一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，包括步驟：a、將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9,將單克隆抗體F10與抗原溶液H9等體積比反應(yīng)得到反應(yīng)物；b、將反應(yīng)物置于室溫孵育一段時間，然后震蕩，并在低溫條件下過夜，使抗原抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)成型、將復(fù)合物置于檢測盒中，并在太赫茲光束焦斑處垂直置入檢測盒中，記錄與濃度有關(guān)的太赫茲強度吸收光譜；d、根據(jù)與濃度有關(guān)的太赫茲強度吸收光譜判斷是否有吸收峰，當沒有時，則檢測到樣本中含有血凝素蛋白。
【專利說明】一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋 白檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 流感病毒是一種可致哺乳類及禽類急性上呼吸道感染的RNA病毒。目前，對于該 病毒及其各種亞型的檢測和防控已成為全世界面臨解決的醫(yī)學(xué)問題。流感病毒表面抗原主 要分為兩種：血凝素蛋白和唾液酸苷酶。其中血凝素蛋白的分布占了病毒表面的80%，因此 對血凝素蛋白的檢測可提高流感病毒識別的敏感度?，F(xiàn)有技術(shù)中對血凝素蛋白的檢測絕大 多數(shù)采用生化免疫學(xué)方法，例如熒光免疫發(fā)光、免疫印跡法以及酶聯(lián)免疫吸附法等。這些方 法在廣泛被利用的同時，也突現(xiàn)出其不便之處：在檢測抗原-抗體反應(yīng)過程中，需要引入熒 光探針或蛋白酶作為標記物，由于探針標記物的存在，一定程度上復(fù)雜了樣品制備及檢測 過程，增加了檢測時間，降低了檢測效率。
[0003] 因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進和發(fā)展。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種基于太赫茲時域光譜的無 標記血凝素蛋白檢測方法，旨在解決現(xiàn)有的檢測方法檢測時間長、檢測效率低的問題。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，包括步驟： a、 將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9,將單克隆抗體F10與抗原 溶液H9等體積比反應(yīng)得到反應(yīng)物； b、 將反應(yīng)物置于室溫孵育一段時間，然后震蕩，并在低溫條件下過夜，使抗原抗體復(fù)合 物結(jié)構(gòu)成型； c、 將復(fù)合物置于檢測盒中，并在太赫茲光束焦斑處垂直置入檢測盒，記錄與濃度有關(guān) 的太赫茲強度吸收光譜； d、 根據(jù)與濃度相關(guān)的太赫茲強度吸收光譜判斷是否有吸收峰，當沒有時，則檢測到樣 本中含有血凝素蛋白。
[0006] 所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟a中， 單克隆抗體F10以固定濃度23(^g/ml與抗原溶液等體積比反應(yīng)。
[0007] 所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟C中， 檢測盒中的復(fù)合物厚度為〇. 3cm。
[0008] 所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟c中， 所述太赫茲光束的頻率范圍為〇. 1~1. 5THz。
[0009] 所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟b中， 在室溫條件下孵育30分鐘。
[0010] 所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其中，所述步驟a中， 將樣本溶于PBS緩沖液中配制成7. 5、15、29、56、113、225以及43(^g/ml的濃度梯度。
[0011] 有益效果：本發(fā)明的方法對血凝素蛋白的檢測靈敏度大大提高，優(yōu)于ELISA等傳 統(tǒng)檢測技術(shù)，并且無需引入標記物，節(jié)省了大量的檢測時間，減少了操作步驟，提高了檢測 效率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1為本發(fā)明實施例中太赫茲強度吸收光譜圖。
[0013] 圖2為本發(fā)明實施例中太赫茲介電損耗角與抗原-抗體結(jié)合位點比關(guān)系圖。
[0014] 圖3為現(xiàn)有技術(shù)中采用ELISA方法檢測的濃度關(guān)系圖。
[0015] 圖4為本發(fā)明實施例中太赫茲介電損耗角與太赫茲強度吸收光譜的關(guān)系圖。

【具體實施方式】
[0016] 本發(fā)明提供一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，為使本發(fā)明 的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所 描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017] 本發(fā)明的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法包括步驟： a、 將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9,將單克隆抗體F10與抗原 溶液H9等體積比反應(yīng)得到反應(yīng)物； b、 將反應(yīng)物置于室溫孵育一段時間，然后震蕩，并在低溫條件下過夜，使抗原抗體復(fù)合 物結(jié)構(gòu)成型； c、 將復(fù)合物置于檢測盒中，并在太赫茲光束焦斑處垂直置入檢測盒，記錄與濃度有關(guān) 的太赫茲強度吸收光譜； d、 根據(jù)與濃度有關(guān)太赫茲強度吸收光譜判斷是否有吸收峰，當沒有時，則檢測到樣本 中含有血凝素蛋白。
