一種金銀花的質(zhì)量檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種金銀花檢測(cè)方法，其主要步驟包括50％甲醇溶解、超聲、定容、過濾制備供試品溶液，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動(dòng)相A：乙腈；流動(dòng)相B：0.3％(w/v)檸檬酸和2％(w/v)四氫呋喃水溶液，采用梯度洗脫程序?qū)ζ浠钚猿煞诌M(jìn)行檢測(cè)，本發(fā)明建立的金銀花檢測(cè)方法對(duì)其大部分藥理活性物質(zhì)進(jìn)行了有效表征，實(shí)現(xiàn)了對(duì)其化學(xué)成分的較全面表征進(jìn)，避免了只測(cè)定其中幾個(gè)化學(xué)成分就對(duì)金銀花整體質(zhì)量判斷的片面性，各有效成分的峰分離性好，主要活性成分的峰在35分鐘內(nèi)出峰，檢測(cè)時(shí)間合理，并且重復(fù)性和穩(wěn)定性好。
【專利說明】一種金銀花的質(zhì)量檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種金銀花的質(zhì)量檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]金銀花又名忍冬，為忍冬科多年生半常綠纏繞木質(zhì)藤本植物忍冬的花蕾和藤葉，是一種常見的藥食兩用的傳統(tǒng)植物藥材，在我國(guó)已有2200多年栽植史?！敖疸y花”一名出自《本草綱目》，由于忍冬花初開為白色，后轉(zhuǎn)為黃色，因此得名金銀花。金銀花一般產(chǎn)四季花，花期在5?10月間，南北地區(qū)有所差異，越靠南方花期越提前。四季花中第一、二兩季的花期最為明顯，尤以第一季最顯著，品質(zhì)最佳且產(chǎn)量占全年產(chǎn)量50%以上。
[0003]金銀花具有多種重要的藥效功能，是傳統(tǒng)、常用和大宗的中藥材。具有清熱解毒、疏利咽喉、消暑除煩、抑菌等功能，臨床上廣泛應(yīng)用于急性熱病及外科感染性疾病，如上呼吸道感染、風(fēng)熱感冒、急性扁桃體炎、咽炎、肺炎、關(guān)節(jié)疼痛、蕁麻疹、腿腺炎、痢疾等的治療，其藥理作用主要為:1)解熱抗炎，金銀花能抑制炎性物質(zhì)的滲出與增生，通過注射液、口服液及水煎液等作用能退熱，同時(shí)提高了巨噬細(xì)胞的吞噬作用，臨床多作為清熱解毒制劑使用；2〉降血脂作用，金銀花能夠保護(hù)胰腺8細(xì)胞，同時(shí)有著顯著的降糖作用，一些研究發(fā)現(xiàn)，金銀花可與膽固醇結(jié)合:3)抗病毒作用，金銀花主要成分中的異綠原酸及綠原酸能夠抑制?？刹《?、柯薩病毒等發(fā)揮作用，同時(shí)金銀花對(duì)抵抗皮膚真菌效果顯著利膽作用，金銀花具有顯著的利膽作用，緩解肝臟的損傷，保護(hù)急性肝損傷:5)止血及抗氧化作用，金銀花混懸液及炭水煎液具有較強(qiáng)的止血作用，同時(shí)金銀花能夠清除氏02，抗氧化反應(yīng)。
[0004]金銀花中活性成分眾多，主要包括:(1)揮發(fā)油類，揮發(fā)油是金銀花的有效成分。金銀花干品中含有揮發(fā)油成分60種以上，主要成分為棕櫚酸，占揮發(fā)油26%以上，其它成分則多為醇、醛、酮、酸、酯類和烷烴等。鮮花揮發(fā)油成分多為低沸點(diǎn)的不飽和萜烯類，其中以芳香醇為主，含量占揮發(fā)油的45.5%以上。金銀花干花蕾中多為單萜及倍半萜類化合物，含量較高的有香樹烯、芳樟醇和香葉醇:(2)黃酮類，已分離鑒定出的黃酮類成分主要為木犀草素、木犀草素-7-0-0-0-葡萄糖苷、木犀草素-7-0-13-0-半乳糖苷、槲皮素-3-0-13 -0-葡萄糖苷、金絲桃苷等類似結(jié)構(gòu)的化合物；(3)有機(jī)酸類，綠原酸類化合物是金銀花的重要有效成分，主要包括綠原酸、異綠原酸和咖啡酸。其中異綠原酸為一混合物，包含4，5-二咖啡酸?？崴?、3，4-二咖啡酸酰奎尼酸、3，5-二咖啡酸?？崴?、1,3- 二咖啡酸?？崴?、3-阿魏?？崴幔?-阿魏?？崴帷?-阿魏?？崴崞叻N異構(gòu)體；(4)皂苷類:從金銀花中分離得到的皂苷類化合物主要包括:3-0-0-1-吡喃鼠李糖基-(1-2)1-1-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元-28-0-13 -0-吡喃木糖基-(1-6)-13 -0吡喃葡萄糖酯，3-0-0 吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元-28-0-0 吡喃鼠李糖基-(1-2) -〔 13 -0-吡喃木糖基-(1-6)〕-8-0-吡喃葡萄糖酯，3-0- 0 -1-吡喃鼠李糖基-(1-2) - 0 -1-吡喃阿拉伯糖基常春藤皂苷元-28-0- 0 -1-吡喃鼠李糖基-(1-2) --0-吡喃木糖基-(1-6) 1-13-0-吡喃葡萄糖酯，灰氈毛忍冬皂苷甲，灰氈毛忍冬皂苷乙，川續(xù)斷皂苷乙，木通皂苷0等；(5)無機(jī)元素類，金銀花含微量元素共15種:？6、

