一種高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種atp關聯(lián)產(chǎn)物的方法

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一種高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種atp關聯(lián)產(chǎn)物的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于分析化學領域，公開了一種用高效液相色譜—二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量的方法。使用帶有二極管陣列檢測器的高效液相色譜儀進行檢測，將待測樣品提取后進樣到高效液相色譜儀中，梯度洗脫；根據(jù)各ATP關聯(lián)產(chǎn)物的保留時間及紫外吸收光譜，確定各色譜峰是哪一種ATP關聯(lián)產(chǎn)物，檢測相應ATP關聯(lián)產(chǎn)物色譜峰面積，根據(jù)同樣色譜條件下ATP關聯(lián)物標準工作曲線或者回歸方程計算待測樣品提取液中ATP關聯(lián)產(chǎn)物的含量。本方法的設備及分析條件要求簡單，不用離子對試劑也可以同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量，可同時測10種，分離時間不超過25分鐘。
【專利說明】-種高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種 ATP關聯(lián)產(chǎn)物的方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學領域，涉及檢測水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的方法，特別涉及用高效液相色譜一二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量的方法。

【背景技術】
[0002] ATP關聯(lián)產(chǎn)物是由嘿嶺堿基、嚼巧堿基、尼克醜胺等與糖磯酸醋組成的一類化合物，如H磯酸腺巧（adenosine triphosphate，ATP)、二磯酸腺巧（Adenosine Di地OS地ate, ADFO、腺巧酸（Adenosine Mono 地 OS 地 ate, AMP)、肌巧酸（Inosinic acid, IMP)、次黃嘿嶺核巧（Inosine, HxR)、次黃嘿嶺（Hypoxanthine, Hx)、鳥巧酸（Guan}dic acid, GMP),腺巧（Adenosine, AdR),腺嘿嶺（Adenine, Ad)、黃嘿嶺狂anthine, Xt)等。它們是水產(chǎn)動物肌肉核巧酸的主要成分，與水產(chǎn)原料的風味和新鮮度緊密相關。在風味方面，如AMP有著壓抑苦味的特性，能使食物產(chǎn)生良好的甜味和咸味，化會產(chǎn)生苦味，IMP是水產(chǎn)動物肌肉主要的呈味核巧酸，IMP增加食品鮮味的能力比谷氨酸軸強40倍。在鮮度方面，一般認為魚死后魚肉內(nèi)ATP依次降解為ADP、AMP、IMP、化R和版，其中化R、化量之和對ATP關聯(lián)物總量的比值即為K值。K值作為魚類鮮度指標已被公認。對于貝類，SaitoHuArai和 wamoto嘲等對幾種雙殼動物的肌肉進行分析，發(fā)現(xiàn)在始蝴和扇貝中，ATP及其關聯(lián)物的降解過程為ATP - ADP - AMP - AdR -化R -化一 Xt,而在舟貝、毛贓和鮑魚中按途徑 ATP - ADP - AMP - AdR - Ad進行。因此，快速準確檢測出魚體中的ATP及其關聯(lián)產(chǎn)物對水產(chǎn)原料的風味和新鮮度有很重要的意義。