[0018] 其中的步驟a中，先將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9,以形 成濃度梯度，具體是將樣本溶于PH7. 4的PBS緩沖液中，配制成7. 5、15、29、56、113、225以 及43(^g/ml的濃度梯度的抗原溶液H9 (即血凝素蛋白溶液)。
[0019] 然后將單克隆抗體F10與抗原溶液H9等體積比反應(yīng)得到反應(yīng)物。
[0020] 再將反應(yīng)物置于室溫下孵育30分鐘，輕輕震蕩，然后在低溫條件下過夜，即放置 12小時，保證反應(yīng)充分以及抗原抗體形成的復(fù)合物結(jié)構(gòu)成型。
[0021] 結(jié)構(gòu)成型的復(fù)合物(溶液)置于檢測盒中，厚度為0. 3cm，在太赫茲光束焦斑處垂直 置入檢測盒，并確保檢測盒中無氣泡、盒外無掛珠、液體無溢出。
[0022] 然后記錄每一組復(fù)合物的太赫茲強度吸收光譜，太赫茲光束的頻率范圍為 0. l~1.5THz，本發(fā)明實施例中，記錄的太赫茲強度吸收光譜是與濃度相關(guān)的，即橫坐標為抗 原與抗體的結(jié)合位點比，縱坐標為吸收系數(shù)。根據(jù)太赫茲強度吸收光譜判斷是否有吸收峰， 此處的吸收峰是并非傳統(tǒng)意義上的橫坐標為頻率情況下的概念，其是指由水合層效應(yīng)產(chǎn)生 的非線性變化形成的，具體在后文中有詳細分析，當沒有時，則檢測到樣本中含有血凝素蛋 白。
[0023] 下面結(jié)合具體實施例來對本發(fā)明進行具體說明。
[0024] a、將血凝素蛋白溶于pH值L4的PBS緩沖液中配制成L 5、15、29、56、113、225以 及430ug/ml的濃度梯度的抗原溶液H9 (即血凝素蛋白溶液）； b、將單克隆抗體F10以固定濃度230ug/ml與抗原溶液H9等體積比反應(yīng)得反應(yīng)物溶 液； 其反應(yīng)條件是在室溫下進行混合并震蕩得反應(yīng)物溶液。
[0025] c、將反應(yīng)物溶液置于室溫孵育30分鐘，輕微震蕩，隨后在4度冰箱過夜，保證反應(yīng) 充分以及抗原抗體的復(fù)合物結(jié)構(gòu)成型； 過夜時間為12小時。
[0026] d、將充分反應(yīng)后得到的復(fù)合物溶液滴置于檢測盒中，復(fù)合物溶液厚度保持在(光 程）0· 3cm ; 該檢測盒的材料選用TOPAS? 5013L-10,該材料對太赫茲光具有較好的透過率特性，可 確保不引入干擾信號。
[0027] e、在太赫茲光束焦斑處垂直置入檢測盒，并確保檢測盒中無氣泡、盒外無掛珠以 及液體無溢出； 太赫茲光束經(jīng)過準直后，垂直入射在檢測盒中的樣品中，并使樣品放置在太赫茲的焦 點光斑處。
[0028] 本發(fā)明中采用的太赫茲時域光譜系統(tǒng)為z-omega公司生產(chǎn)的型號為z3的太赫茲 透射型時域光譜系統(tǒng)。
[0029] f、分別多次記錄每一組濃度梯度的太赫茲強度吸收光譜，頻率范圍為 0. 1~1. 5THz，確定太赫茲強度吸收光譜與抗原-抗體摩爾比的關(guān)系； g、 經(jīng)過透射光強測量，計算折射率η (ω)及吸收系數(shù)η (ω )，并取多次平均； h、 由折射率η(ω)與吸收系數(shù)η(ω)，根據(jù)下述公式（1) (2)，計算介電常數(shù)ε (ω) (ε = ε ' +i ε "）的實部ε '與虛部ε " ；

【權(quán)利要求】
1. 一種基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其特征在于，包括步驟： a、 將樣本溶于PBS緩沖液中配制成不同濃度的抗原溶液H9,將單克隆抗體F10與抗原 溶液H9等體積比反應(yīng)得到反應(yīng)物； b、 將反應(yīng)物置于室溫孵育一段時間，然后震蕩，并在低溫條件下過夜，使抗原抗體復(fù)合 物結(jié)構(gòu)成型； c、 將復(fù)合物置于檢測盒中，并在太赫茲光束焦斑處垂直置入檢測盒，記錄與濃度有關(guān) 的太赫茲強度吸收光譜； d、 根據(jù)與濃度有關(guān)的太赫茲強度吸收光譜判斷是否有吸收峰，當沒有時，則檢測到樣 本中含有血凝素蛋白。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其特征 在于，所述步驟a中，單克隆抗體F10以固定濃度23〇Pg/ml與抗原溶液等體積比反應(yīng)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其特征 在于，所述步驟c中，檢測盒中的復(fù)合物厚度為0. 3cm。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其特征 在于，所述步驟c中，所述太赫茲光束的頻率范圍為0. 1~1. 5THz。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其特征 在于，所述步驟b中，在室溫條件下孵育30分鐘。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于太赫茲時域光譜的無標記血凝素蛋白檢測方法，其特征 在于，所述步驟a中，將樣本溶于PBS緩沖液中配制成7. 5、15、29、56、113、225以及43〇μ8/ ml的濃度梯度。
【文檔編號】G01N33/68GK104215776SQ201410467449
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月15日
【發(fā)明者】孫怡雯, 鐘俊蘭 申請人:深圳大學(xué)