面對(duì)如此復(fù)雜的活性成分,如何保證藥物的質(zhì)量，控制其療效，需要對(duì)它的活性物質(zhì)群進(jìn)行控制，然而現(xiàn)有的檢測(cè)方法中普遍存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)到的活性成分峰個(gè)數(shù)少、分離效果不好等技術(shù)問題，因此，尋求一種能夠快速、有效的檢測(cè)方法對(duì)于金銀花的質(zhì)量控制而言顯得尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、檢出成分少、分離效果差等技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種快速、有效的金銀花的檢測(cè)方法，其包括以下步驟:
[0006]仏)供試品溶液的制備:取金銀花粉末適量，精密稱量，置于容量瓶中，加50%甲醇溶解、超聲、定容、過濾即得供試品；
[0007](^)色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相八:乙腈；流動(dòng)相8:0.3% ^八)檸檬酸和2% ^八)四氫呋喃水溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為325111
[0008]上述檢測(cè)方法中所述梯度洗脫的程序?yàn)?其中下述比例為體積比):
[0009]0-3111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 95:5
[0010]15111111 時(shí)，流動(dòng)相 X:流動(dòng)相 8 = 90: 10
[0011]20111111時(shí)，流動(dòng)相八:流動(dòng)相8 = 75:25
[0012]40111111時(shí)，流動(dòng)相六:流動(dòng)相8 = 60:40
[0013]45111111時(shí)，流動(dòng)相六:流動(dòng)相8 = 0: 100
[0014]45111111開始沖洗并平衡色譜柱15111111。
[0015]上述指紋圖譜的檢測(cè)方法中供試品溶液的制備方法優(yōu)選為:精密稱取金銀花0.28，粉碎后置于5001量瓶中，加50%甲醇溶解后超聲30-11,放冷后定容至5001，過濾即得供試品溶液。
[0016]上述指紋圖譜檢測(cè)方法中，色譜條件優(yōu)選為:柱溫:301 ；流速:1.；檢測(cè)波長(zhǎng):35211111 ；進(jìn)樣體積:10111。
[0017]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0018]1、本發(fā)明建立的金銀花檢測(cè)方法及其指紋圖譜，對(duì)于其大部分藥理活性物質(zhì)進(jìn)行了有效表征，實(shí)現(xiàn)了對(duì)其化學(xué)成分的較全面表征進(jìn)，避免了只測(cè)定其中幾個(gè)化學(xué)成分就對(duì)金銀花整體質(zhì)量判斷的片面性；
[0019]2、本發(fā)明所提供的指紋圖譜檢測(cè)方法對(duì)金銀花中各有效成分的峰分離性好；
[0020]3、本發(fā)明所提供的檢測(cè)方法所需檢測(cè)時(shí)間合理，主要活性成分的峰在35分鐘內(nèi)出峰，并且峰強(qiáng)度都較大，因此使得檢測(cè)效率高效；
[0021]4、本發(fā)明所提供的指紋圖譜檢測(cè)方法其重復(fù)性和穩(wěn)定性好；
[0022]

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1對(duì)照品色譜圖(1木樨草苷，7綠原酸)
[0024]圖2-1實(shí)施例一中金銀花檢測(cè)色譜圖
[0025]圖2-2實(shí)施例一中金銀花檢測(cè)色譜圖
[0026]圖2-3實(shí)施例一中金銀花檢測(cè)色譜圖
[0027]圖3實(shí)施例二中多批次金銀花檢測(cè)色譜圖
[0028]圖4實(shí)施例二中多批次金銀花檢測(cè)色譜圖

【具體實(shí)施方式】
[0029]本發(fā)明中涉及的實(shí)驗(yàn)儀器和藥品、試劑如下:
[0030]實(shí)驗(yàn)儀器1290液相色譜儀0^116111:，113八)，以十八燒基娃燒鍵合娃膠為填料的色譜柱:￡￠111)86 ￠1118 018 (250111111^ 4.6111111, 511111)118^) 0
[0031]實(shí)驗(yàn)藥品及試劑:金銀花藥材(來源:甘肅)，木樨草苷對(duì)照品(來源:中檢院)，綠原酸對(duì)照品(來源:中檢院)，乙腈(只?!^，31醉0.1^X1011 001111)8117 1%.113八)，梓檬酸、四氫呋喃為分析純(318胍9.1(1x1011 001111)8117 1%.113八)，純凈水經(jīng)11111-0純水系統(tǒng)自制

嫩，113八)。
[0032]實(shí)施例一金銀花檢測(cè)方法
[0033]1、提取物供試品溶液制備
[0034]精密稱取金銀花0.28，粉碎后置于5001量瓶中，加50%甲醇溶解后超聲300111，放冷后定容至50“，過濾即得供試品溶液。
[0035]2、液相色譜條件
[0036]3、液相色譜條件
[0037]流動(dòng)相:流動(dòng)相X:乙腈；流動(dòng)相8:0.3 % ^八)檸檬酸和2 % ^八)四氫呋喃水溶液，按梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?