[0003] 目前國內(nèi)外測定ATP關聯(lián)物含量的方法主要有離子交換液相色譜法、毛細管電泳法和反相液相色譜法等。離子交換色譜法對核巧酸等兼性離子化合物能很好的分離，但其需要對分離柱進行平衡（再生），且分析時間較長；高效毛細管電泳法對各種呈味核巧酸的分辨率較高，但儀器昂貴；反相高效液相色譜法具有快速、操作簡便的優(yōu)點，是目前生物、食品等研究領域主要使用的方法，但W往的反相高效液相色譜法分離的核巧酸或種類有限，或采用離子對試劑法分離，造成待測核巧酸相互有干擾或分析時間過長。如：亞等用高效液相色譜法測定了馬氏珠母貝肉中的ATP關聯(lián)產(chǎn)物（食品與發(fā)酵工業(yè)，2008， 36(6) =137-141)，該法只測定了 6種ATP關聯(lián)產(chǎn)物，可能存在其他核巧酸的干擾。楊文錯、陳舜勝等采用離子對高效液相色譜法測定了水產(chǎn)品中ATP降解產(chǎn)物（農(nóng)業(yè)工程學報，2007,（06). 217-222)、（水產(chǎn)學報，2011，35 (11). 1745-1752)，離子對高效液相色譜法穩(wěn)定時間過長，分離度不好，分析效率低，且對柱子污染大，暫時還沒有一種設備要求低、不采用離子對試劑、分析效率高且定性穩(wěn)定、能夠同時測定水產(chǎn)品中該9種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的高效液相色譜法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是提供一種操作簡單、分離速度快、不使用離子對試劑且定量定性準確，能夠同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的高效液相色譜-二極管陣列法，解決W上現(xiàn) 有技術中存在的分離效果不好、種類有限、分析時間過長、柱子污染嚴重及定性不準確等不足。
[0005] 所測定的ATP關聯(lián)產(chǎn)物為H磯酸腺巧（adenosine tri地OS地ate, ATP)、二磯酸腺巧（Adenosine Di 地 OS 地 ate, ADFO、腺巧酸（Adenosine Mono 地 OS 地 ate, AMP)、肌巧酸（Inosinic acid, IMP)、次黃嘿嶺核巧（Inosine, HxR)、次黃嘿嶺（Hypoxanthine, Hx)、鳥巧酸（Guan}dic acid, GMP),腺巧（Adenosine, AdR),腺嘿嶺（Adenine, Ad)和黃嘿嶺狂anthine, Xt)中的至少一種。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為：
[0007] 使用帶有DAD (二極管陣列）檢測器的高效液相色譜儀進行檢測，將待測樣品提取液加入到高效液相色譜儀中，梯度洗脫。
[0008] 用二極管陣列檢測器掃描確定檢測各ATP關聯(lián)產(chǎn)物的最佳檢測波長（紫外最大吸收波長和200?400nm下的紫外吸收光譜，根據(jù)特征光譜確定各色譜峰是哪一種ATP關聯(lián) 產(chǎn)物。
[0009] 10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的紫外最大吸收波長分別為；H磯酸腺巧259. Inm、二磯酸腺巧 253. 2nm、腺巧酸248. 4nm、肌巧酸259. Inm、次黃嘿嶺核巧248. 4nm、次黃嘿嶺259. Inm、鳥巧酸 260. 3nm、腺巧 248. 4nm、腺嘿嶺 259. Inm、黃嘿嶺 267. 4nm。
[0010] 檢測相應ATP關聯(lián)產(chǎn)物色譜峰面積，根據(jù)同樣色譜條件下標準工作曲線或者回歸方程計算ATP關聯(lián)產(chǎn)物的含量。
[0011] 液相色譜柱采用通用型，填料選自十八焼基鍵合相娃膠；流動相由甲醇（A相）和 15mmol/L磯酸氨二鐘緩沖液炬相）組成，磯酸氨二鐘緩沖液抑調(diào)為5. 9,梯度洗脫。
[0012] 色譜條件為，分析柱；填料選自十八焼基鍵合相娃膠的通用型液相色譜柱；流速： 0. 5?1. 5血/min,優(yōu)選為1.0血/min ;進樣量為8?12 y 1，優(yōu)選為IOy 1 ;柱溫為30? 35°C，優(yōu)選為30?32°C。優(yōu)選的，W規(guī)格為4. 6X250mm i.d，5ym的waters C18色譜柱為固定相。
