溶液和供試品溶液在200?900nm掃描， 記錄光譜圖；供試品圖譜中，清腦復(fù)神液在297?298nm，吸光度上升速度較快，吸光度范 圍應(yīng)為0. 0577?0. 1071 ;在335?340nm有第一個較大吸收，吸光度范圍應(yīng)為0. 9218? 1. 7120 ;在455?468nm有最大吸收，吸光度范圍應(yīng)為1. 5362?2. 8530 ;在550nm吸光度 范圍應(yīng)為0. 7862?1. 4600 ;在650nm吸光度范圍應(yīng)為0. 2166?0. 4024。
[0023] -種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，是采用紅外分光光度法進行測定：
[0024] (1)參照物制備：溴化鉀研細，壓片，作為參照物；
[0025] (2)供試品制備：取清腦復(fù)神液一滴于瑪瑙研缽中，揮干，加入0? 3g溴化鉀，研細， 壓片，作為供試品；
[0026] (3)測定方法和結(jié)果：分別將參照物和供試品在4000?450CHT1進行掃描，記錄光 譜圖；供試品圖譜中，清腦復(fù)神液在3400?3350〇11'2950?2900〇11'1650?1600CHT1、 1400?1350CHT1和1030?1080CHT1五個區(qū)域內(nèi)有明顯的吸收；在3400?3350CHT1區(qū)域內(nèi) 吸收峰的T%范圍為16. 9583?39. 5695 ;在2950?2900CHT1區(qū)域內(nèi)吸收峰的T%范圍為 50. 2160 ?93. 2584 ;在 1650 ?1600CHT1 區(qū)域內(nèi)吸收峰的T%范圍為 55. 2932 ?102. 6874 ; 在1400?1350CHT1區(qū)域內(nèi)吸收峰的T%范圍為51. 9735?96. 5221 ;在1030?1080cm-1 區(qū)域內(nèi)吸收峰的T%范圍為26. 7716?62. 4672。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0028] (1)適用TLC去增加定性鑒別標(biāo)準
[0029] 清腦復(fù)神液中含48味中藥材，成份復(fù)雜，成份間相互干擾大，本研究對供試液的 精制方法進行了研究，獲得了干擾較少的樣品制備方法，并成功對其中的赤芍、葛根2味藥 材建立了TLC鑒別項，進一步增加了產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準的可控性。
[0030] (2)建立清腦復(fù)神液的含量測定控制標(biāo)準
[0031] 原標(biāo)準中（衛(wèi)生部藥品標(biāo)準中藥成方制劑第9冊）成品無含量測定方法，本研究 采用HPLC法建立了清腦復(fù)神液中兩味藥材（丹參及遠志）的含量測定方法，填補了原成品 無含量測定檢驗的的空白，增加了產(chǎn)品質(zhì)量的可控性。
[0032] (3)建立清腦復(fù)神液的紅外、紫外波長段活性成分的標(biāo)準吸收曲線
[0033] 中藥指紋圖譜能夠從某一方面從整體上控制產(chǎn)品的質(zhì)量，但是，清腦復(fù)神液含有 48種藥材，活性成分十分復(fù)雜，在同一波長下，很難被完全檢測出來，且由于成分復(fù)雜眾多， 導(dǎo)致對分離條件選擇極為困難，結(jié)果重復(fù)性差，不能進行系統(tǒng)的定性分析。本研究創(chuàng)新地建 立了清腦復(fù)神液的紫外波長段活性成分的吸收曲線，能直觀地表征產(chǎn)品的性質(zhì)，有利于從 整體上控制產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0034] 圖1是赤芍薄層鑒別圖，其中1 :清腦復(fù)神液樣品；2、4:芍藥苷對照品；3:清腦復(fù) 神液陰性樣品。
[0035] 圖2是葛根薄層鑒別圖，其中1、3 :清腦復(fù)神液樣品；2、4:葛根素對照品；5:清腦 復(fù)神液陰性樣品。
[0036] 圖3是枳殼薄層鑒別圖，其中1、3:清腦復(fù)神液樣品；2、4:柚皮苷對照品；5:清腦 復(fù)神液陰性樣品。
[0037] 圖 4 是 131117、131118、131121、131122、131123、131124、131126、131128、131129、 131252批次的清腦復(fù)神液紫外全波長掃描圖。
[0038] 圖 5 是 140337、140338、140339、140340、140341、140342、140343、140344、140345、 140346批次的清腦復(fù)神液紫外全波長掃描圖。
[0039] 圖6是20批清腦復(fù)神液紅外全波長掃描圖。

【具體實施方式】
[0040] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的 理解本發(fā)明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。
[0041] 清腦復(fù)神液處方：
[0042]

【權(quán)利要求】
1. 一種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括薄層色譜法鑒別清腦復(fù)神液中 是否含有赤芍成分和/或是否含有葛根成分；其中赤芍成分的鑒別方法為： ⑴供試品溶液制備：取供試品溶液lOOmL，用30mL乙醚萃取，棄去乙醚層，用水飽和的 正丁醇萃取2次，每次30mL，合并正丁醇液，用30mL水洗滌，正丁醇層揮干，加入lmL乙醇溶 解，加入適量中性氧化鋁在水浴上攪拌，干燥，加在中性氧化鋁柱上，用體積比為3 : 1的乙 酸乙酯-甲醇混合溶液30mL洗脫，棄去洗脫液，用體積比為1 : 1的乙酸乙酯-甲醇混合 溶液30mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇0. 