[0038]0-3111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 95:5
[0039]15111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 90: 10
[0040]20111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 75:25
[0041]40111111時(shí)，流動(dòng)相六:流動(dòng)相8 = 60:40
[0042]45111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 0: 100
[0043]45111111開始沖洗并平衡色譜柱15111111
[0044]柱溫:301^；流速:1.01111/111111 ；檢測(cè)波長(zhǎng):352=111 ；進(jìn)樣體積:10111。
[0045]按照上述條件進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，對(duì)照品液相色譜圖如圖1所示，樣品溶液色譜圖如圖2-12-24-3所示，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果可以看出，該檢測(cè)方法能夠檢測(cè)得到金銀花中25個(gè)主要活性成分物質(zhì)，出峰時(shí)間分別為 1.96111111,13.82111111,16.65111111,17.50111111,21.11—、21.71111111^22.06111111^22.32111111^22.98111111^23.91111111^24.96111111^25.48111111^26.32111111^27.52111111^28.07111111^28.88111111^29.78111111^30.89111111^31.78111111^32.67111111^34.01111111^34.60-^34.91-?。?，其中1號(hào)峰為木樨草苷，7號(hào)峰為綠原酸；且該檢測(cè)結(jié)果基線平穩(wěn)，各峰之間分離度較好，能夠有效表征金銀花有效成分，同時(shí)，該25個(gè)活性成分在35-=前即出峰完畢，大大節(jié)約了檢測(cè)時(shí)間和成本。
[0046]實(shí)施例二不同批次金銀花檢測(cè)方法
[0047]液相色譜條件
[0048]流動(dòng)相:流動(dòng)相I:乙腈；流動(dòng)相8:0.3 % (界八)檸檬酸和2 % (界八)四氫呋喃水溶液，按梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?
[0049]0-3111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 95:5
[0050]15111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 90: 10
[0051]20111111時(shí)，流動(dòng)相六:流動(dòng)相8 = 75:25
[0052]40111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 60:40
[0053]45111111 時(shí)，流動(dòng)相 4:流動(dòng)相 8 = 0: 100。
[0054]45111111開始沖洗并平衡色譜柱15111111。
[0055]柱溫:301^；流速:1.01111/111111 ；檢測(cè)波長(zhǎng):352=111 ；進(jìn)樣體積:10111
[0056]按照實(shí)施例1中的樣品制備方法制備金銀花樣品溶液，分別對(duì)10批次的樣品溶液進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見圖3、圖4，其中10批次樣品出峰時(shí)間一致，出峰面積一致，表明該方法重現(xiàn)性良好，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定。
【權(quán)利要求】
1.一種金銀花的質(zhì)量檢測(cè)方法，其包括以下步驟: (a)供試品溶液的制備:取金銀花粉末適量，精密稱量，置于容量瓶中，加50%甲醇溶解、超聲、定容、過濾即得供試品； (b)色譜條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫，流動(dòng)相A:乙腈；流動(dòng)相B:0.3% (w/v)檸檬酸和2% (w/v)四氫呋喃水溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為325nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金銀花質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述梯度洗脫的程序?yàn)? 0-3min時(shí),流動(dòng)相A:流動(dòng)相B = 95:5 15min時(shí),流動(dòng)相A:流動(dòng)相B = 90:10 20min時(shí),流動(dòng)相A:流動(dòng)相B = 75:25 40min時(shí),流動(dòng)相A:流動(dòng)相B = 60:40 45min時(shí),流動(dòng)相A:流動(dòng)相B = O: 100 45min開始沖洗并平衡色譜柱15min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金銀花質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述供試品溶液的制備方法為:精密稱取金銀花0.2g，粉碎后置于50ml量瓶中，加50%甲醇溶解后超聲30min，放冷后定容至50ml，過濾即得供試品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金銀花質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述色譜條件為:柱溫:30°C ;流速:1.0ml/min ;進(jìn)樣體積:1ul0
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104297374SQ201410542954
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】余赟 申請(qǐng)人:南江縣百草中藥材有限公司