[0013] 流動相由A相的有機溶劑和B相的緩沖液組成；A相為甲醇或己膳，B相為抑5. 8? 6. 0、濃度為15?60mmol/L的緩沖液，例如磯酸氨二鐘緩沖液，磯酸二氨鐘緩沖液、磯酸氨二軸緩沖液、巧樣酸-巧樣酸軸緩沖液或己酸-己酸軸緩沖液。優(yōu)選為抑5. 8?6. 0、濃度為15?60mmol/L的磯酸氨二鐘緩沖液；更優(yōu)選濃度抑5. 8?5. 9、濃度為15?25mmol/的磯酸氨二鐘緩沖液。
[0014] 梯度洗脫程序如下：
[00巧]第一階段；A相0%、B相100% ;持續(xù)時間為5. 5?6. 5min;
[001引第二階段；瞬時調(diào)整為A相7%?9%、B相91 %?93%，并W該個梯度洗脫；持續(xù) 時間為8. 5?IOmin ;
[0017] 第H階段；兩種流動相勻速變化到A相32%?40%，B相60%?68% ;持續(xù)時間為 4. 5 ?6min ;
[001引第四階段巧種流動相勻速變化到A相32%?40%，B相60%?68% ;持續(xù)時間為 1. 5 ?Smin ;
[0019] 第五階段：兩種流動相勻速變化到A相0%、B相100% ;持續(xù)時間為2. 5?4min。上述比例均為體積比。
[0020] 或者，優(yōu)選的梯度洗脫程序為：
[0021] 第一階段為第 0. 00 ?6. OOmin ;A 相 0 %、B 相 100 % ;
[0022] 第二階段為第6. 00?15. OOmin,在第二階段開始時（可W是第6. 00?6. Olmin 時），瞬時調(diào)整為A相7%?9%、B相91%?93% (優(yōu)選為A相8%，B相92% )并W該個梯度洗脫；
[0023] 第H階段為第15. 00?20. OOmin ;兩種流動相勻速變化到A相32%?40%，B相 60%?68% (優(yōu)選為A相35%，B相65% );
[0024] 第四階段為第20. 00?22. OOmin ;兩種流動相勻速變化到A相36%?43%，B相 57%?62% % (優(yōu)選為 A 相 35%，B 相 65% );
[00巧]第五階段為第22. 00?25. OOmin;兩種流動相勻速變化到A相0%、B相100%。
[0026] 優(yōu)選的，流動相在使用前用0. 22?0. 5 y m(優(yōu)選為0. 45 y m)的水相微孔濾膜過濾后，超聲脫氣3?10分鐘。
[0027] 優(yōu)選的，檢測相應ATP關聯(lián)產(chǎn)物色譜峰面積，根據(jù)標準工作曲線或者回歸方程計算ATP關聯(lián)產(chǎn)物的含量。用二極管陣列檢測器掃描確定檢測各ATP關聯(lián)產(chǎn)物的最佳檢測波長（紫外最大吸收波長），并根據(jù)H維色譜圖對樣品中的10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物進行進一步定性，確定各色譜峰是哪一種ATP關聯(lián)產(chǎn)物。
[0028] 待測樣品提取液的制備方法為：
[0029] a.取水產(chǎn)品樣品，按照Ig ;1?3ml的的用量比，與預冷到0?4°C、質(zhì)量濃度為 3%?6%的高氯酸溶液混合均質(zhì)進行浸提，0?4°C下2000?8000巧m離也5?20min，收集上清液；
[0030] b.取沉淀按上述步驟a的方法操作重復1?3次，合并上清液；
[0031] C.加入KOH或化OH將抑中和至5. 5?6. 0 (優(yōu)選為5. 8?6. 0,更優(yōu)選5. 9)，過濾去除高氯酸鐘或高氯酸軸結(jié)晶固體，再用流動相B相中的緩沖液定容；
[003引 d.用孔徑為0. 22?0. 5 y m的濾膜（優(yōu)選為0. 45 U m)過濾，即獲得待測樣品提取液。
[0033] 標準工作曲線或回歸方程的建立方法為；分別稱取ATP關聯(lián)物標準品，用流動相的B相配制成不同濃度的標準溶液，進行液相色譜測定，根據(jù)保留時間和二極管陣列檢測器掃描圖譜定性，W核巧酸濃度為橫坐標，所測相應核巧酸色譜峰面積為縱坐標作圖，并繪制標準工作曲線或者擬合回歸方程。
[0034] 上述方法可用外標法定量分析水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的含量。
[00巧]水產(chǎn)品樣品前處理的具體方案為：
[0036] (1)新鮮水產(chǎn)品肉與0?10°C的5wt%?8wt%的高氯酸勻漿1?2min，兩者比例為Ig ;1. 3?3ml ;超聲提取3?Smin后，低溫離也；分離上清液和沉淀；