5mL使溶解，作為供試品溶液； ⑵對照品溶液制備：取芍藥苷對照品，加乙醇制成lmL含2mg的溶液，作對照品溶液； (3)薄層條件及結(jié)果：吸供試品溶液和對照品溶液各10 y L，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以體積比為20 : 2.5 : 5 : 0.1的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以質(zhì)量百分含量為5 %的香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，根據(jù) 顯色斑點的位置判斷清腦復(fù)神液樣品中是否含有赤芍成分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，葛根成分的鑒別 方法為： (1)供試品溶液制備：取供試品溶液l〇〇mL，用乙酸乙酯萃取2次，每次30mL，合并乙酸 乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液； ⑵對照品溶液制備：取葛根素，加甲醇制成每lmL含2mg的溶液，作對照品溶液； (3)薄層條件及結(jié)果：吸供試品溶液和對照品溶液各10 yL，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以體積比為7 : 2.5 : 0.25的氯仿-甲醇-水混合液為展開劑，展開，取出，晾干，置 氨蒸汽中熏15min，在波長365nm的紫外燈下檢視，根據(jù)顯色斑點的位置判斷清腦復(fù)神液樣 品中是否含有葛根成分。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，還包括對丹參的 含量測定方法，以丹參中丹參酮II A為檢測對象： (1) 供試品溶液制備：精密量取清腦復(fù)神液50mL，用乙醚提取3次，每次30mL，合并乙 醚液，揮干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，作為供試品溶液； (2) 對照品溶液的制備：取丹參酮II A對照品，精密稱定，加甲醇制成每lmL含20 y g 的溶液，作為對照品溶液； (3) 測定條件及結(jié)果：液相色譜儀以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，精密吸取對照 品溶液與供試品溶液各10 U L，分別注入液相色譜儀，以體積比為75 : 25的甲醇-水為流 動相，檢測波長為270nm，理論板數(shù)按丹參酮II A峰計算應(yīng)不低于1000。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，還包括對遠志的 含量測定方法，以遠志中細葉遠志皂苷為檢測對象： ⑴供試品溶液的制備：精密量取清腦復(fù)神液50mL，蒸干，殘渣加體積比為70%的甲醇 水溶液溶解并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，加體積比為70%的甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過， 精密量取續(xù)濾液25mL，置圓底燒瓶中，蒸干，殘渣加質(zhì)量百分含量為10 %的氫氧化鈉溶液 50mL，加熱回流2小時，放冷，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4?5,用水飽和的正丁醇振搖提取3次， 每次50mL，合并正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲 醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液； ⑵對照品溶液的制備：取細葉遠志皂苷，精密稱定，加甲醇制成每lmL含80 y g的溶 液，作為對照品溶液； (3)測定條件及結(jié)果：液相色譜儀以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，精密吸取對照 品溶液與供試品溶液各10UL，分別注入液相色譜儀，以體積比為70 : 30的甲醇-磷酸水 溶液為流動相，檢測波長為210nm，理論板數(shù)按細葉遠志皂苷峰計算應(yīng)不低于1000 ;所述磷 酸水溶液中磷酸的質(zhì)量百分比為〇. 05%。
5. -種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，采用紫外-可見分光光度法進行測 定： (1) 參照物溶液制備：乙醇用水稀釋至體積百分含量為15%，得到參照物溶液； (2) 供試品溶液制備：直接取清腦復(fù)神液作為供試品； (3) 測定方法和結(jié)果：分別取適量參照物溶液和供試品溶液在200?900nm掃描，記錄 光譜圖；供試品圖譜中，清腦復(fù)神液在297?298nm，吸光度上升速度較快，吸光度范圍應(yīng)為 0. 0577?0. 1071 ;在335?340nm有第一個較大吸收，吸光度范圍應(yīng)為0. 9218?1. 7120 ; 在455?468nm有最大吸收，吸光度范圍應(yīng)為1. 5362?2. 8530 ;在550nm吸光度范圍應(yīng)為 0. 7862 ?1. 4600 ;在 650nm 吸光度范圍應(yīng)為 0. 2166 ?0. 4024。
6. -種清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制方法，其特征在于，采用紅外分光光度法進行測定： (1) 參照物制備：溴化鉀研細，壓片，作為參照物； (2) 供試品制備：取清腦復(fù)神液一滴于瑪瑙研缽中，揮干，加入0.3g溴化鉀，研細，壓 片，作為供試品； (3) 測定方法和結(jié)果：分別將參照物和供試品在4000?450CHT1進行掃描，記錄光譜 圖；供試品圖譜中，清腦復(fù)神液在3400?3350〇11'2950?2900〇11'1650?1600CHT1、 1400?1350CHT1和1030?1080CHT1五個區(qū)域內(nèi)有明顯的吸收；在3400?3350CHT 1區(qū)域內(nèi) 吸收峰的T%范圍為16. 9583?39. 5695 ;在2950?2900CHT1區(qū)域內(nèi)吸收峰的T%范圍為 50. 2160 ?93. 2584 ;在 1650 ?1600CHT1 區(qū)域內(nèi)吸收峰的 T%范圍為 55. 2932 ?102. 6874 ; 在1400?1350CHT1區(qū)域內(nèi)吸收峰的T%范圍為51. 9735?96. 5221 ;在1030?1080CHT1區(qū) 域內(nèi)吸收峰的T%范圍為26. 7716?62. 4672。
【文檔編號】G01N21/31GK104459005SQ201410674453
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】何新明, 劉濤, 伍利華, 黃英, 劉婷, 劉應(yīng)武 申請人:四川中方制藥有限公司