[0037] (2)步驟（1)的沉淀用0?1(TC的5wt%?8wt%的高氯酸再次勻漿，超聲提取 3?Smin后，低溫離也；分離上清液和沉淀；并重復1?3次；
[00測做合并步驟（1)和步驟（2)的上清液，加入KOH或化OH中和至抑=5. 8? 6. 0 (優(yōu)選5. 9)，去除高氯酸鹽結(jié)晶，加入流動相B相溶解定容，再用孔徑為0. 4?0. 6 y m 濾膜過濾。
[0039] 本發(fā)明的創(chuàng)新在于用常規(guī)的液相色譜儀及C18色譜柱即可進行檢測，設備及分析條件要求簡單，通過選擇合適的流動相條件、合適的抑W及梯度洗脫程序，不用離子對試劑也可W同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量，最多可同時測10種；分離時間不超過 25分鐘。本方法不使用離子對試劑，可大大提高檢測效率，延長色譜柱的使用壽命；具有污染柱子少、操作快速簡便、靈敏度高等優(yōu)點，同時采用二極管陣列檢測器對樣品進行掃描，定性更準確，明顯優(yōu)于已公開的技術，因此是一項非常值得廣泛應用和推廣的技術。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0040] 圖1實施例1的10種ATP關聯(lián)物（100 y g/mL濃度的溶液）的紫外210-400皿的掃描光譜圖
[0041] 圖2為實施例1的10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的H維色譜圖
[0042] 圖3為實施例1的10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物標準品混合溶液（每種物質(zhì)濃度為50 U g/ mL)液相色譜圖（柱溫32 C )
[0043] 圖4為實施例2中華絨馨蟹肉樣品的液相色譜圖
[0044] 圖5為實施例2斑節(jié)對郵肉樣品的液相色譜圖
[0045] 圖6為實施例3的10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物標準品混合溶液（每種物質(zhì)濃度為100 y g/ mL)液相色譜圖（柱溫3(TC )
[0046] 圖7為實施例4秀麗白郵肉樣品的液相色譜圖
[0047] 圖8為實施例4凡納濱對郵肉樣品的液相色譜圖
[0048] 圖9為實施例4哈氏仿對郵肉樣品的液相色譜圖
[0049] 圖10為實施例4文始肉樣品的液相色譜圖
[0050] 圖11為實施例4白始肉樣品的液相色譜圖
[005。圖12為對比例1 (A) 10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物標準品混合溶液的液相色譜圖（柱溫 32°C )
[0052] 圖13為對比例1炬)10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物標準品混合溶液的液相色譜圖 [005引圖14為對比例2 (A) 10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物標準品混合溶液的液相色譜圖
[0054] 圖15為對比例2炬)10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物標準品混合溶液的液相色譜圖

【具體實施方式】
[0055] W下結(jié)合實施例旨在進一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。
[0056] 實施例1分離檢測10種ATP關聯(lián)物
[0057] (1)標準樣品溶液的制備：用抑=5. 9、濃度為15mmol/L的磯酸氨二鐘緩沖溶液 (流動相B相）為溶劑，分別稱取10種ATP關聯(lián)物標準品ATP、GMP、IMP、ADP、化、AMP、At 化R、AdR和Xt,配制濃度液分別為0. Ol?750 y g/mL的ATP關聯(lián)物系列標準溶液。
[005引似最佳紫外檢測波長的確定：取濃度為100 y g/mL的標準溶液，用二極管陣列檢測器掃描確定檢測10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的210?440nm下的紫外吸收光譜和最佳檢測波長 (紫外最大吸收波長），確定ATP、GMP、IMP、ADP、化、AMP、At化R、AdR和Xt的最佳紫外檢測波長分別為 259. 1、253. 2、248. 4、259. 1、248. 4、259. 1、260. 3、248. 4、259. 1、267. 4皿，結(jié) 果圖1。
[0059] (3)將10種ATP關聯(lián)物標準品用抑=5. 9、濃度為15mmol/L磯酸氨二鐘緩沖液制成混合溶液，每種ATP關聯(lián)物濃度為100 y g/mU進行液相色譜測定，使用Waters e2695高效液相色譜儀進行檢測（美國Waters)，并且配有Waters 2996二極管陣列檢測器及Empower色譜軟件。液相色譜柱采用通用型，填料選自十八焼基鍵合相娃膠，Waters Atlantis T3C18 (4. 6 X 250mm，Sum)。
[0060] 色譜條件為；Waters Atlantis T3C18 (4. 6 X 250mm，5 ym)色譜柱，流速 I. 0血/ min ;進樣量為10 y I ;柱溫為3(TC。進樣量10 y L，流速Iml/min。
[0061] 10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物經(jīng)自動進樣器進樣后到達色譜柱分離，用二極管陣列檢測器進行檢測分析。
[0062] 用二極管陣列檢測器掃描確定檢測各ATP關聯(lián)產(chǎn)物洗脫色譜峰的最佳檢測波長和210?440nm下的紫外吸收光譜，對樣品中的10種ATP關聯(lián)產(chǎn)物進行進一步定性，確定各色譜峰是哪一種ATP關聯(lián)產(chǎn)物。H維色譜圖和液相色譜圖結(jié)果如圖2和圖3。
[006引流動相由甲醇（A相）和抑=5. 9、濃度為15mmol/L磯酸氨二鐘緩沖液炬相）組成，磯酸氨二鐘緩沖液抑調(diào)為5. 9,按表1的程序梯度洗脫。A相和B相先用0. 45 y m的水相微孔濾膜過濾并超聲脫氣5分鐘。
[0064] 表1梯度洗脫程序
[0065]

【權利要求】
1. 一種高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的方法，其特征在于，包括如下步驟：使用帶有二極管陣列檢測器的高效液相色譜儀進行檢測，將待測樣品提取液加入到高效液相色譜儀中，梯度洗脫；根據(jù)各ATP關聯(lián)產(chǎn)物的保留時間和210?400nm下的紫外吸收光譜，確定各色譜峰是哪一種ATP關聯(lián)產(chǎn)物；色譜條件為，分析柱：填料選自十八烷基鍵合相硅膠的通用型液相色譜柱；流速： 0· 5?1. 5mL/min ;進樣量為8?12 μ 1 ;柱溫為30?35°C ; 洗脫程序為：第一階段：A相0%、B相100% ;持續(xù)時間為5. 5?6. 5min ; 第二階段：瞬時調(diào)整為A相7%?9 %、B相91 %?93%，并以這個梯度洗脫；持續(xù)時間為 8. 5 ?lOmin ; 第三階段：兩種流動相勻速變化到A相32 %?40 %，B相60 %?68 % ;持續(xù)時間為 4. 5 ?6min ; 第四階段：兩種流動相勻速變化到A相32%?40%，B相60%?68% ;持續(xù)時間為 L 5 ?3min ; 第五階段：兩種流動相勻速變化到A相0%、B相100% ;持續(xù)時間為2. 5?4min ;上述比例均為體積比；所述流動相由A相的有機溶劑和B相的緩沖液組成；A相為甲醇或乙腈，B相為pH5. 8? 6. 0、濃度為15?60mmol/L的磷酸氫二鉀緩沖液，磷酸二氫鉀緩沖液、磷酸氫二鈉緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液或乙酸-乙酸鈉緩沖液；檢測相應ATP關聯(lián)產(chǎn)物色譜峰面積，根據(jù)同樣色譜條件下ATP關聯(lián)物標準工作曲線或者回歸方程計算待測樣品提取液中ATP關聯(lián)產(chǎn)物的含量。
2. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的方法，其特征在于，所測定的ATP關聯(lián)物為三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、腺苷酸、肌苷酸、次黃嘌呤核苷、次黃嘌呤、鳥苷酸、腺苷、腺嘌呤和黃嘌呤中的至少一種。
3. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的方法，其特征在于，所述的流動相A相為甲醇。
4. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物的方法，其特征在于，所述的流動相B相為pH5. 8?6. 0、濃度為15?60mmol/L的磷酸氫二鉀緩沖液。
5. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量的方法，其特征在于，色譜條件為：分析柱選自十八烷基鍵合相硅膠的通用型液相色譜柱；流速〇· 5?L 5mL/min ;進樣量為8?12 μ 1 ;柱溫為30?35°C。
6. 權利要求5所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量的方法，其特征在于，流速為1. OmL/min ;進樣量為10 μ 1 ;柱溫選為30?32°C。
7. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量的方法，其特征在于，梯度洗脫程序為：第一階段為第〇· 〇〇?6. OOmin :A相0 %、B相100 % ; 第二階段為第6. 00?15. OOmin，在第二階段開始時（可以是第6. 00?6. Olmin時），瞬時調(diào)整為A相7%?9%、B相91%?93%，并以這個梯度洗脫；持續(xù)時間為8. 5?lOmin ; 第三階段為第15. 00?20. OOmin :兩種流動相勻速變化到A相32 %?40%，B相 60%?68% ; 第四階段為第20. 00?22. OOmin :兩種流動相勻速變化到A相36 %?43%，B相 57%?62%% ; 第五階段為第22. 00?25. OOmin :兩種流動相勻速變化到A相0 %、B相100 %。
8. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量的方法，其特征在于，梯度洗脫程序為：第一階段為第〇· 〇〇?6. OOmin :A相0 %、B相100 % ; 第二階段為第6. 00?15. OOmin，在第二階段開始時瞬時調(diào)整為A相8%，B相92%并以這個梯度洗脫；第三階段為第15. 00?20. OOmin :兩種流動相勻速變化到A相35%，B相65% ; 第四階段為第20. 00?22. OOmin :兩種流動相勻速變化到A相35%，B相65% ; 第五階段為第22. 00?25. OOmin :兩種流動相勻速變化到A相0%、B相100%。
9. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn)物含量的方法，其特征在于，所述流動相在使用前用〇. 22?0. 5 μ m的水相微孔濾膜過濾后，超聲脫氣3?10分鐘。
10. 權利要求1所述高效液相色譜-二極管陣列法同時測定水產(chǎn)品中多種ATP關聯(lián)產(chǎn) 物含量的方法，其特征在于，水產(chǎn)品待測樣品提取液的制備方法為： a. 取水產(chǎn)品樣品，按照lg :1?3ml的的用量比，與預冷到0?4°C、質(zhì)量濃度為3%? 6(%的高氯酸溶液混合均質(zhì)進行浸提，0?4 1€下2000?8000印1]1離心5?201]1；[11，收集上清液； b. 取沉淀按上述步驟a的方法操作重復1?3次，合并上清液； c. 加入K0H或NaOH將pH中和至5. 8?6. 0,過濾去除高氯酸鉀或高氯酸鈉結(jié)晶固體，再用流動相B相中的緩沖液定容； d. 用孔徑為0. 22?0. 5 μ m的濾膜過濾，即獲得待測樣品提取液。
【文檔編號】G01N30/06GK104237412SQ201410477961
【公開日】2014年12月24日申請日期:2014年9月18日優(yōu)先權日:2014年9月18日
【發(fā)明者】邱偉強, 陳舜勝, 謝晶, 曲映紅, 施文正, 宋雪, 王丹妮, 王帥, 秦曉, 黃鑫, 晉穎穎申請人:上海海洋大學

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